本發(fā)明涉及檢驗醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、生物技術(shù)及生物化學(xué)領(lǐng)域。更具體地說，本發(fā)明涉及一種血清生物標(biāo)志物用于制備糖尿病合并心梗早期診斷的試劑盒的用途。
背景技術(shù)：
：心血管疾病已成為威脅人類健康的第一大殺手，我國目前有心血管疾病患者2.9億，每年約350萬人死于各類心血管疾病，平均每十秒就有一個患者死于這一疾病，而其中急性心肌梗死死亡率呈現(xiàn)快速上升和年輕化趨勢。我國國家衛(wèi)計委2013年統(tǒng)計顯示，糖尿病患者急性心肌梗死死亡率是非糖尿病患者的2.3倍。更有研究數(shù)據(jù)表明，糖尿病患者治療心血管合并癥的年直接醫(yī)療費用是無并發(fā)癥者的633％。同時，在以往的研究中我們也發(fā)現(xiàn)，支架術(shù)后糖尿病患者的心血管事件的發(fā)生率是非糖尿病患者的3.2倍。這些數(shù)據(jù)都提示我們?nèi)绾尉_定位糖尿病患者中心梗的高發(fā)人群，及對這部分人群的心血管進行精準(zhǔn)的風(fēng)險評估，以利于早期發(fā)現(xiàn)早期干預(yù)，是我們面臨的重大課題。目前臨床上通常以肌酸激酶同功酶(CK-MB)、肌紅蛋白、肌鈣蛋白I(TnI)、肌鈣蛋白T(TnT)等血清心肌損傷標(biāo)志物水平的升高及心電圖的改變作為急性心肌梗死的診斷依據(jù)，然而這些指標(biāo)的變化發(fā)生在疾病出現(xiàn)之后，并不能夠揭示疾病的發(fā)生發(fā)展過程，更不能起到預(yù)防疾病發(fā)生的作用。中國發(fā)明101792746A公開的一種用于冠心病診斷的血管過氧化酶ELISA試劑盒可用于檢測人血清、血漿、腦脊液或其他組織勻漿中的血管過氧化物酶濃度，但是該方法通過過氧化物酶濃度來判斷，準(zhǔn)確度不高。中國發(fā)明104311655A公開的一種用于冠心病診斷的血清標(biāo)志物Samd3蛋白，同樣應(yīng)用ELISA方法檢測，靈敏度準(zhǔn)確度不夠高。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個目的是解決至少上述問題，并提供至少后面將說明的優(yōu)點。本發(fā)明基于非預(yù)期的發(fā)現(xiàn)，棕櫚酸(HMDB00220，Palmiticacid)、硬脂酸(HMDB00827，Stearicacid)及花生四烯酸(HMDB01043，Arachidonicacid)無論單獨或者組合，在糖尿病合并心肌梗死病患者中均顯著高于單純糖尿病患者。因而這些可以作為糖尿病合并心肌梗死的早期診斷的可靠生物標(biāo)記。本發(fā)明還有一個目的是提供生物標(biāo)記物用于制備試劑盒的用途，該生物標(biāo)記物包括：棕櫚酸(HMDB00220，Palmiticacid)、硬脂酸(HMDB00827，Stearicacid)及花生四烯酸(HMDB01043，Arachidonicacid)，該試劑盒中糖尿病合并心肌梗死的早期診斷。該試劑盒能夠更加個體化、準(zhǔn)確地早期預(yù)測糖尿病合并心肌梗死的發(fā)病。為了實現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點，提供了一種生物標(biāo)記用于制備試劑盒的用途，所述生物標(biāo)記為棕櫚酸(Palmiticacid)、硬脂酸(Stearicacid)及花生四烯酸(Arachidonicacid)中一種或多種，所述試劑盒用于糖尿病合并心肌梗死病的早期診斷，包括：自被懷疑為患有糖尿病合并心肌梗死的個體取得血清樣本；測定該血清樣本中所述生物標(biāo)記的水平；以及根據(jù)該生物標(biāo)記的水平評估該個體是否具有糖尿病合并心肌梗死病，當(dāng)與糖尿病個體中該生物標(biāo)記的水平相比較，該生物標(biāo)記水平的增加可指出該個體具有糖尿病合并心肌梗死病。