本發(fā)明涉及羥苯甲酯的檢測(cè)領(lǐng)域，特別涉及一種測(cè)定食品、藥品及化妝品中對(duì)羥基苯甲酸甲酯的電化學(xué)方法。

（二）

背景技術(shù)：

對(duì)羥基苯甲酸甲酯，也稱尼泊金甲酯或羥苯甲酯，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：。

羥苯甲酯是一類適用于酸性體系的防腐劑，主要用作有機(jī)合成、食品、化妝品、醫(yī)藥的消毒防腐劑，也被用作于飼料防腐劑。它們對(duì)細(xì)菌，霉菌和酵母菌有很好的抑制作用，曾因低毒性、無刺激性等特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用。但最近有報(bào)道指出羥苯甲酯也會(huì)引起接觸性皮炎，而且有研究表明羥苯甲酯與患乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)存在一定關(guān)系。中國(guó)化妝品衛(wèi)生規(guī)范2007年版中規(guī)定對(duì)羥基苯甲酸酯類防腐劑在化妝品中單一酯最高限量為0.4%。

目前羥苯甲酯的檢測(cè)方法有高效液相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法、高效液相色譜-紫外法、高效液相色譜質(zhì)譜法，此外還有薄層色譜掃描法、毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜法等。這幾種方法的操作步驟復(fù)雜，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，檢測(cè)費(fèi)用高，而且對(duì)儀器要求高。因此建立一種簡(jiǎn)單、快捷的檢測(cè)羥苯甲酯方法非常重要。

（三）

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種簡(jiǎn)單可行、選擇性好、靈敏度高的測(cè)定對(duì)羥基苯甲酸甲酯的電化學(xué)方法。

本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種測(cè)定對(duì)羥基苯甲酸甲酯的電化學(xué)方法，包括如下步驟：

（1）將玻碳電極拋光、清洗后置于PBS、偶氮二甲酰胺及二次蒸餾水配成的溶液中，搖勻，以玻碳電極為工作電極，Ag/AgCl電極為參比電極，鉑絲電極為對(duì)電極，在1.3-2.1V電位范圍內(nèi)，以20mV/s掃描速率循環(huán)掃描16周，取出用二次蒸餾水淋洗電極表面，晾干，即值得偶氮二甲酰胺修飾電極；

（2）向燒杯中依次加入pH為4.0的PBS緩沖液、二次蒸餾水和羥苯甲酯，以偶氮二甲酰胺修飾電極為工作電極，Ag/AgCl電極為參比電極，鉑絲電極為對(duì)電極，攪拌10s，在0.6-1.2V電位范圍內(nèi)，采用差分脈沖伏安法進(jìn)行循環(huán)掃描，記錄峰電位和峰電流；每次掃描結(jié)束后，將電極至于空白滴液中循環(huán)掃描至峰消失，用二次蒸餾水沖洗，濾紙吸干后，即可進(jìn)行下一次測(cè)定。

本發(fā)明的更優(yōu)技術(shù)方案為：

步驟（1）中，玻碳電極的直徑為3.8mm。

步驟（1）中，將玻碳電極在濕潤(rùn)的金相砂紙上磨光，然后在濕潤(rùn)的氧化鋁上拋光成鏡面，依次用硝酸溶液、無水乙醇、二次石英亞沸蒸餾水超聲清洗，再用蒸餾水洗滌；金相砂紙的粒度為2000，氧化鋁的粒徑為0.05μm，拋光后的玻碳電極清洗為30s/次。

步驟（1）中，清洗后的玻碳電極放入10mLpH為7.0的PBS緩沖溶液、2mL 0.01mol/L的偶氮二甲酰胺溶液及8mL二次蒸餾水配成的溶液中。

采用差分脈沖伏安法繪制工作曲線。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，在0.6-1.2V電位范圍內(nèi)，用差分脈沖伏安法對(duì)不同濃度的羥苯甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定。

本發(fā)明采用電化學(xué)方法制備了偶氮二甲酰胺修飾電極來檢測(cè)羥苯甲酯，具有簡(jiǎn)單可行，選擇性好，靈敏度高，費(fèi)用低廉等優(yōu)點(diǎn)。

（四）附圖說明

下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。

圖1為本發(fā)明羥苯甲酯在裸玻碳電極（1）和偶氮二甲酰胺修飾電極（2）上的循環(huán)伏安圖；

圖2為最佳實(shí)驗(yàn)條件下不同濃度的羥苯甲酯在偶氮二甲酰胺修飾電極中的差分脈沖伏安圖；

圖3為標(biāo)準(zhǔn)曲線電流與濃度對(duì)數(shù)圖；

圖4為2.0×10^-5mol/L羥苯甲酯在偶氮二甲酰胺修飾電極中的平行測(cè)定6次的循環(huán)伏安曲線；

圖5為玻碳電極表面掃描電鏡圖；

圖6為偶氮二甲酰胺修飾電極表面掃描電鏡圖。

（五）具體實(shí)施方式

實(shí)施例：

（1）儀器與試劑

CHI660D型電化學(xué)分析系統(tǒng)(上海辰華公司)；KH-100DB型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；SYZ-550型石英亞沸高純水蒸餾器(金壇市晶玻實(shí)驗(yàn)儀器廠)； ESJ180-4電子分析天平；微量進(jìn)樣器；電化學(xué)實(shí)驗(yàn)用三電極系統(tǒng)，Ag/AgCl電極為參比電極，偶氮二甲酰胺修飾電極為工作電極，213型鉑絲電極(上海羅素科技有限公司)為對(duì)電極。

