本發(fā)明屬于煙草化學(xué)分析技術(shù)領(lǐng)域，具體提供一種卷煙主流煙氣中殺菌劑遷移量的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
殺菌劑是用于防治由各種病原微生物引起的植物病害的一類農(nóng)藥，一般指殺真菌劑。但國(guó)際上，通常是作為防治各類病原微生物的藥劑的總稱。從控制作物病害的角度來(lái)說(shuō)，目前殺菌劑有著其他物質(zhì)無(wú)法替代的作用，殺菌劑的總體需求在持續(xù)增加，全球殺菌劑增長(zhǎng)速度達(dá)到近8％，三唑類殺菌劑仍將是主角。為了防止煙葉為病蟲(chóng)害侵噬，保證煙葉產(chǎn)量，在煙葉的種植過(guò)程中也不可避免地使用了殺菌劑。
目前，煙草中農(nóng)藥殘留的問(wèn)題已經(jīng)越來(lái)越引起煙草界和全社會(huì)的關(guān)注。煙草作為一種特殊的消費(fèi)品，是通過(guò)煙支燃燒形成煙氣后進(jìn)入人體消費(fèi)，在此過(guò)程煙絲中的農(nóng)藥殘留以一定的遷移率轉(zhuǎn)移到了煙氣中。因此，單純以煙葉中的農(nóng)藥殘留限量來(lái)判斷卷煙煙氣的農(nóng)藥殘留安全性是不準(zhǔn)確的，必須明確煙葉中農(nóng)藥殘留向主流煙氣中的遷移情況，才能更準(zhǔn)確評(píng)價(jià)卷煙煙氣農(nóng)藥殘留的安全性。因此，建立一種卷煙主流煙氣中殺菌劑遷移量的檢測(cè)方法，對(duì)研究卷煙抽吸過(guò)程中殺菌劑向主流煙氣中的遷移量和遷移率有著重要意義。
目前，在煙草中使用的殺菌劑常見(jiàn)的測(cè)定方法有氣相色譜法、液相色譜法或者氣質(zhì)、氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器和質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)法、氣相色譜火焰光度檢測(cè)器檢測(cè)法、液質(zhì)聯(lián)用法等，但評(píng)價(jià)的準(zhǔn)確性有待提高。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明采用劍橋?yàn)V片捕集煙氣粒相物，經(jīng)基質(zhì)分散固相萃取凈化，用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定煙氣粒相物中殺菌劑的遷移量。經(jīng)文獻(xiàn)搜索，未發(fā)現(xiàn)與本發(fā)明內(nèi)容相同文獻(xiàn)的公開(kāi)報(bào)道。
本發(fā)明的目的在于提供一種卷煙主流煙氣中殺菌劑遷移量的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，以研究煙葉中農(nóng)藥殘留向主流煙氣粒相物中的遷移情況。
本發(fā)明的一種卷煙主流煙氣中殺菌劑遷移量的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，包括以下步驟：
(1)在吸煙機(jī)對(duì)卷煙進(jìn)行抽吸，用劍橋?yàn)V片捕集主流煙氣總粒相物；
(2)取下步驟(1)的劍橋?yàn)V片，將劍橋?yàn)V片剪碎后放入離心管中，加入乙腈和內(nèi)標(biāo)液，振蕩使至樣品浸潤(rùn)；
(3)加入固相萃取試劑，振蕩后離心分離；
(4)取步驟(3)離心后的上層清液至凈化離心管中，振蕩后離心分離；
(5)取步驟(4)離心后的上層清液采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)進(jìn)行分析；
(6)步驟(5)所述氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)的條件為：色譜柱：毛細(xì)管色譜柱，固定相為50wt％苯基–甲基聚硅氧烷，規(guī)格為長(zhǎng)30mm×寬0.25mm×厚0.25μm；PTV進(jìn)樣口，初始溫度70℃，進(jìn)樣后以4℃/s升至280℃；進(jìn)樣量1μL，不分流進(jìn)樣；載氣：氦氣，恒流模式，流速為1.2mL/min；柱溫箱升溫程序：初始溫度為90℃，初始時(shí)間為5min，以25℃/min速率由90℃升至180℃，保持15min，然后以5℃/min升至280℃，保持6.5min，然后以40℃/min升至300℃，保持5min；EI電離模式，電離能70eV；離子源溫度250℃，傳輸線溫度280℃；Q2碰撞氣：氬氣，1.2mTorr；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；溶劑延遲：5min。
優(yōu)選地，步驟(2)所述的內(nèi)標(biāo)液為體積比1:1的2ug/1000mL的莠去津的甲苯溶液和2ug/1000mL的磷酸三苯酯的甲苯溶液。
優(yōu)選地，步驟(2)、(3)和(4)所述振蕩的頻率2500r/min，時(shí)間為6min。
優(yōu)選地，步驟(3)和(4)所述離心分離的轉(zhuǎn)速為4000r/min，離心時(shí)間為10min。
優(yōu)選地，步驟(3)所述固相萃取試劑為質(zhì)量比為2:1:8:2的檸檬酸鈉、檸檬酸氫二鈉、無(wú)水硫酸鎂和氯化鈉的混合物。