優(yōu)選的是，所述生物標(biāo)記為棕櫚酸(Palmiticacid)，所述試劑盒用于糖尿病合并心肌梗死病的早期診斷，包括：自被懷疑為患有糖尿病合并心肌梗死的個體取得血清樣本；測定該血清樣本中棕櫚酸(Palmiticacid)的水平；以及根據(jù)棕櫚酸(Palmiticacid)的水平評估該個體是否具有糖尿病合并心肌梗死病，當(dāng)與糖尿病個體中棕櫚酸(Palmiticacid)的水平相比較，棕櫚酸(Palmiticacid)含量水平的增加1.45-6.15倍時，可指出該個體具有糖尿病合并心肌梗死病。優(yōu)選的是，所述生物標(biāo)記為硬脂酸(Stearicacid)，所述試劑盒用于糖尿病合并心肌梗死病的早期診斷，包括：自被懷疑為患有糖尿病合并心肌梗死的個體取得血清樣本；測定該血清樣本中硬脂酸(Stearicacid)的水平；以及根據(jù)硬脂酸(Stearicacid)的水平評估該個體是否具有糖尿病合并心肌梗死病，當(dāng)與糖尿病個體中硬脂酸(Stearicacid)水平相比較，硬脂酸(Stearicacid)的水平增加1.27-6.25倍時，可指出該個體具有糖尿病合并心肌梗死病。優(yōu)選的是，所述生物標(biāo)記為花生四烯酸(Arachidonicacid)，所述試劑盒用于糖尿病合并心肌梗死病的早期診斷，包括：自被懷疑為患有糖尿病合并心肌梗死的個體取得血清樣本；測定該血清樣本中花生四烯酸(Arachidonicacid)的水平；以及根據(jù)花生四烯酸(Arachidonicacid)的水平評估該個體是否具有糖尿病合并心肌梗死病，當(dāng)與糖尿病個體中花生四烯酸(Arachidonicacid)的水平相比較，該花生四烯酸(Arachidonicacid)水平的增加1.32-6.81倍時，可指出該個體具有糖尿病合并心肌梗死病。優(yōu)選的是，所述生物標(biāo)記為棕櫚酸(Palmiticacid)、硬脂酸(Stearicacid)及花生四烯酸(Arachidonicacid)中一種或多種，所述試劑盒用于篩查糖尿病合并心肌梗死病，包括：自被篩查的個體取得血清樣本；測定該血清樣本中所述生物標(biāo)記的水平；以及根據(jù)該生物標(biāo)記的水平評估該個體是否疑似具有糖尿病合并心肌梗死病，當(dāng)與無糖尿病個體中該生物標(biāo)記的水平相比較，該生物標(biāo)記水平的增加可指出該個體疑似具有糖尿病合并心肌梗死病。優(yōu)選的是，所述生物標(biāo)記為棕櫚酸(Palmiticacid)，所述試劑盒用于糖尿病合并心肌梗死病的早期診斷，包括：自被篩查的個體取得血清樣本；測定該血清樣本中棕櫚酸(Palmiticacid)的水平；以及根據(jù)棕櫚酸(Palmiticacid)的水平評估該個體是否疑似具有糖尿病合并心肌梗死病，當(dāng)與無糖尿病個體中棕櫚酸(Palmiticacid)的水平相比較，棕櫚酸(Palmiticacid)含量水平的增加1.76-9.85倍時，可指出該個體疑似具有糖尿病合并心肌梗死病。優(yōu)選的是，所述生物標(biāo)記為硬脂酸(Stearicacid)，所述試劑盒用于糖尿病合并心肌梗死病的早期診斷，包括：自被篩查的個體取得血清樣本；測定該血清樣本中硬脂酸(Stearicacid)的水平；以及根據(jù)硬脂酸(Stearicacid)的水平評估該個體是否疑似具有糖尿病合并心肌梗死病，當(dāng)與無糖尿病個體中硬脂酸(Stearicacid)水平相比較，硬脂酸(Stearicacid)的水平增加1.49-23.56倍時，可指出該個體疑似具有糖尿病合并心肌梗死病。