本發(fā)明涉及金銀花配方顆粒檢測(cè)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種金銀花配方顆粒的特征圖譜的檢測(cè)方法及質(zhì)量控制方法。

背景技術(shù)：

金銀花自古以來就以它的藥用價(jià)值廣泛而著名。其功效主要是清熱解毒，主治溫病發(fā)熱、熱毒血痢、癰疽疔毒等?，F(xiàn)代研究證明，金銀花含有綠原酸、木犀草素苷等藥理活性成分，對(duì)溶血性鏈球菌、金黃葡萄球菌等多種致病菌及上呼吸道感染致病病毒等有較強(qiáng)的抑制力，另外還可增強(qiáng)免疫力、抗早孕、護(hù)肝、抗腫瘤、消炎、解熱、止血(凝血)、抑制腸道吸收膽固醇等，其臨床用途非常廣泛，可與其它藥物配伍用于治療呼吸道感染、菌痢、急性泌尿系統(tǒng)感染、高血壓等40余種病癥。

為了更深入的研究金銀花，一般采用氣相色譜分析或氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法對(duì)金銀花的化學(xué)成分進(jìn)行研究，建立特征圖譜，但所獲得的特征圖譜出峰密集，色譜峰的分離度較小，色譜峰之間容易重疊，從而不能準(zhǔn)確地確定金銀花化學(xué)成分。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種金銀花配方顆粒的特征圖譜的檢測(cè)方法，其建立了金銀花配方顆粒的液相特征圖譜，能夠系統(tǒng)地反應(yīng)金銀花配方顆?；瘜W(xué)成分的全貌，并且共有峰相對(duì)保留時(shí)間穩(wěn)定，可用于金銀花配方顆粒的質(zhì)量控制。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種金銀花配方顆粒的質(zhì)量控制方法，其能夠準(zhǔn)確檢測(cè)金銀花配方顆粒的化學(xué)成分，有效表征其相對(duì)含量，從而能夠全面評(píng)價(jià)金銀花配方顆粒的質(zhì)量。

本發(fā)明的實(shí)施例是這樣實(shí)現(xiàn)的：

一種金銀花配方顆粒的特征圖譜的檢測(cè)方法，取綠原酸并用體積百分比為45－55％的甲醇溶液配制對(duì)照品溶液；取金銀花配方顆粒并用體積百分比為45－55％的甲醇溶液配制成溶液，經(jīng)超聲波提取，得到供試品溶液；以及對(duì)對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)行高效液相色譜分析，色譜條件包括：以磷酸水溶液和乙腈作為流動(dòng)相分別對(duì)對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)行梯度洗脫，并且在梯度洗脫的過程中控制磷酸水溶液的體積，使得磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的體積百分比大于乙腈。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的較佳實(shí)施中，上述色譜條件還包括：用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑，檢測(cè)波長(zhǎng)為310－340nm，色譜柱的溫度為20－30℃。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的較佳實(shí)施中，上述檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm，色譜柱的溫度為30℃。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的較佳實(shí)施中，在進(jìn)行上述梯度洗脫時(shí)：

初始時(shí)刻，即t＝0min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為85－95％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為5－15％；

t＝15min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為70－80％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為20－30％；

t＝40min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為70－80％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為20－30％；

t＝45min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為85－95％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為5－15％；

t＝60min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為85－95％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為5－15％。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的較佳實(shí)施中，在進(jìn)行上述梯度洗脫時(shí)：

t＝0min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為90％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為10％；

t＝15min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為75％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為25％；

t＝40min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為75％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為25％；

t＝45min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為90％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為10％；

t＝60min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為90％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為10％。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的較佳實(shí)施中，上述流動(dòng)相的流速為0.8－1.2ml/min，優(yōu)選地，流動(dòng)相的流速為1.0ml/min。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的較佳實(shí)施中，上述磷酸水溶液中磷酸的體積比為0.25－0.35％，優(yōu)選地，磷酸水溶液中磷酸的體積比為0.3％。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的較佳實(shí)施中，上述超聲波提取的提取時(shí)間為30－35min，優(yōu)選地，超聲波提取的提取時(shí)間為30min。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的較佳實(shí)施中，上述檢測(cè)方法還包括：在配制供試品溶液時(shí)，將經(jīng)超聲波提取后的溶液放冷，再稱定重量，并用甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量。

