本發(fā)明屬于中藥分析領域，具體涉及一種黃秦艽藥材指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜。

背景技術：

黃秦艽，別名：滇黃芩、麗江金不換、大苦參、黃龍膽。龍膽科、黃秦艽屬多年生草本植物，產(chǎn)西藏東南部、云南西北部、四川西部。

據(jù)現(xiàn)代臨床研究,黃秦艽的主要功效為清熱、消炎、解毒，可治療支氣管炎，解烏頭堿、草烏和附片的中毒,用于治療胃痙攣和解除烏頭中毒引起的多種中樞神精癥狀，對各種痛癥均具有很好的效果。

近年來,龍膽科藥用植物對急慢性病毒性肝炎療效顯著,因此國內(nèi)外藥物化學工作者對其化學成分的研究引起產(chǎn)生了濃厚的興趣。迄今為止，龍膽科的許多藥用植物的化學成分及藥理活性都已被研究，有的已被開發(fā)利用，但黃秦艽化學成分的研究還未見報道。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術問題是：現(xiàn)有技術中沒有對黃秦艽藥材進行質(zhì)量控制的有效方法。

為合理開發(fā)利用云南這一特有藥用資源黃秦艽，對其藥性和療效用現(xiàn)代醫(yī)學的理論進行闡釋，發(fā)現(xiàn)其新的用途，本發(fā)明對其化學成分進行了研究，并提供了黃秦艽藥材指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜。

本發(fā)明提供的黃秦艽藥材指紋圖譜的建立方法，包括以下步驟：

(1)、以黃秦艽制備黃秦艽醇提物；

(2)、將步驟(1)得到的所述黃秦艽醇提物進行液相色譜檢測，記錄90min內(nèi)的指紋圖譜：

其中，所述液相色譜檢測中的流動相包括流動相A和流動相B，所述流動相A為甲醇，所述流動相B為0.01％～0.1％磷酸溶液，所述流動相A和流動相B的體積百分數(shù)之和為100％；流動相的流速為：0.8～1.2mL/min；

所述液相色譜檢測的洗脫程序為梯度洗脫，所述梯度洗脫為：

0～5min，所述流動相A的體積百分數(shù)從7％～9％上升至17％～19％，所述流動相B的體積百分數(shù)從91％～93％下降至81％～83％；

5～20min，所述流動相A的體積百分數(shù)從17％～19％上升至29％～31％，所述流動相B的體積百分數(shù)從81％～83％下降至69％～71％；

20～45min，所述流動相A的體積百分數(shù)從29％～31％上升至30％～32％，所述流動相B的體積百分數(shù)從69％～71％下降至68％～70％；

45～50min，所述流動相A的體積百分數(shù)從30％～32％上升至37％～39％，所述流動相B的體積百分數(shù)從68％～70％下降至61％～63％；

50～55min，所述流動相A的體積百分數(shù)從37％～39％上升至40％～42％，所述流動相B的體積百分數(shù)從61％～63％下降至58％～60％；

55～82min，所述流動相A的體積百分數(shù)從40％～42％上升至41％～43％，所述流動相B的體積百分數(shù)從58％～60％下降至57％～59％；

82～83min，所述流動相A的體積百分數(shù)從41％～43％下降至7％～9％，所述流動相B的體積百分數(shù)從57％～59％上升至91％～93％；

83～90min，所述流動相A的體積百分數(shù)保持在7％～9％，所述流動相B的體積百分數(shù)保持在91％～93％。

優(yōu)選地，步驟(1)為：黃秦艽藥材用90％～100％甲醇溶液回流提取2～4次，每次3～5小時，過濾，合并提取液，減壓濃縮，得黃秦艽醇提物。

優(yōu)選地，步驟(1)為：黃秦艽藥材用80％甲醇溶液回流提取3次，每次4小時，過濾，合并提取液，減壓濃縮，得黃秦艽醇提物。

優(yōu)選地，所述流動相B為0.05％磷酸溶液。

優(yōu)選地，所述梯度洗脫為：

0～5min，所述流動相A的體積百分數(shù)從8％上升至18％，所述流動相B的體積百分數(shù)從92％下降至82％；

5～20min，所述流動相A的體積百分數(shù)從18％上升至30％，所述流動相B的體積百分數(shù)從82％下降至70％；

20～45min，所述流動相A的體積百分數(shù)從30％上升至31％，所述流動相B的體積百分數(shù)從70％下降至69％；

45～50min，所述流動相A的體積百分數(shù)從31％上升至38％，所述流動相B的體積百分數(shù)從69下降至62％；

50～55min，所述流動相A的體積百分數(shù)從38％上升至41％，所述流動相B的體積百分數(shù)從62％下降至59％；

55～82min，所述流動相A的體積百分數(shù)從41％上升至42％，所述流動相B的體積百分數(shù)從59％下降至58％；

82～83min，所述流動相A的體積百分數(shù)從42％下降至8％，所述流動相B的體積百分數(shù)從58％上升至92％；

83～90min，所述流動相A的體積百分數(shù)保持在8％，所述流動相B的體積百分數(shù)保持在92％。

優(yōu)選地，流動相的流速為：1mL/min。

優(yōu)選地，所述液相色譜檢測的檢測器為紫外檢測器；紫外檢測波長為254nm。

優(yōu)選地，所述液相色譜檢測中的色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，，色譜柱柱長為250mm，內(nèi)徑為4.6mm，粒徑為5μm。

