本實用新型屬于臨床血液學(xué)檢測，具體涉及一種快速檢測乳糜血的免疫膠體金試紙卡。

背景技術(shù)：

乳糜血或稱脂血，餐后脂肪經(jīng)過在小腸消化、吸收后，變成細(xì)小的乳糜微粒進入血液，乳糜微粒多到一定程度時，血清就由清澈透明的淡黃色液體變成乳白色的黏稠液體。血漿中因含有大量甘油三酯，而不能將其輸給患者。甘油三酯是心血管疾病的獨立危險因素。目前國內(nèi)并沒有針對街頭采血時，用末梢血快速檢測甘油三酯含量的辦法，因此導(dǎo)致采供血機構(gòu)每年報廢大量的脂血，造成血液資源的巨大浪費。

載脂蛋白B-48 (apoB-48)是唯一由（人的）小腸分泌的脂蛋白，其與甘油三酯結(jié)合后生成乳糜微粒（chylomicrons CMs）及其殘余物。CM中的apoB-48是結(jié)構(gòu)蛋白，由apoB100 mRNA特異編輯而得。Apo B48共有2153個氨基酸。其被中性脂酯化后，在甘油三酯轉(zhuǎn)運蛋白（triglyceride transfer protein (MTP)）的協(xié)助下，生成初期的CM顆粒。未結(jié)合的apoB48立即降解。與肝分泌極低密度脂蛋白（VLDL）不同，在腸細(xì)胞中降解apoB48不是其主要的調(diào)控機制，在脂質(zhì)缺乏的狀態(tài)下，腸細(xì)胞分泌的apoB48是一種高密度脂蛋白。血清中apoB48的濃度可以代表CM及CM殘留物的顆粒數(shù)?？衫胊poB48追蹤腸分泌CM的代謝過程。

免疫膠體金技術(shù)是快速臨床檢測的最佳選擇。酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）、分子生物學(xué)實驗技術(shù)適用于實驗室使用。目前國內(nèi)外并沒有針對街頭采血時，用末梢血快速檢測乳糜血的辦法。因此導(dǎo)致采供血機構(gòu)每年報廢大量的乳糜血，造成血液資源的巨大浪費。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本實用新型的目的是為解決街頭采血時，快速篩選乳糜血的問題。

本實用新型為解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：一種快速檢測乳糜血的免疫膠體金試紙卡，其特征在于，包括膠體金試紙條和卡槽，該卡槽具有一個容置膠體金試紙條的內(nèi)置空腔，且在該卡槽上設(shè)置有觀察口和加樣孔；該膠體金試紙條主要由支持板、NC膜、金標(biāo)抗體墊、樣品墊和吸水墊組成，在該支持板的一側(cè)從一端到另一端依次粘結(jié)樣品墊、金標(biāo)抗體墊、NC膜和吸水墊；在該NC膜的中部設(shè)有一條含有載脂蛋白多克隆抗體的檢測線和一條含有二抗的質(zhì)控線，該檢測線與質(zhì)控線間隔設(shè)置，并且檢測線與金標(biāo)抗體墊相鄰；該膠體金試紙條設(shè)置在卡槽的內(nèi)置空腔內(nèi)，并使該觀察口對應(yīng)膠體金試紙條的檢測線和質(zhì)控線，加樣孔對應(yīng)樣品墊。

所述金標(biāo)抗體墊涂有膠體金標(biāo)記的鼠抗人載脂蛋白B48單克隆抗體。

所述的檢測線為兔抗鼠載脂蛋白B多克隆抗體；所述的質(zhì)控線為兔抗鼠IgG二抗。

所述的檢測線和質(zhì)控線的線寬度為1mm，兩線平行相距3~5mm，位于NC膜的中間，距NC膜兩端的距離6~7mm。

所述的NC膜的兩端與金標(biāo)抗體墊和吸水墊的相鄰端相互重疊，金標(biāo)抗體墊和吸水墊的重疊部分壓在NC膜兩端的上面；該樣品墊與金標(biāo)抗體墊的相鄰端有重疊，該樣品墊的重疊部分壓在金標(biāo)抗體墊相鄰端的上面。

所述的卡槽為扣板式卡槽。

本實用新型的優(yōu)點是：用膠體金的方法檢測乳糜血，不需要使用額外的設(shè)備，速度快，靈敏度高，特別適用于街頭采血時，對獻血者進行篩選。即可保護獻血者的血液資源，也可節(jié)約相關(guān)的檢測、儲存、返回血費等費用。

附圖說明

圖1是本實用新型的免疫膠體金試紙條結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2是本實用新型扣板式卡槽的立體結(jié)構(gòu)示意圖；

圖3（a-d）是使用本實用新型的檢測結(jié)果示意圖。

附圖標(biāo)記說明：1、樣品墊；2、金標(biāo)抗體墊；3、NC膜（硝酸纖維素膜）；4、檢測線、5、質(zhì)控線；6、吸水墊；7、支持板；8、卡槽；9、觀察口；10.加樣孔。

