技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種復(fù)方矮地茶片的質(zhì)量控制方法。

背景技術(shù)：

復(fù)方矮地茶片是清熱解毒，化痰止咳的藥品，臨床上用于肺熱咳嗽及慢性氣管炎等癥。其原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為部頒標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)：WS₃-B-1793-94，原標(biāo)準(zhǔn)中僅有1項(xiàng)顯微鑒別和2項(xiàng)化學(xué)鑒別，該標(biāo)準(zhǔn)難以有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。中國(guó)藥事2010年第24卷第10期《HPLC法測(cè)定復(fù)方矮地茶片中巖白菜素含量》記載了采用HPLC法測(cè)定復(fù)方矮地茶片中巖白菜素含量的方法，中國(guó)藥業(yè)2009年第18卷第22期《反相高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方矮地茶膠囊中巖白菜素含量》建立了一種復(fù)方矮地茶膠囊中巖白菜素含量的RP-HPLC法，湖南中醫(yī)雜志2009年第25卷第6期《HPLC法測(cè)定復(fù)方矮地茶片中巖白菜素的含量》記載了HPLC法測(cè)定復(fù)方矮地茶片中巖白菜素的含量的方法，發(fā)明人經(jīng)過(guò)提取溶劑對(duì)比考察，這三篇文獻(xiàn)中采用甲醇的提取率次于本發(fā)明中采用的80％甲醇的提取率。中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志2010年第16卷第9期《HPLC測(cè)定復(fù)方矮地茶片中巖白菜素的含量》記載了HPLC法測(cè)定復(fù)方矮地茶片中巖白菜素的含量的方法。上述方法都是只建立了巖白菜素含量測(cè)定方法，無(wú)法對(duì)制劑質(zhì)量進(jìn)行全面可靠的控制。

總的來(lái)說(shuō)，現(xiàn)有的定性定量檢測(cè)方法不能有效的控制復(fù)方矮地茶片的質(zhì)量，從而將影響該產(chǎn)品的生產(chǎn)和質(zhì)量保證及其臨床療效。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
:

本發(fā)明的目的是提供一種復(fù)方矮地茶片的定性定量檢測(cè)方法，包括復(fù)方矮地茶片中矮地茶的顯微鑒別，矮地茶、野菊花、甘草的薄層鑒別，復(fù)方矮地茶片中巖白菜素的含量測(cè)定方法；鑒別：采用顯微鑒別法鑒別矮地茶、薄層色譜法鑒別矮地茶、野菊花、甘草；含量測(cè)定：采用高效液相色譜法測(cè)定矮地茶中巖白菜素的含量；每片含矮地茶以巖白菜素(C₁₄H₁₆O₉)計(jì)不得少于1.5mg。本發(fā)明方法可增加產(chǎn)品的質(zhì)量可控性，克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，以便能夠更好的保證療效，更好的為廣大患者服務(wù)。

本發(fā)明的目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種復(fù)方矮地茶片的定性定量檢測(cè)方法，(1)采用顯微鑒別矮地茶，采用薄層色譜法鑒別矮地茶、野菊花、甘草；(2)采用高效液相色譜法測(cè)定矮地茶中巖白菜素的含量，包含如下步驟：

(1)鑒別：

矮地茶的顯微鑒別包括下列步驟：取本品，置顯微鏡下觀察：螺紋導(dǎo)管直徑7.5～25μm，纖維成束，壁較厚，草酸鈣方晶直徑7.5～26μm(矮地茶)。

矮地茶的薄層鑒別包括下列步驟：取本品2片，除去包衣，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。另取巖白菜素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液3～5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲醇(9∶8∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵-1％鐵氰化鉀(1∶1)的混合溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

野菊花的薄層鑒別包括下列步驟：取本品3片，除去包衣，研細(xì)，加甲醇15ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。另取蒙花苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液1～2μl，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁酮-三氯甲烷-甲酸-水(15∶15∶6∶4∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2％三氯化鋁溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

甘草的鑒別包括下列步驟：取本品20片，除去包衣，研細(xì)，加乙醚40ml，超聲處理15分鐘，濾過(guò)，棄去乙醚液，藥渣加甲醇50ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用以水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用以正丁醇飽和的水洗滌3次，每次20ml，棄去水液，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3～5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，使成條狀，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