優(yōu)選地，步驟(4)所述凈化離心管中含有質(zhì)量比為1:1:2的N-丙基乙二胺、石墨化碳和無(wú)水硫酸鎂混合物。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：用分散固相萃取凈化劍橋?yàn)V片上的總粒相物的提取液，采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行分析，實(shí)現(xiàn)煙氣總粒相物中殺菌劑遷移量的檢測(cè)。從而為考察不同卷煙在燃燒過(guò)程中殺菌劑向卷煙主流煙氣中的遷移量和遷移率打下基礎(chǔ)。評(píng)價(jià)的準(zhǔn)確性有所提高。
附圖說(shuō)明
無(wú)。
具體實(shí)施方式：
本發(fā)明的卷煙主流煙氣中殺菌劑遷移量的檢測(cè)方法，具體步驟如下：
a.在吸煙機(jī)上裝上待測(cè)卷煙，參照中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 19609-2004《卷煙用常規(guī)分析用吸煙機(jī)測(cè)定總粒相物和焦油》，抽吸20支卷煙，用劍橋?yàn)V片捕集主流煙氣總粒相物；
b.卷煙抽吸完畢后，取下捕集有主流煙氣總粒相物的劍橋?yàn)V片，并將其撕碎，放入50mL離心管中，加乙腈15mL，100uL內(nèi)標(biāo)液，2500r/min振蕩6min至樣品被乙腈充分浸潤(rùn)；
c.加入固相萃取試劑包，萃取試劑包中含1.0g檸檬酸鈉、0.5g檸檬酸氫二鈉、4.0g無(wú)水硫酸鎂、1.0g氯化鈉；置于漩渦混合振蕩儀上以2500r/min振蕩6min充分混合，然后以4000r/min離心10min；
d.移取離心上清液2mL至凈化離心管，凈化離心管中含50mg的N-丙基乙二胺、50mg石墨化碳、100mg無(wú)水硫酸鎂中，置于漩渦混合振蕩儀上以2500r/min振蕩6min，然后以10000r/min離心2min，取上清液1mL經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾，之后采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行分析。
e.所述氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)的條件為：色譜柱：毛細(xì)管色譜柱，固定相為50wt％苯基–甲基聚硅氧烷，規(guī)格為長(zhǎng)30mm×寬0.25mm×厚0.25μm；PTV進(jìn)樣口，初始溫度70℃，進(jìn)樣后以4℃/s升至280℃；進(jìn)樣量1μL，不分流進(jìn)樣；載氣：氦氣，恒流模式，流速為1.2mL/min；柱溫箱升溫程序：初始溫度為90℃，初始時(shí)間為5min，以25℃/min速率由90℃升至180℃，保持15min，然后以5℃/min升至280℃，保持6.5min，然后以40℃/min升至300℃，保持5min；EI電離模式，電離能70eV；離子源溫度250℃，傳輸線溫度280℃；Q2碰撞氣：氬氣，1.2mTorr；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；溶劑延遲：5min。
儀器與試劑
Waters Quattro Micro氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國(guó)Waters公司)，Talboys多管旋渦混合儀(美國(guó)Talboys公司)，Millipore超純水機(jī)(美國(guó)Millipore公司)，Eppendorf 5804臺(tái)式離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司)，SM450直線型吸煙機(jī)(英國(guó)斯茹林公司)。
乙腈、甲苯：色譜級(jí)，購(gòu)自美國(guó)Tiade公司；農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)莠去津、磷酸三苯酯購(gòu)自Dr.Ehrenstorfer公司；基質(zhì)分散固相萃取試劑盒：提取試劑包含1.0g檸檬酸鈉、0.5g檸檬酸氫二鈉、4.0g無(wú)水硫酸鎂、1.0g氯化鈉；凈化離心管含50mg PSA、50mg石墨化碳、100mg無(wú)水硫酸鎂購(gòu)自美國(guó)Agilent公司。
具體實(shí)驗(yàn)步驟
樣品提取：將待測(cè)市售卷煙，在GB/T 16447-2004規(guī)定的煙草及煙草制品調(diào)節(jié)和測(cè)試的大氣環(huán)境條件下平衡48h，經(jīng)分選后，用符合ISO 30008要求的吸煙機(jī)，在常規(guī)分析用吸煙機(jī)標(biāo)準(zhǔn)條件(1puff/min，2s/puff，35.0mL/puff)下抽吸。.卷煙抽吸完畢后，取下捕集有主流煙氣總粒相物的劍橋?yàn)V片，并將其撕碎，放入50mL離心管中，加乙腈15mL，100uL內(nèi)標(biāo)液，2500r/min振蕩6min至樣品被乙腈充分浸潤(rùn)；
