本發(fā)明涉及一種檢測方法,具體是一種動物組織中左旋18-甲基炔諾酮檢測方法及試劑盒。
背景技術(shù):
左旋18-甲基炔諾酮是甾體雌激素類物質(zhì),臨床主要與炔雌醇等組成復(fù)方作為短效口服避孕藥,也可通過劑型改變用作長效避孕藥,還可用于治療痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)。加拿大研究人員的一項研究發(fā)現(xiàn),下水道中的口服避孕藥成分引發(fā)了一系列連鎖反應(yīng),在雌激素的作用下,雄性魚類體內(nèi)會產(chǎn)生卵黃蛋白,繼而產(chǎn)生卵細胞,導(dǎo)致一座湖泊中的一種淡水魚黑頭鯫魚幾乎滅絕,進而導(dǎo)致這種魚的捕食者湖鱒數(shù)量下降,黑頭鯫魚的主要食物——昆蟲的數(shù)量開始增加。
技術(shù)實現(xiàn)要素:
本發(fā)明的目的在于提供一種動物組織中左旋18-甲基炔諾酮檢測方法及試劑盒,以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。
為實現(xiàn)上述目的,本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
一種動物組織中左旋18-甲基炔諾酮檢測方法及試劑盒,試劑盒包括包括動物組織消化酶、蛋白酶K消化液、RNase酶消化液、瓊脂糖酶、TE緩沖液、沖洗緩沖液、低熔點瓊脂糖和透析膜,檢測方法包括如下步驟:1)溶液配制:配制磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液、β-葡萄糖醛酸酶溶液;將動物組織粉碎勻漿化處理后加入適量緩沖液調(diào)節(jié)至弱酸性;2)酶解孵育:向組織勻漿中加入足量β-葡萄糖醛酸酶溶液或羅曼蝸牛(Helixpomatia)組織液,恒溫水浴或紅外輔助微波處理;3)后續(xù)處理:將孵育后所得溶液離心后取上清液,以乙酸乙酯洗滌沉淀并離心收集乙酸乙酯與上清液合并,所得溶液室溫下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑,剩余物用少量乙醇復(fù)溶,再將得到的樣品基質(zhì)以一種功能化復(fù)合材料處理。
作為本發(fā)明進一步的方案:所述動物組織消化酶包括胰酶、膠原酶Ⅰ和膠原酶Ⅳ;所述蛋白酶K消化液由蛋白酶K和裂解緩沖液混合而成,其中,蛋白酶K的濃度為1.0~1.5mg/mL;所述RNase酶消化液由RNase酶和TE緩沖液混合而成,其中,RNase酶的濃度為0.15~0.25mg/mL。
作為本發(fā)明進一步的方案:所述的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液濃度為0.05-0.08M。
作為本發(fā)明再進一步的方案:所述的酶解孵育步驟中恒溫水浴或者紅外、微波控溫應(yīng)保證溫度在40℃-60℃;微波功率在200-600W的范圍內(nèi)。
與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明能克服傳統(tǒng)的檢測方法存在的檢測周期長、步驟繁瑣、費時費力等缺點,使檢測時間大大縮短,操作步驟和勞動強度也大為縮減,達到省時省力、快速靈敏的要求。
具體實施方式
下面對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述。
本發(fā)明實施例中,一種動物組織中左旋18-甲基炔諾酮檢測方法及試劑盒,試劑盒包括包括動物組織消化酶、蛋白酶K消化液、RNase酶消化液、瓊脂糖酶、TE緩沖液、沖洗緩沖液、低熔點瓊脂糖和透析膜,檢測方法包括如下步驟:1)溶液配制:配制磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液、β-葡萄糖醛酸酶溶液;將動物組織粉碎勻漿化處理后加入適量緩沖液調(diào)節(jié)至弱酸性;2)酶解孵育:向組織勻漿中加入足量β-葡萄糖醛酸酶溶液或羅曼蝸牛(Helixpomatia)組織液,恒溫水浴或紅外輔助微波處理;3)后續(xù)處理:將孵育后所得溶液離心后取上清液,以乙酸乙酯洗滌沉淀并離心收集乙酸乙酯與上清液合并,所得溶液室溫下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑,剩余物用少量乙醇復(fù)溶,再將得到的樣品基質(zhì)以一種功能化復(fù)合材料處理。所述動物組織消化酶包括胰酶、膠原酶Ⅰ和膠原酶Ⅳ;所述蛋白酶K消化液由蛋白酶K和裂解緩沖液混合而成,其中,蛋白酶K的濃度為1.0~1.5mg/mL;所述RNase酶消化液由RNase酶和TE緩沖液混合而成,其中,RNase酶的濃度為0.15~0.25mg/mL。所述的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液濃度為0.05-0.08M。所述的酶解孵育步驟中恒溫水浴或者紅外、微波控溫應(yīng)保證溫度在40℃-60℃;微波功率在200-600W的范圍內(nèi)。
實施例1:
