本發(fā)明涉及一種固體香辛料的參考物質(zhì)及其制備方法，尤其涉及一種含有罌粟殼的陽(yáng)性、陰性香辛料參考物質(zhì)及其制備方法。
背景技術(shù)：
：罌粟殼為植物罌粟的干燥成熟果殼，含多種生物堿類物質(zhì)，如嗎啡、可待因、那可汀、罌粟堿、蒂巴因等，其最早作為藥物使用，起到鎮(zhèn)痛、止咳、止瀉的作用，它并非食品，也是一種制造毒品的原料；然而現(xiàn)在有好多不法分子為了謀取利益，將罌粟殼或其浸提物添加到香辛料、調(diào)味料、火鍋料或餐飲食品中，使食物味道鮮美。罌粟殼含有嗎啡等生物堿類物質(zhì)，易使人體產(chǎn)生依賴性而造成癮癖，同時(shí)也能防止吃到不新鮮食物引起的腹痛，長(zhǎng)期食用含有罌粟殼的食物，會(huì)導(dǎo)致慢性中毒，出現(xiàn)發(fā)冷、出虛汗、乏力、面黃肌瘦、犯困等癥狀，嚴(yán)重時(shí)可能對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)造成損害，引起精神失常，出現(xiàn)幻覺(jué)，有時(shí)甚至?xí)粑Ｖ苟劳?。?008年以來(lái)，衛(wèi)計(jì)委先后公布了6批食品非法添加物質(zhì)目錄，罌粟殼被列入了第一批食品非法添加物質(zhì)目錄中。對(duì)于罌粟殼生物堿類物質(zhì)的檢測(cè)，目前只發(fā)布了上海市的地方標(biāo)準(zhǔn)(db312010-2012)，對(duì)罌粟殼生物堿類物質(zhì)快速檢測(cè)方法(酶聯(lián)免疫法)也有相關(guān)應(yīng)用；市售香辛料大部分以數(shù)種香料或調(diào)味料物質(zhì)按一定比例混合構(gòu)成，基體的干擾使得在分析檢測(cè)時(shí)不能簡(jiǎn)單的采用純品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)來(lái)檢測(cè)校準(zhǔn)或進(jìn)行質(zhì)量控制，需要一定帶基體的參考物質(zhì)來(lái)協(xié)助檢測(cè)才能保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性或滿足要求；目前無(wú)公開(kāi)文獻(xiàn)介紹含有罌粟殼的陽(yáng)性、陰性香辛料參考物質(zhì)的制備技術(shù)或相近技術(shù)，因此制備相關(guān)參考物質(zhì)對(duì)于檢測(cè)方法的開(kāi)發(fā)、檢測(cè)過(guò)程的質(zhì)量控制、實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證、實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)及在快速檢測(cè)領(lǐng)域用于快速檢測(cè)過(guò)程中對(duì)快檢產(chǎn)品進(jìn)行有效性驗(yàn)證及質(zhì)量控制等具有重要意義。參考物質(zhì)必須具備的基本條件之一是該物質(zhì)應(yīng)具有良好的均勻性，對(duì)于固態(tài)粉末樣品，其均勻性檢查為最重要的一環(huán)，均勻性差是目前制備固態(tài)標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)所遇到的一個(gè)棘手問(wèn)題。雖然我們不可能達(dá)到使固態(tài)粉末樣品絕對(duì)均勻，但仍要求它達(dá)到一定標(biāo)準(zhǔn)的均勻性。只有在確認(rèn)了標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的均勻性后，其分析定值工作才有意義。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種含有罌粟殼的陽(yáng)性香辛料參考物質(zhì)，該參考物質(zhì)均勻性良好，穩(wěn)定性強(qiáng)，可在常溫下長(zhǎng)期保存。