本發(fā)明涉及一種稀釋液，具體涉及一種血細(xì)胞分析用稀釋液。

背景技術(shù)：

血細(xì)胞稀釋液通常是一類具有酸堿緩沖作用、適當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度和電導(dǎo)率的等滲溶液。適當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度、與血漿相同的滲透壓，能在一定時(shí)間內(nèi)完整的保持血細(xì)胞原來的體積；合適的電導(dǎo)率能保證獲得與細(xì)胞體積相應(yīng)的脈沖大小。

稀釋液是臨床檢驗(yàn)中血細(xì)胞分析儀最常用的一種試劑，是完成血細(xì)胞分類或計(jì)數(shù)的關(guān)鍵試劑。進(jìn)行血細(xì)胞分析前，清洗液與稀釋液相互配合將儀器檢測(cè)單元的容器與管道清洗干凈，以此來降低儀器的背景值，避免前一檢測(cè)樣本對(duì)本次檢測(cè)的干擾。除此之外，稀釋液還起到維持白細(xì)胞、血小板原有形態(tài)，確保儀器對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行準(zhǔn)確分類的作用。

市場(chǎng)售稀釋液一般只采用硼酸鹽緩沖對(duì)，部分血漿，經(jīng)過溶血?jiǎng)┨幚砗螅琾h值低于7.5，硼酸鹽緩沖對(duì)就失去了緩沖效果，造成溶液ph值不穩(wěn)定，從而影響血細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性及血紅蛋白含量測(cè)定的準(zhǔn)確性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提出一種血細(xì)胞分析用稀釋液，該稀釋液緩沖能力強(qiáng)，有利于提高血細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性及血紅蛋白含量測(cè)定的準(zhǔn)確性。

本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

一種血細(xì)胞分析用稀釋液，各組分為：無機(jī)鹽、抗凝劑、防腐劑、二甲基脲、硼酸鹽緩沖對(duì)與磷酸鹽緩沖對(duì)，且稀釋液的ph緩沖范圍為6.5～10.0。

作為優(yōu)選，本發(fā)明的實(shí)施中，硼酸鹽緩沖對(duì)為硼酸與四硼酸鈉，硼酸的含量為0.6g/l，四硼酸鈉的含量為1.0g/l；磷酸鹽緩沖對(duì)為磷酸二氫鉀與磷酸氫二鈉，磷酸二氫鉀的含量為0.5g/l，磷酸氫二鈉為1.0g/l。

進(jìn)一步，無機(jī)鹽為氯化鈉與硫酸鈉，氯化鈉的含量為6.5g/l，硫酸鈉的含量為9.0g/l。

進(jìn)一步，抗凝劑為乙二胺四乙酸二鈉，抗凝劑的含量為0.2g/l。

進(jìn)一步，防腐劑為2,4,4’-三氯-2’羥基二苯醚或者疊氮化鈉，防腐劑的含量為1.0g/l。

本發(fā)明中wbc即白細(xì)胞(英文名：leukocyte，whitebloodcell，簡稱：wbc)，舊稱白血球。

本發(fā)明中rbc為紅細(xì)胞又稱紅血球或紅血細(xì)胞，是血液中最多的一種血細(xì)胞。紅細(xì)胞中含有血紅蛋白，因而使血液呈紅色。血紅蛋白能和空氣中的氧結(jié)合，因此紅細(xì)胞能通過血紅蛋白將吸入肺泡中的氧運(yùn)送給組織，而組織中新陳代謝產(chǎn)生的二氧化碳也通過紅細(xì)胞運(yùn)到肺部并被排出體外。

本發(fā)明中hgb(hemoglobin；haemoglobin；hb；hgb)每一血紅蛋白分子由四分子的珠蛋白和四分子亞鐵血紅素組成，每個(gè)血紅素又由4個(gè)吡咯環(huán)組成，在環(huán)中央有一個(gè)鐵原子。血紅蛋白中的鐵在二價(jià)狀態(tài)時(shí)，可與氧呈可逆性結(jié)合(氧合血紅蛋白)，如果鐵氧化為三價(jià)狀態(tài)。

