本發(fā)明屬于分析
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種測(cè)定普慶溶液中多種水溶性維生素的方法。
背景技術(shù)：
：普慶溶液本院制劑室根據(jù)本院臨床需要經(jīng)批準(zhǔn)而配制、自用的固定處方制劑，主要用于消炎止痛，治療咽喉炎及消化系統(tǒng)炎癥，疼痛等，尤其適用于放療后食管炎癥。普慶溶液的制備方法為：取10克鹽酸普魯卡因、800萬(wàn)單位硫酸慶大霉素加入水中，攪拌溶解，濾過(guò)，濾液加五維他口服溶液16.66ml和羥苯乙酯乙醇液（3%）10ml，加水定容至1000ml，混勻，滅菌，灌裝，即得。其中五維他口服溶液主要包含維生素B1、維生素B2、維生素B6三種維生素，因此，對(duì)普慶溶液中維生素的含量進(jìn)行控制，實(shí)現(xiàn)多種維生素的分離檢測(cè)，對(duì)其質(zhì)量控制具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種測(cè)定普慶溶液中多種水溶性維生素的方法，以測(cè)定普慶溶液中維生素B1、維生素B2、維生素B6的含量，進(jìn)而對(duì)普慶溶液進(jìn)行質(zhì)量控制。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種測(cè)定普慶溶液中多種水溶性維生素的方法，包括如下步驟：對(duì)照品溶液的制備：稱取維生素B1對(duì)照品、維生素B2對(duì)照品、維生素B6對(duì)照品，加水溶解，制成每1mL含維生素B15.0μg、維生素B21.0μg、維生素B61.8μg的混合對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備：量取普慶溶液，過(guò)濾即得供試品溶液；色譜條件如下：色譜柱：waters氨基鍵合硅膠色譜柱5μm4.6×250mm；流動(dòng)相：乙腈:30mmol/L磷酸二氫鉀=75:25；流速：0.9mL/min~1.1mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：264nm～268nm、438nm～442nm、324nm～328nm；柱溫：35℃~45℃；進(jìn)樣量：8μL~12μL；理論塔板數(shù)：以維生素B2峰計(jì)算大于等于2000；檢測(cè)方法：精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，記錄圖譜，即得對(duì)照品與供試品的圖譜，對(duì)照維生素B1、維生素B2、維生素B6線性回歸方程，對(duì)供試品溶液中維生素B1、維生素B2、維生素B6進(jìn)行定性和定量，進(jìn)而計(jì)算得普慶溶液中維生素B1、維生素B2、維生素B6的含量。所述維生素B1線性回歸方程y=14921.23x+28787.36，r=0.9994，線性良好。所述維生素B2線性回歸方程y=10773.55x+5204.82，r=0.9999，線性良好。所述維生素B6線性回歸方程y=2861.70x+2348.57，r=0.9993，線性良好。本發(fā)明進(jìn)一步改進(jìn)方案為：所述流動(dòng)相為乙腈：30mmol/L磷酸二氫鉀=75:25，柱溫為40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為266nm、440nm、326nm。本發(fā)明的更進(jìn)一步改進(jìn)方案為：所述流動(dòng)相為乙腈：30mmol/L磷酸二氫鉀=75:25，柱溫為35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為264nm、438nm、324nm。本發(fā)明的再進(jìn)一步改進(jìn)方案為：所述流動(dòng)相為乙腈：30mmol/L磷酸二氫鉀=75:25，柱溫為45℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為268nm、442nm、328nm。本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明檢測(cè)方法各色譜峰分離較好，基線平穩(wěn)，峰型好，重復(fù)性較好，該方法具有良好的線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、回收率，能夠準(zhǔn)確檢測(cè)普慶溶液中維生素B1、維生素B2、維生素B6的成分含量，達(dá)到對(duì)普慶溶液進(jìn)行質(zhì)量控制的目的。附圖說(shuō)明圖1為實(shí)施例1色譜條件下所得的標(biāo)準(zhǔn)品譜圖和供試品譜圖；圖2為實(shí)施例2色譜條件下所得的標(biāo)準(zhǔn)品譜圖和供試品譜圖；圖3為實(shí)施例3色譜條件下所得的標(biāo)準(zhǔn)品譜圖和供試品譜圖；圖4為實(shí)施例4所得色譜圖；圖5為維生素B1峰面積值和濃度的線性關(guān)系圖；圖6為維生素B2峰面積值和濃度的線性關(guān)系圖；圖7為維生素B6峰面積值和濃度的線性關(guān)系圖。