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種含有罌粟殼的陰性香辛料參考物質(zhì)，該參考物質(zhì)均勻性良好，穩(wěn)定性強(qiáng)，可在常溫下長(zhǎng)期保存。本發(fā)明的還有一個(gè)目的是提供一種含有罌粟殼的陽(yáng)性、陰性香辛料參考物質(zhì)的制備方法，該方法簡(jiǎn)單，可操作性強(qiáng)。本發(fā)明提供的一個(gè)技術(shù)方案為，一種含有罌粟殼的陽(yáng)性香辛料參考物質(zhì)，該參考物質(zhì)由包括以下步驟的方法制備，該方法包括：a)基體粉末的制備：將基質(zhì)材料干燥、混合、粉碎和過(guò)篩；b)罌粟殼粉末的制備：將罌粟殼干燥、粉碎、過(guò)篩；c)參考物質(zhì)的制備：將基體粉末和罌粟殼粉末一次混合、二次干燥、二次過(guò)篩和二次混合，其特征在于：(1)所述的干燥為微波干燥，微波干燥處理后的物料的水分含量＜5wt％；(2)步驟c)所述的基體粉末與罌粟殼粉末一次混合時(shí)加入抗結(jié)劑?；w粉末、罌粟殼粉末或制備的參考物質(zhì)的水分含量小于5wt％，防止粉碎后基質(zhì)材料和罌粟殼結(jié)塊以及確保粉碎后的粉末的流動(dòng)性。優(yōu)選地，加入的抗結(jié)劑為sio2，抗結(jié)劑可以防止基體粉末和罌粟殼粉末聚集結(jié)塊，保持其松散或自由流動(dòng)，并且不影響對(duì)生物堿類物質(zhì)的檢測(cè)。更優(yōu)選地，所述參考物質(zhì)中的抗結(jié)劑sio2的含量為0.5wt％。進(jìn)一步優(yōu)選地，其粒徑為：8～12μm。本發(fā)明根據(jù)對(duì)不同香辛料及罌粟殼的干燥條件進(jìn)行試驗(yàn)研究，在微波功率0.5kw時(shí)，將1kg物料干燥5min，干燥速度快，能很好的保持基質(zhì)材料和罌粟殼的原始狀態(tài)，有利于其粉碎，也能提高后期的混合效率。優(yōu)選地，所述的過(guò)篩使用的篩為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)r40/3，目數(shù)為50～65目?？奢^好的將物料混合均勻，且能提高后期二次混合后的物料干燥效率，篩目數(shù)大于65目物料粉末難以混合均勻且混合后均勻性較差，篩目數(shù)小于50目物料粉末不易混合均勻。本發(fā)明中步驟c)中所述的基體粉末與罌粟殼粉末一次混合采用三步混合法，罌粟殼粉末與基體粉末初次混合的質(zhì)量比大于初次混合的產(chǎn)物與基體粉末再次混合的質(zhì)量比，將再次混合的產(chǎn)物與基體粉末最后混合成目標(biāo)質(zhì)量比值的參考物質(zhì)，初次混合的產(chǎn)物與基體粉末的再次混合的質(zhì)量比≥1:10，最后根據(jù)罌粟殼生物堿的含量與參考物質(zhì)中設(shè)定的罌粟殼生物堿的含量，按一定比例最后混合；優(yōu)選地，罌粟殼粉末與基體粉末初次混合的質(zhì)量比為1:5，初次混合的產(chǎn)物與基體粉末再次混合的質(zhì)量比為1:10，最后根據(jù)罌粟殼生物堿的含量與參考物質(zhì)中設(shè)定的罌粟殼生物堿的含量，按一定比例最后混合，這種方式能夠使混合的均勻程度達(dá)到最大化。本發(fā)明中加入拮抗劑的步驟可以是在初次混合、再次混合或最后混合中的過(guò)程中加入。本發(fā)明中的罌粟殼粉末與基體粉末混合的質(zhì)量比根據(jù)要求制備的目標(biāo)參考物質(zhì)中生物堿(嗎啡、可待因、蒂巴因、罌粟堿、那可丁)中的某一種生物堿要求含量而制備。例如要求制備的目標(biāo)參考物質(zhì)的嗎啡的含量為310μg/kg，根據(jù)罌粟殼粉末中嗎啡的含量為0.09wt％，進(jìn)行質(zhì)量換算，確定罌粟殼粉末與基體粉末混合的質(zhì)量比。