本發(fā)明涉及分子生物學技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種生物樣本庫快速鑒定自身免疫性蕁麻疹樣本的方法。

背景技術(shù)：

生物樣本庫主要是指標準化收集、處理、儲存和應用健康和疾病生物體的生物大分子、細胞、組織和器官等樣本(包括人體器官組織、全血、血漿、血清、生物體液或經(jīng)處理過的生物樣本(DNA、RNA、蛋白等)以及與這些生物樣本相關(guān)的臨床、病理、治療、隨訪、知情同意等資料及其質(zhì)量控制、信息管理與應用系統(tǒng)。然而，在生物樣本庫中，往往需要對這些樣本進行檢測進而識別這些樣本歸屬于哪一類疾病的樣本。

自身免疫性蕁麻疹是指功能性自身抗體通過與高親和性IgE受體(FcεRI)交聯(lián)，激活肥大細胞和嗜堿性細胞釋放組胺而引起的蕁麻疹。目前，尚未有快速檢測自身免疫性蕁麻疹樣本的檢測方法，因此，造成了生物樣本庫中的樣本難以準確且快速的識別。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的主要目的在于，針對上述現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種生物樣本庫快速鑒定自身免疫性蕁麻疹樣本的方法。

為實現(xiàn)上述目的，根據(jù)本發(fā)明實施例提供的生物樣本庫快速鑒定自身免疫性蕁麻疹樣本的方法，包括：

使用酶聯(lián)免疫吸附實驗法或膠體金法，使IgE受體蛋白與血清樣本中的抗IgE受體蛋白抗體發(fā)生反應；

檢測血清樣本中抗IgE受體蛋白抗體的含量，當所述抗IgE受體蛋白抗體超過預定閾值，則所述血液為自身免疫性蕁麻疹樣本。

根據(jù)本發(fā)明實施例提供的生物樣本庫快速鑒定自身免疫性蕁麻疹樣本的方法，可以快速識別自身免疫性蕁麻疹樣本，方便生物樣本庫中的管理。

根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，所述酶聯(lián)免疫吸附實驗法包括：

將IgE受體蛋白包被于固相載體；

采用洗滌緩沖液洗滌除去未結(jié)合的IgE受體蛋白和雜質(zhì)；

加入待檢測者的血清樣本，孵育1至2小時，使所述血清樣本中的抗IgE受體蛋白抗體與固相載體上的固相IgE受體蛋白結(jié)合，形成固相抗原抗體復合物；

采用洗滌緩沖液洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)；

加入酶標抗人IgG抗體，孵育1至2小時，使酶標抗人IgG抗體與固相抗原抗體復合物結(jié)合，形成固相抗原待測抗體酶標抗體復合物；

采用洗滌緩沖液洗滌除去未結(jié)合的酶標抗人IgG抗體；

加底物顯色，通過比色測固相載體上抗IgE受體蛋白抗體的含量。

根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，還包括：

用酶聯(lián)免疫檢測儀測定預定波長下的吸光度；

以吸光度作為縱坐標，以抗IgE受體蛋白抗體的含量作為橫坐標建立標準曲線圖。

根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，所述固相載體的材質(zhì)為聚苯乙烯。

附圖說明

圖1為抗IgE受體蛋白抗體標準曲線，橫坐標為抗IgE受體蛋白抗體含量，縱坐標為吸光度。

圖2為小樣本檢測結(jié)果，以圖中劃線處為區(qū)分，敏感性和特異性均為95％。

本發(fā)明目的的實現(xiàn)、功能特點及優(yōu)點將結(jié)合實施例，參照附圖做進一步說明。

具體實施方式

以下將結(jié)合附圖及具體實施例詳細說明本發(fā)明的技術(shù)方案，以便更清楚、直觀地理解本發(fā)明的發(fā)明實質(zhì)。

實施例一

本發(fā)明實施例提供了一種生物樣本庫快速鑒定自身免疫性蕁麻疹樣本的方法，包括以下步驟：

1)、使用酶聯(lián)免疫吸附實驗法或膠體金法，使IgE受體蛋白與血清樣本中的抗IgE受體蛋白抗體發(fā)生反應。

2)、檢測血清樣本中抗IgE受體蛋白抗體的含量，當所述抗IgE受體蛋白抗體超過預定閾值，則所述血液為自身免疫性蕁麻疹樣本。

根據(jù)本發(fā)明實施例提供的生物樣本庫快速鑒定自身免疫性蕁麻疹樣本的方法，可以快速識別自身免疫性蕁麻疹樣本，方便生物樣本庫中的管理。

實施例二

本發(fā)明實施例提供了一種生物樣本庫快速鑒定自身免疫性蕁麻疹樣本的方法，該方法以酶聯(lián)免疫吸附實驗法為例，對本發(fā)明進行說明，其包括以下步驟：