一種金銀花配方顆粒的質(zhì)量控制方法，該質(zhì)量控制方法包括上述金銀花配方顆粒的特征圖譜的檢測(cè)方法。

本發(fā)明實(shí)施例的有益效果是：

本發(fā)明實(shí)施例的金銀花配方顆粒的特征圖譜的檢測(cè)方法，以體積百分比為45－55％的甲醇溶液為提取液，以磷酸水溶液和乙腈作為流動(dòng)相分別對(duì)對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)行梯度洗脫，來分析金銀花的化學(xué)成分，建立了金銀花配方顆粒的特征圖譜，系統(tǒng)地反映了金銀花配方顆?；瘜W(xué)成分的全貌，并且按照本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)方法獲得共有峰相對(duì)保留時(shí)間較為穩(wěn)定，可為評(píng)價(jià)或控制金銀花配方顆粒的質(zhì)量提供依據(jù)。并且，本發(fā)明實(shí)施例的特征圖譜色譜峰的分離度好，色譜峰之間明顯分離，能夠準(zhǔn)確地得到金銀花中主要化學(xué)成分的色譜峰，檢測(cè)方法具有良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，應(yīng)當(dāng)理解，以下附圖僅示出了本發(fā)明的某些實(shí)施例，因此不應(yīng)被看作是對(duì)范圍的限定，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關(guān)的附圖。

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1的高效液相特征圖譜；

圖2為對(duì)照品溶液的高效液相特征圖譜；

圖3為對(duì)比例1－1的高效液相特征圖譜；

圖4為對(duì)比例1－2的高效液相特征圖譜；

圖5為對(duì)比例1－3的高效液相特征圖譜；

圖6為對(duì)比例2－1的高效液相特征圖譜；

圖7為對(duì)比例2－2的高效液相特征圖譜；

圖8為對(duì)比例2－3的高效液相特征圖譜；

圖9為對(duì)比例2－4的高效液相特征圖譜；

圖10為對(duì)比例2－5的高效液相特征圖譜；

圖11為本發(fā)明實(shí)施例6的高效液相特征圖譜；

圖12為本發(fā)明實(shí)施例7的高效液相特征圖譜；

圖13為對(duì)比例3－1的高效液相特征圖譜；

圖14為對(duì)比例3－2的高效液相特征圖譜；

圖15為本發(fā)明實(shí)施例8的高效液相特征圖譜；

圖16為本發(fā)明實(shí)施例9的高效液相特征圖譜；

圖17為本發(fā)明實(shí)施例10的高效液相特征圖譜；

圖18為本發(fā)明實(shí)施例11的高效液相特征圖譜；

圖19為對(duì)比例4－1的高效液相特征圖譜；

圖20為對(duì)比例4－2的高效液相特征圖譜；

圖21為十批供試品金銀花配方顆粒的高效液相特征圖譜；

圖22為本發(fā)明實(shí)施例建立的金銀花配方顆粒的標(biāo)準(zhǔn)圖譜。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購(gòu)買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。在本發(fā)明實(shí)施例未特別說明時(shí)，色譜峰和特征峰具有相同的意義，兩者可以互為代替。

本發(fā)明實(shí)施例采用的材料、試劑和儀器見表1。

表1實(shí)驗(yàn)儀器與試藥統(tǒng)計(jì)表

本發(fā)明實(shí)施例的金銀花配方顆粒的特征圖譜的檢測(cè)方法包括以下步驟：

步驟1.1：配制對(duì)照品溶液

取綠原酸并用體積百分比為45－55％的甲醇溶液配制對(duì)照品溶液。具體地，取綠原酸適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加45－55％的甲醇溶液配制成每1ml含40μg的溶液，即得(10℃以下保存)。

優(yōu)選地，甲醇溶液中甲醇占溶液總量的重量百分比為50％。

步驟1.2：配制供試品溶液

取金銀花配方顆粒并用體積百分比為45－55％的甲醇溶液配制成溶液，經(jīng)超聲波提取，得到供試品溶液。在配制供試品溶液時(shí)，將經(jīng)超聲波提取后的溶液放冷，再稱定重量，并用甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量。

具體地，取金銀花配方顆粒適量(可選自上述型號(hào)中的一種或者多種進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn))，研細(xì)，精密稱取粉末0.1g，置50ml具塞錐形瓶中，精密加入45－55％的甲醇溶液10ml，稱定重量，超聲處理(功率240w，頻率45khz)30－35min，放冷，再稱定重量，用45－55％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，即得。