由于系統(tǒng)誤差本發(fā)明中的要求制備的目標(biāo)參考物質(zhì)的生物堿的含量與制備的參考物質(zhì)的生物堿的含量接近。db31/2010-2012《食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的檢出限分別為8μg/kg、40μg/kg、8μg/kg、40μg/kg、8μg/kg，定量限分別為25μg/kg、125μg/kg、25μg/kg、125μg/kg、25μg/kg。根據(jù)上述生物堿的檢出限與定量限可知，由基體粉末與罌粟殼粉末混合的最大質(zhì)量比值制備的參考物質(zhì)中的待測(cè)生物堿的含量應(yīng)大于或等于檢出限(定量限)。根據(jù)實(shí)際測(cè)定的要求確定目標(biāo)參考物質(zhì)的生物堿的含量的下限是檢出限還是定量限。步驟c)所述的一次混合方法為：三維混合，轉(zhuǎn)速40r/min，混合時(shí)間2h。三維混合儀器設(shè)備廠家：常州海堯干燥設(shè)備有限公司，型號(hào)syh-5。本發(fā)明提供的另一個(gè)技術(shù)方案為，一種含有罌粟殼的陰性香辛料參考物質(zhì)，該參考物質(zhì)由包括以下步驟的方法制備，該方法包括：a)基體粉末的制備：將基質(zhì)材料干燥、混合、粉碎和過(guò)篩；b)參考物質(zhì)的制備：將基體粉末與抗結(jié)劑一次混合、二次干燥、二次過(guò)篩和二次混合，其特征在于：(1)所述的干燥為微波干燥，微波干燥處理后物料的水分含量＜5wt％；香辛料，利用植物的種子、花蕾、葉莖、花蕾、根塊等，或其提取物，具有刺激性香味，能夠賦予食物以風(fēng)味，增進(jìn)食欲，幫助消化和吸收的作用。本發(fā)明所述的基質(zhì)材料為可以制備香辛料的植物的種子、花蕾、葉莖、花蕾、根塊等，或其提取物。本發(fā)明所述的基體粉末的制備使用多種基質(zhì)材料為原材料。本發(fā)明中制備的含有罌粟殼的陰性香辛料參考物質(zhì)即為參考物質(zhì)中不含有罌粟殼，制備方法中與制備含有罌粟殼的陽(yáng)性香辛料參考物質(zhì)相同的步驟的優(yōu)選條件相同。本發(fā)明提供的又一個(gè)技術(shù)方案為，本發(fā)明所述的含罌粟殼的陽(yáng)性香辛料參考物質(zhì)的制備方法包括：a)基體粉末的制備：干燥、混合、粉碎和過(guò)篩；b)罌粟殼粉末的制備：干燥、粉碎、過(guò)篩；c)參考物質(zhì)的制備：將基體粉末和罌粟殼粉末一次混合、二次干燥、二次過(guò)篩和二次混合，其特征在于：(1)所述的干燥為微波干燥，微波干燥處理后的物料水分含量＜5wt％；(2)步驟c)所述的基體粉末與所述的罌粟殼粉末一次混合時(shí)加入抗結(jié)劑。本發(fā)明所述的含罌粟殼的陽(yáng)性香辛料參考物質(zhì)的制備方法的優(yōu)選條件與制備的含有罌粟殼的陽(yáng)性香辛料參考物質(zhì)相同的步驟的優(yōu)選條件相同。本發(fā)明所述的含有罌粟殼的陰性香辛料參考物質(zhì)的制備方法，該方法包括：a)基體粉末的制備：將基質(zhì)材料干燥、混合、粉碎和過(guò)篩；b)參考物質(zhì)的制備：將基體粉末與抗結(jié)劑一次混合、二次干燥、二次過(guò)篩和二次混合，其特征在于：(1)所述的干燥為微波干燥，微波干燥處理后物料的水分含量＜5wt％；本發(fā)明所述的含罌粟殼的陰性香辛料參考物質(zhì)的制備方法的優(yōu)選條件與制備的含有罌粟殼的陰性香辛料參考物質(zhì)相同的步驟的優(yōu)選條件相同。本發(fā)明中對(duì)由上述步驟制備完成的參考物質(zhì)進(jìn)行如下步驟：(a)均勻性檢驗(yàn)：將二次混合后的樣品進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)；(b)分裝：采用普通西林瓶充氮包裝；(c)殺菌：采用輻照殺菌法對(duì)樣品進(jìn)行殺菌；(d)均勻性實(shí)驗(yàn)與穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)；(e)定值及不確定評(píng)估。