本發(fā)明涉及用于確定具有特定營養(yǎng)需求的患者的獨(dú)特的營養(yǎng)需求并提供滿足所述患者的獨(dú)特的營養(yǎng)需求的組合物的方法。

背景技術(shù)：

多種參數(shù)或化合物限定受檢者的營養(yǎng)狀態(tài)。例如，營養(yǎng)物質(zhì)、微量營養(yǎng)素和其他化合物以一定濃度存在于受檢者的流體或組織中。許多疾病改變這些化合物的濃度或這些參數(shù)的值，這是因?yàn)榈挚辜膊　⒋x變化和/或患者的次優(yōu)膳食管理而導(dǎo)致對這些化合物的利用率增加。結(jié)果，患有這種疾病的受檢者營養(yǎng)不良，這是因?yàn)橄嚓P(guān)參數(shù)和化合物不再處于健康受檢者的范圍內(nèi)并導(dǎo)致營養(yǎng)缺乏，如結(jié)構(gòu)組分的不正確提供、能量供應(yīng)不足、或缺乏功能組分?；加杏绊憼I養(yǎng)狀態(tài)的疾病的受檢者可受益于解決所述受檢者的獨(dú)特的營養(yǎng)需求的營養(yǎng)干預(yù)。因此，將需要為受檢者提供包含營養(yǎng)物質(zhì)和微量營養(yǎng)素的營養(yǎng)組合物，營養(yǎng)物質(zhì)和微量營養(yǎng)素的量將重新建立等同于健康受檢者的營養(yǎng)狀態(tài)的代謝、生理和功能。

其中受檢者表現(xiàn)出獨(dú)特的營養(yǎng)需求的此類疾病的具體示例是炎性腸病(ibd)。

營養(yǎng)在ibd中的作用引起了人們的高度興趣，特別是在小兒克羅恩氏病(cd)中，研究表明，全腸內(nèi)營養(yǎng)(een)可誘導(dǎo)與皮質(zhì)類固醇相當(dāng)?shù)妮p度至中度疾病的緩解。因此，為實(shí)現(xiàn)安全的長期疾病管理，除護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)(soc)之外提供的營養(yǎng)干預(yù)是很有吸引力的選擇。營養(yǎng)不良在小兒和成人ibd患者中十分常見，尤其是患有cd的那些患者，并且通常表現(xiàn)為會造成大體的體重減輕的蛋白質(zhì)-能量缺乏，和/或維生素/礦物質(zhì)缺乏。一般來說，繼發(fā)于餐后腹痛和腹瀉的膳食攝入不良是ibd的營養(yǎng)不良的最常見的原因。營養(yǎng)不良的程度取決于疾病的持續(xù)時間、嚴(yán)重程度和擴(kuò)展，以及因腸切除或纖維化引起的功能喪失。據(jù)報道，ibd患者會出現(xiàn)脂肪和肌肉質(zhì)量消耗；微量營養(yǎng)素缺乏也會在輕度疾病或緩解期中發(fā)生。

除了與營養(yǎng)不良相關(guān)的營養(yǎng)缺乏之外，營養(yǎng)也被認(rèn)為是維持緩解期、特別是維持粘膜健康的有效方法。已提出，形成粘液凝膠和保護(hù)腸上皮的腸粘蛋白對于在ibd的粘膜損傷之后恢復(fù)上皮健康至關(guān)重要。維持足夠的粘蛋白合成的身體能力與一些特定氨基酸的生物利用率直接相關(guān)。已知腸炎可增加腸內(nèi)喂食的小型豬的胃腸道蘇氨酸攝入和粘蛋白合成。因此，在如同ibd的炎癥狀態(tài)下，特定氨基酸可成為維持粘蛋白合成所需的條件性必需的氨基酸，從而用于營養(yǎng)特異性富集。

因此，需要用于識別患有一種或多種疾病或臨床癥狀的患者的獨(dú)特的膳食需求的方法，該患者的營養(yǎng)狀態(tài)與健康受檢者的營養(yǎng)狀態(tài)不同。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供用于確定營養(yǎng)狀態(tài)與健康受檢者的營養(yǎng)狀態(tài)不同的患者的獨(dú)特膳食需求的新方法。

本發(fā)明涉及用于通過以下方式來確定患有疾病的受檢者的獨(dú)特的疾病相關(guān)營養(yǎng)需求的體外方法：a)首先，在患有疾病的受檢者的樣本中確定標(biāo)記物(包括營養(yǎng)物質(zhì)、微量營養(yǎng)素和/或其代謝物，和/或生物標(biāo)記物，或其任何組合)的狀態(tài)的概況，其也被稱為“營養(yǎng)概況”；b)其次，在來自健康受檢者或來自具有不同嚴(yán)重程度或不同階段的疾病的患者的樣本中確定在步驟a)中所確定的相同標(biāo)記物(例如，相同的營養(yǎng)物質(zhì)、微量營養(yǎng)素和/或其代謝物、和/或生物標(biāo)記物)的狀態(tài)的類似營養(yǎng)概況，以及c)第三，對在步驟a)和b)中所確定的營養(yǎng)概況進(jìn)行比較，并且從而確定患有疾病的患者的獨(dú)特的營養(yǎng)需求。

該方法使得有可能確定患有特定疾病的患者以及患有不同嚴(yán)重程度或不同階段的相同疾病的患者的營養(yǎng)概況和獨(dú)特的營養(yǎng)需求?；谶@些所識別的營養(yǎng)需求，可制備營養(yǎng)組合物，該營養(yǎng)組合物包含能夠?qū)⒒加屑膊〉幕颊叩臓I養(yǎng)概況朝健康受檢者的營養(yǎng)概況恢復(fù)或改善的營養(yǎng)物質(zhì)和微量營養(yǎng)素。

本發(fā)明提供了包含營養(yǎng)物質(zhì)和微量營養(yǎng)素的營養(yǎng)組合物，該營養(yǎng)物質(zhì)和微量營養(yǎng)素的量能夠在患有疾病的患者中重建健康受檢者的營養(yǎng)概況或具有改善狀態(tài)(即，較低的疾病嚴(yán)重程度)的患者的營養(yǎng)概況。

附圖說明

圖1：示出用于限定獨(dú)特的營養(yǎng)需求的方法途徑的圖示。使用營養(yǎng)概況或營養(yǎng)狀態(tài)來量化與特定疾病相關(guān)聯(lián)的獨(dú)特的營養(yǎng)/營養(yǎng)物質(zhì)需求。營養(yǎng)概況指示總體營養(yǎng)狀態(tài)并通過在患者和健康人群中測得的一系列營養(yǎng)物質(zhì)和微量營養(yǎng)素值和/或其相關(guān)的狀態(tài)標(biāo)記物來進(jìn)行測定。營養(yǎng)概況可與涉及疾病狀態(tài)(復(fù)發(fā)、緩解、嚴(yán)重程度)的臨床信息(包括臨床標(biāo)記物)相關(guān)。在患者組和健康組之間和/或在針對疾病活動度、嚴(yán)重程度或階段定義的患者組中比較營養(yǎng)概況。如果在患者和健康對照之間觀察到營養(yǎng)概況的差異，則將確定獨(dú)特的營養(yǎng)/營養(yǎng)物質(zhì)需求(dnr)。在圖1中，“np”是指營養(yǎng)概況；“da”是指高疾病活動度或嚴(yán)重程度或疾病晚期階段；“db”是指低疾病活動度或嚴(yán)重程度或疾病早期疾病；“dc”是指無疾病或健康狀態(tài)；“≠”是指營養(yǎng)概況的差異；并且“np(da)”、“np(db)”、“npdc”分別是指da、db和dc的營養(yǎng)概況。

圖2：以圖形方式示出將dnr用于產(chǎn)品的營養(yǎng)組合物的圖示，該產(chǎn)品的目的是適當(dāng)?shù)鼗謴?fù)營養(yǎng)水平，以便利用經(jīng)臨床驗(yàn)證的功效來緩解患者的癥狀、持續(xù)緩解并改善患者的生活質(zhì)量。在圖1中，“np”是指營養(yǎng)概況；“da”是指高疾病活動度或嚴(yán)重程度或疾病晚期階段；“db”是指低疾病活動度或嚴(yán)重程度或疾病早期疾??；“dc”是指無疾病或健康狀態(tài)；“≠”是指營養(yǎng)概況的差異；并且“np(da)”、“np(db)”、“npdc”分別是指da、db和dc的營養(yǎng)概況。

圖3：蘇氨酸和異亮氨酸代謝產(chǎn)物

圖4：通過對蘇氨酸和其他氨基酸的氧化指數(shù)的比較分析來確定ibd中的特定于蘇氨酸的需求

定義

“營養(yǎng)狀態(tài)”涉及個人或人群組(群集)的可量化的身體狀態(tài)。營養(yǎng)狀態(tài)與他們的營養(yǎng)品狀態(tài)(營養(yǎng)物質(zhì)的食用和利用)相關(guān)。在本發(fā)明中，使用指示所述營養(yǎng)狀態(tài)的標(biāo)記物，特別是在受檢者的樣本中確定的生物學(xué)標(biāo)記物、生物化學(xué)標(biāo)記物、生理學(xué)標(biāo)記物或其他標(biāo)記物來量化營養(yǎng)狀態(tài)。

“營養(yǎng)概況”涉及要在樣本(生物流體，例如血紅細(xì)胞、血漿、血清、尿液、組織等等)中確定的營養(yǎng)物質(zhì)和微量營養(yǎng)素或其相關(guān)的狀態(tài)標(biāo)記物的一組定量測定，并且因此需要確定對若干種、至少兩種營養(yǎng)物質(zhì)、微量營養(yǎng)素或相關(guān)的狀態(tài)標(biāo)記物的測定。