(2)含量測(cè)定：

矮地茶中巖白菜素的含量測(cè)定方法包括下列步驟：照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥD)測(cè)定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(20∶80)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm。理論板數(shù)按巖白菜素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

對(duì)照品溶液的制備 取巖白菜素對(duì)照品適量，精密稱定，加80％甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約0.15g，精密稱定，置25ml量瓶中，加80％甲醇20ml，超聲處理(功率300W，頻率40kHz)45分鐘，放冷，加80％甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

復(fù)方矮地茶片每片含矮地茶以巖白菜素(C₁₄H₁₆O₉)計(jì)，不得少于1.5mg。

為更好的表明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，將本發(fā)明的方法學(xué)考察詳述如下：

(1)矮地茶的顯微鑒別

取本品，置顯微鏡下觀察：螺紋導(dǎo)管直徑7.5～25μm，纖維成束，壁較厚，草酸鈣方晶直徑7.5～26μm(矮地茶)。結(jié)果見(jiàn)圖1。

(2)矮地茶的薄層色譜鑒別

①供試品溶液的制備：取本品2片，除去包衣，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。

②對(duì)照品溶液的制備：取巖白菜素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

③陰性樣品溶液的制備：按處方配比，取除去矮地茶的其他味藥材，按制法項(xiàng)下的工藝制成樣品，再按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。

④薄層色譜條件及結(jié)果：照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，取上述三種溶液3～5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲醇(9∶8∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵-1％鐵氰化鉀(1∶1)的混合溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，缺矮地茶的陰性對(duì)照無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖2。

(3)野菊花的薄層色譜鑒別

①供試品溶液的制備：取本品3片，除去包衣，研細(xì)，加甲醇15ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。

②對(duì)照品溶液的制備：取蒙花苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

③陰性樣品溶液的制備：按處方配比，取除去野菊花的其他味藥材，按制法項(xiàng)下的工藝制成樣品，再按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。

④薄層色譜條件及結(jié)果：照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液1～2μl，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁酮-三氯甲烷-甲酸-水(15∶15∶6∶4∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2％三氯化鋁溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，缺野菊花的陰性對(duì)照無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖3。

(4)甘草的薄層色譜鑒別

①供試品溶液的制備：取本品20片，除去包衣，研細(xì)，加乙醚40ml，超聲處理15分鐘，濾過(guò)，棄去乙醚液，藥渣加甲醇50ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用以水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用以正丁醇飽和的水洗滌3次，每次20ml，棄去水液，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。

②對(duì)照藥材溶液的制備：取甘草對(duì)照藥材1g，加乙醚40ml，超聲處理15分鐘，濾過(guò)，棄去乙醚液，藥渣加甲醇50ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用以水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用以正丁醇飽和的水洗滌3次，每次20ml，棄去水液，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。

③陰性樣品溶液的制備：按處方配比，取除去甘草的其他味藥材，按制法項(xiàng)下的工藝制成樣品，再按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。

④薄層色譜條件及結(jié)果：照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各3～5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，使成條狀，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，缺甘草的陰性對(duì)照無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖4。

(3)巖白菜素含量測(cè)定

①儀器與試藥：Wasters 1525高效液相色譜儀；CG-300超聲清洗儀(300W，25kHz)；天平：AE240，CP225D；Wasters 2996(PDA)；巖白菜素(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用，批號(hào)：111532-200202)。甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

②系統(tǒng)適應(yīng)性：色譜柱：Agient C₁₈(DB)(250mm×4.6mm×5μm)，Agilent公司；柱溫：35℃；流動(dòng)相：甲醇－水(20∶80)；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)275nm；色譜工作站Empower。

③對(duì)照品溶液的制備：精密稱取巖白菜素對(duì)照品24.79mg，置50ml量瓶中，加80％甲醇適量使溶解，加80％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品貯備液(C＝0.4958mg/ml)。精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加80％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液(C＝0.04958mg/ml)。精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，見(jiàn)圖5。

④供試品溶液的制備

取本品適量(批號(hào)：20110714)，除去包衣，研細(xì)，備用。

⑤提取溶劑的選擇

取上述粉末0.15g，共8份，精密稱定，置25ml量瓶中，加入甲醇、80％甲醇、50％甲醇、20％甲醇20ml，超聲45分鐘，放冷，補(bǔ)充相應(yīng)的溶劑至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。精密吸取對(duì)照品溶液10μl與供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定并計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 提取溶劑選擇結(jié)果比較表

