本發(fā)明涉及化學(xué)分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種生物樣本血液中苯系物的測(cè)定方法。

背景技術(shù)：

苯系物是化工、醫(yī)藥、農(nóng)藥、制革等行業(yè)的重要原料和溶劑。由于苯系物具有較強(qiáng)的揮發(fā)性，在環(huán)境中廣泛存在，因其接觸途徑廣，已成為一種重要的職業(yè)危害因素。由于苯系物對(duì)人體健康的危害極大，如對(duì)造血系統(tǒng)造成損傷及致畸致癌。因此如何對(duì)苯系物內(nèi)暴露含量進(jìn)行有效的測(cè)定是當(dāng)前環(huán)境醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)和亟待解決的問(wèn)題。

目前，對(duì)于空氣中、水中苯系物的檢測(cè)方法已有很多，而且各方法已被公眾所熟知，與水、空氣等相比，血液成分及理化性質(zhì)非常復(fù)雜，用于檢測(cè)水和空氣中苯系物的方法并不適用于對(duì)血液的檢測(cè)。目前未見(jiàn)有關(guān)于生物樣本血液中苯系物的檢測(cè)技術(shù)的報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種生物樣本血液中苯系物的測(cè)定方法，至少達(dá)到分離度好，準(zhǔn)確度和精密度能滿足分析測(cè)試的要求。

針對(duì)以上技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供的生物樣本血液中苯系物的測(cè)定方法，采用吹掃捕集/氣相色譜/同位素內(nèi)標(biāo)質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定血液中苯系物的含量，該測(cè)定方法具體包括如下步驟：

混標(biāo)溶液的配制：稱取苯系物的純物質(zhì)，用甲醇配制混標(biāo)溶液；

同位素內(nèi)標(biāo)溶液的配制：稱取苯系物的同位素物質(zhì)，用甲醇配制同位素內(nèi)標(biāo)溶液；

標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制：取混標(biāo)溶液，用甲醇配成具有5級(jí)以上濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液；分別取各級(jí)濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液加入到對(duì)應(yīng)的進(jìn)樣瓶中，并在每個(gè)進(jìn)樣瓶中依次加入同位素內(nèi)標(biāo)溶液、空白血液和消泡劑，最后用純水定容；

標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的檢測(cè)及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：將各級(jí)濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液通過(guò)吹掃捕集儀和氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)、以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中苯系物和同位素內(nèi)標(biāo)溶液中苯系物的峰面積之比為縱坐標(biāo)，繪制各物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；

血樣的測(cè)定：取血樣加入進(jìn)樣瓶中，依次加入同位素內(nèi)標(biāo)溶液和消泡劑，最后用純水定容，然后通過(guò)吹掃捕集儀和氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測(cè)定，得到血樣中苯系物和同位素內(nèi)標(biāo)溶液中苯系物的峰面積之比，將峰面積之比分別代入對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，得到血樣中苯系物的含量。

