本發(fā)明涉及一種鑒別蠶絲種類的方法，更具體的說是涉及一種鑒別古代絲織品蠶絲種類的方法。
背景技術(shù)：
蠶絲是古代漢族文明產(chǎn)物之一，是熟蠶結(jié)繭時分泌絲液凝固而成的連續(xù)長纖維，也稱“天然絲”，根據(jù)食物的不同，又分桑蠶、柞蠶、木薯蠶、樟蠶、柳蠶和天蠶等，各種蠶絲在生活領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，在學(xué)術(shù)領(lǐng)域也備受關(guān)注，但是由不同蠶絲制成的各種絲織品，往往會因為工作的不慎或者時間的延長而導(dǎo)致標簽?zāi)：煜烁鞣N絲織品，給之后的科研工作帶來很大的不便，如果是保存較好的絲織品可以通過紅外，XRD等多種方式加以區(qū)分其蠶絲種類，對于保存狀態(tài)不好的古代絲織品使用普通的分析測試技術(shù)則很難鑒別。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，而提供一種快速，直觀，簡便的鑒別古代絲織品蠶絲種類的方法。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：一種鑒別古代絲織品蠶絲種類的方法，該方法采用如下步驟：
a)分別取一份已被混淆的由桑蠶絲，柞蠶絲，栗蠶絲制作的古代絲織品各2～8g，分為A，B，C三組；
b)三組樣品均以1:100的浴比在質(zhì)量分數(shù)為0.4～0.6％的Na2CO3水溶液中沸煮20～40min進行脫膠，反復(fù)4～6次，然后將三組樣品溶液分別和絲素分離，待絲素用去離子水沖洗絞干后，再取50～80ml質(zhì)量分數(shù)為1％的鹽酸溶液，在室溫下浸放50～60min，用溫水洗至溶液呈中性，在60～80℃的烘箱中烘干；
c)將由步驟b)脫鹽烘干的絲素繼續(xù)脫色和脫油蠟質(zhì)，先在50～70℃溫度下，放入90～110ml的質(zhì)量分數(shù)為60～80％甲醇溶液中浸100～120min，再在50～70℃溫度下，放入90～110ml無水乙醇中浸60～80min，接著在30～50℃溫度下，放入90～110ml的丙酮溶液中浸60～80min,最后絞干浸入90～110ml的乙醚中50～70min，使用吹風機吹干；
d)將由步驟c)得到的絲素在96～98℃下煮50～60min，反復(fù)4～6次，在60～80℃的烘箱中烘干；
e)由19.8g氫氧化銅和25.5ml乙二胺配制300ml的銅乙二胺溶液，將由步驟d)處理之后的三組絲素樣品分別放入配好的銅乙二胺溶液中，浴比為1:50,在50～60℃下保溫1～2h；
f)待冷卻后使用質(zhì)量分數(shù)為10％的醋酸調(diào)節(jié)pH值至8～10,采用透析法和超濾法共用對樣品進行脫鹽處理，然后使用聚乙二醇6000濃縮至原體積的1/3～2/3；
g)分別取一份三組樣品濃縮之后的溶液，均加入質(zhì)量分數(shù)為1.5～2％的二硫蘇糖醇溶液2～3ml于40～50℃下保持15～20min,待冷卻至室溫加入質(zhì)量分數(shù)為2.2～2.8％的碘乙酰胺溶液4～5ml，黑暗環(huán)境下保持15～20min后加入50～80ul的胰凝乳蛋白酶溶液然后用甲酸溶液稀釋；
h)采用HPLC-MS/MS對其進行質(zhì)譜分析，將A，B，C三組實驗的氨基酸序列與氨基酸序列數(shù)據(jù)庫進行對比，根據(jù)特征肽段即可確定A，B，C三組絲織品蠶絲的種類。
一種鑒別古代絲織品蠶絲種類的方法，其特征在于采用步驟如下：
a)分別取一份已被混淆的由桑蠶絲，柞蠶絲，栗蠶絲制作的古代絲織品各5g，分為A，B，C三組；
b)三組樣品均以1:100的浴比在質(zhì)量分數(shù)為0.5％的Na2CO3水溶液中沸煮30min進行脫膠，反復(fù)5次，然后將三組樣品溶液分別和絲素分離，待絲素用去離子水沖洗絞干后，再取65ml質(zhì)量分數(shù)為1％的鹽酸溶液，在室溫下浸放55min，用溫水洗至溶液呈中性，在70℃的烘箱中烘干；