優(yōu)選地，所述液相色譜檢測中的色譜柱柱溫為30℃。

本發(fā)明還提供上述的建立方法得到的黃秦艽藥材指紋圖譜，所述指紋圖譜具有47個指紋峰，各指紋峰的數(shù)據(jù)如下表：

本發(fā)明使用溶劑提取法得到黃秦艽醇提物，采用梯度洗脫進行液相色譜檢測，且得到的指紋圖譜中各成分的色譜峰峰形和分離度均較好，能夠對黃秦艽中的相關化學成分進行定性檢測，并且有利于計算色譜峰的峰面積，通過含量測定方法可以計算得到黃秦艽藥材中各成分含量。

本發(fā)明利用本發(fā)明提供的指紋圖譜能夠對黃秦艽藥材中各成分的定量測定，從而有效地控制黃秦艽藥材的質(zhì)量。

附圖說明

圖1是本發(fā)明的黃秦艽藥材的指紋圖譜。

具體實施方式

下面結合附圖和具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，以使本領域的技術人員可以更好的理解本發(fā)明并能予以實施，但所舉實施例不作為對本發(fā)明的限定。

實施例1：黃秦艽醇提物的制備方法：

黃秦艽藥材4.8Kg用80％甲醇溶液回流提取3次，每次4小時，過濾，合并提取液，減壓濃縮，得黃秦艽醇提物1227.68g。

所用的黃秦艽實驗藥材黃秦艽購于云南省大理市藥材市場周盛藥材行，經(jīng)鑒定為龍膽科黃秦艽屬黃秦艽的干燥根莖，所用甲醇購買于天津博迪化工有限公司。

實施例2：指紋圖譜的測定：

戴安Ultimate 3000型色譜儀，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱型號為Phenomenex Synergi色譜柱，色譜柱柱長為250mm，內(nèi)徑為4.6mm，粒徑為5μm。

將流動相A為甲醇，所述流動相B為0.05％磷酸溶液，液相色譜檢測的洗脫程序為梯度洗脫，所述梯度洗脫為：0～5min，所述流動相A的體積百分數(shù)從8％上升至18％，所述流動相B的體積百分數(shù)從92％下降至82％；5～20min，所述流動相A的體積百分數(shù)從18％上升至30％，所述流動相B的體積百分數(shù)從82％下降至70％；20～45min，所述流動相A的體積百分數(shù)從30％上升至31％，所述流動相B的體積百分數(shù)從70％下降至69％；45～50min，所述流動相A的體積百分數(shù)從31％上升至38％，所述流動相B的體積百分數(shù)從69下降至62％；50～55min，所述流動相A的體積百分數(shù)從38％上升至41％，所述流動相B的體積百分數(shù)從62％下降至59％；55～82min，所述流動相A的體積百分數(shù)從41％上升至42％，所述流動相B的體積百分數(shù)從59％下降至58％；82～83min，所述流動相A的體積百分數(shù)從42％下降至8％，所述流動相B的體積百分數(shù)從58％上升至92％；83～90min，所述流動相A的體積百分數(shù)保持在8％，所述流動相B的體積百分數(shù)保持在92％。流動相的流速為1mL/min。液相色譜檢測的檢測器為紫外檢測器；紫外檢測波長為254nm。液相色譜檢測中的色譜柱柱溫為30℃。

所用的色譜純甲醇購買于美國Tedia公司，磷酸購買于國藥集團化學試劑有限公司。

將本發(fā)明實施例1制備的黃秦艽醇提物進行液相色譜檢測得到的指紋圖譜如圖1所示，圖1為本發(fā)明實施例1得到的黃秦艽醇提物的指紋圖譜。其共有47個指紋峰，各指紋峰的數(shù)據(jù)如下表：

從上表和圖1可看出，本發(fā)明的大部分指紋峰的分離度均大于1.5，大部分成分理論塔板數(shù)均不低于5000。(其中僅有非常少部分峰的分離度和理論塔板數(shù)系統(tǒng)無法分析得到,標注為n.a.)

根據(jù)本發(fā)明得到的指紋圖譜通過與標準物質(zhì)對照計算實施例1得到的黃秦艽醇提物中主要成分含量。

以上所述實施例僅是為充分說明本發(fā)明而所舉的較佳的實施例，本發(fā)明的保護范圍不限于此。本技術領域的技術人員在本發(fā)明基礎上所作的等同替代或變換，均在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。本發(fā)明的保護范圍以權利要求書為準。