優(yōu)選地，甲醇溶液中甲醇占溶液總量的重量百分比為50％。

優(yōu)選地，超聲波提取的提取時(shí)間為30min。

需要說明的是，在配制對(duì)照品溶液和供試品溶液時(shí)，采用相同的甲醇溶液進(jìn)行配制。

步驟1.3：高效液相色譜分析

對(duì)對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)行高效液相色譜分析。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定。

色譜條件為：以磷酸水溶液和乙腈作為流動(dòng)相分別對(duì)對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)行梯度洗脫，并且在梯度洗脫的過程中控制磷酸水溶液的體積，使得磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的體積百分比大于乙腈。

優(yōu)選地，色譜條件還包括：用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑，檢測(cè)波長(zhǎng)為310－340nm，色譜柱的溫度為20－30℃(以下簡(jiǎn)稱柱溫)。

更優(yōu)選地，檢測(cè)波長(zhǎng)優(yōu)選為327nm，色譜柱的溫度優(yōu)選為30℃。

優(yōu)選地，在進(jìn)行上述梯度洗脫時(shí)：

初始時(shí)刻，即t＝0min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為85－95％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為5－15％；

t＝15min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為70－80％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為20－30％；

t＝40min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為70－80％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為20－30％；

t＝45min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為85－95％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為5－15％；

t＝60min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為85－95％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為5－15％。

更優(yōu)選地，在進(jìn)行上述梯度洗脫時(shí)：

t＝0min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為90％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為10％；

t＝15min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為75％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為25％；

t＝40min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為75％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為25％；

t＝45min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為90％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為10％；

t＝60min時(shí)，磷酸水溶液占流動(dòng)相總量的百分比為90％，乙腈占流動(dòng)相總量的百分比為10％。

優(yōu)選地，流動(dòng)相的流速為0.8－1.2ml/min。更優(yōu)選地，流動(dòng)相的流速為1.0ml/min。

優(yōu)選地，磷酸水溶液中磷酸的體積比為0.25－0.35％。更優(yōu)選地，磷酸水溶液中磷酸的體積比為0.3％。

經(jīng)過上述步驟后，將對(duì)照品溶液的特征圖譜與供試品溶液的特征圖譜進(jìn)行比對(duì)，指認(rèn)出供試品溶液的特征圖譜中代表綠原酸的色譜峰，并對(duì)其他色譜峰進(jìn)行編號(hào)，從而建立起了金銀花配方顆粒的特征圖譜。按照本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)方法建立的金銀花配方顆粒的特征圖譜系統(tǒng)地反映了金銀花配方顆?；瘜W(xué)成分的全貌，并且共有峰相對(duì)保留時(shí)間穩(wěn)定、色譜峰的分離度好。

本發(fā)明實(shí)施例的金銀花配方顆粒的質(zhì)量控制方法，其包括本發(fā)明實(shí)施例的金銀花配方顆粒的特征圖譜的檢測(cè)方法。具體地：

步驟2.1：按照本發(fā)明實(shí)施的檢測(cè)方法建立金銀花配方顆粒的標(biāo)準(zhǔn)圖譜。

步驟2.2：建立待檢測(cè)顆粒樣品的特征圖譜。具體地：將待檢測(cè)的顆粒樣品按照本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，獲得液相特征圖譜。

步驟2.3：將顆粒樣品的特征圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜進(jìn)行對(duì)比，通過圖譜中的色譜峰出峰時(shí)間、峰數(shù)量、峰值等參數(shù)來評(píng)價(jià)或控制顆粒樣品的質(zhì)量。

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說明。

實(shí)施例1

本實(shí)施例的特征圖譜是按照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0512)測(cè)定的。

色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以流動(dòng)相a：0.3％磷酸水溶液(v/v，體積比)，流動(dòng)相b：乙腈，按下表2進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm，柱溫30℃。

表2

供試品溶液的制備：取金銀花配方顆粒樣品(批號(hào)s151010－1)適量，研細(xì)，精密稱取粉末0.1g，置50ml具塞錐形瓶中，精密加入50％甲醇10ml，稱定重量，超聲處理(功率240w，頻率45khz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，即得供試品溶液。