具體實施方式

參見圖1和圖2，本實用新型一種快速檢測乳糜血的免疫膠體金試紙卡，其特征在于，包括膠體金試紙條A和扣板式卡槽8，該扣板式卡槽8具有一個容置膠體金試紙條A的內(nèi)置空腔11，且在該扣板式卡槽8上設(shè)置有觀察口9和加樣孔10；該膠體金試紙條A主要由支持板7、NC膜3、金標(biāo)抗體墊2、樣品墊1和吸水墊6組成，在該支持板7的一側(cè)從一端到另一端依次粘結(jié)樣品墊1、金標(biāo)抗體墊2、NC膜3和吸水墊6；在該NC膜3的中部設(shè)有一條含有載脂蛋白B多克隆抗體的檢測線4和一條含有IgG二抗的質(zhì)控線5，該檢測線4與質(zhì)控線5間隔設(shè)置，并且檢測線4與金標(biāo)抗體墊2相鄰；該膠體金試紙條A設(shè)置在扣板式卡槽8的內(nèi)置空腔11內(nèi)，并使該觀察口9對應(yīng)膠體金試紙條A的檢測線4和質(zhì)控線5（對應(yīng)NC膜3的區(qū)域），加樣孔10對應(yīng)膠體金試紙條的樣品墊1。

所述金標(biāo)抗體墊2中金標(biāo)抗體為膠體金標(biāo)記的載脂蛋白B48單克隆抗體。

所述NC膜3上的檢測線4為載脂蛋白B多克隆抗體，質(zhì)控線5為IgG二抗。

本實用新型乳糜血快速檢測試紙卡的制備方法，包括以下步驟：

1）制備NC膜3：

檢測線4的制備：采用噴金儀，用包被緩沖液稀釋載體蛋白B多克隆抗體，在NC膜中檢測線位置劃線，即為檢測線，晾干備用；所述的包被緩沖液為經(jīng)過0.45μm濾膜過濾的0.05M pH9.6的碳酸鹽緩沖液。

質(zhì)控線5的制備：采用噴金儀，用包被緩沖液稀釋二抗，在NC膜上與檢測線平行的位置劃線，間隔5mm，即為質(zhì)控線，所述的包被緩沖液為經(jīng)過0.45μm濾膜過濾的0.05M pH9.6的碳酸鹽緩沖液。

NC膜組裝制備：晾干檢測線和質(zhì)控線，得到含有檢測線和質(zhì)控線的NC膜；用封閉工作液將制備的NC膜于室溫72h晾干，封存?zhèn)溆?；所述的封閉工作液為2.5~3% BSA、2~2.5%脫脂奶粉和0.01M，pH7.0的碳酸鹽緩沖液混合后用0.45μm濾膜過濾得到封閉工作液。

2）制備涂覆金標(biāo)抗體墊2：

用含1.5% BSA、0.1%疊氮鈉的Trs-HCl緩沖液稀釋金標(biāo)的載脂蛋白B48單抗；將金標(biāo)抗體溶液用噴金儀，均勻噴灑于玻璃纖維棉，56℃干燥1h，加入干燥劑真空密封后，室溫保存?zhèn)溆谩?/p>

3）組裝乳糜血快速檢測試紙卡：

將涂有檢測線和質(zhì)控線的NC膜黏貼在支持板的中部，在NC膜的一側(cè)依次黏貼含有金標(biāo)抗體的玻璃纖維膜和樣品墊，在NC膜的另一側(cè)粘貼吸水墊，得到試紙板，將試紙板切割成不同寬度的試紙條，將試紙條安放于卡槽中，即為乳糜血快速檢測試紙卡。

4）乳糜血快速檢測試紙卡的使用及判定：

對街頭獻血的獻血者進行初篩時，采集獻血者的末端血液40微升，滴加于本試紙卡的樣品墊1上（圖1中箭頭B處），滴加血液后，血清將按圖1中箭頭C所指方向進行虹吸前進，血清中的apoB48首先會與金標(biāo)墊2上的標(biāo)記有膠體金的apoB48單克隆抗體特異結(jié)合，并隨血清向前運動，當(dāng)?shù)竭_檢測線4位置時，apoB48會被固定于檢測線4的apoB48多克隆抗體所捕獲，當(dāng)有足夠多的apoB48被捕獲時，其上連接的膠體金因聚集而顯紅色。未結(jié)合apoB48的標(biāo)記有膠體金的apoB48單克隆抗體會繼續(xù)向前運動直至質(zhì)控線5，在質(zhì)控線5上固定有IgG二抗，二抗將捕獲所有的未結(jié)合apoB48的標(biāo)記有膠體金的apoB48單克隆抗體，并顯紅色。

在試紙卡的檢測線4、質(zhì)控線5位置均出現(xiàn)紅色條帶時，乳糜血檢測為陽性（如圖3b）；僅質(zhì)控線5出現(xiàn)一條紅色條帶時，為陰性結(jié)果（如圖3a）；在試紙卡的質(zhì)控線5未出現(xiàn)紅色條帶時為無效結(jié)果（如圖3c和圖3d）。