本發(fā)明涉及延胡索配方顆粒檢測(cè)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種延胡索配方顆粒的特征圖譜的檢測(cè)方法及質(zhì)量控制方法。

背景技術(shù)：

延胡索為罌粟科(Papaveraceae)紫堇屬植物延胡索(Corydalis yanhusuo W.T.Wang)的干燥塊莖，生于低海拔的曠野草叢或緩坡林緣，分布于河南南部、陜西南部、江蘇、安徽、浙江、湖北等地。歷代本草均有記載。延胡索據(jù)古醫(yī)藥書籍記載有活血散瘀、理氣止痛的功效，現(xiàn)代科學(xué)實(shí)驗(yàn)表明延胡索具有很好的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜和催眠的藥理作用。

為了更深入的研究延胡索，一般采用氣相色譜分析或氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法對(duì)延胡索的化學(xué)成分進(jìn)行研究，建立特征圖譜，但所獲得的特征圖譜出峰密集，色譜峰的分離度較小，色譜峰之間容易重疊，從而不能準(zhǔn)確地確定延胡索化學(xué)成分。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種延胡索配方顆粒的特征圖譜的檢測(cè)方法，其建立了延胡索配方顆粒的液相特征圖譜，能夠系統(tǒng)地反應(yīng)延胡索配方顆?；瘜W(xué)成分的全貌，并且共有峰相對(duì)保留時(shí)間穩(wěn)定，可用于延胡索配方顆粒的質(zhì)量控制。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種延胡索配方顆粒的質(zhì)量控制方法，其能夠準(zhǔn)確檢測(cè)延胡索配方顆粒的化學(xué)成分，有效表征其相對(duì)含量，從而能夠全面評(píng)價(jià)延胡索配方顆粒質(zhì)量。

本發(fā)明的實(shí)施例是這樣實(shí)現(xiàn)的：

一種延胡索配方顆粒的特征圖譜的檢測(cè)方法，其包括以下步驟：

取延胡索乙素和延胡索配方顆粒分別配制對(duì)照品溶液和供試品溶液；以及

對(duì)對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)行高效液相色譜分析，色譜條件包括：以甲醇和磷酸溶液作為流動(dòng)相分別對(duì)對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)行梯度洗脫，并且在梯度洗脫過程中控制甲醇的體積，使得甲醇的體積占流動(dòng)相總量的百分比由8％增大至90％。

一種延胡索配方顆粒的質(zhì)量控制方法，其包括前面所述的延胡索配方顆粒的特征圖譜的檢測(cè)方法。

本發(fā)明實(shí)施例的有益效果是：

本發(fā)明實(shí)施例的延胡索配方顆粒的特征圖譜的檢測(cè)方法，利用高效液相色譜法分析延胡索的化學(xué)成分，建立了延胡索配方顆粒的特征圖譜，系統(tǒng)的反映了延胡索配方顆粒化學(xué)成分的全貌，并且按照本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)方法獲得共有峰相對(duì)保留時(shí)間較為穩(wěn)定，可為評(píng)價(jià)或控制延胡索配方顆粒的質(zhì)量提供依據(jù)。并且，本發(fā)明實(shí)施例的特征圖譜色譜峰的分離度好，色譜峰之間明顯分離，能夠準(zhǔn)確地得到延胡索中主要化學(xué)成分的色譜峰，檢測(cè)方法具有良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，應(yīng)當(dāng)理解，以下附圖僅示出了本發(fā)明的某些實(shí)施例，因此不應(yīng)被看作是對(duì)范圍的限定，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關(guān)的附圖。

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1的延胡索配方顆粒的特征圖譜；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例2的延胡索配方顆粒的特征圖譜；

