本發(fā)明涉及檢測(cè)領(lǐng)域，特別是指一種通過(guò)甲醇索氏提取煙葉中致香物構(gòu)建煙葉指紋圖譜的方法，本發(fā)明還涉及一種通過(guò)甲醇索氏提取煙葉中致香物構(gòu)建煙葉指紋圖譜的方法在煙葉致香物分析中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

煙草在我國(guó)種植歷史悠久，是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)作物之一。煙葉質(zhì)量是反映和體現(xiàn)煙葉必要性狀均衡情況的綜合性概念,它包括外觀質(zhì)量和內(nèi)在質(zhì)量。長(zhǎng)期以來(lái)，煙葉品質(zhì)主要由四個(gè)方面進(jìn)行評(píng)價(jià)和分類,即外觀質(zhì)量、感官評(píng)吸、化學(xué)分析、物理特性，從某個(gè)角度看，仍不能全面地滿足要求。如化學(xué)分析只有8、9個(gè)指標(biāo)，強(qiáng)調(diào)共性；外觀評(píng)價(jià)和感官評(píng)吸受主觀因素的影響較大。為此，國(guó)內(nèi)外專家做了大量的研究工作，以期客觀準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)煙葉質(zhì)量，化學(xué)成分分析就是其中一項(xiàng)主要的研究?jī)?nèi)容。

指紋圖譜是指某些復(fù)雜物質(zhì)，比如中藥，某種生物體或某種組織或細(xì)胞的dna，蛋白質(zhì)經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標(biāo)示其化學(xué)特征的色譜圖或光譜圖。

指紋圖譜主要分為中藥指紋圖譜，dna指紋圖譜和肽指紋圖譜。中藥指紋圖譜是一種綜合的，可量化的鑒定手段，它是建立在中藥化學(xué)成分系統(tǒng)研究的基礎(chǔ)上，主要用于評(píng)價(jià)中藥材以及中藥制劑半成品質(zhì)量的真實(shí)性、優(yōu)良性和穩(wěn)定性。中藥及其制劑均為多組分復(fù)雜體系，因此評(píng)價(jià)其質(zhì)量應(yīng)采用與之相適應(yīng)的，能提供豐富鑒別信息的檢測(cè)方法，建立中藥指紋圖譜將能較為全面地反映中藥及其制劑中所含化學(xué)成分的種類與數(shù)量，進(jìn)而對(duì)藥品質(zhì)量進(jìn)行整體描述和評(píng)價(jià)。在此基礎(chǔ)上，如果進(jìn)一步開(kāi)展譜效學(xué)研究，可使中藥質(zhì)量與其藥效真正結(jié)合起來(lái)，有助于闡明中藥作用機(jī)理。總之，中藥指紋圖譜的研究和建立，對(duì)于提高中藥質(zhì)量，促進(jìn)中藥現(xiàn)代化具有重要意義。

煙葉是煙草的主要經(jīng)濟(jì)部位，不同的品種，不同地區(qū)，甚至不同環(huán)境(如降雨量、施肥量等)都會(huì)對(duì)煙葉的品質(zhì)和風(fēng)味造成不同的影響，煙葉的風(fēng)味也是區(qū)分不同煙葉的主要標(biāo)準(zhǔn)，而煙葉風(fēng)味的形成，主要由內(nèi)部的幾種主要的組分構(gòu)成，尤其是具有煙葉中的致香物。

但目前，這些物質(zhì)的檢測(cè)和評(píng)價(jià)，還主要集中在人工評(píng)價(jià)，以及一些簡(jiǎn)單的化學(xué)分析，在精準(zhǔn)度方面還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，并且，在不同的煙葉之間的區(qū)分，尤其是一些較為細(xì)微的區(qū)分，如前述一些種植過(guò)程中環(huán)境因素的變化，對(duì)于煙葉風(fēng)味的調(diào)整，常規(guī)的手段較為難以區(qū)分，這對(duì)于進(jìn)一步提升和改善煙葉的品質(zhì)，實(shí)現(xiàn)我國(guó)“卷煙上水平”戰(zhàn)略任務(wù)造成了困難。

