本發(fā)明屬于生物化工技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用頂空氣相色譜法檢測煙酰胺中甲苯殘留的方法。
背景技術(shù)：
煙酰胺俗名VB3，又名尼克酰胺(Nicotinamide)，分子式C6H6N2O，分子量122.13，為白色針狀結(jié)晶或粉末，熔點(diǎn)129～131℃，易溶于水、能溶于醇和甘油，不溶于醚，微毒，是生物體內(nèi)脫氫輔酶I或II的組分，參與碳水化合物、脂肪和蛋白質(zhì)的代謝，在醫(yī)藥中可用于治療糙皮病等，還可以添加到食品和面粉中用以補(bǔ)充人體所需的維生素，其最大的應(yīng)用領(lǐng)域是用作飼料添加劑。
煙酰胺的合成工藝有化學(xué)合成法和生物催化法兩種：生化法主要工藝為：采用腈水合酶的固定化細(xì)胞將3-氰基吡啶水解為煙酰胺；化學(xué)合成法主要有對3-甲基吡啶(PIC)進(jìn)行氨氧化得到3-氰基吡啶(NSN)，所得到的3-氰基吡啶的混合氣體在抽提精餾工序用甲苯將3-氰基吡啶抽提出來，再進(jìn)行蒸餾分離，分離出來的3-氰基吡啶進(jìn)入生化水解工序進(jìn)行水解反應(yīng)，得到煙酰胺，然后進(jìn)行后續(xù)的工序處理，最終得到煙酰胺產(chǎn)品。但是在采用化學(xué)合成法時，3-氰基吡啶需要利用甲苯進(jìn)行萃取、蒸餾、濃縮、純化，這就導(dǎo)致煙酰胺中殘留有甲苯，尤其是將煙酰胺作為藥物或添加劑供人使用時，由于甲苯對人體是有害的，因此對甲苯的殘留量有很高的要求。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種能用頂空氣相色譜法檢測煙酰胺中甲苯殘留的方法，精確度高，實(shí)現(xiàn)檢測的連續(xù)性，提高檢測的靈敏度及重復(fù)性。
為了實(shí)現(xiàn)上述的發(fā)明目的，采用的技術(shù)方案如下：
一種用頂空氣相色譜法檢測煙酰胺中甲苯殘留的方法，包括以下步驟：
步驟S101、對照溶液配制
1)取10mg甲苯至10.00mL容量瓶中，精密稱定(精確至±0.01mg)，用二甲亞楓稀釋，得到儲備液；
2)移取1.0mL儲備液至50.00mL容量瓶中，用二甲亞楓稀釋，得到對照液A；
3)移取2.0mL儲備液至50.00mL容量瓶中，用二甲亞楓稀釋，得到對照液B；
步驟S102、樣品供溶液配制
準(zhǔn)確稱取100.0±10.0mg樣品(精確至±0.1mg)至頂空進(jìn)樣瓶，并加入1.0mL二甲亞楓，然后用聚四氟乙烯隔墊和鋁蓋密封；
步驟S103、標(biāo)準(zhǔn)供試液配制
1)標(biāo)準(zhǔn)供試液1：準(zhǔn)確稱量100.0±10.0mg樣品(精確至±0.1mg)至頂空進(jìn)樣瓶，并加入1.0mL對照液A，然后用聚四氟乙烯隔墊和鋁蓋密封；
2)標(biāo)準(zhǔn)供試液2：準(zhǔn)確稱量100.0±10.0mg樣品(精確至±0.1mg)至頂空進(jìn)樣瓶，并加入1.0mL對照液B，然后用聚四氟乙烯隔墊和鋁蓋密封；
步驟S104、采用頂空-氣相色譜質(zhì)譜法測定
1)毛細(xì)管色譜柱操作條件：采用Agilent19091J-413HP-5色譜柱，大小為30m×0.32mm×0.25μm；色譜操作條件為：柱溫：60～210℃，初溫從60℃開始以10℃/min升溫速率升至120℃，再以20℃/min升溫速率升至210℃，保持2min；汽化室溫度：210℃；檢測器溫度：280℃，載氣：氮?dú)狻?.6mL/min；
