本發(fā)明屬于免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞學(xué)以及原位雜交基因檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種載片標(biāo)本檢測的預(yù)處理裝置及方法。

背景技術(shù)：

對生物或病理標(biāo)本中蛋白或基因的檢測在很多情況下是以薄層涂片或薄片切片的形式粘附在載片上進(jìn)行(如免疫組織化學(xué)法以及原為雜交基因檢測法等)，這些生物或病理標(biāo)本在制作過程中，經(jīng)過多個(gè)復(fù)雜的步驟，比如福瑪琳固定，酒精和二甲苯脫水，石蠟包埋以及石蠟包埋所涉及的加熱等步驟，標(biāo)本中的蛋白和基因分子大多已變性并難以觸及。所以在標(biāo)本檢測的過程中，首先都需要對載片標(biāo)本進(jìn)行脫蠟、水化以及絕大部分的標(biāo)本需要熱修復(fù)等預(yù)處理步驟，才能確保檢測的準(zhǔn)確度和靈敏度。

脫蠟一般需要多次將載片標(biāo)本浸泡在有機(jī)溶劑(如二甲苯)中，然后使用不同梯度的酒精進(jìn)行水化，再進(jìn)行加熱處理(熱修復(fù))使抗原或病原體特征蛋白回復(fù)原有形狀。加熱一般在80-121℃進(jìn)行并維持3-60分鐘。然而，要使熱修復(fù)充分、均勻、可重復(fù)等，是比較難以控制的步驟，在自動(dòng)化儀器上進(jìn)行尤為如此。

目前手工操作常用的方法是將載片浸泡在容液中進(jìn)行脫蠟，而后再轉(zhuǎn)移到梯度酒精中水化，再轉(zhuǎn)移至可加熱容器中，比如用高壓鍋烹煮、一般沸煮、微波爐烹煮或熱水浴加熱等方法。載片在加熱中和加熱之后的檢測過程往往需要以不同的方式擺放，比如熱處理時(shí)，載片多是以豎立緊密擺放，有利于加熱的速度、均勻性、減小容器體積和減少試劑的揮發(fā)等。而后續(xù)的檢測步驟則往往需要將載片平鋪擺放。所以在載片標(biāo)本處理的中途需要將載片標(biāo)本轉(zhuǎn)移到可加熱的容器內(nèi)進(jìn)行，而后又需要轉(zhuǎn)移到常溫的操作臺(tái)上，增加了操作流程的復(fù)雜性和操作誤差。

全自動(dòng)或半自動(dòng)的儀器上的載片加熱處理則都是以烘烤式的形式進(jìn)行。將試劑滴加到載片上，然后在載片背面用熱鐵板加熱，類似于烘烤。試劑的揮發(fā)和氣泡的產(chǎn)生難以控制。有些產(chǎn)家，如Dako、Biocare，Biogenex等采用更溫和的溫度(一般在90-97℃)來防止沸騰造成的氣泡、揮發(fā)和干枯現(xiàn)象。這種方法卻延長了時(shí)間，也還是不能徹底解決氣泡和揮發(fā)造成干片的根本問題。

常見的儀器均采用每張載片標(biāo)本分開加熱，獨(dú)立溫度控制，載片之間以及儀器之間的溫度差異在所難免，影響到標(biāo)本處理的重復(fù)性和可靠性。

因此，當(dāng)前存在一種需求，需要一種能夠更充分有效、均勻和可重復(fù)地進(jìn)行載片標(biāo)本檢測中的脫蠟、水化、熱處理等預(yù)處理方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了解決上述問題，本發(fā)明提出了一種處理生物載片標(biāo)本的預(yù)處理裝置及方法，能夠更有效、更均勻、更具重復(fù)性地處理大批量的載片標(biāo)本。

一種載片標(biāo)本檢測的預(yù)處理裝置，用于免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞學(xué)以及原位雜交基因檢測中的熱抗原修復(fù)和熱預(yù)處理，該裝置包括容器、熱蒸氣出氣口、容器蓋、載片、載片蓋板、載片支架；載片支架用于放置或擺列帶有生物標(biāo)本的載片；熱蒸氣出氣口位于容器側(cè)壁或頂部，載片支架位于容器中且水平位置低于熱蒸氣出氣口，熱蒸氣由載片支架的下方向上穿過載片支架。