取上述供試品溶液10μl注入液相色譜儀中測(cè)定，即得。

根據(jù)本實(shí)施例提供的檢測(cè)方法，獲得的供試品溶液的特征圖譜如圖1所示，對(duì)照品溶液的特征圖譜如圖2所示。結(jié)合圖2，指認(rèn)出圖1中代表綠原酸的色峰，并編號(hào)為s峰(或者峰2)，同時(shí)分別對(duì)其他色譜峰進(jìn)行編號(hào)。如圖1所示，供試品溶液的特征圖譜包括6個(gè)特征峰，以峰2對(duì)應(yīng)的峰為s峰，各特征峰與s峰的相對(duì)保留時(shí)間為：峰1：0.73，峰2：1.00，峰3：1.06，峰4：2.05，峰5：2.17，峰6：2.31。

實(shí)施例2－3

實(shí)施例2－3與實(shí)施例1基本相同，區(qū)別在于，作為提取溶媒的甲醇溶液的濃度發(fā)生變化，實(shí)施例2為45％的甲醇溶液，實(shí)施例3為55％的甲醇溶液。

實(shí)施例4－5

實(shí)施例4－5與實(shí)施例1基本相同，區(qū)別在于，超聲波提取時(shí)間不同，實(shí)施例4為33min，實(shí)施例5為35min。

實(shí)施例6－7

實(shí)施例6－7與實(shí)施例1基本相同，區(qū)別在于，柱溫不同，實(shí)施例6為20℃，實(shí)施例7為25℃。

實(shí)施例8－11

實(shí)施例8－9與實(shí)施例1基本相同，區(qū)別在于，檢測(cè)波長(zhǎng)不同，實(shí)施例8為330nm，實(shí)施例9為340nm，實(shí)施例10為310nm、實(shí)施例11為320nm。

實(shí)施例12

本實(shí)施例的特征圖譜是按照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0512)測(cè)定的。

色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以流動(dòng)相a：0.25％磷酸水溶液(v/v，體積比)，流動(dòng)相b：乙腈，按下表3進(jìn)行梯度洗脫，流速0.8ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為330nm，柱溫25℃。

表3

供試品溶液的制備：取金銀花配方顆粒樣品(批號(hào)s151010－1)適量，研細(xì)，精密稱取粉末0.1g，置50ml具塞錐形瓶中，精密加入45％甲醇10ml，稱定重量，超聲處理(功率240w，頻率45khz)33分鐘，放冷，再稱定重量，用45％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，即得供試品溶液。

取上述供試品溶液10μl注入液相色譜儀中測(cè)定，即得。

實(shí)施例13

本實(shí)施例的特征圖譜是按照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0512)測(cè)定的。

色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以流動(dòng)相a：0.35％磷酸水溶液(v/v，體積比)，流動(dòng)相b：乙腈，按下表4進(jìn)行梯度洗脫，流速1.2ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為340nm，柱溫35℃。

表4

供試品溶液的制備：取金銀花配方顆粒樣品(批號(hào)s151010－1)適量，研細(xì)，精密稱取粉末0.1g，置50ml具塞錐形瓶中，精密加入55％甲醇10ml，稱定重量，超聲處理(功率240w，頻率45khz)35分鐘，放冷，再稱定重量，用55％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，即得供試品溶液。

取上述供試品溶液10μl注入液相色譜儀中測(cè)定，即得。

實(shí)施例14

本實(shí)施例的特征圖譜是按照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0512)測(cè)定的。

色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以流動(dòng)相a：0.3％磷酸水溶液(v/v，體積比)，流動(dòng)相b：乙腈，按下表5進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm，柱溫30℃。

表5

供試品溶液的制備：取金銀花配方顆粒樣品(批號(hào)s151010－1)適量，研細(xì)，精密稱取粉末0.1g，置50ml具塞錐形瓶中，精密加入50％甲醇10ml，稱定重量，超聲處理(功率240w，頻率45khz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，即得供試品溶液。

取上述供試品溶液10μl注入液相色譜儀中測(cè)定，即得。

試驗(yàn)例1提取溶媒的優(yōu)化設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)例的目的是在于研究提取溶酶對(duì)色譜峰分離度的影響，以優(yōu)化出最佳的提取溶媒。

按照實(shí)施例1的檢測(cè)方法對(duì)實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3、對(duì)比例1－1、對(duì)比例1－2、對(duì)比例1－3進(jìn)行特征圖譜的測(cè)定。試驗(yàn)條件及檢測(cè)結(jié)果見表6。本試驗(yàn)例提供了對(duì)比例1－1、對(duì)比例1－2、對(duì)比例1－3的特征圖譜(也即是本發(fā)明所指的高效液相特征圖譜)，分別如圖3、圖4、圖5所示。表6中所指百分比為體積百分比。