本發(fā)明采用p&t/gc/ms聯(lián)用技術(shù)同位素內(nèi)標(biāo)法，對(duì)生物樣本血液中苯系物含量進(jìn)行準(zhǔn)確的定性定量分析，為人體苯系物內(nèi)暴露檢測(cè)方法提供科學(xué)依據(jù)，檢測(cè)結(jié)果分離度好，準(zhǔn)確度和精密度能滿足分析測(cè)試的要求。本發(fā)明使用到了同位素內(nèi)標(biāo)法?，F(xiàn)有技術(shù)中定量方法多用外標(biāo)法或歸一化法，但是歸一化法需要知道各組分的校正因子，不適于微量雜質(zhì)的含量測(cè)定；外標(biāo)法要求對(duì)照品溶液的濃度與樣品中組分的濃度相近，且該方法的準(zhǔn)確性受進(jìn)樣重復(fù)性和實(shí)驗(yàn)條件穩(wěn)定性的影響。內(nèi)標(biāo)法即選擇樣品中不含有的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物加入待測(cè)樣品溶液中，以待測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)的峰面積做比值，測(cè)定待測(cè)組分含量的方法。內(nèi)標(biāo)法優(yōu)點(diǎn)：在色譜柱不超載的范圍內(nèi)，定量結(jié)果與進(jìn)樣量重復(fù)性無(wú)關(guān)；只要被測(cè)物質(zhì)和內(nèi)標(biāo)物出峰，且能完全分離就可定量，與其他組分無(wú)關(guān)；能避免實(shí)驗(yàn)各步處理操作中的待測(cè)組分丟失造成的定量不準(zhǔn)確。內(nèi)標(biāo)法缺點(diǎn)：內(nèi)標(biāo)物不易得。內(nèi)標(biāo)物的要求：內(nèi)標(biāo)物是原樣品中不含有的組分，否則會(huì)使峰重疊而無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)量?jī)?nèi)標(biāo)物的峰面積；內(nèi)標(biāo)物與待測(cè)化合物有相同或相似的理化性質(zhì)，它們的保留時(shí)間應(yīng)相近，但彼此能完全分離(分離度≥1.5)；內(nèi)標(biāo)物要求與樣本成分不干擾、不反應(yīng)；內(nèi)標(biāo)物必須是純度合乎要求的純物質(zhì)。本發(fā)明用同位素取代物作為內(nèi)標(biāo)，即用同位素取代待測(cè)化合物的c或h，使內(nèi)標(biāo)物質(zhì)與待測(cè)化合物既有相似的理化性質(zhì)又彼此能完全分離。同位素內(nèi)標(biāo)與待測(cè)化合物的保留時(shí)間和離子豐度等色譜行為類似。

進(jìn)一步地，吹掃捕集儀的參數(shù)設(shè)定：以99.999%的氦氣為吹掃氣，吹掃時(shí)間為11min，吹掃流量為40ml/min；解析溫度為250℃，解析流量為300ml/min，解析時(shí)間為2min；烘烤溫度為280℃，烘烤流量為200ml/min，烘烤時(shí)間為2min。約35%-70%的血液檢測(cè)結(jié)果差錯(cuò)出自血樣檢測(cè)前。為獲得可靠的檢測(cè)數(shù)據(jù)，提供給疾病預(yù)防控制中心和環(huán)保部門真實(shí)準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，必須嚴(yán)格控制采血、血液保存及檢測(cè)等一系列過(guò)程中的干擾。血液中的苯系物屬于痕量有毒有害有機(jī)污染物，需要采用高富集效率和高靈敏度的分析測(cè)試技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。為此，本發(fā)明采用吹掃捕集技術(shù)（p&t）來(lái)高效富集生物樣本血液中的揮發(fā)性苯系物（苯、甲苯、乙苯、間/對(duì)二甲苯和鄰二甲苯），不僅可降低分析方法的檢出限，而且不需有機(jī)溶劑和萃取基質(zhì)，可有效避免有機(jī)試劑與血液樣本中某些成分的相互作用等產(chǎn)生的二次污染。并且本發(fā)明針對(duì)血液的特性，對(duì)吹掃捕集的條件參數(shù)等進(jìn)行了針對(duì)性的優(yōu)化，例如通過(guò)分析吹掃溫度和吹掃時(shí)間、解吸溫度和解吸時(shí)間對(duì)吹掃捕集效率的影響，最終確定適合參數(shù)。

進(jìn)一步地，氣質(zhì)聯(lián)用儀的參數(shù)設(shè)定：色譜柱為db-624毛細(xì)管色譜柱，色譜柱規(guī)格為30m×0.25mm×1.4μm；柱溫為起始溫度40℃保持3min，以10℃/min升到150℃，保持0.5min，再以15℃/min升到210℃，保持4min；分流進(jìn)樣，分流比為20：1；進(jìn)樣口溫度為250℃；載氣為99.999%的氦氣；恒流模式，載氣流量為1.2ml/min；離子源種類為ei，離子源溫度為250℃；傳輸線溫度為280℃；電子轟擊能量為70ev。氣相色譜-質(zhì)譜法（gc/ms）可對(duì)痕量的未知化合物進(jìn)行定性定量分析，方法靈敏度高、使用范圍廣，是目前最重要、應(yīng)用最多的分析測(cè)試技術(shù)之一，已被廣泛應(yīng)用于分析水、空氣中vocs。同位素內(nèi)標(biāo)化合物與目標(biāo)化合物的化學(xué)性質(zhì)幾乎完全一樣，所以在測(cè)試過(guò)程中的富集效率、損失程度和基質(zhì)影響等完全一致，可用來(lái)校正分析方法的測(cè)試偏差。