1)、將IgE受體蛋白包被于固相載體。

具體的，可以采用包被緩沖液稀釋IgE受體蛋白至溶度為1-10μg/m，并將稀釋后的IgE受體蛋白添加至固相載體中，再孵育1至3小時使其形成固相IgE受體蛋白(固相抗原)，也即是，使得IgE受體蛋白結(jié)合在固相載體的表面。較佳的，孵育的溫度為35-38℃，更為優(yōu)選地，孵育的溫度為37℃。

可以理解的是，固相載體可以采用聚苯乙烯材質(zhì)的試管、珠狀物或者是微孔板，聚苯乙烯對IgE受體蛋白具有良好的吸附效果。

2)、采用洗滌緩沖液洗滌除去未結(jié)合的IgE受體蛋白和雜質(zhì)。具體的，可以采用洗滌緩沖液洗滌固相載體兩次至三次，并輕拍固相載體將其表面的洗滌緩沖液及未結(jié)合至固相載體上的IgE受體蛋白、雜質(zhì)等甩干去除。

3)、加入待檢測者的血清樣本，孵育1至2小時，使所述血清樣本中的抗IgE受體蛋白抗體與固相載體上的固相IgE受體蛋白結(jié)合，形成固相抗原抗體復合物。

具體的，可以采用稀釋緩沖液將血清樣本稀釋，再將稀釋后的血清樣本加入至固相載體上并孵育1至2小時，較佳的，孵育的溫度為35-38℃，更為優(yōu)選地，孵育的溫度為37℃，進而使得血清樣本中的抗IgE受體蛋白抗體與固相載體上的IgE受體蛋白充分反應，以結(jié)合形成固相抗原抗體復合物。

4)、采用洗滌緩沖液洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。具體的，可以采用洗滌緩沖液洗滌固相載體兩次至三次，并輕拍固相載體將其表面的洗滌緩沖液及未結(jié)合至固相載體上的抗IgE受體蛋白抗體、雜質(zhì)等甩干去除。

5)、加酶標抗人IgG抗體，孵育1至2小時，使酶標抗人IgG抗體與固相抗原抗體復合物結(jié)合，形成固相抗原待測抗體酶標抗體復合物。

具體的，可以采用稀釋緩釋液對酶標抗人IgG抗體進行稀釋，再將稀釋后的酶標抗人IgG抗體加入至固相載體中并孵育1至2小時，較佳的，孵育的溫度為35-38℃，更為優(yōu)選地，孵育的溫度為37℃，進而使得酶標抗人IgG抗體與固相抗原抗體復合物相結(jié)合。

6)、采用洗滌緩沖液洗滌除去未結(jié)合的酶標抗人IgG抗體。也即是，可以采用洗滌緩沖液洗滌固相載體兩次至三次，并輕拍固相載體將其表面的洗滌緩沖液及未結(jié)合至固相載體上的酶標抗人IgG抗體、雜質(zhì)等甩干去除。

7)、加底物顯色，通過比色測固相載體中抗IgE受體蛋白抗體的含量。

具體的，可以加入底物溶液于固相載體上，在室溫下作用30分鐘后，再加入終止劑以終止反應。在終止反應后可以通過酶標比色計測量固相載體中IgE受體蛋白抗體的含量(濃度)。

8)、當所述抗IgE受體蛋白抗體超過預定閾值，則所述血液為自身免疫性蕁麻疹樣本。由此，通過抗IgE受體蛋白抗體的含量即可識別該加入的血清樣本是否為自身免疫性蕁麻疹樣本。

根據(jù)本發(fā)明實施例提供的生物樣本庫快速鑒定自身免疫性蕁麻疹樣本的方法，可以快速識別自身免疫性蕁麻疹樣本，方便生物樣本庫中的管理。

在本發(fā)明的一個實施例中，還包括：

9)、用酶聯(lián)免疫檢測儀測定預定波長下的吸光度，也就是，以預定波光的光源照射，并使得光線從結(jié)合有固相抗原待測抗體酶標抗體復合物的固相載體射出，進而測量該固相載體的吸光度。

10)、以吸光度作為縱坐標，以抗IgE受體蛋白抗體的含量作為橫坐標建立標準曲線圖，例如圖1所示，取濃度為10，20，50，100，200，500，1000，2000，3000ng/ml的抗IgE受體蛋白抗體標準品得標準曲線，如此，根據(jù)該標準曲線圖即可讀出各個樣本的抗IgE受體蛋白抗體的含量，進而方便對各個樣本是否為自身免疫性蕁麻疹樣本進行快速鑒定。

參照圖2所示，圖2為使用本發(fā)明的方法對20例過敏性蕁麻疹樣本和20例自身免疫性蕁麻疹樣本進行檢測的檢測結(jié)果，以圖中劃線處為區(qū)分，敏感性和特異性均為95％。

以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例，并非因此限制其專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書及附圖內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，直接或間接運用在其他相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護范圍內(nèi)。