表6

從圖1、圖3至圖5以及表6可以看出，選取濃度為45－55％的甲醇溶液作為提取溶媒，其獲得的色譜峰的分離度比由純的甲醇、純的乙醇以及75％的乙醇溶液作為提取溶媒都要好，其中50％的甲醇溶液其分離度最佳。而對(duì)比例1－1、對(duì)比例1－2、對(duì)比例1－3的特征圖譜色峰分離差，有其他峰值出現(xiàn)。

試驗(yàn)例2提取時(shí)間的優(yōu)化設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)例的目的是在于研究提取時(shí)間對(duì)金銀花配方顆粒在提取溶酶中溶解程度的影響，以優(yōu)化出最佳的提取時(shí)間。

按照實(shí)施例1的檢測(cè)方法對(duì)實(shí)施例1、實(shí)施例4、實(shí)施例5、對(duì)比例2－1、對(duì)比例2－2、對(duì)比例2－3、對(duì)比例2－4和對(duì)比例2－5進(jìn)行特征圖譜的測(cè)定。試驗(yàn)條件及檢測(cè)結(jié)果見表7。本試驗(yàn)例還提供了對(duì)比例2－1、對(duì)比例2－2、對(duì)比例2－3、對(duì)比例2－4和對(duì)比例2－5的特征圖譜，分別如圖6、圖7、圖8、圖9和圖10所示。

表7

從圖1、圖6至10以及表7可以看出，當(dāng)提取時(shí)間為15min(對(duì)比例2－1)或者20min(對(duì)比例2－2)時(shí)，將檢測(cè)圖譜與標(biāo)準(zhǔn)譜圖進(jìn)行比對(duì)，其色譜峰沒有全部顯現(xiàn)。圖6所表示的對(duì)比例2－1，其只有3個(gè)特征峰，與圖1所表示的實(shí)施例1相比，其缺乏特征峰4、5、6。圖7所表示的對(duì)比例2－2，特征峰大部分顯現(xiàn)，與圖1所表示的實(shí)施例1相比，其缺乏特征峰5。說明當(dāng)提取時(shí)間低于30min時(shí)，在超聲波提取時(shí)，金銀花顆粒的主要成分沒有全部提取出來。而當(dāng)提取時(shí)間增加至30min時(shí)，金銀花顆粒的主要成分開始全部顯現(xiàn)，并且色譜峰分離明顯，當(dāng)提取時(shí)間繼續(xù)增加至40min、50min或60min時(shí)，圖譜上的色譜峰不再增加，色譜峰值穩(wěn)定，分離明顯。本發(fā)明實(shí)施例將提取時(shí)間為30－35min，其能夠足以將金銀花配方顆粒中主要成分全部提取出的同時(shí)還可以避免因提取時(shí)間過長(zhǎng)而降低檢測(cè)效率。

試驗(yàn)例3柱溫的優(yōu)化設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)例的目的是在于研究柱溫對(duì)色譜峰的影響，以優(yōu)化出最佳的色譜柱溫度(簡(jiǎn)稱柱溫)。

按照實(shí)施例1的檢測(cè)方法對(duì)實(shí)施例1、實(shí)施例6、實(shí)施例7、對(duì)比例3－1和對(duì)比例3－2進(jìn)行特征圖譜的測(cè)定。試驗(yàn)條件及檢測(cè)結(jié)果見表8。圖11和圖12分別為實(shí)施例6、實(shí)施例7的特征圖譜。圖13和圖14分別為對(duì)比例3－1和對(duì)比例3－2的特征圖譜。

表8

從圖1、圖11－圖14以及表8可以看出，當(dāng)柱溫在20－30℃范圍內(nèi)時(shí)，色譜峰分離度好，整體峰型呈正太分布，當(dāng)柱溫超過該范圍，例如35℃、40℃時(shí)，色譜峰為非正太分布，色譜峰有重合，分離度差。

試驗(yàn)例4檢測(cè)波長(zhǎng)的優(yōu)化設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)例的目的是在于研究檢測(cè)波長(zhǎng)對(duì)色譜峰的影響，以優(yōu)化出最佳的檢測(cè)波長(zhǎng)。

按照實(shí)施例1的檢測(cè)方法對(duì)實(shí)施例1、實(shí)施例8、實(shí)施例9、實(shí)施例10、實(shí)施例11、對(duì)比例4－1和對(duì)比例4－2進(jìn)行特征圖譜的測(cè)定。試驗(yàn)條件及檢測(cè)結(jié)果見表9，圖1、圖15、圖16、圖17和圖18分別為實(shí)施例1、實(shí)施例8、實(shí)施例9、實(shí)施例10、實(shí)施例11的特征圖譜。同時(shí)，本實(shí)施例還提供了對(duì)比例4－1和對(duì)比例4－2的特征圖譜，見圖19和圖20。