進(jìn)一步地，載片支架下方的容器壁設(shè)有熱蒸氣進(jìn)入口。

進(jìn)一步地，還包括位于容器側(cè)壁的加熱介質(zhì)進(jìn)液口，位于容易底部的加熱介質(zhì)和加熱裝置和熱蒸氣進(jìn)入口。

進(jìn)一步地，容器是由耐熱材料制做的熱蒸汽承載體；當(dāng)加熱裝置對容器內(nèi)的加熱介質(zhì)加熱至沸騰時(shí)，所產(chǎn)生的熱蒸汽將對載片進(jìn)行加熱，實(shí)現(xiàn)對載片標(biāo)本熱修復(fù)的目的。

進(jìn)一步地，所述載片蓋上具有毛細(xì)平面的蓋板，相互之間存在毛細(xì)縫隙，毛細(xì)縫隙中首先灌滿熱預(yù)處理所需要的試劑后，載片能以豎立、平鋪或斜放在載片支架。

一種載片標(biāo)本檢測的預(yù)處理方法，用于免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞學(xué)以及原位雜交基因檢測中的熱抗原修復(fù)和熱預(yù)處理，具體是：含有生物標(biāo)本的載片蓋上具有毛細(xì)平面的蓋板，相互之間存在毛細(xì)縫隙，毛細(xì)縫隙中首先灌滿處理所需要的試劑后，放置在容器中的載片支架上，通過熱蒸氣對位于載片進(jìn)行加熱，載片無需浸泡在溶液中也不需以烘烤的方式進(jìn)行加熱。

進(jìn)一步地，熱蒸氣的產(chǎn)生由一個(gè)與容器分離的獨(dú)立的蒸汽生成器產(chǎn)生，并將所產(chǎn)生的熱蒸氣通過管道從熱蒸氣進(jìn)入口輸入到容器內(nèi)；蒸汽生成器中預(yù)先將加熱介質(zhì)燒至沸騰，當(dāng)載片需要加熱時(shí)，打開熱蒸氣進(jìn)入口，容器內(nèi)的溫度能快速地達(dá)到預(yù)期的溫度；而當(dāng)熱修復(fù)完成時(shí)，停止加熱或輸送熱蒸氣，載片的溫度能較快降低，加熱和冷卻快速，有利于縮短載片處理的時(shí)間以及提高熱修復(fù)的重復(fù)性。

進(jìn)一步地，熱蒸氣的產(chǎn)生由容器底部的加熱介質(zhì)經(jīng)加熱裝置加熱后產(chǎn)生。

進(jìn)一步地，多個(gè)含有生物標(biāo)本的載片在同一個(gè)容器內(nèi)一體化通過蒸汽加熱。減少標(biāo)本于標(biāo)本之間熱處理的差異，提高載片標(biāo)本處理的重復(fù)性。

進(jìn)一步地，載片以豎立或傾斜擺放時(shí)，載片的脫蠟、水化和熱修復(fù)的步驟能同時(shí)進(jìn)行，無需將載片預(yù)先脫蠟和水化后再進(jìn)行熱修復(fù)；載片標(biāo)本上的石蠟在熱蒸氣中融化并不斷流失，實(shí)現(xiàn)脫蠟、水化、熱修復(fù)同步進(jìn)行。

進(jìn)一步地，當(dāng)熱修復(fù)完成后，可直接進(jìn)行下一步驟的標(biāo)本處理程序，無需對載片進(jìn)行轉(zhuǎn)移。

進(jìn)一步地，對已經(jīng)脫蠟了的載片使用熱蒸汽加熱進(jìn)行熱處理.

進(jìn)一步地，對未脫蠟的載片進(jìn)行熱處理時(shí)，通過預(yù)先在載片上滴加具有脫蠟、水化和熱修復(fù)一體化功能的試劑后，然后再用熱蒸氣加熱施行熱處理，熱蒸汽會(huì)使載片標(biāo)本上的石蠟融化或溶解、流失并同時(shí)進(jìn)行水化、熱修復(fù)處理效果。

進(jìn)一步地，通過使用具有不同沸點(diǎn)的加熱介質(zhì)來調(diào)節(jié)所產(chǎn)生熱蒸汽的溫度，從而選擇載片熱處理所需要的溫度，無需額外的溫度控制系統(tǒng)。