具體實(shí)施方式1、儀器高效液相：島津公司LC-20AD型號(hào)高效液相。2、試劑：對(duì)照品維生素B1、維生素B2、維生素B6購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院。普慶溶液：淮安市第一人民醫(yī)院自制。實(shí)施例1對(duì)照品溶液的制備：稱取維生素B1對(duì)照品、維生素B2對(duì)照品、維生素B6對(duì)照品，加水溶解，制成每1mL含維生素B15.0μg、維生素B21.0μg、維生素B61.8μg的混合對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備：量取編號(hào)為160619的普慶溶液，過(guò)濾即得供試品溶液；色譜條件如下：色譜柱：waters氨基鍵合硅膠色譜柱5μm4.6×250mm；流動(dòng)相：乙腈:30mmol/L磷酸二氫鉀=75:25；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：266nm、440nm、326nm；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL；理論塔板數(shù)：以維生素B2峰計(jì)算大于等于2000；檢測(cè)方法：精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，記錄圖譜，如圖1所示。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，普慶溶液中維生素B1應(yīng)不得少于4μg/ml，維生素B2應(yīng)不得少于0.8μg/ml，維生素B,6應(yīng)不得少于1.5μg/ml。實(shí)施例2對(duì)照品溶液和供試品溶液的制備同實(shí)施例1。色譜條件如下：色譜柱：waters氨基鍵合硅膠色譜柱5μm4.6×250mm；流動(dòng)相：乙腈:30mmol/L磷酸二氫鉀=75:25；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：264nm、438nm、324nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10μL；理論塔板數(shù)：以維生素B2峰計(jì)算大于等于2000；檢測(cè)方法：精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，記錄圖譜，如圖2所示。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，普慶溶液中維生素B1應(yīng)不得少于4μg/ml，維生素B2應(yīng)不得少于0.8μg/ml，維生素B,6應(yīng)不得少于1.5μg/ml。實(shí)施例3對(duì)照品溶液和供試品溶液的制備同實(shí)施例1。色譜條件如下：色譜柱：waters氨基鍵合硅膠色譜柱5μm4.6×250mm；流動(dòng)相：乙腈:30mmol/L磷酸二氫鉀=75:25；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：268nm、442nm、328nm；柱溫：45℃；進(jìn)樣量：10μL；理論塔板數(shù)：以維生素B2峰計(jì)算大于等于2000；檢測(cè)方法：精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，記錄圖譜，如圖3所示。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，普慶溶液中維生素B1應(yīng)不得少于4μg/ml，維生素B2應(yīng)不得少于0.8μg/ml，維生素B,6應(yīng)不得少于1.5μg/ml。實(shí)施例4干擾試驗(yàn)對(duì)照品溶液和供試品溶液的制備同實(shí)施例1。全輔料溶液的制備：取1克鹽酸普魯卡因、80萬(wàn)單位硫酸慶大霉素，加水定容至100ml，搖勻，過(guò)濾即得；色譜條件同實(shí)施例1。檢測(cè)方法：精密吸取對(duì)照品溶液、全輔料溶液和供試品溶液，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄圖譜，如圖4所示。根據(jù)測(cè)量結(jié)果，輔料在主峰位置均無(wú)吸收峰，對(duì)含量測(cè)定無(wú)干擾。實(shí)施例5維生素B1線性回歸方程將對(duì)照品維生素B1分別配制成1.17μg/ml~7.00μg/ml的10個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照實(shí)施例1的色譜條件，各精密量取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積，以峰面積值（S）對(duì)濃度（C）進(jìn)行線性回歸，求得維生素B1的線性回歸方程：y=14921.23x+28787.36，r=0.9994，線性良好。并以峰面積值S對(duì)濃度C作圖,得一直線圖，見(jiàn)圖5。