因此，需要充分結(jié)合一些新興的技術(shù)，以及煙葉這一產(chǎn)品的特色，對(duì)煙葉的檢測(cè)方法和方式，都進(jìn)行改善。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提出一種通過(guò)甲醇索氏提取煙葉中致香物構(gòu)建煙葉指紋圖譜的方法及其在煙葉致香物分析中的應(yīng)用，為煙葉的深入研究提供了更加科學(xué)可靠的方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種通過(guò)甲醇索氏提取煙葉中致香物構(gòu)建煙葉指紋圖譜的方法，包括步驟：稱取粉碎好的烤煙葉，置于濾紙筒內(nèi)，然后裝入索氏提取器中，索氏提取器上面連接冷凝管，下面連接的圓底燒瓶，燒瓶中加入甲醇，在水浴鍋中連續(xù)加熱提取，濃縮甲醇提取液得煙葉成分浸膏，供gc/ms分析。

進(jìn)一步的，gc條件為：ultra－2毛細(xì)管柱，載氣為n2，柱頭壓170kpa。

進(jìn)一步的，為便于后期提取，前期稱取50.00g烤煙葉。

進(jìn)一步的，為保證提取效果，水浴鍋溫度為70度，提取時(shí)間為72h。

所述通過(guò)甲醇索氏提取煙葉中致香物構(gòu)建煙葉指紋圖譜的方法在煙葉致香物分析中的應(yīng)用。通過(guò)構(gòu)建出不同煙葉中致香物的指紋圖譜，形成煙葉中致香物的指紋圖譜庫(kù)，并針對(duì)所述煙葉中致香物的指紋圖譜庫(kù)進(jìn)行劃分，形成對(duì)不同煙葉中致香物的分類與劃分。

本發(fā)明的所述通過(guò)甲醇索氏提取煙葉中致香物構(gòu)建煙葉指紋圖譜的方法，結(jié)合指紋圖譜技術(shù)和煙葉的特質(zhì)，創(chuàng)造性的形成了對(duì)煙葉致香物構(gòu)建煙葉指紋圖譜構(gòu)建，并具體采用了甲醇索氏提取的方式，保證了煙葉中物質(zhì)的有效獲取，并最大限度的降低物質(zhì)的損傷或者變化，同時(shí)，也具有一定的選擇性的提取其中的物質(zhì)。所述通過(guò)甲醇索氏提取煙葉中致香物構(gòu)建煙葉指紋圖譜的方法在煙葉致香物分析中的應(yīng)用，也為煙葉的風(fēng)味的深入研究提供了新的方法。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為南雄粵煙97烤煙c3f(2008)索氏提取致香物指紋圖譜；

圖2為南雄粵煙97烤煙c3f(2009)索氏提取致香物指紋圖譜；

圖3為南雄粵煙97(x2f)2009烤煙索氏提取成分指紋圖譜。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

本發(fā)明的實(shí)施步驟如下：

烤煙索氏甲醇提?。?/p>

稱取50.00g粉碎好的烤煙葉，置于濾紙筒內(nèi),然后裝入索氏提取器中，索氏提取器上面連接冷凝管，下面連接500ml的圓底燒瓶，燒瓶中加入300ml甲醇(分析純)，在70度水浴鍋中連續(xù)加熱提取72h(濾紙筒中甲醇溶劑顏色很淡為準(zhǔn))，濃縮甲醇提取液得煙葉成分浸膏，供gc/ms分析。

gc/ms分析：

gc條件：ultra－2毛細(xì)管柱(50m×0.2mm×0.33μm)，載氣為n2，柱頭壓170kpa，檢測(cè)器fid，進(jìn)樣口溫度280℃，檢測(cè)器溫度280℃，程序升溫:80℃(1min)，2℃/min，280℃(30min)，進(jìn)樣量2μl，分流比10∶1。gc/ms測(cè)定時(shí)gc條件同上電離電壓70ev，離子源溫度200℃，傳輸線溫度220℃，使用wiley譜庫(kù)進(jìn)行圖譜檢索。

