本發(fā)明涉及藥物分析領(lǐng)域中的一種檢測復(fù)方甘草片中嗎啡和甘草酸含量的方法。
背景技術(shù)：
：：復(fù)方甘草片，英文名為compoundliquoricetablets，本品為棕色片；有特臭，味甜，易吸潮。復(fù)方甘草片收載于《中國藥典》2015年版二部，主要由甘草浸膏粉、阿片粉、樟腦、八角茴香油、苯甲酸鈉等組成，是目前治療上呼吸道感染、急性支氣管炎等疾病所致咳嗽的常用藥。其中，甘草浸膏粉為保護性鎮(zhèn)咳祛痰劑；阿片粉有較強鎮(zhèn)咳作用；樟腦及八角茴香油能刺激支氣管黏膜，反射性地增加腺體分泌，稀釋痰液，使痰易于咳出；苯甲酸鈉為防腐劑。上述成分組成復(fù)方制劑，有鎮(zhèn)咳、祛痰、消炎的協(xié)同作用。因復(fù)方甘草片毒副作用小、價格低廉，深受廣大患者青睞，是居家常備的藥品之一。《中國藥典》(2015年版)中復(fù)方甘草片功效成分嗎啡及甘草酸分別采用兩個完全不同的液相色譜系統(tǒng)進行檢測，其中嗎啡測定時，樣品首先在固相萃取柱提取后，于辛烷基硅烷鍵合硅膠柱檢測，該方法操作復(fù)雜、精密度低、耗時長、成本高，因此，研制開發(fā)一種復(fù)方甘草片含量的檢測方法一直是亟待解決的新課題。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種復(fù)方甘草片含量的檢測方法，該方法采用hplc法(濃度、梯度淋洗、變波長法)進行檢測，該方法具有試劑易得、操作簡便、時間短、精密度高、檢測成本低等優(yōu)點。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的：一種檢測復(fù)方甘草片中嗎啡和甘草酸含量的方法，該檢測方法包括如下步驟：(1)色譜條件：色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，規(guī)格250×4.6mm，5μm柱溫：30℃～40℃流速：1.3ml/min～1.7ml/min紫外檢測器波長：210nm、250nm進樣量：10μl～25μl流動相：磷酸鹽緩沖液和乙腈(2)磷酸鹽緩沖液的制備：取磷酸二氫鉀6.8g，加水適量溶解，加入庚烷磺酸鈉1.1g、三乙胺2ml，用20％磷酸溶液調(diào)ph至4.9±0.1，用水稀釋至1000ml；(3)稀釋劑的制備：取50ml冰醋酸，加水至500ml，混勻，加入500ml甲醇，搖勻，即得；(4)供試品溶液的制備：取本品適量，精密稱定，研細，精密稱取約1片量，置50ml量瓶中，加稀釋劑適量，超聲30分鐘，取出，放冷，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(5)對照品溶液的制備：精密稱取嗎啡對照品10mg，置100ml量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為嗎啡對照品溶液；精密稱取甘草酸銨對照品15mg，置100ml量瓶中，精密加入嗎啡對照品溶液10ml，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液；(6)測定方法：精密量取對照品溶液10μl～25μl注入液相色譜儀，重復(fù)5次，記錄色譜圖，嗎啡峰及甘草酸峰的理論板數(shù)均不得低于2000，嗎啡峰及甘草酸峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均應(yīng)≤2.0％，甘草酸與相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5；精密量取供試品溶液10μl～25μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算，即得；(7)計算公式式中：a嗎啡對：對照品溶液中嗎啡峰面積；a嗎啡樣：供試品溶液中嗎啡峰面積；w嗎啡對：嗎啡對照品的重量，mg；w供：供試品的重量，mg；w平均片重：復(fù)方甘草片的平均片重，g；p嗎啡：嗎啡對照品的純度，％；式中：a甘草酸對：對照品溶液中甘草酸峰面積；a甘草酸樣：供試品溶液中甘草酸峰面積；w甘草酸對：甘草酸銨對照品的重量，mg；w供：供試品的重量，mg；w平均片重：復(fù)方甘草片的平均片重，mg；p甘草酸：甘草酸銨對照品的純度，％。