本發(fā)明涉及農(nóng)藥殘留檢測領域，具體涉及一種柑橘類水果中惡霉靈農(nóng)藥殘留檢測方法。
背景技術：
惡霉靈俗稱綠亨一號、土菌消、土菌克或綠佳寶，是一種高效廣譜殺菌劑，惡霉靈對各種植物真菌的病害防治效果較好，毒性較低，因此在我國應用廣泛。目前，隨著人們對健康安全關注度的增加，植物中惡霉靈農(nóng)藥殘留對人體的毒害作用也逐漸受到關注，有資料顯示惡霉靈農(nóng)藥殘留不僅會損害人體的腸胃、腎臟器官，而且在人體代謝過程中惡霉靈轉變成的亞硝基化合物容易誘發(fā)癌癥等疾病。據(jù)此，需要對植物中，特別是水果蔬菜中的惡霉靈農(nóng)藥殘留進行檢測，以及早做出防治準備。
現(xiàn)有針對柑橘類水果中殘留的惡霉靈檢測報道較少，且檢測中的回收率低，檢測方法選擇性不好，容易造成假陽性判斷，誤差較大。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術問題是克服現(xiàn)有技術的缺陷，提供一種柑橘類水果中惡霉靈農(nóng)藥殘留檢測方法，該方法回收率高，檢測準確度高、重復性好。
為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的技術方案是：
一種柑橘類水果中惡霉靈農(nóng)藥殘留檢測方法，包括步驟：
（1）將柑橘類水果洗凈切塊，加入固體堿，勻漿處理；
（2）加入乙酸乙酯，渦旋振蕩，放置冰箱內冷藏0.5-1h；
（3）再加入氯化鈉和堿溶液，渦旋振蕩后離心，過色譜柱，取洗脫液；
（4）利用液相色譜-串聯(lián)質譜對洗脫液進行檢測。
本發(fā)明中所述柑橘類水果指橙、柚、橘和檸檬等柑橘類。
優(yōu)選的，步驟（1）中，固體堿為粉末狀的氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉或碳酸鉀中的一種或多種混合物。優(yōu)選的，固體堿用量是柑橘類水果質量的0.5-50%，進一步優(yōu)選的，氫氧化鈉或/和氫氧化鉀用量是柑橘類水果質量的0.5-10%，更進一步優(yōu)選的，氫氧化鈉或/和氫氧化鉀用量是柑橘類水果質量的0.5-5%，碳酸鈉或/和碳酸鉀用量是柑橘類水果質量的20-50%。
優(yōu)選的，步驟（2）中，渦旋振蕩的速率為2000-2500r/min，時間為3-8min。
優(yōu)選的，步驟（2）中，乙酸乙酯用量為：每1g柑橘類水果加入3-5.5ml。
優(yōu)選的，步驟（3）中，按質量計，氯化鈉的用量是柑橘類水果用量的1.0-1.2倍，堿溶液的PH為9-12。進一步優(yōu)選的，氯化鈉的用量是柑橘類水果用量的1.0倍，1.1倍，1.2倍，堿溶液的PH為10，10.5，11，11.5，12。
優(yōu)選的，色譜柱填料為硅藻土和活性炭的混合物，按質量比計，活性炭是硅藻土重量的1-10%。進一步優(yōu)選的，活性炭用量是硅藻土重量的1-5%。色譜柱作為進一步凈化目的，填料用量較少，具體可為柑橘類水果重量的1-3倍。
優(yōu)選的，色譜柱所用洗脫液為乙酸乙酯。
本發(fā)明所達到的有益效果：
本發(fā)明檢測方法所用溶劑及試劑為常用試劑，毒性低，在勻漿前加入固體堿能將柑橘類水果中的農(nóng)殘充分的提取出來，后續(xù)的加入乙酸乙酯和堿溶液等步驟在進一步將水果中農(nóng)殘釋放出來后，還進一步將水相中農(nóng)殘向乙酸乙酯中轉移，進一步提高惡霉靈的提取率。色譜柱的處理能進一步減少后續(xù)測量的干擾，提高檢測的準確度。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步描述。以下實施例僅用于更加清楚地說明本發(fā)明的技術方案，而不能以此來限制本發(fā)明的保護范圍。
實施例1
一種柑橘類水果中惡霉靈農(nóng)藥殘留檢測方法，包括以下步驟：
將5橘子洗凈切塊，加入粉末狀的氫氧化鈉0.095g，送勻漿機勻漿處理；然后加入乙酸乙酯20ml，渦旋振蕩，旋振蕩的速率為2000r/min，時間為4min。隨后放置冰箱內冷藏0.5h，冷藏溫度-2℃。再加入5g氯化鈉和PH為10氫氧化鈉溶液12ml，渦旋振蕩后離心，本次渦旋振蕩參數(shù)同上次相同。然后過色譜柱，色譜柱填料選用硅藻土和活性炭的混合物，總用量為12g，其中活性炭用量是硅藻土用量的1.5%。用乙酸乙酯洗脫，取洗脫液備用。