c)將由步驟b)脫鹽烘干的絲素繼續(xù)脫色和脫油蠟質(zhì)，先在60℃溫度下，放入100ml的質(zhì)量分數(shù)為70％甲醇溶液中浸110min，再在60℃溫度下，放入100ml無水乙醇中浸70min，接著在40℃溫度下，放入100ml的丙酮溶液中浸70min,最后絞干浸入100ml的乙醚中60min，使用吹風機吹干；
d)將由步驟c)得到的絲素在97℃下煮55min，反復(fù)5次，在70℃的烘箱中烘干；
e)由19.8g氫氧化銅和25.5ml乙二胺配制300ml的銅乙二胺溶液，將由步驟d)處理之后的三組絲素樣品分別放入配好的銅乙二胺溶液中，浴比為1:50,在55℃下保溫1.5h；
f)待冷卻后使用質(zhì)量分數(shù)為10％的醋酸調(diào)節(jié)pH值至9,采用透析法和超濾法共用對樣品進行脫鹽處理，然后使用聚乙二醇6000濃縮至原體積的1/2；
g)分別取一份三組樣品濃縮之后的溶液，均加入質(zhì)量分數(shù)為1.7％的二硫蘇糖醇溶液2.5ml于45℃下保持17min,待冷卻至室溫加入質(zhì)量分數(shù)為2.5％的碘乙酰胺溶液4.5ml，黑暗環(huán)境下保持17min后加入65ul的胰凝乳蛋白酶溶液然后用甲酸溶液稀釋；
h)采用HPLC-MS/MS對其進行質(zhì)譜分析，將A，B，C三組實驗的氨基酸序列與氨基酸序列數(shù)據(jù)庫進行對比，根據(jù)特征肽段即可確定A，B，C三組絲織品蠶絲的種類。
本發(fā)明的有益效果是：采用蛋白質(zhì)組學(xué)方法鑒別古代絲織品蠶絲種類，克服了普通檢測分析方法的檢測限度，使得即便是保存狀態(tài)不好的古代絲織品也可以被區(qū)分鑒定；采用蛋白質(zhì)組學(xué)方法鑒定古代絲織品蠶絲種類，檢測中使用溶液內(nèi)酶切的技術(shù)使得實驗操作簡單方便；采用蛋白質(zhì)組學(xué)方法鑒定古代絲織品蠶絲種類，靈敏度高，準確度高，樣品使用量少。
具體實施方式
以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作詳細介紹：
一種鑒別古代絲織品蠶絲種類的方法，該方法采用如下步驟：
a)分別取一份已被混淆的由桑蠶絲，柞蠶絲，栗蠶絲制作的古代絲織品各2～8g，分為A，B，C三組；
b)三組樣品均以1:100的浴比在質(zhì)量分數(shù)為0.4～0.6％的Na2CO3水溶液中沸煮20～40min進行脫膠，反復(fù)4～6次，然后將三組樣品溶液分別和絲素分離，待絲素用去離子水沖洗絞干后，再取50～80ml質(zhì)量分數(shù)為1％的鹽酸溶液，在室溫下浸放50～60min，用溫水洗至溶液呈中性，在60～80℃的烘箱中烘干；
c)將由步驟b)脫鹽烘干的絲素繼續(xù)脫色和脫油蠟質(zhì)，先在50～70℃溫度下，放入90～110ml的質(zhì)量分數(shù)為60～80％甲醇溶液中浸100～120min，再在50～70℃溫度下，放入90～110ml無水乙醇中浸60～80min，接著在30～50℃溫度下，放入90～110ml的丙酮溶液中浸60～80min,最后絞干浸入90～110ml的乙醚中50～70min，使用吹風機吹干；
d)將由步驟c)得到的絲素在96～98℃下煮50～60min，反復(fù)4～6次，在60～80℃的烘箱中烘干；
e)由19.8g氫氧化銅和25.5ml乙二胺配制300ml的銅乙二胺溶液，將由步驟d)處理之后的三組絲素樣品分別放入配好的銅乙二胺溶液中，浴比為1:50,在50～60℃下保溫1～2h；
f)待冷卻后使用質(zhì)量分數(shù)為10％的醋酸調(diào)節(jié)pH值至8～10,采用透析法和超濾法共用對樣品進行脫鹽處理，然后使用聚乙二醇6000濃縮至原體積的1/3～2/3；