“標(biāo)記物”是表示一系列或一組標(biāo)記物中的一個參數(shù)/標(biāo)記物的可量化的參數(shù)。所述標(biāo)記物的定量指示所述標(biāo)記物的狀態(tài)。該參數(shù)可與諸如營養(yǎng)物質(zhì)(例如蛋白質(zhì)、氨基酸等)或微量營養(yǎng)素(維生素、包括礦物質(zhì)等的元素)的某種化合物的量直接相關(guān)。然而，標(biāo)記物也可與從樣本中的營養(yǎng)物質(zhì)和微量營養(yǎng)素濃度和/或狀態(tài)標(biāo)記物的數(shù)學(xué)組合得出的值相關(guān)。標(biāo)記物也可以是功能性標(biāo)記物，并且尤其涉及某些生理活性(例如，酶活性)或生理狀態(tài)(氧化應(yīng)激狀態(tài))。

“獨(dú)特的營養(yǎng)需求”(dnr)是在患病受檢者和健康受檢者中存在差異的營養(yǎng)需求。例如，與健康受檢者的營養(yǎng)概況相比，患病受檢者的樣本中的營養(yǎng)概況或營養(yǎng)物質(zhì)的概況的定量分析可能不同。在此類情況下，所觀察到的營養(yǎng)概況的差異可用于識別和定量特定于疾病的營養(yǎng)需求。

“游離形式的氨基酸”是指這樣的氨基酸，其作為未與其他化合物(如其他氨基酸)結(jié)合的游離氨基酸而被包含在某種組合物中，并因此不被包含在肽或蛋白質(zhì)中。

因此，“結(jié)合形式的氨基酸”是作為肽、蛋白質(zhì)的一部分或與其他化合物結(jié)合的氨基酸。

“蛋白質(zhì)氨基酸”是在天然產(chǎn)生的蛋白質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的那些氨基酸，其包括由平移機(jī)構(gòu)用于產(chǎn)生蛋白質(zhì)的那些氨基酸，以及在平移之后在蛋白質(zhì)中被修飾的那些氨基酸。

“非蛋白質(zhì)氨基酸”是在天然產(chǎn)生的蛋白質(zhì)中沒有發(fā)現(xiàn)的氨基酸，它們是細(xì)胞和生物體中的代謝物或結(jié)構(gòu)組分。

具體實(shí)施方式

各部分標(biāo)題起到闡明主題的作用，并且不應(yīng)被理解為限制該主題。

本發(fā)明的概念示于圖1中。

例如在一群組患者中，確定患有疾病的受檢者(患病受檢者，患者)的營養(yǎng)概況，并與一群組健康受檢者(健康對照)的營養(yǎng)狀態(tài)進(jìn)行比較。營養(yǎng)概況包括確定營養(yǎng)物質(zhì)、微量營養(yǎng)素和/或營養(yǎng)物質(zhì)/微量營養(yǎng)素狀態(tài)標(biāo)記物的概況(至少兩次測定)。在健康受檢者和患有疾病的患者的樣本中確定特定標(biāo)記物的狀態(tài)(所述標(biāo)記物的定量)?；颊叩臓I養(yǎng)概況與健康受檢者的營養(yǎng)概況的比較用于識別患病受檢者和健康對照之間的營養(yǎng)物質(zhì)水平和/或其相關(guān)的狀態(tài)標(biāo)記物的差異，該差異用于識別和定量患病人群的獨(dú)特的營養(yǎng)需求。此外，相對于疾病的嚴(yán)重程度或階段進(jìn)行分層的患者人群內(nèi)的營養(yǎng)概況的比較使得能夠識別與較低疾病活動度或嚴(yán)重程度或階段相關(guān)聯(lián)的一組營養(yǎng)物質(zhì)和微量營養(yǎng)素，并將此與患者的改善的臨床癥狀相關(guān)聯(lián)。

在下一個步驟中，可能配制將相應(yīng)的獨(dú)特的營養(yǎng)需求考慮在內(nèi)的營養(yǎng)組合物(產(chǎn)品)。此外，根據(jù)疾病的嚴(yán)重程度或階段進(jìn)行分層的患病患者人群內(nèi)的營養(yǎng)概況的差異也用于確定旨在將具有較高疾病活動度或嚴(yán)重程度的患者的營養(yǎng)概況恢復(fù)到具有較低疾病活動度或嚴(yán)重程度的患者的營養(yǎng)概況值的營養(yǎng)組合物(產(chǎn)品)。

例如，在已觀察到相對于健康受檢者中的蘇氨酸和/或其一種或多種氧化代謝物的值，氨基酸蘇氨酸的血液濃度降低和/或其一種或多種氧化代謝物(圖3)的水平發(fā)生變化的患者中，營養(yǎng)組合物將包含蛋白質(zhì)、肽，以便調(diào)節(jié)蘇氨酸的膳食供應(yīng)或游離氨基酸蘇氨酸本身(圖2)。所述組合物將被施用于患者，目的是使得患者能夠滿足其對蘇氨酸的特定需求。這樣便可滿足患病受檢者對蘇氨酸的增加的需求并糾正相對于蘇氨酸的最終缺陷。

一些疾病表現(xiàn)出不同的嚴(yán)重程度，伴隨著不同的營養(yǎng)需求。在此類情況下，待確定營養(yǎng)狀態(tài)的一群組患者將是顯示出相同或相似的疾病嚴(yán)重程度的一群組患者。以這種方式，可能識別具有特定疾病嚴(yán)重程度的患者的獨(dú)特的營養(yǎng)需求，從而提供適于該嚴(yán)重程度的產(chǎn)品?，F(xiàn)在將更詳細(xì)地描述該方法。

本發(fā)明涉及用于確定患病受檢者的獨(dú)特的營養(yǎng)需求的方法：

本發(fā)明涉及用于確定患有疾病的受檢者的獨(dú)特的疾病相關(guān)的營養(yǎng)需求的體外方法，該疾病的特征在于所述患病受檢者相比于健康受檢者的獨(dú)特的營養(yǎng)需求，該方法包括以下步驟：

a.在患有疾病的患者的樣本中確定標(biāo)記物(包括營養(yǎng)物質(zhì)、微量營養(yǎng)素和/或其代謝物和/或生物標(biāo)記物)的狀態(tài)的概況，該標(biāo)記物的狀態(tài)的概況指示所述患者的營養(yǎng)概況，

b.在健康受檢者的樣本中確定在步驟a中所確定的相同標(biāo)記物的狀態(tài)的概況，該標(biāo)記物的狀態(tài)的概況指示健康受檢者的營養(yǎng)概況，

c.對在步驟a和b中所確定的概況進(jìn)行比較，從而確定患有疾病的患者對營養(yǎng)物質(zhì)的獨(dú)特的營養(yǎng)需求。

可確定(定量)各種營養(yǎng)物質(zhì)、微量營養(yǎng)素及其狀態(tài)標(biāo)記物的相關(guān)代謝物。對于每種標(biāo)記物，確定其狀態(tài)，即所述標(biāo)記物的存在或其值。代謝相互關(guān)聯(lián)的營養(yǎng)物質(zhì)、微量營養(yǎng)素或相關(guān)標(biāo)記物可分組，以用于進(jìn)行綜合分析和解讀。

根據(jù)所確定的營養(yǎng)概況，可識別患病患者中的某些營養(yǎng)物質(zhì)和微量營養(yǎng)素的缺乏。對這些缺陷的識別將允許在營養(yǎng)組合物中提供一組足夠的營養(yǎng)物質(zhì)或微量營養(yǎng)素，其水平經(jīng)適當(dāng)?shù)卣{(diào)整以補(bǔ)償這些缺陷。將這組營養(yǎng)物質(zhì)施用于患病受檢者可具有將患病受檢者的營養(yǎng)概況恢復(fù)到健康受檢者的營養(yǎng)概況的作用。

指示營養(yǎng)物質(zhì)的營養(yǎng)狀態(tài)的標(biāo)記物可為直接標(biāo)記物或間接標(biāo)記物。直接標(biāo)記物指示例如營養(yǎng)物質(zhì)或微量營養(yǎng)素的量。間接標(biāo)記物可從直接確定的標(biāo)記物得到(例如，通過它們的組合)，或者可以是營養(yǎng)物質(zhì)或微量營養(yǎng)素的代謝物或分解代謝物，和/或可以是營養(yǎng)物質(zhì)或微量營養(yǎng)素的生物標(biāo)記物或分解代謝物；或者可與身體中的特定生理狀態(tài)相關(guān)。

間接標(biāo)記物可涉及確定營養(yǎng)物質(zhì)和微量營養(yǎng)素的相對狀態(tài)，即特定營養(yǎng)物質(zhì)與其他營養(yǎng)物質(zhì)的比例、特定營養(yǎng)物質(zhì)與微量營養(yǎng)素的比例、特定微量營養(yǎng)素與特定微量營養(yǎng)素的比例、或上述的組合。

此外，間接標(biāo)記物可涉及確定患病受檢者的功能性標(biāo)記物。功能性標(biāo)記物是與指示受檢者的健康狀態(tài)的生理或生物化學(xué)參數(shù)的狀態(tài)相關(guān)的標(biāo)記物。例如，功能性標(biāo)記物可以是測定，諸如紅細(xì)胞轉(zhuǎn)酮醇酶活性、紅細(xì)胞谷胱甘肽還原酶活性、氧化應(yīng)激狀態(tài)或一氧化氮合酶活性。這些功能性標(biāo)記物在健康受檢者中顯示出特定(參比)狀態(tài)。在患有疾病的患者中，這些標(biāo)記物可能具有不同的值，因此指示相對于健康受檢者的不適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)物或微量營養(yǎng)素狀態(tài)。為患病受檢者適當(dāng)?shù)靥峁I養(yǎng)物質(zhì)和微量營養(yǎng)素的合適的一組和合適水平的營養(yǎng)組合物可用于將這些功能性標(biāo)記物的水平朝在健康受檢者中測得的水平恢復(fù)。