結(jié)果表明，用4種溶劑提取供試品，80％甲醇以及50％甲醇測(cè)得含量結(jié)果較高，但是50％甲醇處理所得供試品溶液難以過(guò)濾，因此，選擇80％甲醇為提取溶劑。

⑥提取方法、提取時(shí)間的考察

取上述粉末0.15g，共8份，精密稱定，置25ml量瓶中，加入80％甲醇20ml，分別超聲處理(300W，40kHz)15、30、45、60分鐘，放冷，用80％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

取上述粉末0.15g，共2份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80％甲醇25ml，密塞，稱定重量，回流提取30分鐘，放冷，用80％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

測(cè)定法 精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，并計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 提取方法、時(shí)間選擇結(jié)果比較表

結(jié)果表明，超聲45分鐘得率較高，故選擇超聲45分鐘提取。

⑦供試品溶液的制備：取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約0.15g，置25ml量瓶中，加入80％甲醇20ml，超聲處理(300W，40kHz)45分鐘，放冷，用80％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，見(jiàn)圖6。

⑧陰性溶液的制備：按處方稱取缺矮地茶的其余各藥味適量，制成缺矮地茶的陰性對(duì)照樣品，同法制備缺矮地茶的陰性對(duì)照溶液。精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，缺矮地茶的陰性對(duì)照無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖7。

⑨精密度試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液(批號(hào)：20110714)，進(jìn)樣6次，每次10μl，測(cè)定，其巖白菜素峰面積積分值的RSD為0.68％，結(jié)果見(jiàn)表3，結(jié)果表明進(jìn)樣精密度良好。

表3 精密度試驗(yàn)結(jié)果表

⑩穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、12、24小時(shí)，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果表明：供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。

表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表

線性關(guān)系考察 精密稱取巖白菜素對(duì)照品19.98mg，置50ml量瓶中，加80％甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得貯備液(0.3996mg/ml)。分別精密吸取貯備液0.5、1、2、3、5、10ml至25、25、25、25、10、10ml量瓶?jī)?nèi)，用80％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得系列對(duì)照品溶液(0.007992、0.01598、0.03197、0.04795、0.1998、0.3996mg/ml)，精密吸取上述溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明：巖白菜素對(duì)照品在0.07992～3.996μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其回歸方程為：Y＝1316272.5302X-4649.9257，r＝0.9999，結(jié)果見(jiàn)表5，圖7。

表5 線性關(guān)系考察結(jié)果表

重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(20071114)樣品，依法制備5份供試品溶液，測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表6。結(jié)果表明：本方法重復(fù)性較好。

表6 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

回收率試驗(yàn)及范圍驗(yàn)證試驗(yàn) 取3個(gè)容量瓶，各稱取已測(cè)定含量的同一批號(hào)(20110714)樣品粉末(含巖白菜素7.993mg/g)約0.1g，精密稱定，各精密加入濃度為0.3996mg/ml巖白菜素對(duì)照品溶液2ml，依法制備供試品溶液；取3個(gè)容量瓶，各稱取已測(cè)定含量的同一批號(hào)(20110714)樣品粉末(含巖白菜素7.993mg/g)約0.15g，精密稱定，各精密加入濃度為0.3996mg/ml巖白菜素對(duì)照品溶液2ml，依法制備供試品溶液；取3個(gè)容量瓶，各稱取已測(cè)定含量的同一批號(hào)(20110714)樣品粉末(含巖白菜素7.993mg/g)約0.2g，精密稱定，各精密加入濃度為0.3996mg/ml巖白菜素對(duì)照品溶液2ml，依法制備供試品溶液。

按上述色譜條件測(cè)定，進(jìn)樣量為10μl，計(jì)算回收率，結(jié)果表明，本法回收率良好，結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 回收率試驗(yàn)結(jié)果