實(shí)施例6維生素B2線性回歸方程將對(duì)照品維生素B2分別配制成0.24μg/ml~1.43μg/ml的10個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照實(shí)施例1的色譜條件，各精密量取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積，以峰面積值（S）對(duì)濃度（C）進(jìn)行線性回歸，求得維生素B2的線性回歸方程：y=10773.55x+5204.82，r=0.9999，線性良好。并以峰面積值S對(duì)濃度C作圖,得一直線圖，見(jiàn)圖6。實(shí)施例7維生素B6線性回歸方程將對(duì)照品維生素B6分別配制成0.77μg/ml~2.70μg/ml的10個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照實(shí)施例1的色譜條件，各精密量取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積，以峰面積值（S）對(duì)濃度（C）進(jìn)行線性回歸，求得維生素B1的線性回歸方程：y=2861.70x+2348.57，r=0.9993，線性良好。并以峰面積值S對(duì)濃度C作圖,得一直線圖，見(jiàn)圖7。實(shí)施例8進(jìn)樣精密度試驗(yàn)對(duì)照品溶液制備方法和色譜條件同實(shí)施例1，取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。表1進(jìn)樣精密度試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)樣次數(shù)12345平均RSD%維生素B1峰面積（S）912989101491385913699137591288.20.2%維生素B2峰面積（S）1546715456155901579315624155860.9%維生素B6峰面積（S）796879627776792678947905.21.0%結(jié)論：由表1可見(jiàn)，試驗(yàn)結(jié)果維生素B1RSD%為0.2%（n=5）、維生素B2RSD%為0.9%（n=5）、維生素B6RSD%為1.0%（n=5），表明進(jìn)樣精密度較好。實(shí)施例9，回收率試驗(yàn)分別取維生素B1、維生素B2、維生素B6配成標(biāo)準(zhǔn)溶液，各樣品按照實(shí)施例1的色譜條件和檢測(cè)方法測(cè)定，計(jì)算回收率，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2，表3，表4。表2維生素B1回收率試驗(yàn)結(jié)果表3維生素B2回收率試驗(yàn)結(jié)果表4維生素B6回收率試驗(yàn)結(jié)果結(jié)論：由表2，表3，表4可見(jiàn)，維生素B1平均回收率為100.4%，RSD為1.3%，維生素B2平均回收率為99.2%，RSD為1.45%，維生素B6平均回收率為82.7%，RSD為1.68%，表明回收率較好。實(shí)施例10重復(fù)性試驗(yàn)按照實(shí)施例1的色譜條件，取批號(hào)為160619的樣品6份，分別過(guò)濾精密稱定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5。表5重復(fù)性測(cè)定結(jié)果（n=6）溶液序號(hào)維生素B2維生素B6維生素B1重復(fù)性15.171.071.48重復(fù)性24.971.071.42重復(fù)性35.251.061.48重復(fù)性45.231.011.45重復(fù)性55.191.031.40平均含量5.161.041.45RSD2.2%2.6%2.5%結(jié)論：由表5可見(jiàn)，試驗(yàn)結(jié)果維生素B2RSD為2.2%，維生素B6RSD為2.6%，維生素B1RSD為2.5%表明重復(fù)性較好。實(shí)施例11色譜條件耐用性流速變化按照實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)方法，將流速變?yōu)椋?.9ml/min、1.1ml/min，考察多種維生素之間的峰分離度，結(jié)果見(jiàn)表6表6流速變化測(cè)試結(jié)果表結(jié)論：本色譜條件下測(cè)定，可見(jiàn)將流速在0.9ml/min~1.1ml/min條件允許范圍內(nèi)變化對(duì)分離度檢測(cè)沒(méi)有明顯影響。實(shí)施例12色譜條件耐用性進(jìn)樣量變化按照實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)方法，將進(jìn)樣量變?yōu)椋?μl、12μl考察多種維生素之間的峰分離度，結(jié)果見(jiàn)表7。表7進(jìn)樣量變化測(cè)試結(jié)果表結(jié)論：本色譜條件下測(cè)定，可見(jiàn)將流速在8μl~12μl條件允許范圍內(nèi)變化對(duì)分離度檢測(cè)沒(méi)有明顯影響。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3