g)分別取一份三組樣品濃縮之后的溶液，均加入質(zhì)量分數(shù)為1.5～2％的二硫蘇糖醇溶液2～3ml于40～50℃下保持15～20min,待冷卻至室溫加入質(zhì)量分數(shù)為2.2～2.8％的碘乙酰胺溶液4～5ml，黑暗環(huán)境下保持15～20min后加入50～80ul的胰凝乳蛋白酶溶液然后用甲酸溶液稀釋；
h)采用HPLC-MS/MS對其進行質(zhì)譜分析，將A，B，C三組實驗的氨基酸序列與氨基酸序列數(shù)據(jù)庫(見附件1)進行對比，根據(jù)特征肽段即可確定A，B，C三組絲織品蠶絲的種類。
實施例1：一種鑒別古代絲織品蠶絲種類的方法，該方法采用如下步驟：
a)分別取一份已被混淆的由桑蠶絲，柞蠶絲，栗蠶絲制作的古代絲織品各2g，分為A，B，C三組；
b)三組樣品均以1:100的浴比在質(zhì)量分數(shù)為0.4％的Na2CO3水溶液中沸煮20min進行脫膠，反復(fù)4次，然后將三組樣品溶液分別和絲素分離，待絲素用去離子水沖洗絞干后，再取50ml質(zhì)量分數(shù)為1％的鹽酸溶液，在室溫下浸放50min，用溫水洗至溶液呈中性，在60℃的烘箱中烘干；
c)將由步驟b)脫鹽烘干的絲素繼續(xù)脫色和脫油蠟質(zhì)，先在50℃溫度下，放入90ml的質(zhì)量分數(shù)為60％甲醇溶液中浸100min，再在50℃溫度下，放入90ml無水乙醇中浸60min，接著在30℃溫度下，放入90ml的丙酮溶液中浸60min,最后絞干浸入90ml的乙醚中50min，使用吹風機吹干；
d)將由步驟c)得到的絲素在96℃下煮50min，反復(fù)4次，在60℃的烘箱中烘干；
e)由19.8g氫氧化銅和25.5ml乙二胺配制300ml的銅乙二胺溶液，將由步驟d)處理之后的三組絲素樣品分別放入配好的銅乙二胺溶液中，浴比為1:50,在50℃下保溫1h；
f)待冷卻后使用質(zhì)量分數(shù)為10％的醋酸調(diào)節(jié)pH值至8,采用透析法和超濾法共用對樣品進行脫鹽處理，然后使用聚乙二醇6000濃縮至原體積的1/3；
g)分別取一份三組樣品濃縮之后的溶液，均加入質(zhì)量分數(shù)為1.5％的二硫蘇糖醇溶液2ml于40℃下保持15min,待冷卻至室溫加入質(zhì)量分數(shù)為2.2％的碘乙酰胺溶液4ml，黑暗環(huán)境下保持15min后加入50ul的胰凝乳蛋白酶溶液然后用甲酸溶液稀釋；
h)采用HPLC-MS/MS對其進行質(zhì)譜分析，將A，B，C三組實驗的氨基酸序列與數(shù)據(jù)庫進行對比，根據(jù)特征肽段即可確定A，B，C三組絲織品蠶絲的種類。
實施例2:一種鑒別古代絲織品蠶絲種類的方法，該方法采用如下步驟：
a)分別取一份已被混淆的由桑蠶絲，柞蠶絲，栗蠶絲制作的古代絲織品各5g，分為A，B，C三組；
b)三組樣品均以1:100的浴比在質(zhì)量分數(shù)為0.5％的Na2CO3水溶液中沸煮30min進行脫膠，反復(fù)5次，然后將三組樣品溶液分別和絲素分離，待絲素用去離子水沖洗絞干后，再取65ml質(zhì)量分數(shù)為1％的鹽酸溶液，在室溫下浸放55min，用溫水洗至溶液呈中性，在70℃的烘箱中烘干；
c)將由步驟b)脫鹽烘干的絲素繼續(xù)脫色和脫油蠟質(zhì)，先在60℃溫度下，放入100ml的質(zhì)量分數(shù)為70％甲醇溶液中浸110min，再在60℃溫度下，放入100ml無水乙醇中浸70min，接著在40℃溫度下，放入100ml的丙酮溶液中浸70min,最后絞干浸入100ml的乙醚中60min，使用吹風機吹干；
d)將由步驟c)得到的絲素在97℃下煮55min，反復(fù)5次，在70℃的烘箱中烘干；
e)由19.8g氫氧化銅和25.5ml乙二胺配制300ml的銅乙二胺溶液，將由步驟d)處理之后的三組絲素樣品分別放入配好的銅乙二胺溶液中，浴比為1:50,在55℃下保溫1.5h；