樣品：

對來自受檢者的樣本執(zhí)行對營養(yǎng)概況的確定。

樣本可以是選自全血、血漿、血清、紅細(xì)胞、尿液或組織切片的樣本。根據(jù)確定方法，從同一受檢者獲得不同的樣本。也可使用來自同一受檢者的樣本的組合。還可設(shè)想，在第一時間點(diǎn)從受檢者獲得一個樣本或一組樣本，并且在第二時間點(diǎn)或另外的時間點(diǎn)獲得另外的一個樣本或一組樣本。以這種方式，可能測定受檢者的營養(yǎng)概況在一段時間內(nèi)的變化。

根據(jù)后續(xù)分析的技術(shù)要求來對樣本進(jìn)行處理。

例如，生物樣本可在稀釋之后直接注入到電感聯(lián)接的質(zhì)譜儀中，以進(jìn)行礦物質(zhì)和微量元素分析(元素分析，包括礦物質(zhì)分析)。在注入在聯(lián)接至火焰離子化檢測器的氣液色譜系統(tǒng)上之前，它們也可經(jīng)歷蛋白質(zhì)沉淀、提取、凈化、衍生化等各種步驟，以用于進(jìn)行脂肪酸分析，或注入在聯(lián)接至質(zhì)譜的高壓液相色譜系統(tǒng)上，以進(jìn)行氨基酸或水溶性維生素分析。生物樣本還可被處理，以經(jīng)歷比色、熒光或免疫測定分析。

待確定的營養(yǎng)概況和標(biāo)記物：

營養(yǎng)概況涵蓋直接標(biāo)記物和間接標(biāo)記物。標(biāo)記物可以是生物化學(xué)標(biāo)記物、生物學(xué)標(biāo)記物或功能性標(biāo)記物、或它們的組合。這些標(biāo)記物與受檢者的營養(yǎng)狀態(tài)相關(guān)，并且因此指示其相對于營養(yǎng)物質(zhì)的營養(yǎng)需求。這些標(biāo)記物可受到受檢者所消耗的營養(yǎng)物質(zhì)的影響。這些標(biāo)記物可通過下文所述的各種方法來確定。

這些標(biāo)記物的定量分析指示對營養(yǎng)物質(zhì)的營養(yǎng)需求。營養(yǎng)物質(zhì)可以是大量營養(yǎng)素和微量營養(yǎng)素。大量營養(yǎng)素可以是蛋白質(zhì)、肽、氨基酸、脂肪、脂肪酸、碳水化合物、或膽堿。微量營養(yǎng)素可以是礦物質(zhì)、維生素、類胡蘿卜素、植物營養(yǎng)素。營養(yǎng)物質(zhì)還可根據(jù)其不依賴于結(jié)構(gòu)相似性的功能(功能性營養(yǎng)物質(zhì))而被分組。例如，抗氧化劑不依賴于其結(jié)構(gòu)來提供抗氧化作用。抗氧化劑可以是維生素、礦物質(zhì)、氨基酸或肽。

可確定至少10、25、50、100、250個標(biāo)記物的狀態(tài)。對于待確定的標(biāo)記物的最大數(shù)量沒有特別要求，但上限可能為25、50、100、250或1000個標(biāo)記物。

蛋白質(zhì)標(biāo)記物：

蛋白質(zhì)標(biāo)記物可通過蛋白質(zhì)狀態(tài)的標(biāo)記物或蛋白質(zhì)分解代謝的標(biāo)記物來進(jìn)行確定，并且因此可確定對提供蛋白質(zhì)或氨基酸的營養(yǎng)物質(zhì)或者特定蛋白質(zhì)和氨基酸的營養(yǎng)需求。蛋白質(zhì)狀態(tài)標(biāo)記物可以選自白蛋白、前白蛋白或/和磷酸肌酸、以及它們的組合。分解代謝標(biāo)記物選自氨、尿素、經(jīng)修飾的氨基酸(一甲基和二甲基精氨酸)、或它們的組合。

氨基酸標(biāo)記物：

氨基酸標(biāo)記物可通過確定樣本中氨基酸或其衍生物(包括其代謝物/分解代謝物)的數(shù)量而被確定，以作為對其狀態(tài)的指示，從而可確定對提供蛋白質(zhì)或氨基酸的營養(yǎng)物質(zhì)或者特定蛋白質(zhì)和氨基酸的營養(yǎng)需求。

氨基酸標(biāo)記物選自丙氨酸、β-丙氨酸、肌氨酸、精氨酸、一甲基精氨酸、不對稱二甲基精氨酸、對稱二甲基精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、瓜氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、組氨酸、1-甲基組氨酸、3-甲基組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、鳥氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、?；撬帷⑻K氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、羥脯氨酸、乙醇胺、α-氨基丁酸、β-氨基異丁酸、γ-氨基丁酸、同型半胱氨酸、半胱氨酸、γ-谷氨酰-半胱氨酸、半胱氨酰-甘氨酸、同型胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸亞砜、硒代甲硫氨酸、甲硫氨酸亞砜亞胺、硒代半胱氨酸、硒代胱氨酸、麥角硫因、n-甲?；?l-甲硫氨酸、s-腺苷高半胱氨酸、s-腺苷基甲硫氨酸胺、α-酮丁酸、2-氨基丁酸、2-氨基-3-酮丁酸、α-酮基-β-甲基丁酸(或α-酮異戊酸)、α-酮異己酸或α-酮基-β-甲基戊酸。

根據(jù)一個優(yōu)選的實(shí)施方案，確定蘇氨酸、絲氨酸或脯氨酸的狀態(tài)，優(yōu)選地確定蘇氨酸的狀態(tài)，并且因此確定對它們的需求。

優(yōu)選地，蘇氨酸的狀態(tài)的指示物是蘇氨酸和/或蘇氨酸的一種或多種分解代謝物。蘇氨酸的分解代謝物選自丙酸、2-氨基丁酸、2-酮丁酸、2-氨基-3-酮丁酸、氨基丙酮、乙酰coa、甘氨酸、或它們的組合(圖3)。

優(yōu)選地，異亮氨酸的狀態(tài)指示物是異亮氨酸或異亮氨酸的分解代謝物。待確定的異亮氨酸分解代謝物優(yōu)選地為2-酮基-3-甲基戊酸(圖3)。

脂肪酸標(biāo)記物：

脂肪酸標(biāo)記物可通過脂肪酸的定量分析而被確定，以指示其相關(guān)狀態(tài)，從而可確定對提供脂肪的營養(yǎng)物質(zhì)、磷脂(磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺等)或特定脂肪酸的營養(yǎng)需求。

脂肪酸標(biāo)記物選自丁酸c4:0、己酸c6:0、辛酸c8:0、癸酸c10:0、十一烷酸c11:0、月桂酸c12:0、十三烷酸c13:0、肉豆蔻酸c14:0、十五烷酸c15:0、棕櫚酸c16:0、十七烷酸c17:0、硬脂酸c18:0、花生酸c20:0、二十一烷酸c21:0、山崳酸c22:0、二十四烷酸c24:0、肉豆蔻腦酸c14:1n-5、順-10-十五碳烯酸c15:1n-5、棕櫚油酸c16:1n-7、順-10-十七碳烯酸c17:1n-7、c18:1n-9反式反油酸、c18:1n-9順式油酸、順-11-二十碳烯酸c20:1n-9、芥酸c22:1n-9、神經(jīng)酸c24:1n-9、c18:2n-6反式亞油酸、c18:2n-6順式亞麻酸、γ-亞麻酸c18:3n-6、α-亞麻酸c18:3n-3、順-11,14-二十碳二烯酸c20:2n-6、順-8,11,14-二十碳三烯酸c20:3n-6、順-11,14,17-二十碳三烯酸20:3n-3、花生四烯酸c20:4n-6、順-13,16-二十二碳二烯酸22:2n-6、順-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸(epa)c20:5n-3、順-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸(dha)c22:6n-3或硫辛酸。

元素標(biāo)記物(包括礦物質(zhì)標(biāo)記物)：

樣本中的直接元素(包括礦物質(zhì))標(biāo)記物通過元素分析而被測定和/或使用其相關(guān)聯(lián)的蛋白質(zhì)或代謝物(例如用于確定鐵狀態(tài)的鐵蛋白、用于確定銅狀態(tài)的血漿銅藍(lán)蛋白等)的定量而被測定。

元素標(biāo)記物(包括礦物質(zhì)標(biāo)記物)可選自鋰(li)、硼(b)、鎂(mg)、鋁(al)、硅(si)、磷(p)、硫(s)、鉀(k)、鈣(ca)、釩(v)、鉻(cr)、錳(mn)、鐵(fe)、鈷(co)、鎳(ni)、銅(cu)、鋅(zn)、砷(as)、硒(se)、溴(br)、銣(rb)、鍶(sr)、鉬(mo)、錫(sn)、碘(i)、鋇(ba)、鈦(ti)、鈉(na)、氯(cl)、氟(f)。

間接元件標(biāo)記物(包括礦物質(zhì)標(biāo)記物)包含一個或多個元素和/或其相關(guān)聯(lián)的蛋白質(zhì)或代謝物的組合。

直接標(biāo)記物和間接標(biāo)記物可用于確定對元素(包括礦物質(zhì))的膳食需求。

維生素標(biāo)記物：

維生素標(biāo)記物可以是直接標(biāo)記物或間接標(biāo)記物。直接標(biāo)記物包括對樣本中的維生素和/或其代謝產(chǎn)物的定量。間接標(biāo)記物包括一種或多種維生素和/或其代謝產(chǎn)物以及指示維生素的狀態(tài)的功能性標(biāo)記物的組合，諸如分別用于確定維生素b1(硫胺素)和維生素b2(核黃素)的狀態(tài)的紅細(xì)胞轉(zhuǎn)酮醇酶活性、紅細(xì)胞谷胱甘肽還原酶活性。