圖3為本發(fā)明實(shí)施例3的延胡索配方顆粒的特征圖譜；

圖4為本發(fā)明實(shí)施例4的延胡索配方顆粒的特征圖譜；

圖5為本發(fā)明實(shí)施例5的延胡索配方顆粒的特征圖譜；

圖6為本發(fā)明實(shí)施例6的延胡索配方顆粒的特征圖譜；

圖7為本發(fā)明實(shí)施例的延胡索配方顆粒的特征圖譜與空白溶液和對(duì)照品溶液的對(duì)照?qǐng)D譜；

圖8為本發(fā)明實(shí)施例所建立的延胡索配方顆粒的特征圖譜對(duì)照?qǐng)D譜；

圖9為3批延胡索配方顆粒的特征圖譜。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

關(guān)于本發(fā)明實(shí)施例的材料、試劑以及儀器說明：

1.延胡索乙素：中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)110726－201515。

2.延胡索配方顆粒：黑龍江珍寶島藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)S20151201、S20151202、S20151203。

3.作為流動(dòng)相用的甲醇：色譜級(jí)，默克公司(HPLC，Merck)。

4.磷酸：色譜級(jí)，默克公司(HPLC，Merck)。

5.三乙胺：色譜級(jí)，默克公司(HPLC，Merck)。

6.氨水：分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

7.作為溶劑用的甲醇：色譜級(jí)，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

8.實(shí)驗(yàn)儀器：Waters e2695＿2998液相系統(tǒng)，Agilent Zorbax eclipse XDB－C18(4.6×250mm，5μm)液相色譜柱。

本發(fā)明實(shí)施例的延胡索配方顆粒的特征圖譜的檢測(cè)方法，其包括以下步驟：

步驟1：配制對(duì)照品溶液和供試品溶液

取延胡索乙素和延胡索配方顆粒分別配制對(duì)照品溶液和供試品溶液。具體地：

步驟1.1：配制對(duì)照品溶液

用甲醇配制濃度為0.1mg/mL－0.3mg/mL的延胡索乙素溶液，即得對(duì)照品溶液。

優(yōu)選地，對(duì)照品溶液的濃度為0.2mg/mL，以提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

延胡索乙素為延胡索的主要成分之一，其相較于其他成分(例如延胡索甲素、丙素、丁素等)具有更強(qiáng)的鎮(zhèn)痛效果，因此本實(shí)施例選取延胡索乙素作為對(duì)照品，對(duì)延胡索配方顆粒特征圖譜中的延胡索乙素的色譜峰進(jìn)行指認(rèn)，根據(jù)特征圖譜能夠直觀地獲取延胡索配方顆粒中延胡索乙素的含量，為控制或評(píng)價(jià)延胡索配方顆粒的質(zhì)量提供依據(jù)。

毫無疑義地，在本發(fā)明的其他實(shí)施例中，還可以用延胡索的其他有效成分作為對(duì)照品，例如延胡索甲素、延胡索丙素、延胡索丁素、延胡索戊素、延胡索辛素、延胡索壬素、延胡索癸素、延胡索子素、延胡索丑素、延胡索寅素、β－高白屈菜堿、黃連堿和延胡索胺堿等。在本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)構(gòu)思下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以將前述有效成分中的任一種作為延胡索乙素的替換。

步驟1.2：配制供試品溶液

在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，配制供試品溶液包括以下步驟：

用氨水和甲醇的混合溶液配制濃度為15mg/mL－25mg/mL的延胡索配方顆粒溶液，其中氨水和甲醇的體積比為1：20。稱定重量，加熱回流0.8h－1.2h后放冷，再稱定重量，用氨水和甲醇的混合溶液補(bǔ)足減少的重量。經(jīng)搖勻后過濾，所得濾液即為供試品溶液。

根據(jù)一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，加氨水和甲醇的混合溶液調(diào)節(jié)溶液濃度為20mg/mL。

根據(jù)一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，加熱回流溶液1h。

進(jìn)一步，在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，配制供試品溶液還包括以下步驟：過濾后取濾液蒸干，并用甲醇定容，再搖勻、過濾，所得濾液即為供試品溶液。

在本發(fā)明的有一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，配制供試品溶液包括以下步驟：

用氨水和甲醇的混合溶液配制濃度為15mg/mL－25mg/mL的延胡索配方顆粒溶液，其中氨水和甲醇的體積比為1：20。稱定重量，用超聲波處理溶液50min－70min，放冷，用氨水和甲醇的混合溶液補(bǔ)足減少的重量。經(jīng)搖勻后過濾，所得濾液即為供試品溶液。