表9

如圖19、圖20以及表9所示，在370nm或385nm檢測(cè)的色譜峰多但是各色譜峰分離度較差，含有的雜質(zhì)較多，主要色譜峰峰面積較?。欢鐖D1、以及圖15－圖18所示，在310－340nm下的色譜峰分?jǐn)?shù)較多，主要成分全部顯現(xiàn)，且各峰之間的分離度較好，信息量大，各峰之間分離度較好，主要色譜峰面積大。

試驗(yàn)例5本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)方法的精密度試驗(yàn)

以實(shí)施例1為例，對(duì)其進(jìn)行色譜分析，每次進(jìn)樣體積為10μl，記錄60min內(nèi)的特征圖譜，檢測(cè)結(jié)果見表10和表11。

表10特征峰相對(duì)保留時(shí)間比值

表11特征峰相對(duì)峰面積比值

如表10和表11所記錄的結(jié)果，所得各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間rsd均小于0.3％，特征峰的相對(duì)峰面積rsd均小于2.0％，說明本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)方法精密度好。

試驗(yàn)例6本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)方法的重復(fù)性試驗(yàn)

以實(shí)施例1為例，稱取6份金銀花配方顆粒按照實(shí)施例1提供的檢測(cè)方法進(jìn)行色譜分析，進(jìn)樣體積10μl，記錄60min內(nèi)的特征圖譜，檢測(cè)結(jié)果見表12和表13。

表12特征峰相對(duì)保留時(shí)間比值

表13特征峰相對(duì)峰面積比值

如表12和表13所記錄的結(jié)果，所得各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間rsd均小于0.3％，特征峰的相對(duì)峰面積rsd均小于2.0％，說明本實(shí)發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)方法重復(fù)性好。

試驗(yàn)例7本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)方法的穩(wěn)定性試驗(yàn)

以實(shí)施例1為例，稱取同一批金銀花配方顆粒(例如批號(hào)s151010－1)按照實(shí)施例1提供的檢測(cè)方法進(jìn)行色譜分析，分別于0，4，8，12，24h五個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)進(jìn)樣并測(cè)定，記錄60min內(nèi)的特征圖譜，檢測(cè)結(jié)果見表14和表15。

表14特征峰相對(duì)保留時(shí)間

表15特征峰相對(duì)峰面積比值

從表14和表15可以看出，相對(duì)應(yīng)的色譜峰相對(duì)保留時(shí)間rsd均小于0.3％，特征峰的相對(duì)峰面積rsd均小于2.0％，結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

金銀花配方顆粒特征圖譜的建立

按照實(shí)施例1所提供的檢測(cè)方法，取10批金銀花配方顆粒(s151010－1、s151010－2、s151010－3、s151013－1、s151013－2、s151013－3、s151016－1、s151016－2、s151016－3、s151016－4)的供試品溶液，進(jìn)樣，記錄60min特征圖譜，檢測(cè)結(jié)果見表16，10批金銀花配方顆粒的特征圖譜如21所示。

表16特征峰相對(duì)保留時(shí)間

如表16和圖21所示，10批配方顆粒有6個(gè)共有峰，分別在5.8、8.0、8.4、16.4、17.4、18.4min左右出峰。共有峰保留時(shí)間及相對(duì)保留時(shí)間均具有較好的重復(fù)性。這6個(gè)共有峰出峰時(shí)間較為穩(wěn)定，可作為金銀花配方顆粒的特征峰。

由此，建立起金銀花配方顆粒的特征圖譜如圖22所示，以其作為標(biāo)準(zhǔn)圖譜，對(duì)后續(xù)待檢測(cè)顆粒進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)及控制。

綜上所述，本發(fā)明的金銀花配方顆粒的特征圖譜的檢測(cè)方法，其建立的特征圖譜系統(tǒng)地反映了金銀花配方顆粒的化學(xué)成分全貌，共有峰相對(duì)保留時(shí)間較為穩(wěn)定，并且該檢測(cè)方法精密度高、重復(fù)性好、穩(wěn)定性好，可為評(píng)價(jià)或控制金銀花配方顆粒的質(zhì)量提供依據(jù)。

以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。