本發(fā)明屬于藥物檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種五氯酚鈉殘留的檢測(cè)方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：五氯酚鈉作為一種除草殺蟲劑，可經(jīng)由呼吸、皮膚接觸或誤食導(dǎo)致人員嚴(yán)重傷害或死亡。目前檢測(cè)五氯酚鈉殘留所使用的方法為氣相、氣質(zhì)、比色法等，在這些方法中有使用乙酸酐-吡啶溶液衍生劑，4-氨基安替比林作為反應(yīng)試劑，前處理操作繁瑣，檢出限高，成本大，目前急需一種高效、準(zhǔn)確的方法來進(jìn)行五氯酚鈉的檢測(cè)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：一種檢測(cè)五氯酚鈉殘留的方法，利用硫酸和正己烷提取樣品中的五氯酚鈉殘留，之后使用高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)；所述硫酸溶液的濃度為6％。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述檢測(cè)五氯酚鈉殘留的方法步驟如下：1)提取純化精確稱量5.00g樣品，加入15mL6％硫酸水溶液，再加入20mL正己烷，超聲20min，加入5gNaCl，振蕩1min，4000r/min離心5min，將上清液于梨形瓶中旋蒸至干，再加入10mL8％三乙胺乙腈水溶液復(fù)溶；所述三乙胺乙腈為三乙胺和乙腈按7∶3的體積比混合而成；2)凈化柱凈化用2mL甲醇和2mL水活化MAX凈化柱，將溶解在三乙胺乙腈水溶液中的樣品過MAX凈化柱，分別用5mL5％氨水和5mL甲醇淋洗凈化柱，減壓抽干，最后用5mL5％甲酸甲醇溶液洗脫，接收的洗脫液氮吹至干后，用1mL甲醇復(fù)溶，過0.22μm尼龍濾膜，待測(cè)；3)高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)色譜參數(shù)：色譜柱：AgilentEclipsePlusC18RRHD1.8μm；2.1mm*100mm；柱溫：40℃；流速：0.4mL/min；進(jìn)樣量：2μL；流動(dòng)相：A：5mM乙酸銨0.1％甲酸水，B：甲醇；質(zhì)譜參數(shù)：離子源：ESI源；離子源溫度：325℃；氣體流速：10L/min；噴嘴壓力：45psi；輔助加熱器溫度：350℃；輔助加熱器流量：11L/min。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述檢測(cè)五氯酚鈉殘留的方法應(yīng)用于檢測(cè)動(dòng)物源性食品中五氯酚鈉的殘留。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述動(dòng)物源性食品為肌肉、蛋類、乳類和腎臟。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明所要檢測(cè)的五氯酚鈉在基體中是以五氯酚離子的狀態(tài)存在，提取過程中加入6％硫酸水溶液可使基質(zhì)水溶液呈現(xiàn)酸性，使五氯酚鈉由離子狀態(tài)變成分子狀態(tài)，成為非極性物質(zhì)；由于正己烷作為非極性溶劑，根據(jù)相似相溶的原理可以作為提取溶劑，文獻(xiàn)中有的采用環(huán)己烷與乙酸乙酯的混合體作為提取溶劑，以乙酸酐吡啶作為衍生劑，這種方法的成本高，且乙酸酐對(duì)質(zhì)譜損害很大，不利于定量定性分析；旋蒸至干后加入8％三乙胺可使目標(biāo)物成離子狀態(tài)，乙腈水溶液可將附著在旋干瓶上的目標(biāo)物清洗下來，為下一步凈化做準(zhǔn)備；固相萃取中采用的MAX凈化柱為強(qiáng)陰離子交換柱，五氯酚鈉在堿性環(huán)境中為陰離子，當(dāng)五氯酚鈉通過MAX凈化柱時(shí)，可與MAX上的氨基結(jié)合，雜質(zhì)從而流下去，達(dá)到凈化的目的。相比于其他方法的單一基質(zhì)，本方法適用于動(dòng)物源性食品檢測(cè)；該方法使用正己烷提取，操作簡(jiǎn)便；使用MAX固相萃取柱凈化，選擇性強(qiáng)，回收率高，有效去除雜質(zhì)，相比于其他方法如采用濃硫酸凈化及衍生的方法，簡(jiǎn)化操作步驟，既省時(shí)省力，又減少了對(duì)環(huán)境的污染；使用高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，采用MRM采集方法，相比于其他色譜方法，具有靈敏度高，重復(fù)性好，檢測(cè)限低的優(yōu)勢(shì)，并且大大減少雜質(zhì)干擾。附圖說明圖1五氯酚鈉高效液相質(zhì)譜圖，其中縱坐標(biāo)為響應(yīng)，橫坐標(biāo)為m/z。圖2五氯酚鈉定量定性離子明細(xì)，其中縱坐標(biāo)為響應(yīng)，橫坐標(biāo)為保留時(shí)間。圖3五氯酚鈉保留時(shí)間的測(cè)定，其中縱坐標(biāo)為響應(yīng)，橫坐標(biāo)為保留時(shí)間。圖4五氯酚鈉的定量限測(cè)定，其中縱坐標(biāo)為響應(yīng)，橫坐標(biāo)為保留時(shí)間，圖上四部分分別代表4個(gè)子離子的S/N。圖5五氯酚鈉的標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中縱坐標(biāo)為峰面積響應(yīng)，橫坐標(biāo)為五氯酚鈉濃度。具體實(shí)施方式在本發(fā)明中所使用的術(shù)語，除非有另外說明，一般具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義。