進(jìn)一步地，步驟1），配制各單標(biāo)濃度為100μg/ml的混標(biāo)溶液。

進(jìn)一步地，步驟2），配制各單標(biāo)濃度為200ng/ml的同位素內(nèi)標(biāo)溶液。

進(jìn)一步地，血樣的準(zhǔn)備過(guò)程包括通過(guò)靜脈穿刺收集血液樣本于采血管中，采樣后將真空采血管中血樣倒入樣品瓶中，并于4℃冷藏保存。

綜上所述，本發(fā)明所提供的一種用吹掃捕集/氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時(shí)測(cè)定生物樣本血液中苯系物含量的方法，對(duì)吹掃捕集實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化，使生物樣本血液中的苯系物富集和解析，然后用氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用和以同位素內(nèi)標(biāo)法選擇特征離子進(jìn)行定性和定量分析。通過(guò)優(yōu)化吹掃捕集參數(shù)，本發(fā)明方法實(shí)現(xiàn)了對(duì)生物樣本血液中苯、甲苯、乙苯、間/對(duì)二甲苯、鄰二甲苯6種苯系物的同時(shí)富集、解析和準(zhǔn)確測(cè)定。本發(fā)明方法檢出限為0.002~0.011μg/l，線性范圍為0.043~10.99μg/l，低、高濃度的加標(biāo)回收率范圍分別為72.78%~81.03%、82.27%~109.09%。對(duì)同一樣品重復(fù)進(jìn)行6次分析，rsd范圍為3.47%~7.36%。本方法操作簡(jiǎn)便、分析周期短、分離度好，準(zhǔn)確度和精密度能滿足分析測(cè)試的要求，適合用于生物樣本血液中6種苯系物的同時(shí)檢測(cè)分析。

附圖說(shuō)明

圖1為不同吹掃流速下各色譜峰面積變化趨勢(shì)。

圖2為不同吹掃溫度下各色譜峰面積變化趨勢(shì)。

圖3為不同解析溫度時(shí)各色譜峰面積變化趨勢(shì)。

圖4為不同解析時(shí)間下各色譜峰面積變化趨勢(shì)。

圖5為濃度為1.563μg/l的混標(biāo)溶液的選擇離子譜圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明采用吹掃捕集/氣相色譜/同位素內(nèi)標(biāo)質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定血液中苯系物的含量，在一種典型的實(shí)施方式中，該測(cè)定方法具體包括如下步驟：

混標(biāo)溶液的配制：稱取苯系物的純物質(zhì)，用甲醇配制混標(biāo)溶液；

同位素內(nèi)標(biāo)溶液的配制：稱取苯系物的同位素物質(zhì)，用甲醇配制同位素內(nèi)標(biāo)溶液；

標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制：取混標(biāo)溶液，用甲醇配成具有5級(jí)以上濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液；分別取各級(jí)濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液加入到對(duì)應(yīng)的進(jìn)樣瓶中，并在每個(gè)進(jìn)樣瓶中依次加入同位素內(nèi)標(biāo)溶液、空白血液和消泡劑，最后用純水定容；

標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的檢測(cè)及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：將各級(jí)濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液通過(guò)吹掃捕集儀和氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)、以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中苯系物和同位素內(nèi)標(biāo)溶液中苯系物的峰面積之比為縱坐標(biāo)，繪制各物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；

血樣的測(cè)定：取血樣加入進(jìn)樣瓶中，依次加入同位素內(nèi)標(biāo)溶液和消泡劑，最后用純水定容，然后通過(guò)吹掃捕集儀和氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測(cè)定，得到血樣中苯系物和同位素內(nèi)標(biāo)溶液中苯系物的峰面積之比，將峰面積之比分別代入對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，得到血樣中苯系物的含量。

