1.一種瘧原蟲pf/pan檢測試紙的制備方法,其特征在于,包括步驟為:
(1)制備pf重懸液:所述pf重懸液中包括三羥甲基氨基甲烷、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白和吐溫20,將三羥甲基氨基甲烷、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白和吐溫20溶于水并定容,調節(jié)pH值至8-9得到;制備pan重懸液:所述pan重懸液中包括三羥甲基氨基甲烷、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白和酪蛋白,將三羥甲基氨基甲烷、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白和酪蛋白溶于水并定容,調節(jié)pH值至8-9得到;制備包被基液:海藻糖溶于pH值為7-8的磷酸緩沖溶液并定容得到;
(2)將膠體金與碳酸鉀混合并調節(jié)pH值,再加入惡性瘧原蟲乳酸脫氫酶pfLDH單克隆抗體、牛血清白蛋白溶液混合,離心得到第一沉淀,所述第一沉淀用所述pf重懸液重懸,得到pf免疫金;將膠體金與碳酸鉀混合并調節(jié)pH值,再加入瘧原蟲乳酸脫氫酶panLDH單克隆抗體、牛血清白蛋白溶液混合,離心得到第二沉淀,所述第二沉淀用所述pan重懸液重懸,得到pan免疫金;
(3)用所述包被基液稀釋所述惡性瘧原蟲乳酸脫氫酶pfLDH單克隆抗體得到惡性瘧原蟲乳酸脫氫酶pfLDH單克隆抗體檢測線包被液;用所述包被基液稀釋所述瘧原蟲乳酸脫氫酶panLDH單克隆抗體得到瘧原蟲乳酸脫氫酶panLDH單克隆抗體檢測線包被液;用所述包被基液稀釋羊抗鼠IgG多抗得到對照線包被液;
(4)用所述pf免疫金對金墊噴金得到pf免疫金墊;用所述pan免疫金對金墊噴金得到pan免疫金墊;用所述惡性瘧原蟲乳酸脫氫酶pfLDH單克隆抗體檢測線包被液、所述瘧原蟲乳酸脫氫酶panLDH單克隆抗體檢測線包被液和所述對照線包被液分別在貼于聚氯乙烯底板的硝酸纖維素膜上劃線,得到點膜的聚氯乙烯底板;
(5)將樣品墊、所述pf免疫金墊、所述pan免疫金墊、所述點膜的聚氯乙烯底板和吸水紙組裝在一起,切割成瘧原蟲pf/pan檢測試紙。
2.根據(jù)權利要求1所述的瘧原蟲pf/pan檢測試紙的制備方法,其特征在于,步驟(1)中所述pf重懸液中所述三羥甲基氨基甲烷、所述蔗糖、所述海藻糖、所述牛血清白蛋白、所述吐溫20和定容總體積的比例為0.242g:10g:5g:1g:0.2 mL:100mL;所述pan重懸液中所述三羥甲基氨基甲烷、所述蔗糖、所述海藻糖、所述牛血清白蛋白、所述酪蛋白和定容總體積的比例為0.242g:10g:5g:1g:0.2g:100mL。
3.根據(jù)權利要求1所述的瘧原蟲pf/pan檢測試紙的制備方法,其特征在于,步驟(1)中所述pf重懸液的pH值用1M鹽酸調節(jié)至8.5;所述pan重懸液的pH值用1M鹽酸調節(jié)至9.0;所述磷酸緩沖溶液為0.01M、pH值為7.4的磷酸緩沖溶液。
4.根據(jù)權利要求1所述的瘧原蟲pf/pan檢測試紙的制備方法,其特征在于,步驟(2)中制備pf免疫金的具體步驟為:將膠體金與碳酸鉀混合并調節(jié)pH值后攪拌5min,加入惡性瘧原蟲乳酸脫氫酶pfLDH單克隆抗體并攪拌5min,再加入牛血清白蛋白溶液混合并攪拌5min,在4℃、轉速為6000r/min的條件下離心 30min得到第一沉淀,所述第一沉淀用所述pf重懸液重懸至離心前體積的1/10,得到pf免疫金;制備pan免疫金的具體步驟為:將膠體金與碳酸鉀混合并調節(jié)pH值后攪拌5min,加入瘧原蟲乳酸脫氫酶panLDH單克隆抗體并攪拌5min,再加入牛血清白蛋白溶液混合并攪拌5min,在4℃、轉速為6000r/min的條件下離心 30min得到第二沉淀,所述第二沉淀用所述pan重懸液重懸至離心前體積的1/20,得到pan免疫金。
5.根據(jù)權利要求1或4所述的瘧原蟲pf/pan檢測試紙的制備方法,其特征在于,步驟(2)中所述碳酸鉀為0.2M碳酸鉀,所述0.2M碳酸鉀和所述惡性瘧原蟲乳酸脫氫酶(pfLDH)單克隆抗體的比例為3uL/mL:10μg/mL,所述0.2M碳酸鉀和所述瘧原蟲乳酸脫氫酶panLDH單克隆抗體的比例為4uL/mL:5μg/mL;所述牛血清白蛋白溶液為質量分數(shù)為10%的牛血清白蛋白溶液,所述質量分數(shù)為10%的牛血清白蛋白溶液的加入體積為所述膠體金體積的1/10;攪拌是置于磁力攪拌器上實現(xiàn)的。
6.根據(jù)權利要求1所述的瘧原蟲pf/pan檢測試紙的制備方法,其特征在于,步驟(3)中所述惡性瘧原蟲乳酸脫氫酶pfLDH單克隆抗體檢測線包被液中所述惡性瘧原蟲乳酸脫氫酶pfLDH單克隆抗體的濃度為2mg/mL;所述瘧原蟲乳酸脫氫酶panLDH單克隆抗體檢測線包被液中所述瘧原蟲乳酸脫氫酶panLDH單克隆抗體的濃度為2mg/mL;所述對照線包被液中所述羊抗鼠IgG多抗的濃度為2mg/mL。
7.根據(jù)權利要求1所述的瘧原蟲pf/pan檢測試紙的制備方法,其特征在于,步驟(4)中所述金墊采用玻璃纖維膜;所述噴金采用點膜噴金設備完成。
8.根據(jù)權利要求1所述的瘧原蟲pf/pan檢測試紙的制備方法,其特征在于,步驟(4)中將得到的點膜的聚氯乙烯底板放入條件為60℃±3℃、相對濕度≤30%的環(huán)境中烘干2h,密封保存。
9.根據(jù)權利要求1所述的瘧原蟲pf/pan檢測試紙的制備方法,其特征在于,步驟(6)中所述樣品墊為玻璃纖維膜;所述樣品墊在使用前用樣品墊處理液浸泡10min后干燥,其中所述樣品墊處理液中包括三羥甲基氨基甲烷、TritonX-100、表面活性劑S7、表面活性劑S9和BSA。
10.根據(jù)權利要求9所述的瘧原蟲pf/pan檢測試紙的制備方法,其特征在于,所述樣品墊處理液是將比例為1.21g:0.3mL:0.3g:0.4g:1g的三羥甲基氨基甲烷、TritonX-100、表面活性劑S7、表面活性劑S9和BSA溶于水中定容至100 mL,pH值調節(jié)至9.0。