本發(fā)明動物組織中左旋18-甲基炔諾酮檢測方法及試劑盒,試劑盒包括包括動物組織消化酶、蛋白酶K消化液、RNase酶消化液、瓊脂糖酶、TE緩沖液、沖洗緩沖液、低熔點瓊脂糖和透析膜,檢測方法包括如下步驟:1)溶液配制:配制磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液、β-葡萄糖醛酸酶溶液;將動物組織粉碎勻漿化處理后加入適量緩沖液調(diào)節(jié)至弱酸性;2)酶解孵育:向組織勻漿中加入足量β-葡萄糖醛酸酶溶液或羅曼蝸牛(Helixpomatia)組織液,恒溫水浴或紅外輔助微波處理;3)后續(xù)處理:將孵育后所得溶液離心后取上清液,以乙酸乙酯洗滌沉淀并離心收集乙酸乙酯與上清液合并,所得溶液室溫下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑,剩余物用少量乙醇復(fù)溶,再將得到的樣品基質(zhì)以一種功能化復(fù)合材料處理。所述動物組織消化酶包括胰酶、膠原酶Ⅰ和膠原酶Ⅳ;所述蛋白酶K消化液由蛋白酶K和裂解緩沖液混合而成,其中,蛋白酶K的濃度為1.0mg/mL;所述RNase酶消化液由RNase酶和TE緩沖液混合而成,其中,RNase酶的濃度為0.15mg/mL。所述的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液濃度為0.05M。所述的酶解孵育步驟中恒溫水浴或者紅外、微波控溫應(yīng)保證溫度在40℃℃;微波功率在200W的范圍內(nèi)。
實施例2:
本發(fā)明動物組織中左旋18-甲基炔諾酮檢測方法及試劑盒,試劑盒包括包括動物組織消化酶、蛋白酶K消化液、RNase酶消化液、瓊脂糖酶、TE緩沖液、沖洗緩沖液、低熔點瓊脂糖和透析膜,檢測方法包括如下步驟:1)溶液配制:配制磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液、β-葡萄糖醛酸酶溶液;將動物組織粉碎勻漿化處理后加入適量緩沖液調(diào)節(jié)至弱酸性;2)酶解孵育:向組織勻漿中加入足量β-葡萄糖醛酸酶溶液或羅曼蝸牛(Helixpomatia)組織液,恒溫水浴或紅外輔助微波處理;3)后續(xù)處理:將孵育后所得溶液離心后取上清液,以乙酸乙酯洗滌沉淀并離心收集乙酸乙酯與上清液合并,所得溶液室溫下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑,剩余物用少量乙醇復(fù)溶,再將得到的樣品基質(zhì)以一種功能化復(fù)合材料處理。所述動物組織消化酶包括胰酶、膠原酶Ⅰ和膠原酶Ⅳ;所述蛋白酶K消化液由蛋白酶K和裂解緩沖液混合而成,其中,蛋白酶K的濃度為1.5mg/mL;所述RNase酶消化液由RNase酶和TE緩沖液混合而成,其中,RNase酶的濃度為0.25mg/mL。所述的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液濃度為0.08M。所述的酶解孵育步驟中恒溫水浴或者紅外、微波控溫應(yīng)保證溫度在60℃;微波功率在600W的范圍內(nèi)。
實施例3:
本發(fā)明動物組織中左旋18-甲基炔諾酮檢測方法及試劑盒,試劑盒包括包括動物組織消化酶、蛋白酶K消化液、RNase酶消化液、瓊脂糖酶、TE緩沖液、沖洗緩沖液、低熔點瓊脂糖和透析膜,檢測方法包括如下步驟:1)溶液配制:配制磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液、β-葡萄糖醛酸酶溶液;將動物組織粉碎勻漿化處理后加入適量緩沖液調(diào)節(jié)至弱酸性;2)酶解孵育:向組織勻漿中加入足量β-葡萄糖醛酸酶溶液或羅曼蝸牛(Helixpomatia)組織液,恒溫水浴或紅外輔助微波處理;3)后續(xù)處理:將孵育后所得溶液離心后取上清液,以乙酸乙酯洗滌沉淀并離心收集乙酸乙酯與上清液合并,所得溶液室溫下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑,剩余物用少量乙醇復(fù)溶,再將得到的樣品基質(zhì)以一種功能化復(fù)合材料處理。所述動物組織消化酶包括胰酶、膠原酶Ⅰ和膠原酶Ⅳ;所述蛋白酶K消化液由蛋白酶K和裂解緩沖液混合而成,其中,蛋白酶K的濃度為1.2mg/mL;所述RNase酶消化液由RNase酶和TE緩沖液混合而成,其中,RNase酶的濃度為00.2mg/mL。所述的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液濃度為0.06M。所述的酶解孵育步驟中恒溫水浴或者紅外、微波控溫應(yīng)保證溫度在50℃;微波功率在500W的范圍內(nèi)。
本發(fā)明能克服傳統(tǒng)的檢測方法存在的檢測周期長、步驟繁瑣、費時費力等缺點,使檢測時間大大縮短,操作步驟和勞動強度也大為縮減,達到省時省力、快速靈敏的要求。
對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言,顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細節(jié),而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下,能夠以其他的具體形式實現(xiàn)本發(fā)明。因此,無論從哪一點來看,均應(yīng)將實施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定,因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。此外,應(yīng)當(dāng)理解,雖然本說明書按照實施方式加以描述,但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術(shù)方案,說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見,本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個整體,各實施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合,形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實施方式。