本發(fā)明屬于杏鮑菇工廠化生產(chǎn)領(lǐng)域，特別涉及一種杏鮑菇工廠化生產(chǎn)中菌渣的測定方法。
背景技術(shù)：
：食用菌工廠化瓶栽業(yè)務(wù)主要是指用塑料瓶子在空調(diào)設(shè)施內(nèi)常年栽培，通過栽培的機械化和標(biāo)準(zhǔn)化，來實現(xiàn)食用菌在工廠內(nèi)常年穩(wěn)定的生產(chǎn)。由于工廠內(nèi)菇房環(huán)境不受季節(jié)影響，實現(xiàn)了食用菌的周年供應(yīng)，滿足了消費者對新鮮食用菌產(chǎn)品的需求。鑒于食用菌瓶栽技術(shù)的優(yōu)勢，目前諸如真姬菇、灰樹花、白靈菇、金針菇、杏鮑菇、滑子菇、茶樹菇、猴頭菇等的瓶栽生產(chǎn)已經(jīng)在產(chǎn)業(yè)上得到廣泛的應(yīng)用。杏鮑菇(PleurotuseryngiiQuel)，又名剌芹側(cè)耳。隸屬于真菌門、擔(dān)子菌綱、傘菌目、側(cè)耳科、側(cè)耳屬。杏鮑菇菌肉肥厚，質(zhì)地脆嫩，特別是菌柄組織致密、結(jié)實、乳白，可全部食用，且菌柄比菌蓋更脆滑、爽口，被稱為“平菇王”、“干貝菇”，具有愉快的杏仁香味和如鮑魚的口感，適合保鮮、加工，深得人們的喜愛。杏鮑菇的子實體單生或群生，菌蓋寬2-12cm，初呈拱圓形，后逐漸平展，成熟時中央淺凹至漏斗形，表面有絲狀光澤，平滑、干燥、細(xì)纖維狀，幼時蓋緣內(nèi)卷，成熟后呈波浪狀或深裂；菌肉白色，具有杏仁味，無乳汁分泌；菌褶延生，密集，略寬，乳白色，邊緣及兩側(cè)平，有小菌褶；菌柄2-8cm至0.5-3cm，偏心生或側(cè)生。杏鮑菇屬于中低溫結(jié)實性菌類，子實體發(fā)育適宜溫度圍10-15℃。目前能夠用于菌渣的測定方法普遍采用傳統(tǒng)的范氏洗滌法，樣品抽濾烘干轉(zhuǎn)移的過程對結(jié)果造成很大的誤差，不能得到杏鮑菇生長過程中短期內(nèi)培養(yǎng)料中木質(zhì)纖維素含量的微小變化，限制了對于杏鮑菇生長過程中對木質(zhì)纖維素利用過程的研究，因此不能深入的進(jìn)行杏鮑菇工廠化生產(chǎn)的配方篩選研究，阻礙了杏鮑菇的工業(yè)化發(fā)展。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種杏鮑菇工廠化生產(chǎn)中菌渣的測定方法，該方法能夠準(zhǔn)確定量木質(zhì)纖維素的含量，大大減小誤差，能夠得到食用菌生長過程中短期內(nèi)培養(yǎng)料中木質(zhì)纖維素含量的微小變化。本發(fā)明的一種杏鮑菇工廠化生產(chǎn)中菌渣的測定方法，包括：(1)將杏鮑菇工廠化生產(chǎn)中的菌渣經(jīng)中性洗滌劑和無水亞硫酸鈉(用于脫除木質(zhì)素)煮沸處理，離心，收集殘渣，得到中性洗滌纖維；上清液采用苯酚硫酸法測定總糖；(2)中性洗滌后的菌渣經(jīng)酸性洗滌劑和無水亞硫酸鈉處理，離心，收集殘渣，得到酸性洗滌纖維；上清液采用苯酚硫酸法測定總糖；(3)酸性洗滌后的菌渣經(jīng)硫酸溶液消化后，離心，干燥，灰化，得到木質(zhì)素含量；離心后的上清液采用苯酚硫酸法測定總糖。所述步驟(1)中的中性洗滌劑的組成為：EDTA0.0186g/ml，硼酸鈉0.0068g/ml，十二烷基硫酸鈉0.03g/ml，無水磷酸氫二鈉0.00456g/ml，乙二醇乙醚1％，pH值為6.9～7.1。所述步驟(1)中的中性洗滌纖維的成分包括半纖維素、纖維素、木質(zhì)素和硅酸鹽。所述步驟(2)中的酸性洗滌劑的組成為：1mol/L含有十六烷三甲基溴化銨的硫酸溶液。所述步驟(2)中的酸性洗滌纖維的成分包括纖維素、木質(zhì)素和硅酸鹽。所述無水亞硫酸鈉與中性洗滌劑或酸性洗滌劑的質(zhì)量體積比為1g:200ml。所述步驟(3)中的硫酸溶液體積百分?jǐn)?shù)為72％。所述步驟(3)中的消化溫度為30℃，消化時間為3h。所述步驟(3)中的灰化溫度為550℃，灰化時間為3h。所述步驟(1)、(2)和(3)中的苯酚硫酸法測定總糖具體為：多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物，再以比色法測定。