樣品凈化：加入固相萃取試劑為1.0g檸檬酸鈉、0.5g檸檬酸氫二鈉、4.0g無(wú)水硫酸鎂、1.0g氯化鈉，然后置于漩渦混合振蕩儀上以2500r/min振蕩6min充分混合，然后以4000r/min離心10min；移取離心上清液2mL至凈化離心管，凈化離心管中含50mg的N-丙基乙二胺、50mg石墨化碳、100mg無(wú)水硫酸鎂(美國(guó)Agilent公司產(chǎn)品)中，置于漩渦混合振蕩儀上以2500r/min振蕩6min，然后以4000r/min離心10min，取上清液1mL經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾，之后采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行分析。
測(cè)定條件
以下分析條件可供參考，采用其他條件應(yīng)驗(yàn)證其適用性。
——色譜柱：毛細(xì)管色譜柱，固定相為(50％苯基)–甲基聚硅氧烷，規(guī)格為[30m(長(zhǎng)度)×0.25mm(內(nèi)徑)×0.25μm(膜厚)]；
——PTV進(jìn)樣口，初始溫度70℃，進(jìn)樣后以4℃/s升至280℃；
——進(jìn)樣量1μL，不分流進(jìn)樣；
——載氣：氦氣，恒流模式，流速為1.2mL/min；
——柱溫箱升溫程序：初始溫度為90℃，初始時(shí)間為5min；以25℃/min速率由90℃升至180℃，保持15min；然后以5℃/min升至280℃，保持6.5min；然后以40℃/min升至300℃，保持5min；
——EI電離模式，電離能70eV；離子源溫度250℃，傳輸線溫度280℃；
——Q2碰撞氣：氬氣，1.2mTorr；
——掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；
——溶劑延遲：5min。
標(biāo)準(zhǔn)工作曲線制作
對(duì)基質(zhì)配標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析，得到每個(gè)農(nóng)藥目標(biāo)化合物與內(nèi)標(biāo)的峰面積之比，以每個(gè)農(nóng)藥目標(biāo)化合物的濃度為縱坐標(biāo)，該農(nóng)藥目標(biāo)化合物與內(nèi)標(biāo)的峰面積之比為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，通過(guò)線性擬合檢查質(zhì)譜檢測(cè)器的響應(yīng)是否呈線性，相關(guān)系數(shù)R2＞0.99。
每次試驗(yàn)均應(yīng)制作標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，每進(jìn)樣20次后應(yīng)加入一個(gè)中等濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，如果測(cè)得的值與原值相差超過(guò)10％，則應(yīng)重新進(jìn)行混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制作。
樣品測(cè)定，對(duì)試樣萃取液進(jìn)行分析，由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到測(cè)定值。每個(gè)樣品平行測(cè)定兩次。
實(shí)施例1
選取市售國(guó)內(nèi)卷煙樣品，按照上述測(cè)試方法進(jìn)行卷煙主流煙氣中殺菌劑遷移量的測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果顯示卷煙主流煙氣中沒(méi)檢出三唑酮、三唑醇、稻瘟靈、甲霜靈等殺菌劑殘留。其中：殺菌劑遷移率(wt％)＝(主流煙氣粒相物中檢出量/卷煙抽吸燃燒前煙絲中殘留量)×wt100％。
表1卷煙主流煙氣中殺菌劑遷移量的檢測(cè)結(jié)果
注：表中/表示未檢出。
實(shí)施例2
由于市售卷煙主流煙氣中沒(méi)檢出殺菌劑，采用外加注射不同濃度的殺菌劑(三唑酮和稻瘟靈)，分別注射1ug/20支、4ug/20支、20ug/20支和80ug/20支到煙支中，抽吸后按照上述測(cè)試方法對(duì)卷煙主流煙氣中三唑酮和稻瘟靈進(jìn)行測(cè)定。
結(jié)果顯示：外加到煙支中的三唑酮量在1.0ug/20支和4.0ug/20支時(shí)，在卷煙主流煙氣粒相物中未檢測(cè)到三唑酮和其代謝物三唑醇；外加到煙支中的三唑酮量在20ug/20支和80ug/20支時(shí)，在卷煙卷煙主流煙氣粒相物中檢測(cè)到三唑酮和其代謝物三唑醇，并且隨著外加量的增加煙氣粒相物中三唑酮和三唑醇的遷移量、遷移率升高。外加到煙支中的稻瘟靈量在1.0ug/20支和4.0ug/20支時(shí)，在卷煙主流煙氣粒相物中未檢測(cè)到稻瘟靈；外加到煙支中的稻瘟靈量在20ug/20支和80ug/20支時(shí)，在卷煙主流煙氣粒相物中檢測(cè)到稻瘟靈，并且隨著外加量的增加煙氣粒相物中稻瘟靈遷移量、遷移率升高。結(jié)果見(jiàn)表2。其中：殺菌劑遷移率(wt％)＝(主流煙氣粒相物中檢出量/卷煙抽吸燃燒前煙絲中殘留量)×wt100％。
因此該方法可以用來(lái)檢測(cè)卷煙主流煙氣粒相物中殺菌劑的遷移量。
表2外加三唑酮和稻瘟靈后卷煙粒相物中的遷移量/率檢測(cè)結(jié)果
注：表中/表示未檢出。