維生素標(biāo)記物可用于確定對維生素的膳食需求。維生素標(biāo)記物可選自水溶性維生素或脂溶性維生素。

水溶性維生素及其代謝物可選自維生素b1(硫胺素)、維生素b2(核黃素)、維生素b3(尼克酸或煙酸)、煙酰胺、甲基煙酰胺、煙尿酸、膽堿、維生素b5(泛酸)、維生素b6(吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺)、磷酸吡哆醛、吡哆酸、維生素b8(生物素)、維生素b9(葉酸)、甲基四氫葉酸、維生素b12(氰鈷胺素、甲基鈷胺素)、羥基鈷胺素、腺苷鈷胺素。

脂溶性維生素可選自維生素a(視黃醇)、維生素k2(甲萘醌)、維生素k1(葉綠醌)、維生素e(α-生育酚、δ-生育酚)、維生素d(25-oh維生素d2、維生素d25-ohd3、維生素d2、維生素d3、1α-25-(oh)2維生素d3)。

核苷酸標(biāo)記物：

可確定核苷酸標(biāo)記物，從而確定對提供核苷酸的營養(yǎng)物質(zhì)的需求。

核苷酸可選自肌苷5'-單磷酸、腺苷5'-單磷酸、胞苷5'-單磷酸、鳥苷5'-單磷酸、肌苷5'-單磷酸、尿苷5'-單磷酸、或它們的組合。

植物營養(yǎng)素標(biāo)記物：

可確定植物營養(yǎng)素標(biāo)記物，從而確定對提供植物營養(yǎng)素的營養(yǎng)物質(zhì)的需求。

在一個實(shí)施方案中，植物營養(yǎng)素可選自類胡蘿卜素(例如，葉黃素、玉米黃質(zhì))、鞣花酸、黃酮類(兒茶素、表兒茶素、表沒食子兒茶素)、綠原酸、白藜蘆醇、芥子油苷、植物雌激素(染料木黃酮、黃豆苷元等)、或它們的組合。

肽標(biāo)記物：

可確定肽標(biāo)記物，從而確定對提供肽的營養(yǎng)物質(zhì)的需求。

肽可選自還原型谷胱甘肽或氧化型谷胱甘肽。

氧化應(yīng)激標(biāo)記物：

可確定氧化應(yīng)激標(biāo)記物，從而確定對改善氧化應(yīng)激狀態(tài)的營養(yǎng)物質(zhì)的需求。

在一個實(shí)施方案中，氧化應(yīng)激標(biāo)記物可選自4-羥基壬烯醛、丙二醛、硝基酪氨酸、羰基化蛋白質(zhì)、總谷胱甘肽、還原型谷胱甘肽、氧化型谷胱甘肽、谷胱甘肽過氧化物酶活性、谷胱甘肽還原酶活性、超氧化物歧化酶活性、過氧化氫酶活性、或它們的組合。

影響氧化應(yīng)激狀態(tài)的營養(yǎng)物質(zhì)可以是膳食氧化劑。膳食氧化劑可以是維生素、礦物質(zhì)(例如，硒)、植物化學(xué)物質(zhì)、氨基酸(例如，半胱氨酸)或肽(例如，谷胱甘肽)。這些營養(yǎng)物質(zhì)重新建立與健康受檢者相似的氧化應(yīng)激水平。

氮合酶活性：

可確定氮合酶活性的標(biāo)記物，從而確定對影響一氧化氮合酶活性的營養(yǎng)物質(zhì)的需求。

在一個實(shí)施方案中，氮合酶活性的標(biāo)記物可選自亞硝酸鹽、硝酸鹽、一甲基精氨酸、不對稱二甲基精氨酸、對稱二甲基精氨酸、精氨酸、瓜氨酸、鳥氨酸、精氨基琥珀酸、或它們的組合。

滲壓劑標(biāo)記物：

可確定滲壓劑的標(biāo)記物，從而確定對影響滲壓劑狀態(tài)的營養(yǎng)物質(zhì)的要求。這些標(biāo)記物是功能性標(biāo)記物。

在一個實(shí)施方案中，滲壓劑標(biāo)記物可選自三甲胺n-氧化物、二甲基锍丙酸鹽、三甲基甘氨酸、肌氨酸、甜菜堿、甘油磷酰膽堿、肌醇、或它們的組合。

用于定量標(biāo)記物的方法：

已知用于確定樣本中的上述營養(yǎng)狀態(tài)標(biāo)記物的多種方法。下面將描述如何執(zhí)行所述標(biāo)記物的定量的各種方法的非限制性示例。除此之外或另選地，可使用本領(lǐng)域已知的其他合適的方法。

本發(fā)明中的受檢者的營養(yǎng)狀態(tài)涉及可指示營養(yǎng)物質(zhì)和微量營養(yǎng)素的狀態(tài)的直接標(biāo)記物或間接標(biāo)記物的狀態(tài)的概況，該標(biāo)記物可以是生物化學(xué)標(biāo)記物、生物學(xué)標(biāo)記物、功能性標(biāo)記物、或其他標(biāo)記物。

直接生物化學(xué)標(biāo)記物可以是特定營養(yǎng)物質(zhì)的濃度。營養(yǎng)物質(zhì)可以是常大量營養(yǎng)素(例如，蛋白質(zhì)和衍生化氨基酸、碳水化合物、脂質(zhì))或微量營養(yǎng)素(維生素和元素(包括礦物質(zhì)))。

間接生物化學(xué)標(biāo)記物可以是與大量營養(yǎng)素、微量營養(yǎng)素、或它們的組合相關(guān)的營養(yǎng)狀態(tài)指示物。

營養(yǎng)狀態(tài)指示物可以是生物標(biāo)記物，其濃度指示營養(yǎng)物質(zhì)的狀態(tài)，而不是所述營養(yǎng)物質(zhì)本身。例如，用于鐵的鐵蛋白，或用于維生素d的25-羥基-維生素d同效維生素。

其他營養(yǎng)物質(zhì)狀態(tài)標(biāo)記物可來自于單一營養(yǎng)物質(zhì)或其代謝物的濃度、或營養(yǎng)物質(zhì)及其代謝物的濃度組合(比例)、或營養(yǎng)物質(zhì)與其他生物化學(xué)標(biāo)記物(例如，營養(yǎng)物質(zhì)/微量營養(yǎng)素的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)和/或生物學(xué)標(biāo)記物和/或功能性標(biāo)記物(例如，特異性酶活性，如轉(zhuǎn)酮醇酶活性、紅細(xì)胞谷胱甘肽還原酶活性)的濃度組合。

目前有多種確定直接或間接生物化學(xué)標(biāo)記物的狀態(tài)的方法。在下文中，我們將討論所述標(biāo)記物的各種定量方法。然而，應(yīng)當(dāng)理解，相應(yīng)定量方法對于本發(fā)明的方法而言并非決定性的，只要能夠確定對一種特定營養(yǎng)物質(zhì)或一組特定營養(yǎng)物質(zhì)的營養(yǎng)需求即可。

氨基酸氧化指示物(iaao)方法：

例如，對必需氨基酸的特異性需求可使用氨基酸氧化指示物(iaao)方法進(jìn)行定量(robertssa,thorpejm,ballro,pencharzpb.；amjclinnutr.2001feb,73(2):276-82。(robertssa、thorpejm、ballro、pencharzpb.；《美國臨床營養(yǎng)學(xué)雜志》，2001年2月，第73卷第2期第276-282頁)；elangor,ballro,pencharzpb.,jnutr.2008feb；138(2):243-6.review(elangor、ballro、pencharzpb.；《營養(yǎng)學(xué)雜志》，2008年2月，第138卷第2期第243-246頁，綜述))。由于n平衡的局限性，已經(jīng)開發(fā)了基于穩(wěn)定同位素碳氧化的方法來評估人類的必需氨基酸需求(pencharzpb,ballro.differentapproachestodefineindividualaminoacidrequirements.annurevnutr.2003；23:101-16(pencharzpb、ballro，用于確定各個氨基酸需求的不同方法，《營養(yǎng)學(xué)年評》，2003年，第23卷第101-116頁))。經(jīng)驗(yàn)證，iaao方法可通過最小在先適應(yīng)性(minimalprioradaptation)來估計(jì)氨基酸需求(brossr,ballro,pencharzpb.,jnutr.1998nov；128(11):1913-9(brossr、ballro、pencharzpb.，《營養(yǎng)學(xué)雜志》，1998年11月，第128卷第11期第1913-1919頁)；thorpejm,robertssa,ballro,pencharzpb.,jnutr.1999feb；129(2):343-8(thorpejm、robertssa、ballro、pencharzpb.，《營養(yǎng)學(xué)雜志》，1999年2月，第129卷第2期第343-348頁))。iaao技術(shù)基于以下概念：當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)合成缺乏一種必需的氨基酸時，包括所謂的指示物氨基酸(通常為l-[1-¹³c]苯丙氨酸)的所有其他氨基酸均因?yàn)檩^少使用而過量，并且因此將被氧化(pencharz和ball，2003年)。這主要是因?yàn)檫^量的氨基酸不能被存儲，并且因此必須在摻入蛋白質(zhì)中或發(fā)生氧化之間被分配。隨著限制性氨基酸的攝入增加，指示氨基酸的氧化程度將降低，從而反映出摻入蛋白質(zhì)的程度增加。一旦滿足對限制性氨基酸的需求，隨著測試氨基酸的攝入增加，指示氨基酸的氧化程度便將不再發(fā)生變化。指示氨基酸的氧化程度停止降低并達(dá)到平穩(wěn)階段的拐點(diǎn)被稱為“斷點(diǎn)”。使用雙相線性回歸分析所識別的斷點(diǎn)指示對限制性(測試)氨基酸的估計(jì)平均需求。iaao模型的一個特別優(yōu)勢是絕對氧化水平并不重要，關(guān)鍵在于在寬泛的攝入量范圍內(nèi)的相對氧化產(chǎn)生相同的斷點(diǎn)(需求估值)。此方法是一種得到廣泛認(rèn)可的方法，但它具有很大的局限性。事實(shí)上，這種方法僅被應(yīng)用于必需的氨基酸，在每次臨床研究中僅評估一種必需的氨基酸，這對于患者是侵入性的(示蹤劑的動力學(xué)研究和接受不同飲食的若干個時間點(diǎn))并且非常耗時。