有益效果(1)本發(fā)明采用苯酚硫酸法對消化后消化液中的多糖進(jìn)行定量測定，然后換算成木質(zhì)纖維素的含量，達(dá)到準(zhǔn)確定量，大大減小誤差，能夠得到食用菌生長過程中短期內(nèi)培養(yǎng)料中木質(zhì)纖維素含量的微小變化；(2)本發(fā)明采用高速離心的方法，分離時間縮短、效率大大提高；因此對于蛋白含量較高的食用菌的菌渣更有優(yōu)勢，且誤差小，可對樣品中木質(zhì)纖維素含量的微小變化進(jìn)行跟蹤，具有良好的應(yīng)用前景。附圖說明圖1為實施例1中苯酚硫酸法測定總糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線。具體實施方式下面結(jié)合具體實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。實施例1一、溶液配制(1)中性洗滌液準(zhǔn)確稱取18.6g乙二胺四乙酸二鈉(EDTA，C10H14O8Na2·2H2O，分析純)和6.8g硼酸鈉(Na2B4O7·10H2O，分析純)放入燒杯中，加入少量蒸餾水，加熱溶解后，再加入30g十二烷基硫酸鈉(C12H25NaO4S，分析純)和10ml乙二醇乙醚(C4H10O2，分析純)，4.56g無水磷酸氫二鈉(Na2HPO4，分析純)，在容量瓶中稀釋至1000ml，其中pH值約為6.9～7.1(pH值一般勿需調(diào)整)。(2)酸性洗滌液量取約27.87ml濃硫酸(分析純，比重1.84，98％)，徐徐加入已裝有500ml蒸餾水的燒杯中，冷卻后注入1000ml容量瓶定容，標(biāo)定；稱取20g十六烷三甲基溴化銨(CTAB，分析純)溶于1000ml1N硫酸，必要時過濾。(3)72％硫酸配制稱取433.53g去離子水于1L玻璃燒杯中，置于磁力攪拌器上，不斷攪拌，沿玻璃棒貼壁緩緩倒入1199.68g98％濃硫酸。(4)5％苯酚配制80克苯酚(分析純重蒸餾試劑)加20克水使之溶解，可置冰箱中避光長期儲存。臨用前以80％苯酚配制5％苯酚。(每次測定均需現(xiàn)配)。二、方法(1)工廠化栽培杏鮑菇流程配料、裝瓶、滅菌、冷卻、接種、預(yù)培養(yǎng)、培養(yǎng)、搔菌、菌絲恢復(fù)、催蕾子實體、發(fā)育、采收、削菇、包裝、挖瓶，分別在滅菌后，搔菌后，出菇后各取三瓶樣品，稱濕重，烘干，稱干重，記錄含水量，三瓶混勻取樣，打粉，過篩，測定木質(zhì)纖維素含量。(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線制備取葡萄糖(105℃，干燥制恒重)0.0100g(AR)，用蒸餾水溶解定容至100mL，取干凈干燥試管1-7，用移液槍加葡萄糖溶液0mL，0.1mL，0.2mL，0.3mL，0.4mL，0.5mL，0.6mL，分別加蒸餾水至1mL，然后加5％苯酚0.5mL，再加入2.5mL98％濃硫酸。震蕩混勻，沸水浴15min，流動水冷卻，490nm處檢測吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。(每次測定時均繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線)。(3)中性洗滌液洗滌1.0g樣品，加入100mL中性洗滌液，0.5g無水亞硫酸鈉，置于100℃水浴鍋中，保持微沸60min，取2mL洗滌液12000rpm離心5min，上清液苯酚硫酸法測定總糖，剩余部分10000rpm離心10min，棄上清收集殘渣。成分包括半纖維素、纖維素、木質(zhì)素和硅酸鹽。(4)酸性洗滌液洗滌將中性洗滌殘渣至于100ml容量瓶中，加入100mL酸性洗滌液，0.5g無水亞硫酸鈉，置于100℃水浴鍋中，保持微沸60min，取2mL洗滌液12000rpm離心5min，上清液苯酚硫酸法測定總糖，剩余部分10000rpm離心10min，棄上清收集殘渣。成分包括纖維素、木質(zhì)素和硅酸鹽。(5)72％硫酸消化將酸性洗滌殘渣至于100ml容量瓶中，加入10mL72％硫酸，30℃下消化3h，稀釋定容到100L，取2mL消化液12000rpm離心5min，上清液苯酚硫酸法測定總糖，剩余部分10000rpm離心10min，棄上清，清水洗滌重復(fù)離心一次(防止烘干時殘留硫酸使殘渣碳化)，收集殘渣。