本發(fā)明涉及一種檢測方法，具體涉及一種左磷霉素右苯乙胺鹽及其對映異構(gòu)體的檢測方法，屬于藥物分析領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

磷霉素（Fosfomycin,phosphonomycin）是1969年美國MERCK公司和西班牙CEP公司從西班牙土壤中分離出的鏈絲菌所產(chǎn)生的一種新類型的廣譜抗生素，國外應(yīng)用十分廣泛。 1993年列為我國國家基本藥物。 磷霉素具有獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗菌作用機(jī)制，廣譜、耐酶、高效、低毒。其分子量小，組織滲透性好，分布廣泛，血藥，尿藥濃度高；過敏反應(yīng)少；對視聽神經(jīng)及腎臟無毒性；與其它抗生素不產(chǎn)生拮抗作用亦無交叉耐藥性。此外，磷霉素能抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的早期合成，破壞細(xì)菌外層結(jié)構(gòu)，改變并用藥物進(jìn)入菌體的途徑，使藥物在菌體內(nèi)易于富集，表現(xiàn)出良好的協(xié)同作用。

磷霉素為一種游離酸，藥用品主要以其鹽的形式，如磷霉素鈣，磷霉素鈉等存在，各種磷霉素鹽通常由左旋磷霉素右旋苯乙胺鹽轉(zhuǎn)化生成，而左旋磷霉素右旋苯乙胺鹽是通過順丙稀磷酸的環(huán)氧化步驟合成得到，但從該步驟獲得的產(chǎn)物為磷霉素消旋體。其中，左旋磷霉素有療效，從消旋體中被拆分出來后，進(jìn)一步精制成為產(chǎn)品；而右旋磷霉素[(+)-順-(1S，2R)-1，2-環(huán)氧丙基磷酸]無療效，其前體物質(zhì)右旋磷霉素左旋苯乙胺鹽，即（1S,2R）-(+)-1,2-環(huán)氧丙基磷酸-S-(-)-α-苯乙胺，該雜質(zhì)會通過后續(xù)反應(yīng)使右旋磷霉素殘留在藥物中，影響藥物質(zhì)量。因此，控制左磷霉素右苯乙胺鹽對映異構(gòu)體的含量，對提高磷霉素的質(zhì)量，保證廣大患者用藥的安全性具有重大意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

對于左磷霉素右苯乙胺鹽對映異構(gòu)體雜質(zhì)，在藥物合成過程中是需要進(jìn)行質(zhì)量控制的。含手性碳原子的光學(xué)異構(gòu)體的分離一直是手性藥物合成和制劑過程中質(zhì)量控制的難點(diǎn)。因?yàn)閷τ钞悩?gòu)體理化性質(zhì)相近，尚無左旋磷霉素右旋苯乙胺及其對映異構(gòu)體有效的檢測方法報道。本發(fā)明旨在提供一種簡單、快速、準(zhǔn)確地分析左磷霉素右苯乙胺及其對映異構(gòu)體的方法。本發(fā)明所述方法主要通過高效液相色譜儀分析左磷霉素右苯乙胺鹽及其對映異構(gòu)體，采用陰離子交換手性柱及特定的成份和比例的流動相進(jìn)行樣品的分析。高效液相色譜儀的檢測條件為：流動相甲醇-乙腈-醋酸-醋酸銨或甲醇-乙腈-醋酸-三乙胺或甲醇-乙腈-醋酸-氨水，甲醇-乙腈-醋酸-醋酸銨體積質(zhì)量百分比或甲醇-乙腈-醋酸-三乙胺體積百分比或甲醇-乙腈-醋酸-氨水體積百分比為80：20：1~2：0.2~0.6，色譜柱為CHIRALPAK-QNAX(150mm×4.6mm，5μm)陰離子交換手性柱，流速：0.8~1.0ml/min，柱溫：30~35℃，示差檢測器，檢測器溫度30~35℃，進(jìn)樣體積：5~10μl。該方法的分離度能達(dá)到1.5以上，分離效果好。本方法能實(shí)現(xiàn)左磷霉素右苯乙胺及其對映異構(gòu)體的簡單、快速、準(zhǔn)確分析，該方法具有再現(xiàn)性好，分離度高，檢測樣品穩(wěn)定等優(yōu)勢。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1中以甲醇-乙腈-醋酸-醋酸銨=80：20：2：0.5（V：V：V:M）作為流動相的HPLC檢測圖譜