優(yōu)選的是，所述生物標(biāo)記為花生四烯酸(Arachidonicacid)，所述試劑盒用于糖尿病合并心肌梗死病的早期診斷，包括：自被篩查的個體取得血清樣本；測定該血清樣本中花生四烯酸(Arachidonicacid)的水平；以及根據(jù)花生四烯酸(Arachidonicacid)的水平評估該個體是否疑似具有糖尿病合并心肌梗死病，當(dāng)與無糖尿病個體中花生四烯酸(Arachidonicacid)的水平相比較，該花生四烯酸(Arachidonicacid)水平的增加1.75-18.01倍時，可指出該個體疑似具有糖尿病合并心肌梗死病。優(yōu)選的是，所述生物標(biāo)記物通過電噴霧-四級桿-飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜儀進行定性和定量分析。本發(fā)明至少包括以下有益效果：本發(fā)明所述生物標(biāo)記物與目前臨床上常規(guī)的血清心肌損傷標(biāo)志物檢測相比，可以更加個體化、準(zhǔn)確地早期預(yù)測糖尿病合并心肌梗死的發(fā)病。利用所述生物標(biāo)記物制備試劑盒，所述試劑盒用于篩查和檢測糖尿病合并心肌梗死的發(fā)病，更加個體化，更加準(zhǔn)確。本發(fā)明的其它優(yōu)點、目標(biāo)和特征將部分通過下面的說明體現(xiàn)，部分還將通過對本發(fā)明的研究和實踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。附圖說明圖1為本發(fā)明所述生物標(biāo)志物ROC曲線圖；圖2本發(fā)明所述生物標(biāo)志物棕櫚酸(HMDB00220，Palmiticacid)的箱線圖，顯示在糖尿病合并心梗人群、糖尿病人群及健康人三組人群中，棕櫚酸在糖尿病合并心梗人群中含量最高，在健康人中含量最低；圖3本發(fā)明所述生物標(biāo)志物硬脂酸(HMDB00827，Stearicacid)的箱線圖，顯示在糖尿病合并心梗人群、糖尿病人群及健康人三組人群中，硬脂酸在糖尿病合并心梗人群中含量最高，在健康人中含量最低；圖4本發(fā)明所述生物標(biāo)志物花生四烯酸(HMDB01043，Arachidonicacid)的箱線圖，顯示在糖尿病合并心梗人群、糖尿病人群及健康人三組人群中，花生四烯酸在糖尿病合并心梗人群中含量最高，在健康人中含量最低。具體實施方式下面結(jié)合附圖對本發(fā)明做進一步的詳細說明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書文字能夠據(jù)以實施。應(yīng)當(dāng)理解，本文所使用的諸如“具有”、“包含”以及“包括”術(shù)語并不排除一個或多個其它元件或其組合的存在或添加。本發(fā)明所述生物標(biāo)記用于制備試劑盒的用途，所述生物標(biāo)記為棕櫚酸(Palmiticacid)、硬脂酸(Stearicacid)及花生四烯酸(Arachidonicacid)中一種或多種，所述試劑盒用于糖尿病合并心肌梗死病的早期診斷，包括：自被懷疑為患有糖尿病合并心肌梗死的個體取得血清樣本；測定該血清樣本中所述生物標(biāo)記的水平；以及根據(jù)該生物標(biāo)記的水平評估該個體是否具有糖尿病合并心肌梗死病，當(dāng)與糖尿病個體中該生物標(biāo)記的水平相比較，該生物標(biāo)記水平的增加可指出該個體具有糖尿病合并心肌梗死病。在其中一個實施例中，所述生物標(biāo)記物通過電噴霧-四級桿-飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜儀進行定性和定量分析。在其中一個實施例中，所述試劑盒用于篩查糖尿病合并心肌梗死病，其方法包括：自被篩查的個體取得血清樣本；測定該血清樣本中所述生物標(biāo)記的水平；以及根據(jù)該生物標(biāo)記的水平評估該個體是否疑似具有糖尿病合并心肌梗死病，當(dāng)與糖尿病個體中該生物標(biāo)記的水平相比較，該生物標(biāo)記水平的增加可指出該個體疑似具有糖尿病合并心肌梗死病。