利用液相色譜-串聯(lián)質譜對洗脫液進行檢測。
取5μL洗脫液進樣至超高效液相色譜-質譜聯(lián)用儀（美國Agilent公司生產(chǎn)的Agilent1290型號高效液相色譜儀和美國AB SCIEX公司生產(chǎn)的AP15500質譜儀連用）中平行測定三次，測定條件參考如下：
色譜條件：色譜柱Agilent ZORBAX300SB-C8(規(guī)格為2 .1×100mm，1 .8μm )；流動相：A：甲醇，B：水；梯度洗脫程序：0-2min甲醇：水＝4:9，2-4min甲醇：水＝12:1，4-10min甲醇：水＝10:1，10-15min甲醇：水＝7:1，15-30min甲醇：水＝3:7；流速：250μL/min，柱溫：40℃。
質譜條件：電噴霧離子源，噴霧電壓（IS）：2.6V；離子化溫度350℃，霧化器流量1000L/Hr；錐孔氣流量50L/Hr；碰撞氣流量為0.20mL/min，碰撞氣氮氣，駐留時間110ms。
隨后配標準溶液，線性回歸，計算惡霉靈含量及加標回收率。經(jīng)檢測，本實施例中惡霉靈加標回收率為97.8%，RSD值為2.1%。
對比例
對比例1：勻漿處理前，加入氫氧化鈉堿溶液代替固體堿，堿溶液PH為10，堿用量同實施例1，其余檢測步驟同實施例1.檢測結果：惡霉靈加標回收率為86.5%，RSD值為1.9%。
對比例2：勻漿處理前，加入乙酸乙酯代替固體堿，其余檢測步驟同實施例1.檢測結果：惡霉靈加標回收率為89.5%，RSD值為2.2%。
由對比例1、2和實施例1可知，在勻漿前加入固體堿能將柑橘類水果中的農(nóng)殘充分的提取出來，提高回收率。
實施例2
一種柑橘類水果中惡霉靈農(nóng)藥殘留檢測方法，包括以下步驟：
將5g檸檬洗凈切塊，加入粉末狀的碳酸鉀2.25g，送勻漿機勻漿處理；然后加入乙酸乙酯21ml，渦旋振蕩，旋振蕩的速率為2500r/min，時間為5min。隨后放置冰箱內冷藏0.5h，冷藏溫度-2℃。再加入5.5g氯化鈉和PH為11氫氧化鈉溶液12ml，渦旋振蕩后離心，本次渦旋振蕩參數(shù)同上次相同。然后過色譜柱，色譜柱填料選用硅藻土和活性炭的混合物，總用量為12g，其中活性炭用量是硅藻土用量的2%。用乙酸乙酯洗脫，取洗脫液備用。
利用液相色譜-串聯(lián)質譜對洗脫液進行檢測。
取5μL洗脫液進樣至超高效液相色譜-質譜聯(lián)用儀（美國Agilent公司生產(chǎn)的Agilent1290型號高效液相色譜儀和美國AB SCIEX公司生產(chǎn)的AP15500質譜儀連用）中平行測定三次，測定條件參考參考實施例1，必要時需做不付出創(chuàng)造性的參數(shù)調整：
計算惡霉靈含量及加標回收率。經(jīng)檢測，本實施例中惡霉靈加標回收率為101.8%，RSD值為3.2%。
實施例3
將5g柚子洗凈切塊，加入粉末狀的氫氧化鉀0.4g，送勻漿機勻漿處理；然后加入乙酸乙酯27ml，渦旋振蕩，旋振蕩的速率為2000r/min，時間為4min。隨后放置冰箱內冷藏0.5h，冷藏溫度-2℃。再加入6g氯化鈉和PH為10.5氫氧化鈉溶液11ml，渦旋振蕩后離心，本次渦旋振蕩參數(shù)同上次相同。然后過色譜柱，色譜柱填料選用硅藻土和活性炭的混合物，總用量為13g，其中活性炭用量是硅藻土用量的1.0%。用乙酸乙酯洗脫，取洗脫液備用。
利用液相色譜-串聯(lián)質譜對洗脫液進行檢測。
取5μL洗脫液進樣至超高效液相色譜-質譜聯(lián)用儀（美國Agilent公司生產(chǎn)的Agilent1290型號高效液相色譜儀和美國AB SCIEX公司生產(chǎn)的AP15500質譜儀連用）中平行測定三次，測定條件實施例1，必要時需做不付出創(chuàng)造性的參數(shù)調整：
計算惡霉靈含量及加標回收率。經(jīng)檢測，本實施例中惡霉靈加標回收率為98.8%，RSD值為1.8%。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明技術原理的前提下，還可以做出若干改進和變形，這些改進和變形也應視為本發(fā)明的保護范圍。