根據(jù)一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，加氨水和甲醇的混合溶液調(diào)節(jié)溶液濃度為20mg/mL。

根據(jù)一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，用超聲波處理溶液60min。

步驟2：高效液相色譜分析對(duì)照品溶液和供試品溶液

對(duì)對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)行高效液相色譜分析，色譜條件包括：

用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑。以甲醇和磷酸溶液作為流動(dòng)相分別對(duì)對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)行梯度洗脫，并且在梯度洗脫過程中控制甲醇的體積，使得甲醇的體積占流動(dòng)相總量的百分比由8％增大至90％。流動(dòng)相的流速為0.8mL/min－1.2mL/min。檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，色譜柱的溫度為20℃－35℃。

根據(jù)一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，磷酸溶液中磷酸的體積比0.1％，并且用三乙胺將磷酸溶液的pH值調(diào)節(jié)至6。

根據(jù)一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，流動(dòng)相甲醇和磷酸溶液的流速為0.8mL/min－1.2mL/min。

根據(jù)一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，色譜柱溫度為30℃。

在本發(fā)明較佳的實(shí)施例中，在進(jìn)行梯度洗脫時(shí)：

初始時(shí)刻，即t＝0min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為8％－12％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為88％－92％；

t＝15min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為18％－22％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為78％－82％；

t＝35min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為32％－38％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為62％－68％；

t＝50min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為48％－52％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為48％－52％；

t＝80min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為82％－90％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為10％－18％。

優(yōu)選地，在本發(fā)明的較佳實(shí)施例中：

t＝0min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為10％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為90％；

t＝15min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為20％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為80％；

t＝35min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為35％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為65％；

t＝50min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為50％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為50％；

t＝80min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為85％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為15％。

優(yōu)選地，在本發(fā)明的較佳實(shí)施例中：

t＝0min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為8％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為92％；

t＝15min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為18％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為82％；

t＝35min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為32％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為68％；

t＝50min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為48％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為52％；

t＝80min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為82％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為18％。

優(yōu)選地，在本發(fā)明的較佳實(shí)施例中：

t＝0min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為12％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為88％；

t＝15min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為22％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為78％；

t＝35min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為38％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為62％；

t＝50min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為52％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為48％；

t＝80min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為90％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為10％。

優(yōu)選地，在本發(fā)明的較佳實(shí)施例中：

t＝0min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為11％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為89％；

t＝15min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為21％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為79％；

t＝35min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為36％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為64％；

t＝50min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為51％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為49％；

t＝80min時(shí)，甲醇占流動(dòng)相總量的百分比為89％，磷酸溶液占流動(dòng)相總量的百分比為11％。

本發(fā)明實(shí)施例的延胡索配方顆粒的質(zhì)量控制方法，其包括本發(fā)明實(shí)施例的延胡索配方顆粒的特征圖譜的檢測(cè)方法。具體地：

步驟1：按照本發(fā)明實(shí)施的檢測(cè)方法建立延胡索配方顆粒標(biāo)準(zhǔn)特征圖譜。

步驟2：建立待檢測(cè)顆粒樣品的特征圖譜，具體地：將待檢測(cè)的顆粒樣品按照本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，獲得液相特征圖譜。

步驟3：將顆粒樣品的特征圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜進(jìn)行對(duì)比，通過圖譜中的色譜峰出峰時(shí)間、峰數(shù)量、峰值等參數(shù)來評(píng)價(jià)或控制顆粒樣品的質(zhì)量。

實(shí)施例1

本實(shí)施例的特征圖譜是按照高效液相色譜法(《中國藥典》2015年版四部通則0512)測(cè)定的。

色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Agilent ZORBAX Eclipse XDB－C18；4.6×250mm，5μm)。以流動(dòng)相A：甲醇(色譜級(jí)，默克公司(HPLC，Merck))，流動(dòng)相B：0.1％磷酸溶液(三乙胺調(diào)pH值至6.0)，按下表1進(jìn)行梯度洗脫，流速為1mL/min。檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，柱溫30℃。