例如本發(fā)明所述試劑盒進行檢測的方法如下：(一)臨床患者入組與生物樣本的收集：1、入排標(biāo)準(zhǔn)：所有入組人員均屬中國漢族人群，入組、排除標(biāo)準(zhǔn)如下。糖尿病合并心梗組入選標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥30歲；符合糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)；符合心肌梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)；糖尿病病史＞心肌梗死病史。糖尿病組入選標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥30歲；符合糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)；不符合心肌梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)；無心血管疾病史。健康組入選標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥30歲；無糖尿病病史、心血管疾病史；無高血壓、血脂異；無家族史；目前未接受任何藥物治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：肝腎功能損害，傳染性疾病，慢性腸胃功能紊亂，血液系統(tǒng)或其他內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病，惡性腫瘤，自身免疫性疾?。挥惺中g(shù)及其他應(yīng)激情況；孕婦、哺乳期婦女；近期使用抗生素類藥物；有精神病史、濫用藥物史。糖尿病合并心梗患者來自我院心臟中心，糖尿病患者來自我院內(nèi)分泌科，健康者來自我院普外科腹外疝、血管外科靜脈曲張患者，以上均由臨床醫(yī)師確診。2、知情同意：向患者詳細介紹本項科學(xué)研究的目的與意義，患者自愿簽署知情同意書，保障患者隱私，建立病例信息庫，詳細記錄患者的姓名、年齡、性別、病史、血糖、血脂、血壓、吸煙飲酒史等，并對患者進行編號。3、收集入組患者的血清樣本，為盡量避免患者飲食差異，患者住院期間飲食均為院內(nèi)食譜。4、檢測受試者的臨床生化指標(biāo)，結(jié)果見下表：表1.受試者臨床生化指標(biāo)(二)代謝組學(xué)檢測：1、臨床患者入組：糖尿病合并心肌梗死患者40例，糖尿病患者40例，健康者40例。2、樣本信息：樣本類型：血清儲存條件：-80℃凍存檢測內(nèi)容：LC-ESI-qtof-MSQ1M/Z(50-1200)3、儀器信息：儀器型號：WatersACQUITYUPLC/XevoG2QTOF，制造商：美國waters公司4、樣本前處理：血清樣本取200ul，加入600ul三氯甲烷/甲醇(3：1)，蛋白沉淀。12000rpm，4攝氏度，離心5分鐘，取上層溶液200ul，離心濃縮4小時。向干燥后的樣品中加入100ul異丙醇/乙腈(1：1)，震蕩混勻40s。12000rpm離心5分鐘，取上清液80ul，置于200ul內(nèi)襯管中，待測。5、實驗參數(shù)質(zhì)譜條件：質(zhì)量掃描范圍為50-1200M/Z，氣路均使用氮氣，數(shù)據(jù)采集采用Masslynx4.1數(shù)據(jù)管理軟件。液相條件：色譜柱:watersUPLCCSHC18(1.7um2.1mm*100mm)；流動相:A(乙腈/水4:6,0.1％甲酸,10mM甲酸銨)和B(乙腈/異丙醇9:1,0.1％甲酸,10mM甲酸銨)；洗脫程序:見上表；流速：0.3ml/min；進樣量為2.0μL；柱溫：50℃。