2)頂空進(jìn)樣器操作條件為：加熱箱溫度，80℃；定量環(huán)溫度，120℃；傳輸線溫度，120℃；樣品瓶平衡時間，25min；進(jìn)樣持續(xù)時間，1.5min；GC循環(huán)時間，27min；樣品瓶體積，20mL；樣品瓶填充模式：缺省：恒定流量；定量環(huán)填充模式：缺??；
步驟S105、采用標(biāo)準(zhǔn)加入法，且樣品進(jìn)行平行分析
1)查看各組分出峰時間
以空白溶劑(二甲亞楓)—對照液A—對照液B—空白溶劑(二甲亞楓)的進(jìn)樣順序依次進(jìn)樣，分析出二甲亞楓以及甲苯的出峰時間；
2)進(jìn)樣
以供試液—標(biāo)準(zhǔn)供試液1—供試液—標(biāo)準(zhǔn)供試液2—空白溶劑(二甲亞楓)的進(jìn)樣順序依次進(jìn)樣檢測；
步驟S106、結(jié)果計(jì)算
甲苯的含量結(jié)果以μg/g，以下式計(jì)算
式中：
G—甲苯的濃度，μg/g；
AP—供試液色譜的甲苯峰面積；
AV—添加標(biāo)準(zhǔn)供試液色譜的甲苯峰面積；
m—添加標(biāo)準(zhǔn)供試液加入甲苯的質(zhì)量，μg；
MP—供試液中煙酰胺的質(zhì)量，mg；
MV—添加標(biāo)準(zhǔn)供試液中煙酰胺的質(zhì)量，mg。
在上述的用頂空氣相色譜法檢測煙酰胺中甲苯殘留的方法中，可選的，所述儲備液中的二甲亞楓加入量為10mL。
在上述的用頂空氣相色譜法檢測煙酰胺中甲苯殘留的方法中，可選的，所述対照液A中的二甲亞楓加入量為49mL。
在上述的用頂空氣相色譜法檢測煙酰胺中甲苯殘留的方法中，可選的，所述對照液B中的二甲亞楓加入量為48mL。
在上述的用頂空氣相色譜法檢測煙酰胺中甲苯殘留的方法中，可選的，所述色譜操作條件還包括：尾吹輔助氣，25mL/min；空氣流量，300mL/min；氫氣流量，25mL/min；分流比10:1。
在上述的用頂空氣相色譜法檢測煙酰胺中甲苯殘留的方法中，可選的，所述頂空-氣相色譜采用的氣相色譜儀：安捷倫7890B，色譜柱為毛細(xì)管柱，配有氫火焰離子化檢測器。
在上述的用頂空氣相色譜法檢測煙酰胺中甲苯殘留的方法中，可選的，所述頂空-氣相色譜采用的頂空進(jìn)樣器：安捷倫7697A TRAY。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，有益效果是：
(1)本發(fā)明測定方法中，對樣品經(jīng)頂空進(jìn)樣器處理，使樣品中的甲苯在氣體和液體中達(dá)到分配平衡，配合氣相色譜的分離檢測，能夠?qū)崿F(xiàn)檢測的連續(xù)性，提高檢測的靈敏度及重復(fù)性；
(2)穿刺加入不同體積的甲苯標(biāo)準(zhǔn)供試液，可避免甲苯的揮發(fā)造成的誤差，保證測定的準(zhǔn)確性；
(3)頂空氣相色譜可實(shí)現(xiàn)自動連續(xù)進(jìn)樣，特別適用于樣品數(shù)量大的測定，能夠節(jié)約大量時間；
(4)本發(fā)明具有分析時間短，操作簡單，準(zhǔn)確性高的特點(diǎn)。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體的實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)一步說明。
以下實(shí)施例采用的頂空-氣相色譜儀：安捷倫7890B，色譜柱為毛細(xì)管柱，配有氫火焰離子化檢測器，頂空進(jìn)樣器：安捷倫7697A TRAY。
一種用頂空氣相色譜法檢測煙酰胺中甲苯殘留的方法，包括以下步驟：
步驟S101、對照溶液配制
1)取10mg甲苯至10.00mL容量瓶中，精密稱定(精確至±0.01mg)，用10mL二甲亞楓稀釋，得到儲備液；
2)移取1.0mL儲備液至50.00mL容量瓶中，用49mL二甲亞楓稀釋，得到對照液A；
3)移取2.0mL儲備液至50.00mL容量瓶中，用48mL二甲亞楓稀釋，得到對照液B；
步驟S102、樣品供溶液配制
準(zhǔn)確稱取100.0±10.0mg樣品(精確至±0.1mg)至頂空進(jìn)樣瓶，并加入1.0mL二甲亞楓，然后用聚四氟乙烯隔墊和鋁蓋密封；
步驟S103、標(biāo)準(zhǔn)供試液配制
1)標(biāo)準(zhǔn)供試液1：準(zhǔn)確稱量100.0±10.0mg樣品(精確至±0.1mg)至頂空進(jìn)樣瓶，并加入1.0mL對照液A，然后用聚四氟乙烯隔墊和鋁蓋密封；
2)標(biāo)準(zhǔn)供試液2：準(zhǔn)確稱量100.0±10.0mg樣品(精確至±0.1mg)至頂空進(jìn)樣瓶，并加入1.0mL對照液B，然后用聚四氟乙烯隔墊和鋁蓋密封；
步驟S104、采用頂空-氣相色譜法測定
1)采用Agilent19091J-413HP-5色譜柱，大小為30m×0.32mm×0.25μm；色譜操作條件為：柱溫：60～210℃，初溫從60℃開始以10℃/min升溫速率升至120℃，再以20℃/min升溫速率升至210℃，保持2min；汽化室溫度：210℃；檢測器溫度：280℃，載氣：氮?dú)狻?.6mL/min；尾吹輔助氣，25mL/min；空氣流量，300mL/min；氫氣流量，25mL/min；分流比10:1；
2)頂空進(jìn)樣器操作條件為：加熱箱溫度，80℃；定量環(huán)溫度，120℃；傳輸線溫度，120℃；樣品瓶平衡時間，25min；進(jìn)樣持續(xù)時間，1.5min；GC循環(huán)時間，27min；樣品瓶體積，20mL；樣品瓶填充模式：缺省：恒定流量；定量環(huán)填充模式：缺??；
步驟S105、采用標(biāo)準(zhǔn)加入法，且樣品進(jìn)行平行分析
1)查看各組分出峰時間
以空白溶劑(二甲亞楓)—對照液A—對照液B—空白溶劑(二甲亞楓)的進(jìn)樣順序依次進(jìn)樣，分析出二甲亞楓以及甲苯的出峰時間；
2)進(jìn)樣
以供試液—標(biāo)準(zhǔn)供試液1—供試液—標(biāo)準(zhǔn)供試液2—空白溶劑(二甲亞楓)的進(jìn)樣順序依次進(jìn)樣檢測；
步驟S106、結(jié)果計(jì)算
甲苯的含量結(jié)果以μg/g，以下式計(jì)算
式中：
G—甲苯的濃度，μg/g；
AP—供試液色譜的甲苯峰面積；
AV—添加標(biāo)準(zhǔn)供試液色譜的甲苯峰面積；
m—添加標(biāo)準(zhǔn)供試液加入甲苯的質(zhì)量，μg；
MP—供試液中煙酰胺的質(zhì)量，mg；
MV—添加標(biāo)準(zhǔn)供試液中煙酰胺的質(zhì)量，mg。
3)實(shí)施例結(jié)果檢驗(yàn)
供試液色譜的甲苯峰面積AP：986
添加標(biāo)準(zhǔn)供試液色譜的甲苯峰面積AV：2203
添加標(biāo)準(zhǔn)供試液加入甲苯的質(zhì)量：9.79μg
供試液中煙酰胺的重量MP：96.36mg
添加標(biāo)準(zhǔn)供試液中煙酰胺的重量MV：100.03mg
發(fā)明測定方法中，對樣品經(jīng)頂空進(jìn)樣器處理，使樣品中的甲苯在氣體和液體中達(dá)到分配平衡，配合氣相色譜的分離檢測，能夠?qū)崿F(xiàn)檢測的連續(xù)性，提高檢測的靈敏度及重復(fù)性；穿刺加入不同體積的甲苯標(biāo)準(zhǔn)供試液，可避免甲苯的揮發(fā)造成的誤差，保證測定的準(zhǔn)確性。