所述十八烷基硅烷鍵合硅膠柱選自superiorexmgc18柱；所述測定方法中流動相磷酸鹽緩沖液和乙腈采用濃度、梯度淋洗、變波長法：所述濃度、梯度淋洗、變波長法為如下步驟，洗脫開始后0-4分鐘，磷酸鹽緩沖液83％，乙腈17％，波長210nm；洗脫開始后4-4.01分鐘，磷酸鹽緩沖液由83％到73％，乙腈由17％到27％，波長250nm；洗脫開始后4.01-28分鐘，磷酸鹽緩沖液73％，乙腈27％，波長250nm；洗脫開始后28-28.01分鐘，磷酸鹽緩沖液由73％到50％，乙腈由27％到50％，波長250nm；洗脫開始后28.01-47分鐘，磷酸鹽緩沖液50％，乙腈50％，波長250nm；洗脫開始后47-47.01分鐘，磷酸鹽緩沖液由50％到83％，乙腈由50％到17％，波長210nm；洗脫開始后47.01-65分鐘，磷酸鹽緩沖液83％，乙腈17％，波長210nm。本發(fā)明的要點在于它的檢測方法，采用hplc(濃度、梯度淋洗、變波長法)進行檢測。一種復(fù)方含量的檢測方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有該方法采用hplc法進行檢測，通過該方法檢測復(fù)方甘草片的含量，有試劑易得、操作簡便、每批檢測時間由2天縮短為一天、精密度高、檢測成本低等優(yōu)點，將廣泛地應(yīng)用于藥物分析領(lǐng)域中。附圖說明下面結(jié)合附圖及實施例對本發(fā)明進行詳細說明。圖1是本發(fā)明的對照品溶液hplc圖譜。圖2是本發(fā)明的供試品溶液hplc圖譜。具體實施方式以下實例將有助于對本發(fā)明的了解，但這些實例僅為了對本發(fā)明加以說明，本發(fā)明并不限于這些內(nèi)容。實施例一1.色譜條件色譜柱：superiorex(資生堂)mgc18250×4.6mm5μm，柱溫：30℃～40℃，流速：1.3ml/min～1.7ml/min，檢測波長：210nm、250nm，進樣量：10μl～25μl。2.溶液制備2.1流動相：磷酸鹽緩沖液和乙腈2.2磷酸鹽緩沖液：取磷酸二氫鉀6.8g，加水適量溶解，加入庚烷磺酸鈉1.1g、三乙胺2ml，用20％磷酸溶液調(diào)ph至4.9±0.1，用水稀釋至1000ml。2.3稀釋劑：取50ml冰醋酸，加水至500ml，混勻，加入500ml甲醇，搖勻，即得。2.4供試品溶液：取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取0.15881g、0.15675g、0.15656g量，分別置50ml量瓶中，加稀釋劑適量，超聲30分鐘，取出，放冷，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。2.5對照品溶液：精密稱取嗎啡對照品10.37mg、10.05mg，分別置100ml量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為嗎啡對照品溶液；精密稱取甘草酸銨對照品13.27mg、13.89mg，分別置100ml量瓶中，分別精密加入嗎啡對照品溶液10ml，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。3.