樣品含量測(cè)定：對(duì)其余批次樣品進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表8。

表8 復(fù)方矮地茶片中巖白菜素含量測(cè)定結(jié)果

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明采用顯微鑒別矮地茶、薄層色譜法鑒別矮地茶、野菊花、甘草，采用高效液相色譜法測(cè)定矮地茶中的巖白菜素含量；通過(guò)建立明確的專屬性強(qiáng)的鑒別方法及重現(xiàn)性、穩(wěn)定性及精密度良好的含量測(cè)定方法，能夠有效控制復(fù)方矮地茶片的質(zhì)量，使復(fù)方矮地茶片質(zhì)量達(dá)到穩(wěn)定、可控，對(duì)產(chǎn)品的投料及質(zhì)量控制要求更加嚴(yán)格，克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提高產(chǎn)品的質(zhì)量、療效，更好地滿足醫(yī)療的需要。

附圖說(shuō)明:

圖1是本發(fā)明的復(fù)方矮地茶片中矮地茶的顯微鑒別圖；

圖2是本發(fā)明的復(fù)方矮地茶片中矮地茶的薄層鑒別圖；

圖3是本發(fā)明的復(fù)方矮地茶片中野菊花的薄層鑒別圖；

圖4是本發(fā)明的復(fù)方矮地茶片中甘草的薄層鑒別圖；

圖5是本發(fā)明的巖白菜素對(duì)照品的高效液相色譜圖；

圖6是本發(fā)明的復(fù)方矮地茶片樣品中巖白菜素含量的高效液相色譜圖；

圖7是本發(fā)明的復(fù)方矮地茶片缺矮地茶陰性對(duì)照溶液的高效液相色譜圖；

圖8是本發(fā)明的復(fù)方矮地茶片巖白菜素含量測(cè)定線性圖；

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

復(fù)方矮地茶片(薄膜衣片)批號(hào)：20111204

(1)鑒別：

矮地茶的顯微鑒別包括下列步驟：取本品，置顯微鏡下觀察：螺紋導(dǎo)管直徑7.5～25μm，纖維成束，壁較厚，草酸鈣方晶直徑7.5～26μm(矮地茶)。

矮地茶的薄層鑒別包括下列步驟：取本品2片，除去包衣，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。另取巖白菜素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲醇(9∶8∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵-1％鐵氰化鉀(1∶1)的混合溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

野菊花的薄層鑒別包括下列步驟：取本品3片，除去包衣，研細(xì)，加甲醇15ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。另取蒙花苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液1μl，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁酮-三氯甲烷-甲酸-水(15∶15∶6∶4∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2％三氯化鋁溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

甘草的鑒別包括下列步驟：取本品20片，除去包衣，研細(xì)，加乙醚40ml，超聲處理15分鐘，濾過(guò)，棄去乙醚液，藥渣加甲醇50ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用以水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用以正丁醇飽和的水洗滌3次，每次20ml，棄去水液，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，使成條狀，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

(2)含量測(cè)定：

矮地茶中巖白菜素的含量測(cè)定方法包括下列步驟：照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥD)測(cè)定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(20∶80)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm。理論板數(shù)按巖白菜素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

對(duì)照品溶液的制備 取巖白菜素對(duì)照品適量，精密稱定，加80％甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約0.15g，精密稱定，置25ml量瓶中，加80％甲醇20ml，超聲處理(功率300W，頻率40kHz)45分鐘，放冷，加80％甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

含量測(cè)定結(jié)果 本批次復(fù)方矮地茶片每片含矮地茶以巖白菜素(C₁₄H₁₆O₉)計(jì)為1.8mg。

實(shí)施例2

復(fù)方矮地茶片(薄膜衣片)批號(hào)：20111205

(1)鑒別：

矮地茶的顯微鑒別包括下列步驟：取本品，置顯微鏡下觀察：螺紋導(dǎo)管直徑7.5～25μm，纖維成束，壁較厚，草酸鈣方晶直徑7.5～26μm(矮地茶)。

矮地茶的薄層鑒別包括下列步驟：取本品2片，除去包衣，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。另取巖白菜素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲醇(9∶8∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵-1％鐵氰化鉀(1∶1)的混合溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

野菊花的薄層鑒別包括下列步驟：取本品3片，除去包衣，研細(xì)，加甲醇15ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。另取蒙花苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液2μl，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁酮-三氯甲烷-甲酸-水(15∶15∶6∶4∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2％三氯化鋁溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

甘草的鑒別包括下列步驟：取本品20片，除去包衣，研細(xì)，加乙醚40ml，超聲處理15分鐘，濾過(guò)，棄去乙醚液，藥渣加甲醇50ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用以水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用以正丁醇飽和的水洗滌3次，每次20ml，棄去水液，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，使成條狀，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