營養(yǎng)概況(或營養(yǎng)物質(zhì)分析)：

營養(yǎng)物質(zhì)需求可使用對生物樣本中的營養(yǎng)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的定量分析(即，被稱為營養(yǎng)物質(zhì)分析)來確定。營養(yǎng)物質(zhì)分析使用基于各種分析技術(shù)(例如，高效液相色譜、氣相色譜、質(zhì)譜、分光光度法、或免疫確定法)的分析方法的組合來實(shí)現(xiàn)。營養(yǎng)物質(zhì)分析包含多種營養(yǎng)物質(zhì)和微量營養(yǎng)素及其代謝產(chǎn)物(代謝物)以及相關(guān)的蛋白質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)/微量營養(yǎng)素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的濃度確定，或功能性生物標(biāo)記物，諸如營養(yǎng)物質(zhì)/微量營養(yǎng)素特異性酶活性。這種營養(yǎng)分析方法具有覆蓋全范圍的營養(yǎng)物質(zhì)和微量營養(yǎng)素的優(yōu)點(diǎn)，因此使得能夠評估營養(yǎng)物質(zhì)間的相互作用，并且由于不需要進(jìn)行動力學(xué)研究，所以對于患者而言速度更快且侵入性相對較小。

關(guān)于氨基酸需求的確定，可使用對氨基酸的濃度及其特定代謝產(chǎn)物的同時分析來確定特定氨基酸的氧化程度。由于蛋白質(zhì)氧化，對特定氨基酸的氧化程度的測定可用于推斷其在蛋白質(zhì)中的相對摻入，并且因此推斷用于滿足蛋白質(zhì)合成的代謝需要的特定需求。例如，蘇氨酸被氧化成2-酮丁酸、2-氨基丁酸和2-氨基-3-酮丁酸(圖3)。

例如，蘇氨酸及其代謝物的濃度的同時分析可用于評估蘇氨酸氧化程度(參見圖3左側(cè))。然后，將蘇氨酸氧化程度與另一種必需氨基酸進(jìn)行比較，作為基準(zhǔn)，諸如異亮氨酸(參見圖3右側(cè))。就異亮氨酸而言，使用對異亮氨酸及其氧化產(chǎn)物2-酮基-3-甲基-戊酸的濃度的確定來測定氧化程度(參見圖2右側(cè))。氧化程度被定義為蘇氨酸及其一種或多種代謝物的濃度組合的計(jì)算產(chǎn)物，諸如：

-l-蘇氨酸濃度/2-酮丁酸濃度的比值

-l-蘇氨酸濃度/(2-酮丁酸濃度+2-氨基丁酸濃度)的比值

-l-蘇氨酸濃度/(2-酮丁酸濃度+2-氨基丁酸濃度+2-氨基-3-酮丁酸濃度)的比值

-或其任何數(shù)學(xué)組合

-或其與其他標(biāo)記物或蛋白質(zhì)分解代謝的產(chǎn)物的任何數(shù)學(xué)組合，諸如循環(huán)氨的濃度、尿素循環(huán)中的中間體(鳥氨酸、瓜氨酸、精氨酸琥珀酸、精氨酸)、對稱二甲基精氨酸、和不對稱二甲基精氨酸的濃度

-其與氧化應(yīng)激、一氧化氮代謝(血漿/血清中的一氧化氮含量，尿液中的硝酸鹽含量)的標(biāo)記物的任何組合。

-其與用于監(jiān)測例如ibd活性的臨床標(biāo)記物的任何組合，該臨床標(biāo)記物如：crp、血細(xì)胞分類計(jì)數(shù)、糞便鈣衛(wèi)蛋白、鐵狀態(tài)、紅細(xì)胞沉降率、蛋白質(zhì)電泳、糞便中性粒細(xì)胞、維生素b12狀態(tài)等。

例如，可對患病受檢者和健康受檢者之間的蘇氨酸和異亮氨酸的氧化程度進(jìn)行比較，如圖4所示(此處的示例將ibd作為所關(guān)注的疾病)。從圖4中可看出，只有在與健康受檢者相比蘇氨酸氧化程度較低的情況下，才能識別ibd對蘇氨酸的營養(yǎng)需求增加。

因此，本發(fā)明還涉及用于確定對蘇氨酸和/或異亮氨酸的營養(yǎng)需求的方法，該方法包括對患病受檢者和健康受檢者的蘇氨酸和/或異亮氨酸的氧化程度進(jìn)行比較。

利用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法來進(jìn)行氨基酸定量：

氨基酸也可在從受檢者獲得的樣本中直接測定。

樣品制備

在50μl的血漿或血清中加入10μl的所標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)和140μl的冷甲醇(0.1％甲酸)，以進(jìn)行蛋白沉淀。樣品然后經(jīng)歷渦旋混合(5min)，再在4℃下以10000rpm離心10min。然后收集上清液以經(jīng)歷衍生化。

氨基酸衍生化

使用accq-tagultra衍生化試劑盒氨基酸分析(accq-tagultraderivatizationkitaminoacidanalysis)(沃特世公司(waterscorp.))按照以下制造商的程序來執(zhí)行衍生化：將10μl標(biāo)準(zhǔn)氨基酸混合溶液或樣品的上清液與70μl的accq-tagultra硼酸鹽緩沖液(ph＝8.8)混合。通過將20μl的重構(gòu)的accq-tagultra試劑(3mg/ml的6-氨基喹啉基-n-羥基琥珀酰亞胺基氨基甲酸酯或乙腈中的aqc)加入到緩沖混合物中來執(zhí)行衍生化。然后立即將樣品渦旋混合，接著在55℃下溫育15min。

使用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法(uplc-ms/ms)來分析氨基酸

uplc-ms/ms分析在watersacquityuplc系統(tǒng)上執(zhí)行，該系統(tǒng)在線聯(lián)接到配備電噴霧離子化(esi)探頭的watersxevotq質(zhì)譜儀。使用watersaccq-tagultra柱(2.1mm內(nèi)徑×100mm，1.7μm顆粒)以及包含洗脫液a和b的二元系統(tǒng)來實(shí)現(xiàn)色譜分離。洗脫液a包含10％的accq-tagultra洗脫液a濃縮物(沃特世公司(waterscorp.))在90％水中的商用溶液。洗脫液b是accq-tagultra洗脫液b(沃特世公司(waterscorp.))的商用溶液。所用分離梯度為：0-0.54min(99.9％a)，5.74min(90.9％a)，7.74min(78.8％a)，8.04(40.4％a)，8.05-8.64(10％a)，8.73-10.0(99.9％a)。自動進(jìn)樣器溫度被設(shè)置為20℃，并且色譜柱溫度設(shè)置為55℃。進(jìn)樣體積為2μl。使用watersintellistart程序來確定每個所測得的氨基酸的錐孔電壓和碰撞能量值。代表來自所有aqc加合物的碰撞誘導(dǎo)解離的共同的主要產(chǎn)物的離子m/z171用于定量各個氨基酸。使用標(biāo)準(zhǔn)氨基酸溶液至uplc-esi-ms/ms系統(tǒng)中的注入來確定氨基酸的保留時間。使用以下離子源設(shè)置：毛細(xì)管電壓，2.5kv(esi+)；反溶劑氣溫度，600℃；反溶劑氣流速，1000l/h；源溫度，150℃。

分析儀設(shè)置在每個校準(zhǔn)周期期間被確定，其中典型值如下：第一四極桿2.95(低質(zhì)量數(shù)分辨率)，14.35(高質(zhì)量數(shù)分辨率)，離子能量1：0.1；第二四極桿2.95(低質(zhì)量數(shù)分辨率)和14.40(高質(zhì)量數(shù)分辨率)，離子能量2：0.3。使用氬氣作為0.15ml.min^-1的流速下的碰撞氣體。利用waterscorporationmasslynxtm軟件來執(zhí)行uplc-ms/ms系統(tǒng)控制和數(shù)據(jù)采集。使用targetlynxtm軟件(沃特世公司(waterscorporation))來進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

通過氣液色譜來定量脂肪酸：

脂肪酸的濃度可利用任何合適的方法如薄層色譜法或氣相色譜法來確定。

在下文中，我們將舉例說明氣相色譜法。

樣品制備

在酸性條件下執(zhí)行血漿和紅細(xì)胞(rbc)脂肪酸的衍生化。簡而言之，將200μl的樣品與螺旋蓋玻璃試管中的甲醇、甲醇鹽酸、己烷和內(nèi)標(biāo)溶液混合在一起。將試管加蓋，并且在100℃下對血漿加熱60min并對rbc加熱90min，然后冷卻至室溫并且加入水以停止反應(yīng)。接著將試管以1200g離心5min，并且收集上部有機(jī)相并通過氣相色譜(gc)進(jìn)行分析。

通過氣液色譜來快速分析脂肪酸甲酯(fame)