表1

供試品溶液：取延胡索配方顆粒樣品(批號(hào)S20151201)1g，研細(xì)，精密稱定，置平底燒瓶中，精密加入氨水－甲醇(1：20)混合溶液50mL，調(diào)節(jié)溶液濃度為20mg/mL，精密稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用氨水－甲醇(1：20)混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

取上述供試品溶液10μL注入液相色譜儀中，記錄色譜峰，所得特征圖譜如圖1所示。

實(shí)施例2

本實(shí)施例與實(shí)施例1的區(qū)別在于供試品溶液的提取方式不同。

供試品溶液：取延胡索配方顆粒樣品(批號(hào)S20151201)1g，研細(xì)，精密稱定，置平底燒瓶中，精密加入氨水－甲醇(1：20)混合溶液50mL，調(diào)節(jié)溶液濃度為20mg/mL，精密稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用氨水－甲醇(1：20)混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL，蒸干，用甲醇定容至5mL容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

取上述供試品溶液10μL注入液相色譜儀中，記錄色譜峰，所得特征圖譜如圖2所示。

實(shí)施例3

本實(shí)施例與實(shí)施例1的區(qū)別也在于供試品溶液的提取方式不同。

供試品溶液：取延胡索配方顆粒樣品(批號(hào)S20151201)1g，研細(xì)，精密稱定，置平底燒瓶中，精密加入氨水－甲醇(1：20)混合溶液50mL，調(diào)節(jié)溶液濃度為20mg/mL，精密稱定重量，超聲60min，放冷，再稱定重量，用氨水－甲醇(1：20)混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

取上述供試品溶液10μL注入液相色譜儀中，記錄色譜峰，所得特征圖譜如圖3所示。

實(shí)施例1－實(shí)施例3相互之間的區(qū)別在于供試品溶液(即延胡索配方顆粒溶液)的提取方式不同。如圖1－圖3所示的實(shí)施例1－實(shí)施例3的特征圖譜，三者的特征圖譜峰數(shù)及分布情況基本一致。其中，圖2所示出的實(shí)施例2的特征圖譜的色譜峰高較高。這是由于在施例2在實(shí)施例1的基礎(chǔ)之上，在過濾步驟之后，對(duì)濾液進(jìn)行了蒸干、甲醇定容以及再過濾等步驟，提高了溶液的純度，增大了檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

實(shí)施例4

本實(shí)施例和實(shí)施例1的區(qū)別在于，色譜柱的溫度不同。本實(shí)施例的色譜柱溫度為25℃。

色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Agilent ZORBAX Eclipse XDB－C18；4.6×250mm，5μm)。以流動(dòng)相A：甲醇(色譜級(jí)，默克公司(HPLC，Merck))，流動(dòng)相B：0.1％磷酸溶液(三乙胺調(diào)pH值至6.0)，按照表1進(jìn)行梯度洗脫，流速為1mL/min。檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，柱溫25℃。

對(duì)照品溶液：稱取延胡索乙素適量，用甲醇(色譜級(jí)，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)配制成濃度為0.2mg/mL的對(duì)照品溶液。

供試品溶液：取延胡索配方顆粒樣品(批號(hào)S20151201)1g，研細(xì)，精密稱定，置平底燒瓶中，精密加入氨水－甲醇(1：20)混合溶液50mL，調(diào)節(jié)溶液濃度為20mg/mL，精密稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用氨水－甲醇(1：20)混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

取上述供試品溶液10μL注入液相色譜儀中，記錄色譜峰，所得特征圖譜如圖4所示。

實(shí)施例5

本實(shí)施例和實(shí)施例1的區(qū)別也在于，色譜柱的溫度不同。本實(shí)施例的色譜柱溫度為35℃。

色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Agilent ZORBAX Eclipse XDB－C18；4.6×250mm，5μm)。以流動(dòng)相A：甲醇(色譜級(jí)，默克公司(HPLC，Merck))，流動(dòng)相B：0.1％磷酸溶液(三乙胺調(diào)pH值至6.0)，按照表1進(jìn)行梯度洗脫，流速為1mL/min。檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，柱溫35℃。