f)待冷卻后使用質(zhì)量分數(shù)為10％的醋酸調(diào)節(jié)pH值至9,采用透析法和超濾法共用對樣品進行脫鹽處理，然后使用聚乙二醇6000濃縮至原體積的1/2；
g)分別取一份三組樣品濃縮之后的溶液，均加入質(zhì)量分數(shù)為1.7％的二硫蘇糖醇溶液2.5ml于45℃下保持17min,待冷卻至室溫加入質(zhì)量分數(shù)為2.5％的碘乙酰胺溶液4.5ml，黑暗環(huán)境下保持17min后加入65ul的胰凝乳蛋白酶溶液然后用甲酸溶液稀釋；
h)采用HPLC-MS/MS對其進行質(zhì)譜分析，將A，B，C三組實驗的氨基酸序列與氨基酸序列數(shù)據(jù)庫進行對比，根據(jù)特征肽段即可確定A，B，C三組絲織品蠶絲的種類。
實施例3:一種鑒別古代絲織品蠶絲種類的方法，該方法采用如下步驟：
a)分別取一份已被混淆的由桑蠶絲，柞蠶絲，栗蠶絲制作的古代絲織品各8g，分為A，B，C三組；
b)三組樣品均以1:100的浴比在質(zhì)量分數(shù)為0.6％的Na2CO3水溶液中沸煮40min進行脫膠，反復(fù)6次，然后將三組樣品溶液分別和絲素分離，待絲素用去離子水沖洗絞干后，再取80ml質(zhì)量分數(shù)為1％的鹽酸溶液，在室溫下浸放60min，用溫水洗至溶液呈中性，在80℃的烘箱中烘干；
c)將由步驟b)脫鹽烘干的絲素繼續(xù)脫色和脫油蠟質(zhì)，先在70℃溫度下，放入110ml的質(zhì)量分數(shù)為80％甲醇溶液中浸120min，再在70℃溫度下，放入110ml無水乙醇中浸80min，接著在50℃溫度下，放入110ml的丙酮溶液中浸80min,最后絞干浸入110ml的乙醚中70min，使用吹風機吹干；
d)將由步驟c)得到的絲素在98℃下煮60min，反復(fù)6次，在80℃的烘箱中烘干；
e)由19.8g氫氧化銅和25.5ml乙二胺配制300ml的銅乙二胺溶液，將由步驟d)處理之后的三組絲素樣品分別放入配好的銅乙二胺溶液中，浴比為1:50,在60℃下保溫2h；
f)待冷卻后使用質(zhì)量分數(shù)為10％的醋酸調(diào)節(jié)pH值至10,采用透析法和超濾法共用對樣品進行脫鹽處理，然后使用聚乙二醇6000濃縮至原體積的2/3；
g)分別取一份三組樣品濃縮之后的溶液，均加入質(zhì)量分數(shù)為2％的二硫蘇糖醇溶液3ml于50℃下保持20min,待冷卻至室溫加入質(zhì)量分數(shù)為2.8％的碘乙酰胺溶液5ml，黑暗環(huán)境下保持20min后加入80ul的胰凝乳蛋白酶溶液然后用甲酸溶液稀釋；
h)采用HPLC-MS/MS對其進行質(zhì)譜分析，將A，B，C三組實驗的氨基酸序列與氨基酸序列數(shù)據(jù)庫進行對比，根據(jù)特征肽段即可確定A，B，C三組絲織品蠶絲的種類。
以上僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，本發(fā)明的保護范圍并不僅局限于上述實施例，凡屬于本發(fā)明思路下的技術(shù)方案均屬于本發(fā)明的保護范圍。應(yīng)當指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理前提下的若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。
附件一
桑蠶：Bombyx mori (5263aa)
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柞蠶： Antheraea pernyi (2639aa)
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栗蠶：Saturnia japonica (partial, 991aa)
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