(6)木質(zhì)素測定72％硫酸消化后殘渣，干燥恒重后稱重，不溶的為酸洗木質(zhì)素和酸不溶灰分，經(jīng)550℃3h灰化后得出含量。(7)計算公式m(多糖)＝n(中性洗滌)*180*0.9；m(半纖維素)＝n(酸性洗滌)*150*0.9；m(纖維素)＝n(72％硫酸消化)*180*0.9；m(木質(zhì)素)＝m(72％硫酸消化)-m(灰分)。(8)結(jié)果分析①工廠化杏鮑菇生長狀況工廠化杏鮑菇生長狀況②木質(zhì)纖維素降解情況：1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制標(biāo)準(zhǔn)品吸光度標(biāo)準(zhǔn)品(mg/ml)00.010.020.030.040.050.06吸光度10.0470.1380.2320.3150.3970.4680.566吸光度20.0450.1360.2300.3120.4000.4790.568吸光度30.0450.1390.2320.3160.4010.4850.572平均值0.0460.1380.2310.3140.3990.4770.569根據(jù)七個標(biāo)準(zhǔn)品和對應(yīng)吸光度平均值做出標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示，得出標(biāo)準(zhǔn)方程為：y＝8.625x+0.0518，R2＝0.9994。2.杏鮑菇菌渣多糖含量測定中性洗滌液洗滌后，采用苯酚硫酸法測定洗滌液中總糖含量，原始數(shù)據(jù)如下表:將三個吸光度的平均值代入標(biāo)準(zhǔn)方程，得出總糖濃度X＝(Y-0.0518)/8.625；中性洗滌液得到的總糖摩爾量為：n(中性洗滌)＝總糖/180*體積*稀釋倍數(shù)＝X*V*a/180；得出多糖質(zhì)量為：m(多糖)＝n(中性洗滌)*180*0.9；因為取樣質(zhì)量為1g，所以得出多糖含量為：多糖含量＝多糖質(zhì)量*100％＝m*100％；三個平行樣品結(jié)果取平均值后得到最終樣品多糖含量如下表：3.杏鮑菇菌渣半纖維素含量測定酸性洗滌液洗滌后，采用苯酚硫酸法測定洗滌液中總糖含量，原始數(shù)據(jù)如下表：將三個吸光度的平均值代入標(biāo)準(zhǔn)方程，得出總糖濃度X＝(Y-0.0518)/8.625；酸性洗滌液得到的總糖摩爾量為：n(酸性洗滌)＝總糖/180*體積*稀釋倍數(shù)＝X*V*a/180；得出半纖維素質(zhì)量為：m(半纖維素)＝n(酸性洗滌)*150*0.9；因為取樣質(zhì)量為1g，所以得出半纖維素含量為：半纖維素含量＝半纖維素質(zhì)量*100％＝m*100％；三個平行樣品結(jié)果取平均值后得到最終樣品半纖維素含量如下表：4.杏鮑菇菌渣纖維素含量測定72％硫酸消化后，采用苯酚硫酸法測定洗滌液中總糖含量，原始數(shù)據(jù)如下表:將三個吸光度的平均值代入標(biāo)準(zhǔn)方程，得出總糖濃度X＝(Y-0.0518)/8.625；72％硫酸消化得到的總糖摩爾量為：n(72％硫酸消化)＝總糖/180*體積*稀釋倍數(shù)＝X*V*a/180；得出纖維素質(zhì)量為：m(纖維素)＝n(72％硫酸消化)*180*0.9；因為取樣質(zhì)量為1g，所以得出纖維素含量為：纖維素含量＝纖維素質(zhì)量*100％＝m*100％；三個平行樣品結(jié)果取平均值后得到最終樣品纖維素含量如下表：5.杏鮑菇菌渣木質(zhì)素含量測定硫酸消化后質(zhì)量為：m(72％硫酸消化)＝m(烘干后恒重)-m(坩堝恒重)；灰分的質(zhì)量為灰化后質(zhì)量減去坩堝恒重：m(灰分)＝m(灰化后)-m(坩堝恒重)；木質(zhì)素質(zhì)量則為72％硫酸消化后質(zhì)量減去灰分質(zhì)量即：m(木質(zhì)素)＝m(72％硫酸消化)-m(灰分)＝m(烘干后恒重)-m(坩堝恒重)-(m(灰化后)-m(坩堝恒重))＝m(烘干后恒重)-m(灰化后)，結(jié)果如下表：6.結(jié)果匯總工廠化杏鮑菇栽培周期木質(zhì)纖維素含量變化當(dāng)前第1頁1 2 3