實(shí)施例1

南雄粵煙97c3f(2008)索氏提取致香物的分析結(jié)果

從表1可以看出,經(jīng)甲醇索氏提取南雄煙葉c3f主要含有尼古丁,相對(duì)含量占50.41％,其它主要為一類煙致香成分,它們是：2,3-二氫-3,5-二羥基-6-甲基-4h-吡喃-4-酮、5-羥甲基-2-呋喃甲醛、新植二烯、十七酸、棕櫚酸、9,12-十八碳二烯酸、9,12,15-十八碳三烯酸甲酯、反式十八烯酸、α八十八碳酸等,它們相對(duì)含量分別為：1.89％、4.61％、9.61％、0.85％、5.79％、1.71％、1.85％、0.86％和0.96％。

表1南雄粵煙97烤煙c3f(2008)索氏提取致香物的分析結(jié)果

實(shí)施例2

南雄粵煙97烤煙c3f(2009)索氏提取致香物的分析結(jié)果

⑴酮類：

羥丙酮0.45％、4-環(huán)戊烯-1,3-二酮0.21％、2-羥基-3-甲基吡喃-4-酮0.13％、4-羥基-2,5-二甲基-3(2h)呋喃酮0.29％、1,3-二羥基丙酮3.34％、3,5-二羥基-6-甲基-2,3-二氫吡喃-4-酮5.11％。

酮類占致香物的9.53％。

⑵醛類：

5-甲基糠醛0.17％、4,5-二甲基-2-糠醛0.04％、5-羥甲基糠醛4.88％。

醛類占致香物的5.09％。

⑶醇類：

正丁醇0.17％、丁二醇0.13％、糠醇0.94％、5-(氨基甲基)-6,7,8,9-四氫-5h-苯并[7]輪烯-5-醇0.30％、3-氧代-α-紫羅蘭醇0.42％。

醇類占煙氣致香物的1.96％。

⑷有機(jī)酸類：

乙酸3.39％、甲酸1.34％、反油酸1.87％、亞油酸5.46％。

有機(jī)酸類占煙氣致香物的12.06％。

⑸酯類：

羥基乙酸甲酯0.94％、二乙酸甘油酯0.08％、γ-巴豆酰內(nèi)酯0.09％、甲基-2-羥基-2-環(huán)己基乙酸酯0.13％、羥基丙二酸二甲基酯0.04％、3-乙酸基-3-3-羥基丙酸二甲酯0.80％、2-酮戊二酸二甲酯0.11％、棕櫚酸甲酯0.43％、2-乙?；?2-羥基丁酸內(nèi)酯0.60％、丁二酸單甲酯0.13％、硬酯酸甲酯0.10％、(s)-5-羥甲基二氫呋喃-2-酮,(s)-(+)-4-羥甲基丁內(nèi)酯0.18％、亞油酸甲酯0.33％、鄰苯二甲酸二異丁酯0.05％、亞麻酸甲酯0.50％。