在一種相對(duì)具體的實(shí)施方式中，包括如下步驟：

1）首先，打開(kāi)高純氮?dú)庹?，通?5min，使操作環(huán)境充滿氮?dú)狻?/p>

2）混標(biāo)溶液的配制：稱取苯系物的純物質(zhì)，優(yōu)選用甲醇配制得到各單標(biāo)濃度為100μg/ml的混標(biāo)溶液。

具體為：a、準(zhǔn)確稱取苯0.0281g、甲苯0.0344g、乙苯0.0248g、間二甲苯0.0283g、對(duì)二甲苯0.0283g、鄰二甲苯0.0277g于10.0ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度線，得到苯2.81mg/ml、甲苯3.44mg/ml、乙苯2.48mg/ml、間二甲苯2.83mg/ml、對(duì)二甲苯2.83mg/ml、鄰二甲苯2.77mg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液；b、準(zhǔn)確取上述配置的各標(biāo)準(zhǔn)溶液苯356μl、甲苯291μl、乙苯403μl、間二甲苯354μl、對(duì)二甲苯354μl、鄰二甲苯361μl于10.0ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度線，得到各單標(biāo)濃度為100.0μg/ml的混標(biāo)溶液；c、分裝入1ml棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，4℃冷藏保存。

3）同位素內(nèi)標(biāo)溶液的配制：稱取苯系物的同位素物質(zhì)，優(yōu)選用甲醇配制得到各單標(biāo)濃度為200ng/ml的同位素內(nèi)標(biāo)溶液。

具體為：a、準(zhǔn)確稱取苯（d5）0.0421g、甲苯（d5）0.0435g、乙苯（d10）0.0451g、間/對(duì)二甲苯（d10）0.0452g、鄰二甲苯（d4）0.0357g于10.0ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度線，得到同位素單標(biāo)儲(chǔ)備液；b、準(zhǔn)確取上述配制的苯（d5）2.375ml、甲苯（d5）2.299ml、乙苯（d10）2.217ml、間/對(duì)二甲苯（d10）2.212ml、鄰二甲苯（d4）2.801ml于50.0ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度線，得到濃度為200μg/ml的同位素混標(biāo)貯備液；c、分裝入1ml棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，4℃冷藏保存；d、取上述同位素混標(biāo)貯備液1.0ml，用甲醇稀釋至10.00ml，得到濃度為20.0μg/ml同位素混標(biāo)中間液；e、取上述同位素混標(biāo)中間液0.1ml，用甲醇稀釋至10.00ml，得到濃度為200.0ng/ml的同位素內(nèi)標(biāo)溶液；f、分裝入10ml棕色溶劑小瓶中，封口后置于冰箱中，4℃冷藏保存。

4）測(cè)定儀器的參數(shù)設(shè)定：測(cè)定過(guò)程中使用到的儀器有美國(guó)thermofisherscientific公司的tqu03947氣質(zhì)聯(lián)用儀；美國(guó)tekmar公司的吹掃捕集儀、吹掃捕集儀自動(dòng)進(jìn)樣器；美國(guó)agilent公司的db-624彈性石英毛細(xì)管色譜柱；25ml砂芯式吹掃管；40ml內(nèi)襯有聚四氟乙烯膜的棕色進(jìn)樣瓶；7ml的內(nèi)含肝素鈉和氟化鈉的玻璃真空采血管；5ml棕色玻璃樣品瓶。

吹掃捕集儀的參數(shù)設(shè)定：以99.999%的氦氣為吹掃氣，吹掃時(shí)間為11min，吹掃流量為40ml/min；解析溫度為250℃，解析流量為300ml/min，解析時(shí)間為2min；烘烤溫度為280℃，烘烤流量為200ml/min，烘烤時(shí)間為2min。

