1.一種測(cè)定土壤中酸性磷酸酶活性的方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）準(zhǔn)備原料：一份新鮮土壤，pH在4.8~5.2之間的醋酸鹽緩沖液，濃度為5.0~5.1umol/ml、作為底物的對(duì)硝基苯磷酸二鈉溶液，濃度為38~41mg/ml的NaOH溶液；
2）在新鮮土壤中取一份土壤樣品A，稱(chēng)量并記錄鮮重，然后將其烘干至恒重后，稱(chēng)量并記錄干重，由此計(jì)算得到該新鮮土壤的含水率；再在該新鮮土壤中取一份1~5g重的土壤樣品B，稱(chēng)量并記錄其鮮重；
3）在土壤樣品B中加入40ml的醋酸鹽緩沖液，攪拌均勻，得到粗酶液，測(cè)量并記錄其體積，繼續(xù)攪拌，保持粗酶液處在混合均勻的狀態(tài)；
4）取一塊96孔酶標(biāo)板，記為酶標(biāo)版A，在酶標(biāo)版A中設(shè)置3~6組樣品和對(duì)照；所述每組樣品中都移取了100ul混合均勻的粗酶液和150ul底物作為培養(yǎng)液；所述每組對(duì)照均包括一個(gè)底物對(duì)照和一個(gè)粗酶液對(duì)照，所述底物對(duì)照都移取了150ul底物和100ul醋酸鹽緩沖液作為培養(yǎng)液，所述粗酶液對(duì)照都移取了100ul混合均勻的粗酶液和150ul醋酸鹽緩沖液作為培養(yǎng)液；
5）將步驟4）中裝好培養(yǎng)液后的酶標(biāo)板A置于30℃的培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)45~60min；
6）先取一個(gè)干凈且無(wú)色透明的96孔酶標(biāo)板，記為酶標(biāo)板B，用酶標(biāo)儀于405nm波長(zhǎng)處比色，檢測(cè)到酶標(biāo)板B每孔對(duì)應(yīng)的Abs，記為空白對(duì)照Abs；
然后取出培養(yǎng)結(jié)束后的酶標(biāo)板A，分別移取100ul的樣品和對(duì)照的上清液至酶標(biāo)板B上對(duì)應(yīng)的孔位，并分別加入10ul的NaOH溶液終止反應(yīng)，最后置入酶標(biāo)儀于405nm波長(zhǎng)處比色，得到樣品Abs、底物對(duì)照Abs和粗酶液對(duì)照Abs；
7）計(jì)算OD值：
所述OD=（樣品Abs-空白對(duì)照Abs）-[（底物對(duì)照Abs-空白對(duì)照Abs）+（粗酶液對(duì)照Abs-空白對(duì)照Abs）]，
其中，每組樣品Abs和對(duì)照Abs所減去的空白對(duì)照Abs，都是與其在酶標(biāo)板A中的孔相對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)板B中的孔的空白對(duì)照Abs；所述OD為樣品吸光度減去對(duì)照吸光度后的吸光度；
按照此步驟可計(jì)算出其余樣品的OD值；
8）計(jì)算得到酸性磷酸酶活性：
酶活性(umol·h-1·gDOM-1)=（OD×0.25×V）/（EC×h×m×0.1）
m=m鮮×(mA干/mA鮮)
其中，m為土壤樣品B的干重，單位為g；m鮮為土壤樣品B的鮮重，單位為g；mA干指樣品A的干重，單位為g，mA鮮指樣品A的鮮重，單位為g；0.25是指酶標(biāo)板單孔培養(yǎng)液體積為0.25ml；V為粗酶液體積，單位為ml；EC為消光系數(shù)；h為培養(yǎng)液在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的時(shí)間，單位為小時(shí)；0.1是比色所取上清液的體積0.1ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定土壤中酸性磷酸酶活性的方法，其特征在于，所述醋酸鹽緩沖液由三水乙酸鈉、冰醋酸與去離子水混合而成。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種測(cè)定土壤中酸性磷酸酶活性的方法，其特征在于，所述醋酸鹽緩沖液的pH為5.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定土壤中酸性磷酸酶活性的方法，其特征在于，所述步驟2）中，所述烘干步驟是將土壤放置在溫度為60~105℃的烘箱中進(jìn)行哄干的，哄干時(shí)長(zhǎng)為36~48h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定土壤中酸性磷酸酶活性的方法，其特征在于，所述步驟3）中，粗酶液的配置過(guò)程為：先將土壤樣品B置于50ml的廣口三角瓶中，再向廣口三角瓶中加入40ml的醋酸鹽緩沖液，然后向其中放入一顆攪拌子，并將該廣口三角瓶放在磁力攪拌器上方進(jìn)行攪拌，使其混合均勻，得到粗酶液，并繼續(xù)攪拌，使粗酶液處在混合均勻的狀態(tài)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定土壤中酸性磷酸酶活性的方法，其特征在于，所述步驟5）中，酶標(biāo)板A放入培養(yǎng)箱之前，在其上方蓋一層保鮮膜。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定土壤中酸性磷酸酶活性的方法，其特征在于，所述步驟4）中每組對(duì)照都增加了一個(gè)緩沖液對(duì)照，且每個(gè)緩沖液對(duì)照都移取了250ul醋酸鹽緩沖液作為培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)；同時(shí)，步驟6）中分別移取100ul緩沖液對(duì)照的上清液至酶標(biāo)板B上對(duì)應(yīng)的孔位，再分別加入10ul的NaOH溶液終止反應(yīng)，最后與其他組樣品和對(duì)照一起置入酶標(biāo)儀于405nm波長(zhǎng)處比色，得到3~6個(gè)緩沖液對(duì)照Abs。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種測(cè)定土壤中酸性磷酸酶活性的方法，其特征在于，所述步驟7）中，所述OD=（樣品Abs-空白對(duì)照Abs）-[（緩沖液對(duì)照Abs-空白對(duì)照Abs）+（底物對(duì)照Abs-空白對(duì)照Abs）+（粗酶液對(duì)照Abs-空白對(duì)照Abs）]，
其中，每組樣品Abs和對(duì)照Abs所減去的空白對(duì)照Abs，都是與其在酶標(biāo)板A中的孔相對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)板B中的孔的空白對(duì)照Abs；所述OD為樣品吸光度減去對(duì)照吸光度后的吸光度；
按照此步驟可計(jì)算出其余樣品的OD值。