圖2為實(shí)施例2中以甲醇-乙腈-醋酸-醋酸銨=80：20：1：0.2（V：V：V:M）作為流動相的HPLC檢測圖譜

圖3為實(shí)施例3中以甲醇-乙腈-醋酸-三乙胺=80：20：2：0.6（V：V：V:V）作為流動相的HPLC檢測圖譜

圖4為實(shí)施例4中以甲醇-乙腈-醋酸-氨水=80：20：1：0.5（V：V：V:V）作為流動相的HPLC檢測圖譜

實(shí)施例1

色譜條件：

高效液相色譜儀：安捷倫高效液相色譜儀1260

色譜柱：CHIRALPAK-QNAX(150mm×4.6mm，5μm)陰離子交換手性柱

流動相：甲醇-乙腈-醋酸-醋酸銨=80：20：2：0.5（V：V：V:M）

柱溫：35℃

流速：1.0ml/min

檢測器溫度：35℃

進(jìn)樣體積：10μl

實(shí)施步驟：稱取磷霉素苯乙胺鹽消旋體適量，用流動相溶解，制成每1ml中約含40mg磷霉素苯乙胺鹽消旋體的溶液作為系統(tǒng)適用性溶液。取左磷霉素右苯乙胺鹽800mg，精密稱定，置于10 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液。取右磷霉素左苯乙胺鹽16mg，精密稱定，置于20 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。量取系統(tǒng)適用性溶液10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，左磷霉素右苯乙胺鹽與右磷霉素左苯乙胺鹽分離度應(yīng)大于1.5。分別取供試品溶液和對照品溶液10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果見附圖1，1號峰為左磷霉素右苯乙胺鹽，2號峰為右磷霉素左苯乙胺鹽，分離度3.3。

實(shí)施例2

色譜條件：

高效液相色譜儀：安捷倫高效液相色譜儀1260

色譜柱：CHIRALPAK-QNAX(150mm×4.6mm，5μm)陰離子交換手性柱

流動相：甲醇-乙腈-醋酸-醋酸銨=80：20：1：0.2 （V：V：V:M）

柱溫：30℃

流速：1.0 ml/min

檢測器溫度：30℃

進(jìn)樣體積： 8μl

實(shí)施步驟：稱取磷霉素苯乙胺鹽消旋體適量，用流動相溶解，制成每1ml中約含40mg磷霉素苯乙胺鹽消旋體的溶液作為系統(tǒng)適用性溶液。取左磷霉素右苯乙胺鹽800mg，精密稱定，置于10 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液。取右磷霉素左苯乙胺鹽16mg，精密稱定，置于20 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。量取系統(tǒng)適用性溶液8μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，左磷霉素右苯乙胺鹽與右磷霉素左苯乙胺鹽分離度應(yīng)大于1.5。分別取供試品溶液和對照品溶液8μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果見附圖2，1號峰為左磷霉素右苯乙胺鹽，2號峰為右磷霉素左苯乙胺鹽，分離度3.0。

實(shí)施例3

色譜條件：

高效液相色譜儀：安捷倫高效液相色譜儀1260

色譜柱：CHIRALPAK-QNAX(150mm×4.6mm，5μm)陰離子交換手性柱

流動相：甲醇-乙腈-醋酸-三乙胺=80：20：2：0.6（V：V：V:V）

柱溫：32℃

流速：0.8ml/min

檢測器溫度：32℃

進(jìn)樣體積：5μl

實(shí)施步驟：稱取磷霉素苯乙胺鹽消旋體適量，用流動相溶解，制成每1ml中約含40mg磷霉素苯乙胺鹽消旋體的溶液作為系統(tǒng)適用性溶液。取左磷霉素右苯乙胺鹽800mg，精密稱定，置于10 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液。取右磷霉素左苯乙胺鹽16mg，精密稱定，置于20 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。量取系統(tǒng)適用性溶液5μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，左磷霉素右苯乙胺鹽與右磷霉素左苯乙胺鹽分離度應(yīng)大于1.5。分別取供試品溶液和對照品溶液5μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果見附圖3，1號峰為左磷霉素右苯乙胺鹽，2號峰為右磷霉素左苯乙胺鹽，分離度3.2。

實(shí)施例4

儀器與條件

色譜柱：CHIRALPAK-QNAX(150mm×4.6mm，5μm)陰離子交換手性柱

流動相：甲醇-乙腈-醋酸-氨水=80：20：1：0.5（V：V：V:V）

柱溫：35℃

流速：1.0ml/min

檢測器溫度：35℃

進(jìn)樣體積：10μl

實(shí)施步驟：稱取磷霉素苯乙胺鹽消旋體適量，用流動相溶解，制成每1ml中約含40mg磷霉素苯乙胺鹽消旋體的溶液作為系統(tǒng)適用性溶液。取左磷霉素右苯乙胺鹽800mg，精密稱定，置于10 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液。取右磷霉素左苯乙胺鹽16mg，精密稱定，置于20 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。量取系統(tǒng)適用性溶液10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，左磷霉素右苯乙胺鹽與右磷霉素左苯乙胺鹽分離度應(yīng)大于1.5。分別取供試品溶液和對照品溶液10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果見附圖4，1號峰為左磷霉素右苯乙胺鹽，2號峰為右磷霉素左苯乙胺鹽，分離度3.0。