本發(fā)明中plt(bloodplatelet)為血小板，是哺乳動(dòng)物血液中的有形成分之一，是從骨髓成熟的巨核細(xì)胞胞質(zhì)裂解脫落下來的具有生物活性的小塊胞質(zhì)。

無機(jī)鹽在稀釋液中所起作用是為血液中細(xì)胞提供人體的無機(jī)鹽環(huán)境，一般選用氯化鈉與硫酸鈉，當(dāng)然也可以選用氯化鉀或者硫酸鉀，只要能起到提供人體的無機(jī)鹽環(huán)境而不引起細(xì)胞破裂溶解即可。

應(yīng)用物理或化學(xué)方法，除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，稱為抗凝。本發(fā)明中抗凝劑是指能夠阻止血液凝固的化學(xué)試劑或物質(zhì)。一般有天然抗凝劑(肝素，水蛭素等)，ca⁺²鰲合劑(檸檬酸鈉，氟化鉀)，從血細(xì)胞計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性和血紅蛋白含量測(cè)定準(zhǔn)確性的角度考慮，本發(fā)明中優(yōu)選為螯合劑乙二胺四乙酸二鈉，該螯合劑與鈣離子結(jié)合成螯合物，從而阻止血液凝固。

硼酸鹽緩沖對(duì)緩沖范圍為7.5～10.0，當(dāng)ph值低于7.5時(shí)，幾乎沒有緩沖性。磷酸鹽緩沖對(duì)緩沖范圍為6.5～8.0，當(dāng)ph值低大于8.0時(shí)，幾乎沒有緩沖性。本發(fā)明采用硼酸鹽和磷酸鹽兩種緩沖對(duì)，稀釋液ph緩沖范圍在6.5～10.0，雙重緩沖體系提升了稀釋液的緩沖能力。當(dāng)經(jīng)過溶血?jiǎng)┨幚淼难獫{溶液ph值低于7.5時(shí)，溶液ph值也可以很好的保持在一定范圍內(nèi)，從而保證了血細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性和血紅蛋白含量測(cè)定的準(zhǔn)確性，特別是提高異常標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

一種血細(xì)胞分析用稀釋液，各組分為：

6.5g/l氯化鈉，9.0g/l硫酸鈉，0.2g/l乙二胺四乙酸二鈉，1.0g/l2,4,4’-三氯-2’羥基二苯醚，0.5g/l二甲基脲，0.6g/l硼酸，1.0g/l四硼酸鈉，0.5g/l磷酸二氫鉀，1.0g/l磷酸氫二鈉。

該稀釋液的ph緩沖范圍為6.5～10.0。

將各組分按照要求準(zhǔn)確稱量，用水溶解后混合、定容，然后用2.2μm濾膜過濾分裝。

實(shí)施例2

一種血細(xì)胞分析用稀釋液，各組分為：

6.5g/l氯化鈉，9.0g/l硫酸鈉，0.2g/l乙二胺四乙酸二鈉，1.0g/l疊氮化鈉，0.5g/l二甲基脲，0.6g/l硼酸，1.0g/l四硼酸鈉，0.5g/l磷酸二氫鉀，1.0g/l磷酸氫二鈉。

該稀釋液的ph緩沖范圍為6.5～10.0。

將各組分按照要求準(zhǔn)確稱量，用水溶解后混合、定容，然后用2.2μm濾膜過濾分裝。

試驗(yàn)例

1材料與方法

1.1儀器

1.1.1邁瑞bc-3000血細(xì)胞分析儀

1.1.2雷磁ph酸度計(jì)

1.2試劑

1.1.1邁瑞bc-3000血細(xì)胞分析儀原廠配套試劑：原廠稀釋液、溶血?jiǎng)?、沖洗液。

1.2.2實(shí)施例1稀釋液。

1.2.3標(biāo)本實(shí)驗(yàn)當(dāng)日加入edta-k2抗凝的臨床病人靜脈血，采血后4小時(shí)內(nèi)檢測(cè)完畢。

1.2.4血常規(guī)質(zhì)控血。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1ph測(cè)定

實(shí)驗(yàn)室溫度設(shè)定25℃.