總fame分析在7890agilent氣相色譜儀(美國加利福尼亞州帕洛阿爾托的安捷倫科技公司(agilenttechnologies,paloalto,ca,usa))上執(zhí)行，該氣相色譜儀配備有熔融石英bpx-70毛細(xì)管柱(10m×0.1mm內(nèi)徑，0.2m膜厚度；澳大利亞墨爾本的sge公司(sge,melbourne,australia))。分流進(jìn)樣器(35:1)和火焰離子化檢測(fid)系統(tǒng)分別在250℃和300℃下工作。使用購自安捷倫公司(agilent)的商業(yè)設(shè)備，烘箱的體積已減少至約5400cm³。烘箱溫度程序?yàn)椋涸?5℃下恒溫保持0.5min，以100℃/min升至180℃，在該溫度下恒溫保持0.5min，再以9℃/min升至220℃，在此溫度下恒溫保持0.5min，并且然后以50℃/min升至250℃(總工作時間為7.9min)。載氣(h2)流在0.7ml.min^-1下保持恒定，并且fid信號的采集在50hz下保持恒定。

對fame的識別

使用標(biāo)準(zhǔn)fame的混合物來確認(rèn)對脂肪酸的識別。該混合物包含以下各項(xiàng)的甲酯：丁酸(4:0)、己酸(6:0)、辛酸(8:0)、癸酸(10:0)、十一烷酸(11:0)、月桂酸(12:0)、十三烷酸(13:0)、肉豆蔻酸(14:0)、肉豆蔻腦酸(14:1n-5)、十五烷酸(15:0)、十五碳烯酸(15:1n-5)、棕櫚酸(16:0)、棕櫚油酸(16:1n-7)、十七烷酸(17:0)、十七碳烯酸(17:1n-7)、硬脂酸(18:0)、反式油酸(反-18:1n-9)、油酸(18:1n-9)、反亞油酸(全反-18:2n-6)、亞油酸(18:2n-6)、花生酸(20:0)、-亞油酸(18:3n-6)、二十碳烯酸(20:1n-9)、亞麻酸(18:3n-3)、二十一烷酸(21:0)、二十碳二烯酸(20:2n-6)、山崳酸(22:0)、二十碳三烯酸(20:3n-6)、芥酸(22:1n-9)、二十碳三烯酸(20:3n-3)、花生四烯酸(20:4n-6)、二十二碳二烯酸(22:2n-6)、二十四烷酸(24:0)、二十碳五烯酸(20:5n-3)、神經(jīng)酸(24:1n-9)和二十二碳六烯酸(22:6n-3)。

含硫分子的定量：

含硫分子包含：氨基酸及其衍生物(同型半胱氨酸、半胱氨酸、γ-谷氨酰-半胱氨酸、半胱氨酰-甘氨酸、同型胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸亞砜、硒代甲硫氨酸、甲硫氨酸亞砜亞胺、硒代半胱氨酸、硒代胱氨酸、麥角硫因、n-甲?；?l-甲硫氨酸、s-腺苷高半胱氨酸、s-腺苷基甲硫氨酸胺)、肽(還原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽)和硫辛酸。

樣品制備

在利用100μl的衍生化溶液進(jìn)行處理之前，將血漿、血清或紅細(xì)胞樣品(50μl)與50μl的內(nèi)標(biāo)谷胱甘肽乙酯(gshee)混合，該衍生化溶液包含10mm碘乙酸的10mm碳酸氫銨水溶液和氨樹膠(0.5％v/v，ph9.5)。將該混合物在室溫下存放15分鐘。停止反應(yīng)，并且通過加入50μl的冷磺基水楊酸溶液(10％w/v)來使蛋白質(zhì)沉淀。然后將混合物在4℃下以16000×g離心15分鐘。將上清液(200μl)轉(zhuǎn)移到玻璃小瓶中，并取2μl進(jìn)樣。

使用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法(uplc-ms/ms)來分析衍生化含硫分子

uplc-ms/ms分析在watersacquityuplc系統(tǒng)上執(zhí)行，該系統(tǒng)在線聯(lián)接到配備電噴霧離子化(esi)探頭的watersxevotq質(zhì)譜儀。使用watershsst32.1mm+100mm，1.7μm色譜柱來實(shí)現(xiàn)色譜分離。使用由溶劑a(0.1％甲酸的水溶液)和b(乙腈/水20:80(v/v)，含0.1％甲酸)構(gòu)成的梯度以0.25ml/min的流速來執(zhí)行洗脫。梯度如下：100％溶劑a0min-2min，1％溶劑a2min-7min，99％溶劑a7.1min-10min。質(zhì)譜儀在下列條件下工作：毛細(xì)管電壓：2.5kv；源溫度：150℃；反溶劑氣溫度：600℃；反溶劑氣流速：1000l/h。對于四極桿1，低質(zhì)量數(shù)分辨率和高質(zhì)量數(shù)分辨率分別為2.95和14.35，其中離子能量為0.1。對于四極桿2，低質(zhì)量數(shù)分辨率和高質(zhì)量數(shù)分辨率分別為2.95和14.40，其中離子能量為0.3。使用氬氣作為0.15ml/min的流速下的碰撞氣體。使用watersintellistart軟件來確定每種代謝物的具有各自的優(yōu)化錐孔電壓和碰撞能量值的mrm通道。使用這些條件，將每個含硫分子注入到uplc-ms/ms系統(tǒng)中以確定保留時間。mrm-ms方法被構(gòu)建成僅監(jiān)測每個mrm功能的一個傳輸通道。利用waterscorporationmasslynxtm軟件來執(zhí)行uplc-esi-ms/ms系統(tǒng)控制和數(shù)據(jù)采集。使用targetlynxtm軟件(沃特世公司(waterscorporation))來進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

元素(包括礦物質(zhì))的定量：

元素(包括礦物質(zhì))可通過本領(lǐng)域已知的任何合適方法來進(jìn)行定量。在下文中提供一個示例。

樣品制備

以包含5％的1-丁醇、0.05％的edta、0.05％的tritionx-100和1％氫氧化銨的稀釋溶液，將體積為150μl的生物流體(血漿、血清、尿液等)稀釋成1:10。

使用電感耦合的等離子體三重四極桿質(zhì)譜法(icp-ms/ms)來進(jìn)行元素分析

使用在低矩陣等離子體模式下工作的8800icp-ms/ms質(zhì)譜儀(日本東京的安捷倫科技公司(agilenttechnologies,tokyo,japan))來執(zhí)行元素分析。icp-ms系統(tǒng)配有集成的自動進(jìn)樣器，以用于直接的樣品導(dǎo)入。將樣品通過集成的蠕動泵以0.35mlmin^-1的流速泵送到樣品導(dǎo)入?yún)^(qū)域中，該樣品導(dǎo)入?yún)^(qū)域由同心霧化器和scott雙通道噴霧室組成。在等離子體中離子化后，分析物離子被傳輸?shù)劫|(zhì)譜儀中。icp-ms系統(tǒng)配備有允許采用ms/ms分析模式的三重四極桿質(zhì)譜分析儀。每種礦物質(zhì)的定量通過外部校準(zhǔn)來實(shí)現(xiàn)。為了糾正或減少等離子體波動和基質(zhì)效應(yīng)，采用在線稀釋法以將樣品與多元素內(nèi)標(biāo)溶液混合。為進(jìn)行質(zhì)量控制，在每次分析工作期間分析人類認(rèn)證的參比材料(seroorm血清微量元素l-1(seronormtraceelementsseruml-1)，得自挪威的sero公司(sero,norway))。所測定的元素列于附錄1中。

使用高效液相色譜-電感耦合等離子體三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法(uhplc-icp-ms/ms)來進(jìn)行元素形態(tài)分析

對于所有色譜實(shí)驗(yàn)，使用1290無限大雙活塞uhplc泵(日本東京的安捷倫科技公司(agilenttechnologies,tokyo,japan))。通過與icp-ms聯(lián)用的尺寸排阻色譜法在等度洗脫模式下用用50mm乙酸銨(ph7.4)作為流動相來實(shí)現(xiàn)對與生物分子弱相關(guān)聯(lián)的礦物質(zhì)的分析。對于對穩(wěn)定物質(zhì)的分析，使用反相(rp)hplc-icp-ms，應(yīng)用0.4mlmin¹的流速下的梯度洗脫。流動相a由2％的乙腈(acn)、0.05％的tfa(三氟乙酸)組成，并且流動相b由98％的acn、0.05％的tfa組成。典型的梯度包括在30min內(nèi)乙腈從5％到80％的線性增加。對于對生物流體的分析，應(yīng)用3-20μl的進(jìn)樣體積。通過收集與所檢測到的色譜峰對應(yīng)的級分來實(shí)現(xiàn)對礦物質(zhì)的識別。最后，將所收集的級分預(yù)濃縮，脫鹽并通過分子ms進(jìn)行分析以用于識別生物分子。通過柱后同位素稀釋分析來實(shí)現(xiàn)定量。這時，將同位素富集的元素溶解于2％的硝酸中，并通過蠕動泵注入，從而保持0.2mlmin-¹的恒定流速。

水溶性維生素：

水溶性維生素可在從受檢者獲得的樣本中直接定量。

化學(xué)品

維生素標(biāo)準(zhǔn)品、甲酸、乙酸購自美國密蘇里州圣路易斯的西格瑪奧德里奇公司(sigma-aldrich,st.louis,mo)，millipore水來自美國馬里蘭州米爾福德的沃特世公司(waters,milford,ma)，乙腈購自美國賓夕法尼亞州拉德諾的vwr公司(vwr,radnor,pa)。所標(biāo)記的維生素標(biāo)準(zhǔn)品購自美國馬薩諸塞州圖克斯伯里的cambridgeisotopelaboratories公司(cambridgeisotopelaboratories,tewksbury,ma)。