(2)含量測(cè)定：

矮地茶中巖白菜素的含量測(cè)定方法包括下列步驟：照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥD)測(cè)定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(20∶80)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm。理論板數(shù)按巖白菜素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

對(duì)照品溶液的制備 取巖白菜素對(duì)照品適量，精密稱定，加80％甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約0.15g，精密稱定，置25ml量瓶中，加80％甲醇20ml，超聲處理(功率300W，頻率40kHz)45分鐘，放冷，加80％甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

含量測(cè)定結(jié)果 本批次復(fù)方矮地茶片每片含矮地茶以巖白菜素(C₁₄H₁₆O₉)計(jì)為1.9mg。

實(shí)施例3

復(fù)方矮地茶片(糖衣片)批號(hào)：20111201

(1)鑒別：

矮地茶的顯微鑒別包括下列步驟：取本品，置顯微鏡下觀察：螺紋導(dǎo)管直徑7.5～25μm，纖維成束，壁較厚，草酸鈣方晶直徑7.5～26μm(矮地茶)。

矮地茶的薄層鑒別包括下列步驟：取本品2片，除去包衣，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。另取巖白菜素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲醇(9∶8∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵-1％鐵氰化鉀(1∶1)的混合溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

野菊花的薄層鑒別包括下列步驟：取本品3片，除去包衣，研細(xì)，加甲醇15ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。另取蒙花苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液2μl，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁酮-三氯甲烷-甲酸-水(15∶15∶6∶4∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2％三氯化鋁溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

甘草的鑒別包括下列步驟：取本品20片，除去包衣，研細(xì)，加乙醚40ml，超聲處理15分鐘，濾過(guò)，棄去乙醚液，藥渣加甲醇50ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用以水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用以正丁醇飽和的水洗滌3次，每次20ml，棄去水液，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，使成條狀，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

(2)含量測(cè)定：

矮地茶中巖白菜素的含量測(cè)定方法包括下列步驟：照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥD)測(cè)定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(20∶80)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm。理論板數(shù)按巖白菜素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

對(duì)照品溶液的制備 取巖白菜素對(duì)照品適量，精密稱定，加80％甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約0.15g，精密稱定，置25ml量瓶中，加80％甲醇20ml，超聲處理(功率300W，頻率40kHz)45分鐘，放冷，加80％甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

含量測(cè)定結(jié)果 本批次復(fù)方矮地茶片每片含矮地茶以巖白菜素(C₁₄H₁₆O₉)計(jì)為1.8mg。

實(shí)施例4

復(fù)方矮地茶片(糖衣片)批號(hào)：20111202

(1)鑒別：

矮地茶的顯微鑒別包括下列步驟：取本品，置顯微鏡下觀察：螺紋導(dǎo)管直徑7.5～25μm，纖維成束，壁較厚，草酸鈣方晶直徑7.5～26μm(矮地茶)。

矮地茶的薄層鑒別包括下列步驟：取本品2片，除去包衣，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。另取巖白菜素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲醇(9∶8∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵-1％鐵氰化鉀(1∶1)的混合溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

野菊花的薄層鑒別包括下列步驟：取本品3片，除去包衣，研細(xì)，加甲醇15ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。另取蒙花苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液2μl，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁酮-三氯甲烷-甲酸-水(15∶15∶6∶4∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2％三氯化鋁溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

甘草的鑒別包括下列步驟：取本品20片，除去包衣，研細(xì)，加乙醚40ml，超聲處理15分鐘，濾過(guò)，棄去乙醚液，藥渣加甲醇50ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用以水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用以正丁醇飽和的水洗滌3次，每次20ml，棄去水液，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，使成條狀，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

(2)含量測(cè)定：

矮地茶中巖白菜素的含量測(cè)定方法包括下列步驟：照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥD)測(cè)定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(20∶80)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm。理論板數(shù)按巖白菜素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

對(duì)照品溶液的制備 取巖白菜素對(duì)照品適量，精密稱定，加80％甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約0.15g，精密稱定，置25ml量瓶中，加80％甲醇20ml，超聲處理(功率300W，頻率40kHz)45分鐘，放冷，加80％甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

含量測(cè)定結(jié)果 本批次復(fù)方矮地茶片每片含矮地茶以巖白菜素(C₁₄H₁₆O₉)計(jì)為1.9mg。