a、吹掃時(shí)間與吹掃流速的確定

吹掃時(shí)間與吹掃流速是吹掃捕集技術(shù)的重要參數(shù)，吹掃時(shí)間與吹掃流速的乘積即吹掃氣總體積。吹掃氣總體積越大，則吹掃效率越高。但是吹掃氣總體積過(guò)大，會(huì)將捕集在冷阱中的被分析組分吹落或吹散，降低吹掃效率和結(jié)果的重現(xiàn)性。針對(duì)血液特性，以及為了節(jié)約分析時(shí)間、提高工作效率，本發(fā)明選擇11min作為吹掃時(shí)間，對(duì)吹掃流速進(jìn)行了優(yōu)化。選取34、36、38、40、42ml/min為時(shí)間梯度，取同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，比較不同吹掃流速下各色譜峰面積的變化。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中六種苯系物濃度均為200ng/l，不同吹掃流速下各色譜峰面積變化趨勢(shì)見(jiàn)圖1?？梢?jiàn)，在36~44ml/min范圍內(nèi)，隨著吹掃流速的增大，色譜峰面積逐漸增大；當(dāng)吹掃流速為40ml/min時(shí)，色譜峰面積達(dá)到最大值；吹掃流速大于40ml/min后，色譜峰面積出現(xiàn)了下降。針對(duì)血液特性，本發(fā)明選擇吹掃流速為40ml/min。

b、吹掃溫度的確定

升高吹掃溫度可提高吹掃效率，并且縮短吹掃時(shí)間。尤其在吹掃高水溶性化合物時(shí)，吹掃溫度對(duì)吹掃效率的影響更大。但是吹掃溫度如果過(guò)高，會(huì)導(dǎo)致吹掃出的水蒸氣過(guò)多，不利于待測(cè)組分在冷阱中的吸附。而且高水分會(huì)導(dǎo)致中極性氣相色譜柱的分離效率下降，并損害其使用壽命。對(duì)于水中voc，一般選取20~50℃為常用溫度；而血液中基質(zhì)復(fù)雜，40℃以上溫度會(huì)導(dǎo)致部分蛋白質(zhì)發(fā)生變形，甚至堵塞管路。因此，本發(fā)明選取20、25、30、35、40℃為溫度梯度，取同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，比較不同吹掃溫度下各色譜峰面積的變化。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中六種苯系物濃度均為200ng/l，不同吹掃溫度下各色譜峰面積變化趨勢(shì)見(jiàn)圖2?？梢?jiàn)，色譜峰面積隨著吹掃溫度的升高而增大。但考慮到血液的特性，本發(fā)明選擇吹掃溫度為40℃。

c、解析溫度的確定

解析溫度是吹掃捕集技術(shù)的另一關(guān)鍵參數(shù)。當(dāng)完成吹掃以后，解析器迅速加熱捕集管，使捕集阱表面吸附的化合物脫離出來(lái)，并隨載氣吹入氣相系統(tǒng)。解析溫度越高，捕集管加熱時(shí)間約短，解析越完全，即吹掃效率越高，而且高解析溫度有利于形成尖銳對(duì)稱的色譜峰。但解析溫度過(guò)高會(huì)降低捕集阱和吸附劑的壽命。針對(duì)血液特性，本發(fā)明選取220、230、240、250、260℃為溫度梯度，取同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，比較不同解析溫度時(shí)各色譜峰面積的變化。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中六種苯系物濃度均為200ng/l，不同解析溫度時(shí)各色譜峰面積變化趨勢(shì)見(jiàn)圖3?？梢?jiàn)，在210~250℃溫度范圍內(nèi)，隨著解析溫度的增大，色譜峰面積逐漸增大；250℃以后色譜峰面積趨于平穩(wěn)。針對(duì)血液特性以及為了保護(hù)捕集阱和吸附劑，本發(fā)明選擇解析溫度為250℃。

d、解析時(shí)間的確定

解析時(shí)間越長(zhǎng)，解析越完全，吹掃效率越高。但過(guò)長(zhǎng)的解析時(shí)間會(huì)降低吸附劑使用壽命，并導(dǎo)致色譜峰拖尾。針對(duì)血液特性，我們選取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0min為時(shí)間梯度，取同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，比較不同解析時(shí)間下各色譜峰面積的變化。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中六種苯系物濃度均為200ng/l，不同解析時(shí)間下各色譜峰面積變化趨勢(shì)見(jiàn)圖4?？梢?jiàn)，在1.0~2.0min溫度范圍內(nèi)，隨著解析時(shí)間的增長(zhǎng)，色譜峰面積逐漸增大；2.0min以后色譜峰面積趨于平穩(wěn)。針對(duì)血液特性以及為了保護(hù)吸附劑，本發(fā)明選擇解析時(shí)間為2.0min。