樣品制備

將存儲于-80℃下的血漿/血清解凍并立即放在冰上。在血漿/血清中加入所標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)，混合并保持10min。通過將100的μl血漿/血清與100μl的10％tca酸混合來使蛋白質(zhì)沉淀。將樣品在冰上提取10min，并且在4℃下以17000rpm離心10min，以供分析維生素b1、b2、b3、b6、b7及其代謝物。將100μl血清/血漿與包含乙酸和抗壞血酸的200μl的90％甲醇/水溶液混合，以用于分析維生素b9。將樣品攪拌20min，離心并將使上清液在氮?dú)饬飨峦耆赏?。利用水重新懸浮樣品，并使用前述的uplc條件來進(jìn)樣。

使用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法(uplc-ms/ms)來分析維生素b1、b2、b3、b6、b7和b9及其代謝物

取10μl上清液注入到watersacquityuplc系統(tǒng)中，該系統(tǒng)在線聯(lián)接到配備電噴霧離子化(esi)探頭的watersxevotq質(zhì)譜儀。使用watersacquityhsst32.1×100mm色譜柱、0.6ml的流速、溶劑a(0.1％甲酸的水溶液)和溶劑b(0.1％甲酸的乙腈溶液)來實(shí)現(xiàn)色譜分離。梯度程序在9分鐘內(nèi)從100％a變到100％b。對維生素的檢測在watersxevotqs質(zhì)譜儀中以設(shè)定的mrm模式執(zhí)行，其中每種維生素具有2次躍遷。利用waterscorporationmasslynxtm軟件來執(zhí)行uplc-ms/ms系統(tǒng)控制和數(shù)據(jù)采集。使用targetlynxtm軟件(沃特世公司(waterscorporation))來進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

脂溶性維生素：

脂溶性維生素可在從受檢者獲得的樣本中直接定量。

化學(xué)品

己烷、甲醇、乙醇、去離子水和乙腈均購自美國賓夕法尼亞州拉德諾的vwrinternational公司(vwrinternational,radnor,pa)。維生素標(biāo)準(zhǔn)品購自美國密蘇里州圣路易斯的西格瑪奧德里奇公司(sigmaaldrich,st.louis,mo)。分析色譜柱(hssc18，1.73×100mm)和固相萃取(spe)板購自美國馬里蘭州米爾福德的沃特世公司(waters,milford,ma)。

樣品制備

為了保護(hù)維生素免遭光降解，樣品制備步驟通過在實(shí)驗(yàn)室中適當(dāng)實(shí)現(xiàn)的濾光器所產(chǎn)生的紫外線(uv)保護(hù)下執(zhí)行。使用與液-液萃取工序結(jié)合的蛋白質(zhì)沉淀來提取脂溶性維生素。簡而言之，將200μl丁基化羥基甲苯(bht)的乙醇溶液太添加到200μl血清，以執(zhí)行蛋白沉淀并保護(hù)樣品免遭氧化。然后用2.5ml正己烷來提取樣品，超聲處理并離心3次。合并收集的上清液并在氮?dú)饬飨赂稍铮栽谧詈笤谡和?異丙醇9:1中重構(gòu)。

兩種25-羥基維生素d代謝物經(jīng)歷不同的提取方案。簡而言之，在150μl人血清中加入150μl甲醇，以進(jìn)行蛋白質(zhì)沉淀。收集通過離心(在4℃下以4000rpm離心15min)收集的上清液級分，并使用利用甲醇和水預(yù)處理的oasishlb(美國馬里蘭州米爾福德的沃特世公司(waters,milford,ma,usa))濾筒來進(jìn)行spe凈化步驟。在濾筒中裝入樣品并用水和5％甲醇溶液洗滌。使用甲醇來進(jìn)行分析的洗脫。然后干燥樣品并在正己烷/異丙醇9:1中重構(gòu)。

使用超高效合相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法(upc²-ms/ms)來分析脂溶性維生素及其代謝物

upc²-ms/ms分析在配備有xevotqs質(zhì)譜儀的watersacquity超高效合相色譜(upc²)系統(tǒng)(沃特世公司(waterscorporation))上執(zhí)行。利用hssc18分析柱來執(zhí)行色譜分離，并且該分析柱與以下泵連接：泵a(流動相，co2)和泵b(流動相，10mm醋酸銨甲醇溶液)。在使用1.2ml的流速的14分鐘的總工作時間內(nèi)，所施加的梯度從2％的有機(jī)溶劑開始，直到達(dá)到40％。ms分析如下：毛細(xì)管電壓：2.6kv，反溶劑氣溫度：500℃，錐孔氣流速：150l/h，反溶劑氣流速：500l/h。引用多反應(yīng)監(jiān)測(mrm)來執(zhí)行該分析。利用waterscorporationmasslynxtm軟件來執(zhí)行uplc-ms/ms系統(tǒng)控制和數(shù)據(jù)采集。使用targetlynxtm軟件(沃特世公司(waterscorporation))來進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

例如，25-羥基維生素d同效維生素的量可用于確定維生素d的狀態(tài)。

進(jìn)一步的微量營養(yǎng)素分析：

可使用下文所述的示例性方法來執(zhí)行維生素或礦物質(zhì)/痕量元素狀態(tài)。

維生素b12和維生素b9(葉酸)的狀態(tài)可使用競爭原理而被測定。

可執(zhí)行血漿/血清甲基丙二酸和總同型半胱氨酸以及全反鈷胺素ii的血漿濃度的定量，以用于維生素b12的狀態(tài)。

可執(zhí)行鐵蛋白、可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白或鐵調(diào)素的定量，以用于鐵的狀態(tài)。

可執(zhí)行甲狀腺素t4和t3的定量，以用于碘的狀態(tài)。

可執(zhí)行血漿銅藍(lán)蛋白和銅/鋅超氧化物歧化酶的定量，以用于銅的狀態(tài)。

代謝物的進(jìn)一步分析：

使用cobasc111(羅氏診斷公司(rochediagnostics))來對血漿/血清執(zhí)行進(jìn)一步的分析，以用于氨和尿素定量。通過分光光度法來執(zhí)行測定。氨濃度為在340nm(波長a)和629nm(波長b)下的所計(jì)算的終點(diǎn)降低。通過在340nm(波長a)和409nm(波長b)下的動力學(xué)降低，使用計(jì)算模式來確定尿素濃度。

組合物：

本發(fā)明的組合物包含一定量的營養(yǎng)物質(zhì)，該營養(yǎng)物質(zhì)在患病人中重新建立等同于健康人或健康人群組的營養(yǎng)概況或狀態(tài)的代謝、生理和功能。

首先，確定患病人或一群組患有相同疾病或具有相同疾病嚴(yán)重程度的患病患者的獨(dú)特的營養(yǎng)需求。

以這種方式，可識別未以最佳的量、而是以過低或過高的量(通常以過低的量)提供給患病患者的營養(yǎng)物質(zhì)。

然后可將營養(yǎng)組合物調(diào)整為含包含一定量的營養(yǎng)物質(zhì)，該量將使患病人的營養(yǎng)概況恢復(fù)到健康人的營養(yǎng)概況。最佳地，在食用適于患病受檢者的營養(yǎng)組合物之后，患病受檢者的營養(yǎng)概況將具有相同或幾乎等同的營養(yǎng)狀態(tài)。

例如，用于表現(xiàn)出由iaao方法所確定的蘇氨酸缺乏的患病受檢者的營養(yǎng)組合物包含游離蘇氨酸或/和與蛋白質(zhì)結(jié)合的蘇氨酸的形式的蘇氨酸，其含量將降低或消除蘇氨酸缺乏。

因此，營養(yǎng)組合物可為僅包括在常規(guī)飲食中表現(xiàn)不足的那些營養(yǎng)物質(zhì)的補(bǔ)充劑。

作為另外一種選擇，營養(yǎng)組合物可以是完全食物的形式，該完全食物提供患病人實(shí)現(xiàn)正常營養(yǎng)狀態(tài)所需的所有營養(yǎng)物質(zhì)，并且因此既包含患病受檢者與健康受檢者相比具有獨(dú)特的營養(yǎng)需求的那些營養(yǎng)物質(zhì)，也包含患病受檢者與健康受檢者具有相同營養(yǎng)需求的那些營養(yǎng)物質(zhì)。完善食物可包含患病人與健康受試者相比具有較低需求的少量的那些營養(yǎng)物質(zhì)。

制劑：

上述組合物可以液體或固體形式進(jìn)行配制。

該組合物還可包含可由本領(lǐng)域的技術(shù)人員在閱讀本公開之后識別的至少一種其他活性劑、載體、媒介物、賦形劑或助劑。

該組合物可呈營養(yǎng)組合物或藥物產(chǎn)品的形式。營養(yǎng)組合物或藥物產(chǎn)品可包含本發(fā)明的組合物。

營養(yǎng)組合物：

如本文所用，術(shù)語“營養(yǎng)組合物”包括但不限于完全營養(yǎng)組合物、部分或不完全營養(yǎng)組合物、以及特定于疾病或病癥的營養(yǎng)組合物。完全營養(yǎng)組合物(即，包含所有必需的常量和微量營養(yǎng)素的組合物)可用作患者的唯一營養(yǎng)來源?；颊呖蓮拇祟愅耆珷I養(yǎng)組合物接收到100％的營養(yǎng)需求。部分或不完全營養(yǎng)組合物不包含所有必需的大量和微量營養(yǎng)素，并且不可用作患者唯一的營養(yǎng)來源。部分或不完全營養(yǎng)組合物可用作營養(yǎng)補(bǔ)充劑，即作為患者飲食的補(bǔ)充?？诜a(bǔ)充營養(yǎng)組合物包含按照本發(fā)明的方法識別的患病人的與健康人相比具有較高需求的那些營養(yǎng)物質(zhì)。