測(cè)定原廠稀釋液和實(shí)施例1稀釋液的ph。

取10ml比色管2支，分別加入原廠稀釋液和實(shí)施例1稀釋液5ml，同一抗凝血20μl，然后分別加入溶血?jiǎng)?ml，搖勻，60s后測(cè)定ph并記錄。

抽取20個(gè)正常標(biāo)本和20個(gè)異常標(biāo)本，進(jìn)行上述實(shí)驗(yàn)。

1.3.2臨床檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)前實(shí)驗(yàn)室溫度設(shè)定20℃，在bc-3000血細(xì)胞分析儀上測(cè)定質(zhì)控血，檢測(cè)各項(xiàng)目是否在參考值范圍內(nèi)，確保儀器正常工作。

抽取20個(gè)正常標(biāo)本和20個(gè)異常標(biāo)本，分別使用原廠稀釋液和實(shí)施例1稀釋液在血細(xì)胞分析儀上進(jìn)行檢測(cè)，記錄hgb、wbc、rbc、plt等各項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果。

通過人工鏡檢方式進(jìn)行檢測(cè)上述20個(gè)正常標(biāo)本和20個(gè)異常標(biāo)本，記錄hgb、wbc、rbc、plt等各項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果。

以人工鏡檢方式作為各檢測(cè)項(xiàng)目的標(biāo)準(zhǔn)值。

2結(jié)果與分析

2.1ph

原廠稀釋液ph為7.32，實(shí)施例1稀釋液ph為7.35

原廠稀釋液和實(shí)施例1稀釋液分別與血液混合后的ph見表1和表2。

表1原廠稀釋液和實(shí)施例1稀釋液分別稀釋正常標(biāo)本的ph

表2原廠稀釋液和實(shí)施例1稀釋液分別稀釋異常標(biāo)本的ph

從表1可以看出，原廠稀釋液和實(shí)施例1稀釋液溶與正常血液標(biāo)本混合后的ph基本相同，均穩(wěn)定在7.18～7.58之間，表明兩種試劑對(duì)正常標(biāo)本都有較強(qiáng)的ph緩沖性。

原廠稀釋液與異常血液標(biāo)本混合后的ph變化很大，在6.60～7.89之間，實(shí)施例1稀釋液與異常血液標(biāo)本混合后的ph較小，在7.14～7.42之間。表明實(shí)施例1稀釋液與異常血液標(biāo)本混合后的ph緩沖度比發(fā)明稀釋液強(qiáng)很多。

2.2臨床檢測(cè)結(jié)果及分析

分別用原廠稀釋液、實(shí)施例1稀釋液及人工鏡檢方式臨床測(cè)定20個(gè)正常標(biāo)本和20個(gè)異常標(biāo)本，主要參數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表3和表4。

表3正常標(biāo)本兩種試劑及人工鏡檢臨床測(cè)定結(jié)果比較(x±s)

表4異常標(biāo)本兩種試劑及人工鏡檢臨床測(cè)定結(jié)果比較(x±s)

從表3中可以看出，正常標(biāo)本wbc、rbc、hgb、plt等各項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果兩種試劑與人工鏡檢基本一致，無顯著性差異。

從表4中可以看出，異常標(biāo)本wbc、rbc、hgb、plt等各項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果，原廠稀釋液測(cè)定各項(xiàng)目結(jié)果與人工鏡檢有顯著性差異，實(shí)施例1稀釋液測(cè)定各項(xiàng)目結(jié)果與人工鏡檢無顯著性差異，實(shí)施例1稀釋液臨床檢測(cè)結(jié)果更接近標(biāo)準(zhǔn)值。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。