下面結(jié)合具體實(shí)施例，并參照數(shù)據(jù)進(jìn)一步詳細(xì)的描述本發(fā)明。以下實(shí)施例只是為了舉例說明本發(fā)明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1.標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制1.1儲(chǔ)備液的配制準(zhǔn)確稱量10.00mg五氯酚鈉，溶解到甲醇中，定容到10mL，作為1000μg/mL的儲(chǔ)備液(實(shí)際濃度應(yīng)乘以五氯酚鈉的純度)，置于4℃冷藏保存；1.2標(biāo)準(zhǔn)中間液的配制準(zhǔn)確量取1mL五氯酚鈉儲(chǔ)備液，溶解到甲醇中，定容到10mL，作為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間液，置于4℃冷藏保存；1.3標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的配制用標(biāo)準(zhǔn)中間液配制成1、2、5、10、20ng/mL的標(biāo)液作為工作曲線用的標(biāo)準(zhǔn)溶液。2.樣品處理2.1提取純化精確稱量5.00g樣品，加入15mL6％硫酸水溶液，再加入20mL正己烷，超聲20min，加入5gNaCl，振蕩1min，4000r/min離心5min，將上清液于梨形瓶中旋蒸至干，再加入10mL8％三乙胺乙腈水溶液復(fù)溶；所述三乙胺乙腈為三乙胺和乙腈按7∶3的體積比混合而成；2.2凈化柱凈化用2mL甲醇和2mL水活化MAX凈化柱，將溶解在三乙胺乙腈水溶液中的樣品過MAX凈化柱，分別用5mL5％氨水和5mL甲醇淋洗凈化柱，減壓抽干，最后用5mL5％甲酸甲醇溶液洗脫，接收的洗脫液氮吹至干后，用1mL甲醇復(fù)溶，過0.22μm尼龍濾膜，待測(cè)；3.高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)使用的高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀為AgilentLC-MSMS1290/6460。色譜參數(shù)：色譜柱：AgilentEclipsePlusC18RRHD1.8μm；2.1mm*100mm；柱溫：40℃；流速：0.4mL/min；進(jìn)樣量：2μL；流動(dòng)相：A：5mM乙酸銨0.1％甲酸水，B：甲醇；流動(dòng)相的梯度如表1所示：表1流動(dòng)相的梯度時(shí)間甲醇濃度％0.00401.00403.001005.001005.01406.0040質(zhì)譜參數(shù)：離子源：ESI源；離子源溫度：325℃；氣體流速：10L/min；噴嘴壓力：45psi；輔助加熱器溫度：350℃；輔助加熱器流量：11L/min。4.結(jié)果及分析4.1專屬性如圖1所示，1ppm五氯酚鈉上機(jī)，通過質(zhì)譜優(yōu)化各得到4個(gè)離子對(duì)，縱坐標(biāo)為響應(yīng)，橫坐標(biāo)為m/z。五氯酚鈉定量定性離子明細(xì)如圖2所示，其中縱坐標(biāo)為響應(yīng)，橫坐標(biāo)為保留時(shí)間。五氯酚鈉的質(zhì)譜結(jié)果如表2所示：表2質(zhì)譜結(jié)果4.2保留時(shí)間20ppb五氯酚鈉通過C18色譜柱分離，確定保留時(shí)間，如圖3所示，保留時(shí)間約為3.942min，且色譜的峰形較佳，無干擾峰出現(xiàn)。4.3檢出限在基質(zhì)中添加相當(dāng)于樣品含有1.0μg/kg的標(biāo)準(zhǔn)品，經(jīng)前處理上機(jī)檢測(cè)，計(jì)算其信噪比(S/N)＞10，如圖4所示。該方法測(cè)得的檢出限為1.0μg/kg。4.4標(biāo)準(zhǔn)曲線精密吸取五氯酚鈉標(biāo)準(zhǔn)品，用50％甲醇溶液稀釋成系列濃度為1，2，5，10，20μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積響應(yīng)為縱坐標(biāo)，氟苯尼考胺濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖5所示，得到五氯酚鈉的回歸方程為Y＝8362.689X-1330.1913，R2＝0.9996，由相關(guān)系數(shù)可見，在1ng/mL～20ng/mL標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，UPLC-MSMS法測(cè)定線性關(guān)系良好，此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以用于準(zhǔn)確定量。4.5空白樣品添加回收空白樣品添加回收如表3所示：表3空白樣品的添加回收添加回收選取市場(chǎng)上牛肉、豬肉、豬肝、豬腎、雞蛋、牛奶、蝦做質(zhì)控實(shí)驗(yàn)，回收均在70％-90％之間，方法穩(wěn)定性良好。5.結(jié)論通過運(yùn)用UPLC-LCMSMS法對(duì)動(dòng)物源基體中的五氯酚鈉進(jìn)行測(cè)定，確定用6％硫酸水溶液和正己烷進(jìn)行提取，MAX小柱進(jìn)行凈化，該方法使五氯酚鈉色譜峰達(dá)到基線分離，峰形良好，檢測(cè)限低，靈敏度高，方法回收穩(wěn)定，本研究為動(dòng)物源基質(zhì)中的五氯酚鈉殘留量的測(cè)定建立了一種可靠地分析方法。當(dāng)前第1頁1 2 3