相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)和技術(shù)效果：

本發(fā)明的處理裝置和方法中，熱蒸氣的溫度由容器內(nèi)的加熱介質(zhì)的沸點(diǎn)決定，既達(dá)到了加熱介質(zhì)的最高溫度又完全可重復(fù)，無需額外的溫度控制系統(tǒng)，提高熱處理的可靠性和可重復(fù)性。

本發(fā)明的處理裝置和方法中，由于熱蒸氣的擴(kuò)散性，載片放置在容器內(nèi)的各個(gè)位置都得到均勻的預(yù)處理，避免載片標(biāo)本放置不同的位置帶來的差異性。

本發(fā)明的處理裝置和方法中，載片上的標(biāo)本始終與含有水蒸氣的熱蒸氣接觸，標(biāo)本的表面上可以沒有液體聚積，然而標(biāo)本卻保持充分的水化，不影響后面檢測試劑對載片標(biāo)本的穿透性和檢測效果，也即改進(jìn)了烘烤方法所帶來的干片的缺陷。

本發(fā)明的熱修復(fù)中，與常規(guī)的烹煮或烘烤的方法相比，熱蒸汽可以在一個(gè)分離式的蒸汽生成器中預(yù)先將加熱介質(zhì)燒至沸騰，當(dāng)載片需要加熱時(shí)，打開熱蒸氣輸入口，容器內(nèi)的溫度可較快地達(dá)到較高的溫度。而當(dāng)熱修復(fù)完成時(shí)，停止加熱或輸送熱蒸氣，載片的溫度可以較快低降低，加熱和冷卻均可更加快速，有利于縮短載片處理的時(shí)間以及提高熱修復(fù)的重復(fù)性。

本發(fā)明的處理裝置和方法中，多個(gè)載片標(biāo)本在同一個(gè)容器內(nèi)一體化加熱，受均一的溫度處理，而不是每個(gè)載片標(biāo)本分開加熱、獨(dú)立溫度控制。減少標(biāo)本于標(biāo)本之間熱處理的差異，提高載片標(biāo)本處理的重復(fù)性。

本發(fā)明當(dāng)載片以豎立或傾斜擺放時(shí)，載片的脫蠟、水化和熱修復(fù)的步驟可以同時(shí)進(jìn)行，無需將載片預(yù)先脫蠟和水化后再進(jìn)行熱修復(fù)。載片標(biāo)本上的石蠟在熱蒸氣中融化并不斷流失，實(shí)現(xiàn)脫蠟、水化、熱修復(fù)同步進(jìn)行，極大地簡化熱處理步驟以及熱處理的效果。

本發(fā)明的處理裝置和方法中，當(dāng)熱修復(fù)完成后，可直接進(jìn)行下一步驟的程序，無需對載片進(jìn)行轉(zhuǎn)移。提高載片標(biāo)本蛋白質(zhì)和基因檢測中預(yù)處理步驟的通量、可靠性和重復(fù)性?？蓪?shí)現(xiàn)快速、高通量、簡易、可靠地進(jìn)行載片處理，尤其適用于自動(dòng)化載片標(biāo)本檢測的熱處理。

附圖說明

圖1是實(shí)例中載片水平擺放的一種一體式載片標(biāo)本熱修復(fù)結(jié)構(gòu)示意圖。

圖2是實(shí)例中載片傾斜擺放的一種一體式載片標(biāo)本熱修復(fù)結(jié)構(gòu)示意圖。

圖3是實(shí)例中載片水平擺放的一種分離式載片標(biāo)本熱修復(fù)結(jié)構(gòu)示意圖。

圖4是實(shí)例中載片傾斜擺放的一種分離式載片標(biāo)本熱修復(fù)結(jié)構(gòu)示意圖。

圖5是實(shí)例中載片蓋上具有毛細(xì)縫隙的蓋板后傾斜擺放的一種一體式載片標(biāo)本熱修復(fù)結(jié)構(gòu)示意圖。

圖6是實(shí)例中載片蓋上具有毛細(xì)縫隙的蓋板后傾斜擺放的一種分離式載片標(biāo)本熱修復(fù)結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的保護(hù)和實(shí)施不限于此。