完全營養(yǎng)組合物通常具有熱密度為0.7kcal/ml-2.0kcal/ml(2.9kj/ml-8.4kj/ml)的能量密度。

營養(yǎng)組合物可包含以下大量營養(yǎng)素和微量營養(yǎng)素：蛋白質(zhì)的來源、脂質(zhì)的來源、碳水化合物的來源、維生素和元素(包括礦物質(zhì))。

蛋白質(zhì)來源可以是動物蛋白、乳蛋白或植物蛋白。

該營養(yǎng)組合物還包含一種或多種游離氨基酸。氨基酸的非限制性示例包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、瓜氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、組氨酸、羥脯氨酸、羥絲氨酸、羥酪氨酸、羥賴氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、?；撬?、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸。非蛋白質(zhì)氨基酸的示例為瓜氨酸、hica(α-羥基異己酸)、hiva(α-羥基異戊酸)、himva(α-羥基甲基戊酸)、或它們的組合。

游離氨基酸可以是組合物中的或與其他蛋白質(zhì)來源組合的唯一蛋白質(zhì)來源。每種氨基酸以總氨基酸的0.5％-25％的量存在。

脂肪來源可以是動物脂肪或植物脂肪或這兩者。雖然動物脂肪具有基本上相同的熱量和營養(yǎng)價值并且可互換使用，但是植物油因易于獲得、易于制備并且飽和脂肪酸濃度較低，因此在本發(fā)明的實(shí)踐中是優(yōu)選的。將要使用的脂肪來源包括魚油、卵油、藻油、玉米油、葵花油、紅花油、低芥酸菜籽油、椰子油和/或大豆油、或它們的組合。

營養(yǎng)組合物可包含元素和礦物質(zhì)，諸如硼、鈣、乙酸鈣、葡萄糖酸鈣、氯化鈣、乳酸鈣、磷酸鈣、硫酸鈣、氯化物、鉻、氯化鉻、吡啶甲酸鉻、銅、硫酸銅、葡萄糖酸銅、硫酸銅、氟化物、鐵、羰基鐵、三價鐵、富馬酸亞鐵、正磷酸鐵、鐵研磨物、多糖鐵、碘化物、碘、鎂、碳酸鎂、氫氧化鎂、氧化鎂、硬脂酸鎂、硫酸鎂、錳、鉬、磷、鉀、磷酸鉀、碘化鉀、氯化鉀、乙酸鉀、硒、硫、鈉、多庫酯鈉、氯化鈉、硒酸鈉、鉬酸鈉、鋅、氧化鋅、硫酸鋅、以及它們的混合物。礦物質(zhì)化合物的非限制性示例性衍生物包括上述任何礦物質(zhì)化合物的鹽、堿性鹽、酯和螯合物。

營養(yǎng)組合物還可包含維生素，這個也容易維生素b1(硫胺素、焦磷酸硫胺素、tpp、三磷酸硫胺素、ttp、鹽酸硫胺素、一硝酸硫胺素)、維生素b2(核黃素、黃素單核苷酸、fmn、黃素腺嘌呤二核苷酸、fad、乳黃素、卵黃素)、維生素b3(煙酸、尼克酸、尼克酰胺、煙酰胺、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、nad、尼克酸單核苷酸、nicmn、吡啶-3-羧酸)、維生素b3-前體色氨酸、維生素b6(吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺、鹽酸吡哆醇)、泛酸(泛酸鹽、泛醇)、葉酸鹽(葉酸、蝶酰谷氨酸)、維生素b12(鈷胺素、甲基鈷胺素、脫氧腺苷鈷胺素、氰鈷胺素、羥基鈷胺素、腺苷鈷胺素)、生物素、維生素c(抗壞血酸)、維生素a(視黃醇、視黃醇乙酸酯、視黃醇棕櫚酸酯、與其他長鏈脂肪酸的視黃酯、視黃醛、視黃酸、視黃醇酯)、維生素d(鈣化醇、膽鈣化醇、維生素d3、1,25-二羥基維生素d)、維生素e(α-生育酚、α-生育酚乙酸酯、α-生育酚琥珀酸酯、α-生育酚煙酸酯、α-生育酚)、維生素k(維生素k1、葉綠醌、萘醌、維生素k2、甲萘醌-7、維生素k3、甲萘醌-4、氫化甲荼錕、甲萘醌-8、甲萘醌-8h、甲萘醌-9、甲萘醌-9h、甲萘醌-10、甲萘醌-11、甲萘醌-12、甲萘醌-13)、膽堿、肌醇、6-胡蘿卜素、以及它們?nèi)魏谓M合。

完全營養(yǎng)組合物通常包含10en％-40en％的蛋白質(zhì)、10en％-60en％的碳水化合物和20en％-80en％％的脂肪?！癳n％”是能量占營養(yǎng)組合物的總能量的百分比。

該組合物還可包含抗氧化劑、穩(wěn)定劑(以固體形式提供時)或乳化劑(以液體形式提供時)。

營養(yǎng)組合物的形式：

在一個實(shí)施方案中，該營養(yǎng)組合物選自補(bǔ)充營養(yǎng)組合物、完全營養(yǎng)組合物、酸乳產(chǎn)品、發(fā)酵乳、果汁、小袋形式的干粉或谷物棒。

該營養(yǎng)組合物可以是也被稱為用于特殊醫(yī)療用途的食物的醫(yī)療食物。醫(yī)療食物產(chǎn)品是專門配制的并用于疾病或醫(yī)學(xué)病癥的飲食管理(例如，預(yù)防或治療疾病或不希望的醫(yī)學(xué)病癥)。醫(yī)療食物產(chǎn)品可提供臨床營養(yǎng)，例如滿足存在醫(yī)學(xué)病癥的患者或具有特定營養(yǎng)需求的其他人的特殊營養(yǎng)需求。

醫(yī)療食物可以是用于口服給養(yǎng)的保健營養(yǎng)組合物和/或用于腸內(nèi)或胃腸外給養(yǎng)的營養(yǎng)產(chǎn)品的形式。就用于胃腸外給養(yǎng)的產(chǎn)品而言，其將僅包含適用于胃腸外給養(yǎng)的成分。適用于胃腸外給養(yǎng)的成分是本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的。

在一個實(shí)施方案中，醫(yī)療食物可以是營養(yǎng)完全的產(chǎn)品、飲料、膳食補(bǔ)充劑、膳食替代品、食物添加劑、食物產(chǎn)品的補(bǔ)充劑、待溶解的粉末、腸內(nèi)營養(yǎng)產(chǎn)品、嬰兒配方奶粉的形式、以及它們的組合。

在一個實(shí)施方案中，營養(yǎng)組合物可以是發(fā)酵乳、酸乳、新鮮奶酪、凝乳、甜食棒、早餐谷物片、早餐谷物棒、飲料、乳粉、大豆基產(chǎn)品、非乳發(fā)酵產(chǎn)品、或用于實(shí)現(xiàn)臨床營養(yǎng)的營養(yǎng)補(bǔ)充劑。在一個實(shí)施方案中，組合物可以是粉末形式，特別是用于利用液體重構(gòu)的粉末。在一個實(shí)施方案中，組合物可以是液體的形式，例如即飲型液體口服營養(yǎng)補(bǔ)充劑。

在一個實(shí)施方案中，營養(yǎng)組合物是選自片劑、膠囊劑、液體劑、咀嚼片、軟凝膠、小袋、散劑、糖漿劑、液體懸浮劑、乳劑、溶液的形式、或它們的組合。在一個實(shí)施方案中，營養(yǎng)組合物是口服營養(yǎng)補(bǔ)充劑。作為另外一種選擇，營養(yǎng)組合物可以是管飼物。

粘度：

如果營養(yǎng)組合物是液體，則其粘度低于150mpa.s，優(yōu)選地低于100mpa.s，更優(yōu)選地低于80mpa.s，甚至更優(yōu)選地低于70mpa.s。在旋轉(zhuǎn)流變儀中，使用圓錐-平板幾何形狀在20℃下以501/s的剪切速率來確定粘度。

如果組合物以經(jīng)組織化處理的產(chǎn)品(布丁等)的形式提供以便利用勺子食用，則優(yōu)選的是粘度為至少350mpa.s，優(yōu)選地高于750mpa.s，更優(yōu)選地介于1000和4000mpa.s之間。

治療效用和方法：

本發(fā)明的組合物可用于治療或預(yù)防與健康受檢者營養(yǎng)狀態(tài)不同的患病受檢者的營養(yǎng)狀態(tài)相關(guān)聯(lián)的疾病或者治療或預(yù)防所述疾病的方法。

在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該疾病是炎性腸病(例如，克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、膠原性結(jié)腸炎、淋巴細(xì)胞性結(jié)腸炎、改道性結(jié)腸炎、白塞氏病、未定型結(jié)腸炎)。本發(fā)明的方法和組合物所適用的其他疾病或臨床病癥包括腸道易激綜合癥、2型糖尿病、帕金森病、阿爾茨海默病、認(rèn)知衰退/損害、抑郁癥、危重病癥。

制備方法：

本發(fā)明提供了用于制備上述組合物的方法，該方法包括提供上述營養(yǎng)物質(zhì)中的至少一種營養(yǎng)物質(zhì)；并且任選地添加至少一種另外的營養(yǎng)物質(zhì)，所述營養(yǎng)物質(zhì)選自一種或多種氨基酸、脂肪或碳水化合物；任選地添加載體或/和水。

本領(lǐng)域的技術(shù)人員將理解，他們可自由地組合本文所公開的本發(fā)明的所有特征。具體地，可將針對本發(fā)明不同實(shí)施方案所描述的特征進(jìn)行組合。根據(jù)附圖，本發(fā)明的其他優(yōu)點(diǎn)和特征將顯而易見。