e、清洗烘烤參數(shù)的確定

一般水中清洗循環(huán)設(shè)置為1次。血液中成分復(fù)雜，含有大量血凝塊、絮狀蛋白質(zhì)和血細(xì)胞等。為了最大程度地減少揮發(fā)性物質(zhì)的損失，本發(fā)明的前處理步驟簡(jiǎn)單，所以血液中的各種物質(zhì)極易堵塞吹掃捕集儀的傳輸管路和各電磁閥。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，設(shè)定清洗循環(huán)為3次后，儀器堵塞現(xiàn)象明顯減少。

若被測(cè)組分的濃度較高，會(huì)導(dǎo)致儀器本底值偏高。所以，應(yīng)設(shè)定較高的烘烤溫度和較長(zhǎng)的烘烤時(shí)間，以減少殘留在儀器內(nèi)的揮發(fā)性物質(zhì)。本發(fā)明選擇烘烤溫度為280℃，烘烤時(shí)間為2min。

氣質(zhì)聯(lián)用儀的參數(shù)設(shè)定：色譜柱為db-624毛細(xì)管色譜柱，色譜柱規(guī)格為30m×0.25mm×1.4μm；柱溫為起始溫度40℃保持3min，以10℃/min升到150℃，保持0.5min，再以15℃/min升到210℃，保持4min；分流進(jìn)樣，分流比為20：1；進(jìn)樣口溫度為250℃；載氣為99.999%的氦氣；恒流模式，載氣流量為1.2ml/min；離子源種類為ei，離子源溫度為250℃；傳輸線溫度為280℃；電子轟擊能量為70ev。每種化合物的保留時(shí)間由全掃描模式確定，質(zhì)譜峰頂點(diǎn)值由sim模式確定，選擇離子見(jiàn)表1。

5）標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制：取混標(biāo)溶液，用甲醇配成具有5級(jí)以上濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液；分別取各級(jí)濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液加入到對(duì)應(yīng)的進(jìn)樣瓶中，并在每個(gè)進(jìn)樣瓶中依次加入同位素內(nèi)標(biāo)溶液、空白血液和消泡劑，最后用純水定容；測(cè)定水中voc時(shí)，配制的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液一般不加基質(zhì)，而是直接用水配制；本發(fā)明配制的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液加了空白血液，從而消除了基質(zhì)效應(yīng)。

具體為：a、將混標(biāo)溶液和同位素內(nèi)標(biāo)溶液恢復(fù)至室溫；b、在15個(gè)進(jìn)樣小瓶中分別加入0.40ml甲醇，取0.40ml、100.0μg/ml的混標(biāo)溶液（a）到第一個(gè)小瓶，混勻，得到濃度為50.0μg/ml的混標(biāo)溶液（b）；同理，取0.40ml混標(biāo)溶液（b）到第二個(gè)小瓶得到濃度為25.0μg/ml的混標(biāo)溶液（c）……，以此類推，依次逐級(jí)“倍比”稀釋，先是得到濃度為2500、1250、625、313、156、78.1、39.1、19.5、9.77、4.89、0ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（注：增加一個(gè)空白），然后繼續(xù)用甲醇依次逐級(jí)“倍比”稀釋，最后得到濃度梯度為12.5、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39、0.20、0.10、0.05、0.025、0ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液；c、取每級(jí)的200μl標(biāo)準(zhǔn)系列溶液加入40ml進(jìn)樣瓶，加入5ml空白血液，然后依次加入200μl同位素內(nèi)標(biāo)溶液、一滴消泡劑（約0.039g）和20ml純水，密封樣品瓶（注：墊片的聚四氟乙烯面朝下），上下震蕩20次，再將進(jìn)樣瓶中加滿純水，密封樣品瓶。