如圖1～圖6，一種載片標(biāo)本檢測的預(yù)處理裝置，用于免疫組織化學(xué)以及原位雜交基因檢測中的熱抗原修復(fù)和熱預(yù)處理，該裝置包括容器1、熱蒸氣出氣口2、容器蓋3、載片4、載片蓋板9、載片支架5；載片支架5用于放置或擺列帶有生物標(biāo)本的載片；熱蒸氣出氣口2位于容器1側(cè)壁或頂部，載片支架5位于容器中且水平位置低于熱蒸氣出氣口2，熱蒸氣由載片支架5的下方向上穿過載片支架5。

作為一種實(shí)例，如圖3、圖4、圖6，載片支架5下方的容器壁設(shè)有熱蒸氣進(jìn)入口10。蒸氣生產(chǎn)器中加熱介質(zhì)沸騰所產(chǎn)生的蒸氣通往容器1，從而加熱載片標(biāo)本。

作為另一種實(shí)例，如圖1、圖2、圖、圖5，裝置還包括位于容器1側(cè)壁的加熱介質(zhì)進(jìn)液口6，位于容易底部的加熱介質(zhì)7和加熱裝置8和熱蒸氣進(jìn)入口10。把待檢載片標(biāo)本平鋪在載片架5上，然后將帶有載片標(biāo)本的載片4架放置在容器1中蓋上容器蓋3；通過進(jìn)液口6向容器內(nèi)1灌入加熱介質(zhì)7；啟動(dòng)加熱，由加熱棒8將加熱介質(zhì)7加熱至沸騰。

進(jìn)一步實(shí)施地，容器1是由耐熱材料制做的熱蒸汽承載體；當(dāng)加熱裝置8對容器1內(nèi)的加熱介質(zhì)7加熱至沸騰時(shí)，所產(chǎn)生的熱蒸汽將對載片4進(jìn)行加熱，實(shí)現(xiàn)對載片標(biāo)本熱修復(fù)的目的。所述載片4蓋上具有毛細(xì)平面的蓋板9，相互之間存在毛細(xì)縫隙，毛細(xì)縫隙中首先灌滿熱預(yù)處理所需要的試劑后，載片能以豎立、平鋪或斜放在載片支架5。

實(shí)例過程中，將帶有生物或病理標(biāo)本的載片經(jīng)過脫蠟和水化后，平放或豎立地懸掛在一個(gè)相對密閉的容器內(nèi)，在容器的底部加入少量的加熱介質(zhì)(水或其它水溶液)，加熱至加熱介質(zhì)沸騰并保持溫和地沸騰持續(xù)到所需要的時(shí)間。熱處理過程，載片可以接觸到加熱介質(zhì)或沒有接觸到加熱介質(zhì)，載片的熱處理是通過熱蒸氣熱傳導(dǎo)實(shí)現(xiàn)的。

進(jìn)一步優(yōu)化地，將帶有生物或病理標(biāo)本的載片未經(jīng)過脫蠟和水化，直接以傾斜或水平的方式擺放在一個(gè)相對密閉的容器內(nèi)，在容器的底部加入少量的溶液(加熱介質(zhì))，加熱至沸騰并保持溫和地沸騰至所需要的時(shí)間。當(dāng)載片受到熱蒸氣的加熱時(shí)，載片標(biāo)本上的石蠟因?yàn)檩^高的溫度而融化并不斷流失，實(shí)現(xiàn)脫蠟。熱蒸氣同時(shí)對載片標(biāo)本進(jìn)行水化和熱處理，實(shí)現(xiàn)脫蠟、水化和熱修復(fù)的同時(shí)進(jìn)行，，極大地簡化熱處理步驟以及熱處理的效果。這一過程的特征是載片無需接觸到液態(tài)加熱介質(zhì)，載片的熱處理是通過熱蒸氣熱傳導(dǎo)實(shí)現(xiàn)的。

對未脫蠟的載片進(jìn)行熱處理時(shí)，通過預(yù)先在載片上滴加具有脫蠟、水化和熱修復(fù)一體化功能的試劑(比如，深達(dá)的脫蠟修復(fù)液，產(chǎn)品目錄號(hào)：AR04-1000)后，然后再用熱蒸氣加熱施行熱處理，熱蒸汽會(huì)使載片標(biāo)本上的石蠟融化或溶解、流失并同時(shí)進(jìn)行水化、熱修復(fù)處理效果。由此將脫蠟、水化和熱修復(fù)融為一步完成。