6、代謝組學(xué)數(shù)據(jù)預(yù)處理數(shù)據(jù)預(yù)處理(峰挑選、峰對齊、去噪音、生成標(biāo)志物表)，應(yīng)用軟件ProgenesisQI，設(shè)定峰強度大于：10000count，最小峰寬度：0.05分鐘，忽略保留時間在0.6分鐘以前，和19.0分鐘以后的數(shù)據(jù)，一共提取到3953個峰。原始預(yù)數(shù)據(jù)處理(步驟包括：Excel讀取文件、調(diào)整數(shù)據(jù)格式和數(shù)據(jù)過濾)(1)qc樣本變異系數(shù)過濾；(目的排除檢測時噪音，保證候選marker的重復(fù)性，CV<15％)(2)峰面積小于20萬過濾；(目的排除峰強度較低的候選marker)(3)三組比較時每組分候選marker最小cv<30％值過濾(排除樣品分組后，每個組候選marker不符合重復(fù)性的)(4)p值小于0.05，比較符合顯著性差異的候選marker原始數(shù)據(jù)經(jīng)過過濾，且數(shù)據(jù)存調(diào)整格式，以便于放于metaboanalyst統(tǒng)計軟件可以識別，轉(zhuǎn)換格式文件存放于data_original.csv文件中(正負(fù)離子分開，在相應(yīng)文件夾中尋找)。分別對三組中三種生物標(biāo)記物進行定量檢測，結(jié)果見圖2-4。如圖2所示，在糖尿病合并心梗人群、糖尿病人群及健康人三組人群中，棕櫚酸在糖尿病合并心梗人群中含量最高，在健康人中含量最低；如圖3所示，在糖尿病合并心梗人群、糖尿病人群及健康人三組人群中，硬脂酸在糖尿病合并心梗人群中含量最高，在健康人中含量最低；如圖4所示，在糖尿病合并心梗人群、糖尿病人群及健康人三組人群中，花生四烯酸在糖尿病合并心梗人群中含量最高，在健康人中含量最低。對上述結(jié)果進行比較，結(jié)果見表1：PalmiticacidStearicacidArachidonicacidHMDB00220HMDB00827HMDB01043糖尿病合并心梗組VS.糖尿病組1.45-6.151.27-6.251.32-6.81糖尿病合并心梗組VS.健康組1.76-9.851.49-23.561.75-18.01糖尿病組VS.健康組1.21-5.111.17-11.021.33-10.82從表1中可以看出，在糖尿病患者中能夠明顯檢測出糖尿病合并心肌梗死病患者；相對于健康個體，糖尿病合并心肌梗死病患者體內(nèi)三種生物標(biāo)記物明顯高出健康個體，能夠?qū)⑷N物質(zhì)作為糖尿病合并心肌梗死的生物標(biāo)記物。采用內(nèi)標(biāo)法檢測實施例1中的生物標(biāo)志物的含量，驗證生物標(biāo)志物對糖尿病合并心?；颊叩臋z測敏感性。以進一步說本發(fā)明所述的技術(shù)方案。本發(fā)明所使用的研究方案也得到了醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)，并取得參試患者的知情同意，時間為2015-2016年。本實驗臨床樣本包括糖尿病合并心梗患者40例，糖尿病患者40例及健康者40例。入組標(biāo)準(zhǔn)、排除標(biāo)準(zhǔn)、收集信息同前。樣品采集及處理方法同前。采用內(nèi)標(biāo)法檢測實施例1中的生物標(biāo)志物的含量，驗證生物標(biāo)志物對糖尿病合并心?；颊叩臋z測敏感性。實驗結(jié)果：從上表可以看出，本發(fā)明所述生物標(biāo)志物對糖尿病合并心?；颊叩臋z測敏感性較高。盡管本發(fā)明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列運用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細節(jié)和這里示出與描述的圖例。當(dāng)前第1頁1 2 3