酯類占煙氣致香物的4.06％。

⑹稠環(huán)芳香烴類：

未檢測(cè)到該類成分。

⑺酚類：

苯酚0.03％。

酚類占致香物的0.03％。

⑻烷烴類：

十二烷0.11％、雙氧環(huán)丁烷0.75％。

烷烴類占煙氣致香物的0.86％。

⑼不飽和脂肪烴類：

不飽和脂肪烴類占致香物的0％。

⑽生物堿類：

煙堿35.21％。生物堿類占致香物的35.21％。

⑾萜類：新植二烯8.66％。萜類占致香物的8.66％。

⑿其它類：

二甲基甲酰胺2.09％、麥斯明0.06％、2.5-二羥甲基呋喃0.76％、janghuarui-070#74783.65％。

表2南雄粵煙97烤煙c3f(2009)索氏提取致香物的分析結(jié)果

實(shí)施例3

南雄粵煙97(x2f)2009烤煙索氏提取致香物組成成分分析結(jié)果

⑴酮類：

羥丙酮0.73％、2-甲氧[1]苯并噻吩[2,3-c]喹啉-6(5h)-酮0.07％、2-環(huán)戊烯-1,4-二酮0.26％、2(5h)-呋喃酮0.11％、3-(2,2-二甲基亞丙基)二環(huán)[3.3.1]壬烷-2,4-二酮0.10％、2-甲基-3-羥基-γ-吡喃酮0.15％、4-羥基-2,5-二甲基-3(2h)呋喃酮0.39％、1,3-二羥基丙酮2.90％、s)-5-(羥甲基)-二氫呋喃-2(3h)-酮0.40％、巨豆三烯酮0.06％、3,5-二羥基-6-甲基-2,3-二氫吡喃-4-酮5.78％、(s)-5-羥甲基二氫呋喃-2-酮0.20％、2-(甲氧基甲基)-3,5-二甲基環(huán)己-2,5-二烯-1,4-二酮0.31％。

酮類占致香物的11.46％。

⑵醛類：

5-甲基糠醛0.26％、5-羥甲基糠醛5.09％。

醛類占致香物的5.35％。

⑶醇類：

正丁醇0.12％、2,3-丁二醇0.05％、丁二醇0.07％、糠醇1.26％、苯甲醇0.06％、丙三醇0.74％、1s-[1α,2a(z),4α]]-2-甲基5-(2-甲基-3-次甲基二環(huán)[2.2.1]庚-2-基)-2-戊烯-1-醇0.08％、1-叔-丁基-2,2-二甲基-2,3-二氫-1h-茚-5-醇0.43％、3-氧代-α-紫羅蘭醇0.53％。

醇類占煙氣致香物的3.34％。

⑷有機(jī)酸類：

乙酸3.90％、甲酸1.79％、3-糠酸0.05％、棕櫚酸1.29％、反油酸1.75％、正十四碳酸0.27％、亞油酸2.69％。

有機(jī)酸類占煙氣致香物的11.74％。

⑸酯類：

丙酮酸甲酯0.04％、乙醇酸甲酯0.70％、單乙酸甘油酯0.06％、羥基丙二酸二甲基酯0.21％、十六酸甲酯0.47％、2-乙?；?2-羥基丁酸內(nèi)酯0.73％、丁二酸一甲酯0.23％、硬酯酸甲酯0.14％、亞油酸甲酯0.65％。

酯類占致香物的3.23％。

⑹稠環(huán)芳香烴類：

未檢測(cè)到該類成分。

⑺酚類：

苯酚0.81％。

酚類占致香物的0.81％。

⑻烷烴類：

十一烷0.29％、十二烷0.08％、雙環(huán)氧丁烷0.95％、2,2-二乙基-3-甲基-噁唑烷0.03％、二十七烷0.33％。

烷烴類占煙氣致香物的1.68％。

⑼不飽和脂肪烴類：

不飽和脂肪烴類占致香物的0％。

⑽生物堿類：

煙堿36.93％。生物堿類占致香物的36.93％。

⑾萜類：新植二烯10.30％。萜類占致香物的10.30％。

⑿其它類：

麥斯明0.08％、2,3-二羥基-苯并呋喃0.10％、2,3'-聯(lián)吡啶0.04％。

表3：南雄粵煙97(x2f)2009烤煙索氏香氣物組成成分

從上述實(shí)施例可以看出，同一烤煙品種在不同的環(huán)境下，如不同的年份，不同的采摘部位等，都會(huì)造成該煙葉指紋圖譜的不同，同時(shí)該圖譜又是基于煙葉致香物的特征進(jìn)行構(gòu)建，更深一步的，是基于采用了甲醇索氏提取法提取的煙葉致香物進(jìn)行的指紋圖譜的構(gòu)建，通過(guò)這一方法，形成了對(duì)煙葉更為深入的研究與認(rèn)識(shí)，為提升煙葉的品質(zhì)，形成煙葉的風(fēng)格，提供了更有力的工具與方式。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。