測定方法采用流動相磷酸鹽緩沖液和乙腈濃度、梯度淋洗、變波長法；洗脫開始后0-4分鐘，磷酸鹽緩沖液83％，乙腈17％，波長210nm；洗脫開始后4-4.01分鐘，磷酸鹽緩沖液83％→73％，乙腈17％→27％，波長250nm；洗脫開始后4.01-28分鐘，磷酸鹽緩沖液73％，乙腈27％，波長250nm；洗脫開始后28-28.01分鐘，磷酸鹽緩沖液73％→50％，乙腈27％→50％，波長250nm；洗脫開始后28.01-47分鐘，磷酸鹽緩沖液50％，乙腈50％，波長250nm；洗脫開始后47-47.01分鐘，磷酸鹽緩沖液50％→83％，乙腈50％→17％，波長210nm；洗脫開始后47.01-65分鐘，磷酸鹽緩沖液83％，乙腈17％，波長210nm。精密量取對照品溶液10μl～25μl注入液相色譜儀，重復(fù)5次，記錄色譜圖，嗎啡峰及甘草酸峰的理論板數(shù)均不低于2000，嗎啡峰及甘草酸峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均≤2.0％，甘草酸與相鄰色譜峰的分離度符合要求。精密量取供試品溶液10μl～25μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。對照品溶液1連續(xù)5針的峰面積為：對照品溶液2的峰面積為：a1嗎啡＝320270a2嗎啡＝321171a嗎啡對2平均＝320720a1甘草酸＝762024a2甘草酸＝764080a甘草酸對2平均＝7630524.樣品測定取供試液注入液相色譜儀，記錄圖譜，各重復(fù)一次。供試品1的嗎啡峰面積：a1嗎啡＝257095a2嗎啡＝257478a嗎啡1平均＝257286供試品1的甘草酸峰面積：a1甘草酸＝987465a2甘草酸＝987276a甘草酸1平均＝987370供試品2的嗎啡峰面積：a1嗎啡＝255210a2嗎啡＝255193a嗎啡2平均＝255202供試品2的甘草酸峰面積：a1甘草酸＝974100a2甘草酸＝975284a甘草酸2平均＝974692供試品3的嗎啡峰面積：a1嗎啡＝269060a2嗎啡＝269248a嗎啡3平均＝269154供試品3的甘草酸峰面積：a1甘草酸＝1036876a2甘草酸＝1036960a甘草酸3平均＝10369185.計算結(jié)果式中：a嗎啡對：對照品溶液中嗎啡峰面積；a嗎啡樣：供試品溶液中嗎啡峰面積；w嗎啡對：嗎啡對照品的重量，mg；w供：供試品的重量，mg；w平均片重：復(fù)方甘草片的平均片重，g；p嗎啡：嗎啡對照品的純度，％。式中：a甘草酸對：對照品溶液中甘草酸峰面積；a甘草酸樣：供試品溶液中甘草酸峰面積；w甘草酸對：甘草酸銨對照品的重量，mg；w供：供試品的重量，mg；w平均片重：復(fù)方甘草片的平均片重，g；p甘草酸：甘草酸銨對照品的純度，％。供試品1：供試品2：供試品3：實施例二濃度、梯度淋洗時流動相中成分配比的選擇其他條件同實施例一，采用流動相磷酸鹽緩沖液和乙腈濃度、梯度淋洗、變波長法；洗脫開始后0-4分鐘，磷酸鹽緩沖液86％，乙腈14％，波長210nm；洗脫開始后4-4.01分鐘，磷酸鹽緩沖液86％→73％，乙腈14％→27％，波長250nm；洗脫開始后4.01-28分鐘，磷酸鹽緩沖液73％，乙腈27％，波長250nm；洗脫開始后28-28.01分鐘，磷酸鹽緩沖液73％→50％，乙腈27％→50％，波長250nm；洗脫開始后28.01-47分鐘，磷酸鹽緩沖液50％，乙腈50％，波長250nm；洗脫開始后47-47.01分鐘，磷酸鹽緩沖液50％→86％，乙腈50％→14％，波長210nm；洗脫開始后47.01-65分鐘，磷酸鹽緩沖液86％，乙腈14％，波長210nm。供試品溶液中嗎啡的色譜峰受相鄰雜質(zhì)峰干擾，無法進行檢測。實施例三流動相ph值的選擇其他條件同實施例一，采用磷酸鹽緩沖液和乙腈作為流動相。磷酸鹽緩沖液：取磷酸二氫鉀6.8g，加水適量溶解，加入庚烷磺酸鈉1.1g、三乙胺2ml，用20％磷酸溶液調(diào)ph至5.1，用水稀釋至1000ml。供試品溶液中甘草酸的色譜峰受相鄰雜質(zhì)峰干擾，無法進行檢測。當(dāng)前第1頁12當(dāng)前第1頁12