對(duì)照品溶液：稱取延胡索乙素適量，用甲醇(色譜級(jí)，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)配制成濃度為0.2mg/mL的對(duì)照品溶液。

供試品溶液：取延胡索配方顆粒樣品(批號(hào)S20151201)1g，研細(xì)，精密稱定，置平底燒瓶中，精密加入氨水－甲醇(1：20)混合溶液50mL，調(diào)節(jié)溶液濃度為20mg/mL，精密稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用氨水－甲醇(1：20)混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

取上述供試品溶液10μL注入液相色譜儀中，記錄色譜峰，所得特征圖譜如圖5所示。

實(shí)施例1、實(shí)施例4和實(shí)施例5相互之間的區(qū)別在于供試品溶液(即延胡索配方顆粒溶液)的色譜柱溫度不同。如圖1、圖4和圖5所示的實(shí)施例1、實(shí)施例4和實(shí)施例5的特征圖譜，三者的色譜峰區(qū)別較小，均呈正態(tài)分布，并且分離度良好，其中以圖1所示的實(shí)施例1的正態(tài)分布最好，分離度最好。

實(shí)施例6

本實(shí)施例和實(shí)施例1的區(qū)別在于，流動(dòng)相的流速不同。本實(shí)施例中，流動(dòng)相：甲醇和磷酸溶液的流速為0.8mL/min。

色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Agilent ZORBAX Eclipse XDB－C18；4.6×250mm，5μm)。以流動(dòng)相A：甲醇(色譜級(jí)，默克公司(HPLC，Merck))，流動(dòng)相B：0.1％磷酸溶液(三乙胺調(diào)pH值至6.0)，按照表1進(jìn)行梯度洗脫，流速為0.8mL/min。檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，柱溫30℃。

對(duì)照品溶液：稱取延胡索乙素適量，用甲醇(色譜級(jí)，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)配制成濃度為0.2mg/mL的對(duì)照品溶液。

供試品溶液：取延胡索配方顆粒樣品(批號(hào)S20151201)1g，研細(xì)，精密稱定，置平底燒瓶中，精密加入氨水－甲醇(1：20)混合溶液50mL，調(diào)節(jié)溶液濃度為20mg/mL，精密稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用氨水－甲醇(1：20)混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

取上述供試品溶液10μL注入液相色譜儀中，記錄色譜峰，所得特征圖譜如圖6所示。

試驗(yàn)例1

本試驗(yàn)例在于對(duì)特征圖譜中的延胡索乙素進(jìn)行指認(rèn)。

取空白溶液(氨水－甲醇溶液，其中氨水：甲醇＝1：20)和由延胡索乙素配制而成的對(duì)照品溶液按照與實(shí)施例1相同的方法進(jìn)行色譜分析。其中，對(duì)照品溶液：稱取延胡索乙素適量，用甲醇(色譜級(jí)，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)配制成濃度為0.2mg/mL的對(duì)照品溶液。色譜圖見圖7。如7所示，上層色譜為對(duì)照品延胡索乙素的特征圖譜，中層色譜為空白溶液的特征圖譜，沒有出現(xiàn)峰值，下層色譜為實(shí)施例1的延胡索配方顆粒的特征圖譜。圖7中，68min對(duì)應(yīng)的色峰即為延胡索乙素。

同時(shí)，如圖8所示，對(duì)延胡索乙素配方顆粒的其他特征峰進(jìn)行標(biāo)記，按照本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)方法獲得特征圖譜具有八個(gè)特征峰，其中8號(hào)色譜峰為延胡索乙素，其余色譜峰與8號(hào)峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為0.60(峰1)、0.64(峰2)、0.65(峰3)、0.66(峰4)0.69(峰5)、0.92(峰6)和0.94(峰7)，相對(duì)偏差不得過±5％。

試驗(yàn)例2

本試驗(yàn)例的目的在于對(duì)本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)方法的精密度進(jìn)行測(cè)試，具體地：