1.0×10^-3mol/L的羥苯甲酯(西格瑪奧瑞奇集團(tuán))標(biāo)準(zhǔn)溶液避光保存；0.01mol/L偶氮二甲酰胺(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)溶液避光保存；0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液(上海試劑工廠)、0.1mol/L檸檬酸溶液(上海譜振生物科技有限公司)配制的磷酸鹽緩沖溶液(PBS，pH為2.2～8.0)；無水乙醇(萊陽經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)精細(xì)化工廠)；試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水均為二次石英亞沸蒸餾水。

（2）偶氮二甲酰胺修飾電極的制備

將玻碳電極(Φ=3.8mm)在濕潤(rùn)的金相砂紙(粒度為2000)上磨光，然后在濕潤(rùn)的Al₂O₃(0.05μm)上拋光成鏡面，依次用HNO₃(1:1，V/V)、無水乙醇、二次石英亞沸蒸餾水超聲清洗(30s／次)，再用蒸餾水洗滌之后，放到10.00mL PBS(pH=7.0)，2.00mL(0.01mol/L)偶氮二甲酰胺及8.00mL二次蒸餾水配成的溶液中,搖勻，以玻碳電極為工作電極，Ag/AgCl電極為參比電極，鉑絲電極為對(duì)電極，在-1.3～2.1V電位范圍內(nèi)，以20mV/s掃描速率循環(huán)掃描16周，取出用二次蒸餾水淋洗電極表面，晾干，即制得偶氮二甲酰胺修飾電極。

（3）檢測(cè)方法

向燒杯中依次加入一定量pH=4.0的PBS緩沖溶液、二次蒸餾水和羥苯甲酯。以偶氮二甲酰胺修飾電極為工作電極，Ag/AgCl電極為參比電極，鉑絲電極為對(duì)電極，攪拌10s，在0.6～1.2V電位范圍內(nèi)，采用差分脈沖伏安法進(jìn)行循環(huán)掃描，記錄峰電位和峰電流。每次掃描結(jié)束后，將電極置于空白底液中循環(huán)掃描至峰消失，用二次蒸餾水沖洗，濾紙吸干后，即可進(jìn)行下一次測(cè)定。

（4）技術(shù)指標(biāo)

采用差分脈沖伏安法繪制工作曲線。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，在0.6-1.2V電位范圍內(nèi)，用差分脈沖伏安法對(duì)不同濃度的羥苯甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，羥苯甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液在濃度范圍6.0×10^-6-4.0×10^-4mol/L內(nèi)的對(duì)數(shù)值與羥苯甲酯氧化峰電流有良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為i_pa=8.11×10^-6+ 1.54lgc(μmol·L^-1)，相關(guān)系數(shù)為R=0.9906，檢出限為4.0×10^-6mol·L^-1。

用偶氮二甲酰胺修飾電極對(duì)2.0×10^-3mol·L^-1羥苯甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定6次，測(cè)得結(jié)果RSD為1.6%，表明該電極對(duì)羥苯甲酯的測(cè)定有較好的重現(xiàn)性，如附圖4所示。

附圖1為羥苯甲酯分別在裸玻碳電極(1)、 偶氮二甲酰胺修飾電極(2)上時(shí)的循環(huán)伏安響應(yīng)圖，由圖可見：羥苯甲酯在裸玻碳電極上的電流值為:i_pa1=5.39μA。而電極經(jīng)偶氮二甲酰胺化學(xué)修飾后在偶氮二甲酰胺修飾電極上的電流值為：i_pa2 =21.8μA。與裸玻碳電極相比，偶氮二甲酰胺修飾電極上的氧化峰電流明顯增大約4倍，這可能是由于偶氮二甲酰胺修飾膜對(duì)羥苯甲酯電化學(xué)氧化膜具有良好的催化作用。

附圖2中，從a到j(luò)的濃度分別為:6.0×10^-6，8.0×10^-6，1.0×10^-5，2.0×10^-5，4.0×10^-5，6.0×10^-5，8.0×10^-5，1.0×10^-4，2.0×10^-4，4.0×10^-4mol·L^-1。

用偶氮二甲酰胺修飾電極對(duì)2.0×10^-3mol·L^-1羥苯甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定6次，測(cè)得結(jié)果RSD為1.6%，表明該電極對(duì)羥苯甲酯的測(cè)定有較好的重現(xiàn)性，如附圖4所示。

附圖5和附圖6的掃描電鏡對(duì)比圖，證明偶氮二甲酰胺已被修飾到玻碳電極表面。

（5）回收率的測(cè)定

利用本發(fā)明的方法可對(duì)藥品、化妝品及食品中羥苯甲酯進(jìn)行檢測(cè)，回收率在96%-103%之間。