6）標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的檢測(cè)及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：將各級(jí)濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液通過(guò)吹掃捕集儀和氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)、以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中苯系物和同位素內(nèi)標(biāo)溶液中苯系物的峰面積之比為縱坐標(biāo)，繪制各物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；

a、分離結(jié)果

濃度為1.563μg/l的混標(biāo)溶液的選擇離子譜圖如圖5所示，圖中，1-苯；2-甲苯；3-乙苯；4-間/對(duì)二甲苯；5-鄰二甲苯，從圖中可以看出5種苯系物均得到了良好分離（間/對(duì)二甲苯未分離開(kāi)）。

b、線性范圍和檢出限

按照步驟5）所述，配制6種濃度標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，按照上述實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行平行測(cè)定。以濃度c(μg/l)為橫坐標(biāo)，以峰面積比值(y)為縱坐標(biāo)，繪制各物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。以信噪比響應(yīng)值測(cè)得各化合物的檢出限。結(jié)果見(jiàn)表2。

c、回收率和精密度

取空白血樣分別作高濃度（1.563μg/l）和低濃度（0.195μg/l）兩個(gè)濃度水平的空白加標(biāo)回收率，每個(gè)濃度做六個(gè)平行樣測(cè)定精密度。結(jié)果見(jiàn)表3。

rsd滿足小于20％的要求；回收率滿足在70%~130%的要求。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行分析，各化合物的測(cè)定范圍均在允許范圍之內(nèi)，可見(jiàn)本方法能滿足測(cè)定6種苯系物的監(jiān)測(cè)分析要求。

7）血樣的準(zhǔn)備：通過(guò)靜脈穿刺收集血液樣本于真空采血管中，必須保證采血管采滿，采樣后將真空采血管中血樣倒入樣品瓶中，并于4℃冷藏保存；

具體為：通過(guò)靜脈穿刺收集血液樣本于7ml真空采血管中，輕輕顛倒混勻20次，使采血管中晶體狀的肝素鈉/氟化鈉充分溶解，從而最大限度地減少凝血。采樣后將真空采血管中樣品輕輕傾倒入5ml棕色螺口樣品瓶中，使樣品瓶完全充滿，用帶有白色特氟龍墊片的瓶蓋擰緊。樣品于4℃冷藏保存，在采樣10周內(nèi)完成分析。

8）血樣的測(cè)定：取血樣加入進(jìn)樣瓶中，依次加入同位素內(nèi)標(biāo)溶液和消泡劑，最后用純水定容，然后通過(guò)吹掃捕集儀和氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測(cè)定，得到血樣中苯系物和同位素內(nèi)標(biāo)溶液中苯系物的峰面積之比，將峰面積之比分別代入對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，得到血樣中苯系物的含量。

具體為：取5ml血樣加入40ml進(jìn)樣瓶，同時(shí)加入200μl同位素內(nèi)標(biāo)溶液和一滴消泡劑，加20ml純水上下震蕩20次，加滿純水，密封樣品瓶。在超聲波振蕩器中震蕩1min，上機(jī)測(cè)定。

血液中苯系物的濃度公式為：ci＝cis×40/5，式中：ci為實(shí)際樣品中被測(cè)組分的濃度，μg/l；cis為標(biāo)準(zhǔn)曲線算得的被測(cè)組分的濃度，μg/l。

以下采用上述進(jìn)一步說(shuō)明的測(cè)定方法對(duì)具體的血樣中的苯系物成份進(jìn)行測(cè)定。

采用此法，對(duì)某污染地區(qū)300人和某清潔對(duì)照地區(qū)200人的生物樣本血液中的苯系物含量進(jìn)行了測(cè)定。重點(diǎn)污染地區(qū)和清潔對(duì)照地區(qū)的被測(cè)血樣中各苯系物的含量范圍見(jiàn)表4。由表中可見(jiàn)，重點(diǎn)污染地區(qū)血樣中的各苯系物濃度較清潔對(duì)照地區(qū)偏高。

由于本方法靈敏度高，專屬性好，操作簡(jiǎn)便，因此可用于大批量生物樣本血樣的分析（特別是對(duì)重點(diǎn)污染地區(qū)居民苯系物內(nèi)暴露水平含量進(jìn)行測(cè)定）。