進(jìn)一步優(yōu)化地，加熱介質(zhì)成分可以靈活調(diào)整，實(shí)現(xiàn)對沸騰溫度以及所產(chǎn)生的蒸氣溫度和成分的調(diào)整和控制，達(dá)到載片標(biāo)本預(yù)處理的最佳效果。比如，當(dāng)加熱介質(zhì)為50％的甘油容液時(shí)，器沸點(diǎn)約為106℃。通過使用具有不同沸點(diǎn)的加熱介質(zhì)(具有不同沸點(diǎn)的水溶液，比如使用10-80％的甘油水容液，沸點(diǎn)可達(dá)101-128℃)來調(diào)節(jié)所產(chǎn)生熱蒸汽的溫度，從而選擇載片熱處理所需要的溫度，無需額外的溫度控制系統(tǒng)。

進(jìn)一步優(yōu)化地，當(dāng)載片需要特定試劑(預(yù)處理試劑)進(jìn)行預(yù)處理時(shí)，可以將載片平方，并在載片標(biāo)本上預(yù)先滴加預(yù)處理試劑，然后在容器內(nèi)接受熱蒸氣加熱。

進(jìn)一步優(yōu)化地，所述加熱裝置可采用電磁加熱的方式，也可以采用電熱棒加熱、換熱器加熱等方式。

進(jìn)一步優(yōu)化地，容器和蒸氣生產(chǎn)器可以是分離式結(jié)構(gòu)，也可以是兩者融合為一體結(jié)構(gòu)。熱蒸氣可以在容器內(nèi)直接產(chǎn)生，也可以通過外聯(lián)的蒸氣生成器產(chǎn)生并通過關(guān)聯(lián)通道輸送到容器內(nèi)，對載片標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理。

進(jìn)一步地，如圖3，所述的熱蒸汽可以通過加熱一個(gè)獨(dú)立的(分離式的)容器中的加熱介質(zhì)產(chǎn)生并通過熱蒸汽進(jìn)入口10進(jìn)入容器1。用分離式的容器來提供熱蒸汽有利于簡化容器1的設(shè)置，也有利于節(jié)省容器1熱修復(fù)前后加熱和冷卻的時(shí)間。在分離式的結(jié)構(gòu)中，熱介質(zhì)可以預(yù)先加熱至沸騰，當(dāng)載片擺放完畢需要加熱時(shí)，熱蒸氣可以即時(shí)供給，而當(dāng)熱修復(fù)完成時(shí)，熱蒸氣可以即時(shí)關(guān)閉。

進(jìn)一步地，當(dāng)容器和蒸氣生產(chǎn)器融為一體式，加熱介質(zhì)直接灌注在容器1底部，然后通過加熱棒8加熱容器1內(nèi)的加熱介質(zhì)至沸騰并保持持續(xù)沸騰到所需要的時(shí)間。如果容器1和熱蒸氣生產(chǎn)器是分離式的，則在熱蒸氣生產(chǎn)器中所產(chǎn)生的熱蒸氣通過管道從熱蒸汽進(jìn)口10輸送到容器1中。分離式的有點(diǎn)是可以讓熱蒸氣連續(xù)產(chǎn)生，在需要的時(shí)候通往容器1，而在不需要的時(shí)候關(guān)閉通道，容器1中的溫度冷卻時(shí)間可以被縮短。

進(jìn)一步地，多個(gè)含有生物標(biāo)本的載片4在同一個(gè)容器內(nèi)一體化通過蒸汽加熱，受均一，而不是每個(gè)載片標(biāo)本分開加熱、獨(dú)立溫度控制。減少標(biāo)本于標(biāo)本之間熱處理的差異，提高載片標(biāo)本處理的重復(fù)性。

當(dāng)熱修復(fù)完成后，可直接進(jìn)行下一步驟的標(biāo)本處理程序，無需對載片進(jìn)行轉(zhuǎn)移；可實(shí)現(xiàn)快速、高通量、簡易、可靠地進(jìn)行載片處理，尤其適用于自動(dòng)化載片標(biāo)本檢測的熱處理。

根據(jù)上述說明書的揭示和教導(dǎo)，本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員還可以對上述實(shí)施方式進(jìn)行變更和修改。因此，本發(fā)明并不局限于上面揭示和描述的具體實(shí)施方式，對本發(fā)明的一些修改和變更也應(yīng)落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍。