本發(fā)明屬于分析
技術領域：
，具體涉及一種測定復維顛茄溶液中多種水溶性維生素的方法。
背景技術：
：復維顛茄溶液是本院制劑室根據(jù)本院臨床需要經(jīng)批準而配制、自用的固定處方制劑，主要用于解痙鎮(zhèn)痛。常用于治療胃腸平滑肌痙攣性疼痛，并可用于惡心、嘔吐、胃酸分泌過多癥狀的治療，亦可用于膽腎絞痛等適應癥的治療。復維顛茄溶液的制備方法為：取50ml顛茄酊與1ml聚山梨酯-80混勻，隨后以細流加入316.3ml五維他口服溶液內，隨加隨攪拌，最后加水定容至1000ml，攪勻即得。該方中所用顛茄酊、聚山梨酯-80和五維他口服溶液均為市面購得，其中主要原料五維他口服溶液主要包含維生素b1、維生素b2、維生素b6三種維生素，因此，對復維顛茄溶液中維生素的含量進行控制，實現(xiàn)多種維生素的分離檢測，對其質量控制具有重要的現(xiàn)實意義。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種測定復維顛茄溶液中多種水溶性維生素的方法，以測定復維顛茄溶液中維生素b1、維生素b2、維生素b6的含量，進而對復維顛茄溶液進行質量控制。本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的：一種測定復維顛茄溶液中多種水溶性維生素的方法，包括如下步驟：對照品溶液的制備：稱取維生素b1對照品、維生素b2對照品、維生素b6對照品，加水溶解，制成每1ml含維生素b16.0μg、維生素b21.2μg、維生素b61.8μg的混合對照品溶液；供試品溶液的制備：量取復維顛茄溶液，加水定容，配成每1ml含復維顛茄溶液60μl的供試品溶液；色譜條件如下：色譜柱：waters氨基鍵合硅膠色譜柱5μm4.6×250mm；流動相：乙腈：30mmol/l磷酸二氫鉀=80:20~75:25；流速：0.9ml/min~1.1ml/min；檢測波長：278nm~282nm；柱溫：35℃~45℃；進樣量：8μl~12μl；理論塔板數(shù)：以維生素b2峰計算大于等于2000；檢測方法：精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入高效液相色譜儀，測定，記錄圖譜，即得對照品與供試品的圖譜，依據(jù)標準品的檢測數(shù)據(jù)進行線性回歸，對照維生素b1、維生素b2、維生素b6線性回歸方程，對供試品溶液中維生素b1、維生素b2、維生素b6進行定性和定量，進而計算得復維顛茄溶液中維生素b1、維生素b2、維生素b6的含量。所述維生素b1線性回歸方程y=11633.27x+13059.93，r=0.9996，線性良好。所述維生素b2線性回歸方程y=19021.23x+4234.75，r=0.9999，線性良好。所述維生素b6線性回歸方程y=11756.09x+4430.02，r=0.9999，線性良好。本發(fā)明進一步改進方案為：所述流動相為乙腈：30mmol/l磷酸二氫鉀=75:25，柱溫為40℃，檢測波長為280nm。本發(fā)明更進一步改進方案為：所述流動相為乙腈：30mmol/l磷酸二氫鉀=80:20，柱溫為45℃，檢測波長為282nm。本發(fā)明再進一步改進方案為：所述流動相為乙腈：30mmol/l磷酸二氫鉀=75:25，柱溫為35℃，檢測波長為278nm。本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明檢測方法各色譜峰分離較好，基線平穩(wěn)，峰型好，重復性較好，該方法具有良好的線性關系、精密度、穩(wěn)定性、回收率，能夠準確檢測復維顛茄溶液中維生素b1、維生素b2、維生素b6的成分含量，達到對復維顛茄溶液進行質量控制的目的。附圖說明圖1為實施例1色譜條件下所得的標準品譜圖和供試品譜圖；圖2為實施例2色譜條件下所得的標準品譜圖和供試品譜圖；圖3為實施例3色譜條件下所得的標準品譜圖和供試品譜圖；圖4為實施例4所得色譜圖；圖5為維生素b1峰面積值和濃度的線性關系圖；圖6為維生素b2峰面積值和濃度的線性關系圖；圖7為維生素b6峰面積值和濃度的線性關系圖。具體實施方式1、儀器高效液相：安捷倫1260高效液相。2、試劑：對照品維生素b1、維生素b2、維生素b6購于中國食品藥品檢定研究院。復維顛茄：淮安市第一人民醫(yī)院自制。實施例1對照品溶液的制備：稱取維生素b1對照品、維生素b2對照品、維生素b6對照品，加水溶解，制成每1ml含維生素b16.0μg、維生素b21.2μg、維生素b61.8μg的混合對照品溶液；供試品溶液的制備：量取批號為20160831的復維顛茄溶液，加水定容，配成每1ml含復維顛茄溶液60μl的供試品溶液；色譜條件如下：色譜柱：waters氨基鍵合硅膠色譜柱5μm4.6×250mm；流動相：乙腈：30mmol/l磷酸二氫鉀=75:25；流速：1ml/min；檢測波長：280nm；柱溫：40℃；進樣量：10μl；理論塔板數(shù)：以維生素b2峰計算大于等于2000；檢測方法：精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，記錄圖譜，如圖1所示。根據(jù)測量結果，復維顛茄溶液中維生素b1應不得少于90μg/ml，維生素b2應不得少于35μg/ml，維生素b,6應不得少于30μg/ml。實施例2對照品溶液和供試品溶液的制備同實施例1。色譜條件如下：色譜柱：waters氨基鍵合硅膠色譜柱5μm4.6×250mm；流動相：乙腈：30mmol/l磷酸二氫鉀=80:20；流速：1ml/min；檢測波長：282nm；柱溫：45℃；進樣量：10μl；理論塔板數(shù)：以維生素b2峰計算大于等于2000；檢測方法：精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，記錄圖譜，如圖2所示。根據(jù)測量結果，復維顛茄溶液中維生素b1應不得少于90μg/ml，維生素b2應不得少于35μg/ml，維生素b,6應不得少于30μg/ml。實施例3對照品溶液和供試品溶液的制備同實施例1。色譜條件如下：色譜柱：waters氨基鍵合硅膠色譜柱5μm4.6×250mm；流動相：乙腈：30mmol/l磷酸二氫鉀=75:25；流速：1ml/min；檢測波長：278nm；柱溫：35℃；進樣量：10μl；理論塔板數(shù)：以維生素b2峰計算大于等于2000；檢測方法：精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，記錄圖譜，如圖3所示。根據(jù)測量結果，復維顛茄溶液中維生素b1應不得少于90μg/ml，維生素b2應不得少于35μg/ml，維生素b,6應不得少于30μg/ml。實施例4干擾試驗對照品溶液的制備同實施例1。全輔料溶液的制備：量取顛茄酊與聚山梨酯-80，加水定容，配成每1ml含顛茄酊3μl、聚山梨酯-800.06μl的全輔料溶液；色譜條件同實施例1。檢測方法：精密吸取對照品溶液、全輔料溶液和空白溶劑（即水），注入液相色譜儀，測定，記錄圖譜，如圖4所示。根據(jù)測量結果，輔料與空白溶劑在主峰位置均無吸收峰，對含量測定無干擾。實施例5維生素b1線性回歸方程將對照品維生素b1分別配制成1.21μg/ml、2.42μg/ml、3.63μg/ml、4.84μg/ml、6.06μg/ml、8.48μg/ml的標準溶液，按照實施例1的色譜條件，各精密量取10μl注入液相色譜儀，每個標準液連續(xù)進樣三次，記錄色譜圖，測定峰面積，以峰面積值（s）對濃度（c）進行線性回歸，求得維生素b1的線性回歸方程：y=11633.27x+13059.93并以峰面積值s對濃度c作圖,得一直線圖，測定結果見表1、圖5。表1維生素b1線性測定數(shù)據(jù)結論：維生素b1線性回歸方程y=11633.27x+13059.93，r=0.9996線性良好。實施例6維生素b2線性回歸方程將對照品維生素b2分別配制成0.24μg/ml、0.48μg/ml、0.71μg/ml、0.95μg/ml、1.19μg/ml、1.66μg/ml的標準溶液，按照實施例1的色譜條件，各精密量取10μl注入液相色譜儀，每個標準液連續(xù)進樣三次，記錄色譜圖，測定峰面積，以峰面積值（s）對濃度（c）進行線性回歸，求得維生素b2的線性回歸方程：y=11633.27x+13059.93并以峰面積值s對濃度c作圖,得一直線圖，測定結果見表2，圖6。表2維生素b2線性測定數(shù)據(jù)結論：維生素b2線性回歸方程y=19021.23x+4234.75，r=0.9999線性良好。實施例7維生素b6線性回歸方程將對照品維生素b6分別配制成0.39μg/ml、0.77μg/ml、1.16μg/ml、1.55μg/ml、1.93μg/ml、2.71μg/ml的標準溶液，按照實施例1的色譜條件，各精密量取10μl注入液相色譜儀，每個標準液連續(xù)進樣三次，記錄色譜圖，測定峰面積，以峰面積值（s）對濃度（c）進行線性回歸，求得維生素b6的線性回歸方程：y=11756.09x+4430.02，并以峰面積值s對濃度c作圖,得一直線圖，測定結果見表3，圖7。表3維生素b6線性測定數(shù)據(jù)結論：維生素b6線性回歸方程y=11756.09x+4430.02，r=0.9999線性良好。實施例8進樣精密度試驗對照品溶液制備方法和色譜條件同實施例1，取對照品溶液，連續(xù)進樣5次，記錄色譜圖，測定結果見表4。表4進樣精密度試驗結果進樣次數(shù)12345平均rsd%維生素b1峰面積（s）8329982834830628297982687829720.28維生素b2峰面積（s）2559825434256182554925487255370.30維生素b6峰面積（s）2660026517266192678326487266010.43結論：由表4可見，試驗結果維生素b1rsd%為0.28%（n=5）、維生素b2rsd%為0.30%（n=5）、維生素b6rsd%為0.43%（n=5），表明進樣精密度較好。實施例9回收率試驗分別取維生素b1、維生素b2、維生素b6配成標準溶液，各樣品按照實施例1的色譜條件和檢測方法測定，計算回收率，測定結果見表5，表6，表7。表5維生素b1回收率試驗結果表6維生素b2回收率試驗結果表7維生素b6回收率試驗結果結論：由表5，表6，表7可見，維生素b1平均回收率為95.35%，rsd為3.79%，維生素b2平均回收率為102.40%，rsd為2.80%，維生素b6平均回收率為94.66%，rsd為2.76%，表明回收率較好。實施例10重復性試驗取批號為160831的樣品6份，按照實施例1的方法配制供試品，按照實施例1的色譜條件，各精密量取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定結果見表8。表8重復性測定結果（n=6）溶液序號維生素b2含量維生素b6含量維生素b1含量樣品10.04560.04120.1126樣品20.04630.04170.1096樣品30.04580.04160.1192樣品40.04600.04140.1184樣品50.04590.04130.1168平均含量0.04590.04150.1138rsd0.76%0.74%4.30%結論：由表8可見，試驗結果維生素b2rsd為0.76%，維生素b6rsd為0.74%，維生素b1rsd為4.30%表明重復性較好。實施例11色譜條件耐用性流速變化按照實施例1的實驗方法，將流速變?yōu)椋?.9ml/min、1.1ml/min考察多種維生素之間的峰分離度，結果見表9表9流速變化測試結果表結論：本色譜條件下測定，可見將流速在0.9ml/min~1.1ml/min條件允許范圍內變化對分離度檢測沒有明顯影響。實施例12色譜條件耐用性進樣量變化按照實施例1的實驗方法，將進樣量變?yōu)椋?μl、12μl考察多種維生素之間的峰分離度，結果見表10。表10進樣量變化測試結果表結論：本色譜條件下測定，可見將流速在8μl~12μl條件允許范圍內變化對分離度檢測沒有明顯影響。當前第1頁12