本方法的建立對(duì)環(huán)境污染引起的相關(guān)疾病的防控具有重要的指導(dǎo)意義。

實(shí)施例1：

取重點(diǎn)污染地區(qū)居民王某的血液5ml，按上述方法加入40ml樣品瓶，依次加入200μl同位素內(nèi)標(biāo)溶液、一滴消泡劑和20ml純水。密封樣品瓶，上下震蕩20次。再將進(jìn)樣瓶中加滿純水，密封樣品瓶。在超聲波振蕩器中震蕩1min，上機(jī)測(cè)定。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5。

可見(jiàn)王某血液中六種苯系物均有檢出，其中樣中苯和甲苯濃度較高，乙苯、間/對(duì)二甲苯和鄰二甲苯濃度較低。提示該居民應(yīng)注意防止與苯系物長(zhǎng)期直接或間接接觸，同時(shí)應(yīng)該采取系列防治措施保障其身心健康。

實(shí)施例2：

取重點(diǎn)污染地區(qū)居民司某的血液5ml，按上述方法加入40ml樣品瓶，依次加入200μl同位素內(nèi)標(biāo)溶液、一滴消泡劑和20ml純水。密封樣品瓶，上下震蕩20次。再將進(jìn)樣瓶中加滿純水，密封樣品瓶。在超聲波振蕩器中震蕩1min，上機(jī)測(cè)定。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表6。

注：<loq表示低于檢出限

可見(jiàn)司某血液中有苯和鄰二甲苯檢出，其中樣中苯的濃度較高，鄰二甲苯濃度較低。提示該居民應(yīng)注意防止與苯系物長(zhǎng)期直接或間接接觸，同時(shí)應(yīng)該采取系列防治措施保障其身心健康。

實(shí)施例3：

取重點(diǎn)污染地區(qū)居民姚某的血液5ml，按上述方法加入40ml樣品瓶，依次加入200μl同位素內(nèi)標(biāo)溶液、一滴消泡劑和20ml純水。密封樣品瓶，上下震蕩20次。再將進(jìn)樣瓶中加滿純水，密封樣品瓶。在超聲波振蕩器中震蕩1min，上機(jī)測(cè)定。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表7。

注：<loq表示低于檢出限

可見(jiàn)姚某血液中有苯和甲苯檢出，其中樣中苯的濃度較高，甲苯濃度較低。提示該居民應(yīng)注意防止與苯系物長(zhǎng)期直接或間接接觸，同時(shí)應(yīng)該采取系列防治措施保障其身心健康。

實(shí)施例4：

取重點(diǎn)污染地區(qū)居民賈某的血液5ml，按上述方法加入40ml樣品瓶，依次加入200μl同位素內(nèi)標(biāo)溶液、一滴消泡劑和20ml純水。密封樣品瓶，上下震蕩20次。再將進(jìn)樣瓶中加滿純水，密封樣品瓶。在超聲波振蕩器中震蕩1min，上機(jī)測(cè)定。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表8。

注：<loq表示低于檢出限

可見(jiàn)賈某血液中有低濃度苯和乙苯檢出。提示該居民應(yīng)注意防止與苯系物長(zhǎng)期直接或間接接觸。

實(shí)施例5：

取重點(diǎn)污染地區(qū)居民趙某的血液5ml，按上述方法加入40ml樣品瓶，依次加入200μl同位素內(nèi)標(biāo)溶液、一滴消泡劑和20ml純水。密封樣品瓶，上下震蕩20次。再將進(jìn)樣瓶中加滿純水，密封樣品瓶。在超聲波振蕩器中震蕩1min，上機(jī)測(cè)定。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表9。

注：<loq表示低于檢出限

可見(jiàn)趙某血液中有苯、乙苯和間/對(duì)二甲苯檢出，其中樣中苯和乙苯的濃度較高，間/對(duì)二甲苯濃度較低。提示該居民應(yīng)注意防止與苯系物長(zhǎng)期直接或間接接觸，同時(shí)應(yīng)該采取系列防治措施保障其身心健康。