取批號(hào)為S20151201的延胡索配方顆粒供試品溶液，按照實(shí)施例1的檢測(cè)方法連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μL，并對(duì)每次進(jìn)樣的特征峰保留時(shí)間和相對(duì)峰面積進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，見表2和表3。

表2延胡索配方顆粒的特征峰保留時(shí)間

表3延胡索配方顆粒的特征峰相對(duì)峰面積

如表2和表3所示，特征峰的保留時(shí)間的RSD均小于0.3％，特征峰的相對(duì)峰面積RSD均小于2.0％，表明本發(fā)明實(shí)施例精密度良好，保證了檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

試驗(yàn)例3

本試驗(yàn)例的目的在于檢測(cè)本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)方法的重復(fù)性，具體地：

取批號(hào)為S20151201的延胡索配方顆粒，精密稱取6份，按實(shí)施例1的檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，取所得供試品溶液，分別進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為10μL。并對(duì)每次進(jìn)樣的特征峰保留時(shí)間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，見表4。

表4重復(fù)性考察－特征峰保留時(shí)間

如表4所示，所得特征峰的保留時(shí)間的RSD均小于0.3％，表明本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)方法重復(fù)性良好。

試驗(yàn)例4

本試驗(yàn)例的目的在于檢測(cè)本發(fā)明實(shí)施例的供試品溶液的穩(wěn)定性，具體地：

取實(shí)施例1的供試品溶液，每隔100分鐘進(jìn)樣10μL，檢測(cè)80min內(nèi)的色譜圖，對(duì)特征峰進(jìn)行分析，并對(duì)每次進(jìn)樣的特征峰保留時(shí)間和相對(duì)峰面積比值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，見表5和表6。

表5延胡索配方顆粒的特征峰保留時(shí)間

表6延胡索配方顆粒的特征峰相對(duì)峰面積

如表5和表6所示，色譜峰相對(duì)保留時(shí)間均小于0.3％，特征峰的相對(duì)峰面積的RSD均小于2.0％，表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

試驗(yàn)例5

本試驗(yàn)例的目的在于建立三批延胡索配方顆粒(S20151201、S20151202和S20151203)的特征圖譜，具體地：

取3批延胡索配方顆粒的供試品溶液，進(jìn)樣10μL，記錄80min的色譜圖，如圖9所示。同時(shí)，3批配方顆粒的特征峰的相對(duì)保留時(shí)間見表7。

表7延胡索配方顆粒的特征峰相對(duì)保留時(shí)間

3批配方顆粒有8個(gè)共有峰，分別在41.1，44.0，44.5，45.3，46.9，62.8，63.8，68.3min左右出峰，其中68.3分鐘為延胡索乙素峰。共有峰保留時(shí)間具有較好的重復(fù)性。8個(gè)共有峰的平均相對(duì)保留時(shí)間依次為：0.602、0.644、0.652、0.663、0.686、0.919、0.935、1，RSD均低于0.3％。這8個(gè)共有峰出峰時(shí)間較為穩(wěn)定，可作為延胡索配方顆粒的特征峰。

綜上所述，通過試驗(yàn)例1－5的檢驗(yàn)結(jié)果可以看出，本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)方法不僅系統(tǒng)、全面地反映了延胡索配方顆粒的化學(xué)成分，為評(píng)價(jià)或控制延胡索配方顆粒質(zhì)量提供科學(xué)的評(píng)價(jià)方法，并且本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、精密度高，具有良好的重現(xiàn)性(重復(fù)性)，同時(shí)本發(fā)明實(shí)施例所建立的特征圖譜，色譜峰分離效果過，基線平穩(wěn)，可以作為延胡索配方顆粒特征圖譜的對(duì)照?qǐng)D譜，用于評(píng)價(jià)延胡索或醋延胡索配方顆粒的質(zhì)量。

值得說明的是，本發(fā)明實(shí)施例的延胡索配方顆粒的特征圖譜的檢測(cè)方法同樣適用于醋延胡索配方顆粒。

以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。