其中所述的殺菌條件為：輻射源為鈷60，輻照強(qiáng)度10kgy，輻照時(shí)間24h。本發(fā)明中制備含罌粟殼陽(yáng)性香辛料參考物質(zhì)的一次混合、二次混合分別指基體粉末、罌粟殼粉末和抗結(jié)劑的一次混合、二次混合；二次干燥是相對(duì)于罌粟殼粉末的制備、基體材料的制備中的干燥；二次過(guò)篩是相對(duì)于罌粟殼粉末的制備、基體材料的制備中的過(guò)篩。本發(fā)明中制備含罌粟殼陰性香辛料參考物質(zhì)的一次混合、二次混合分別指基體粉末和抗結(jié)劑的一次混合、二次混合；二次干燥是相對(duì)于基體材料的制備中的干燥；二次過(guò)篩是相對(duì)于基體材料的制備中的過(guò)篩。本發(fā)明提供的一種含罌粟殼的陽(yáng)性、陰性香辛料參考物質(zhì)，在日常分析檢測(cè)中可用于分析檢測(cè)過(guò)程的質(zhì)量控制，解決分析檢測(cè)過(guò)程中遇到的問(wèn)題，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，也可用于檢測(cè)方法的開(kāi)發(fā)、實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證、實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)及在快速檢測(cè)領(lǐng)域用于快速檢測(cè)過(guò)程中對(duì)快檢產(chǎn)品進(jìn)行有效性驗(yàn)證及質(zhì)量控制。本發(fā)明提供的香辛料參考物質(zhì)均勻性良好，穩(wěn)定性強(qiáng)，可在常溫下長(zhǎng)期保存，適用范圍廣。制備方法簡(jiǎn)單，可操作性強(qiáng)。附圖說(shuō)明圖1為制備含罌粟殼的陽(yáng)性香辛料參考物質(zhì)工藝流程圖。圖2為制備含罌粟殼的陰性香辛料參考物質(zhì)工藝流程圖。具體實(shí)施方式1、基體粉末制備：根據(jù)市售香辛料、調(diào)味料的配方，取用新鮮干燥，具有本身特有氣味和無(wú)霉變的原料小茴香、八角茴香、桂皮、肉蔻、花椒(去籽)、白胡椒、干姜、陳皮、丁香、孜然、甘草，除去雜質(zhì)，微波干燥，干燥條件為1kg基質(zhì)材料，功率0.5kw，干燥時(shí)間為5min，干燥后按gb5009.3-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中水分的測(cè)定》檢測(cè)水分含量，使干燥后的基質(zhì)材料水分含量控制在5wt％以下；將干燥好的基質(zhì)材料按一定比例混合，根據(jù)市售香辛料、調(diào)味料的混合比例以及最大限度的覆蓋所有基質(zhì)材料，調(diào)整基質(zhì)材料用量及比例見(jiàn)表1；混合后粉碎；粉碎后過(guò)40目篩，制備好的基體粉末進(jìn)行檢驗(yàn)，以確保其不含罌粟殼生物堿類物質(zhì)(嗎啡、可待因、蒂巴因、罌粟堿、那可丁)。表1：基質(zhì)材料用量2、罌粟殼的處理：取用一定量的罌粟殼，除去雜質(zhì)，微波干燥，干燥條件為1kg基質(zhì)材料，功率0.5kw，干燥時(shí)間為5min，使干燥后的罌粟殼水分含量控制在5wt％以下，粉碎，粉碎后過(guò)40目篩，依據(jù)db312010-2012方法對(duì)制備好的材料進(jìn)行生物堿類物質(zhì)的含量檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果為：?jiǎn)岱群繛?.09wt％，可待因含量為0.27wt％，蒂巴因含量為0.27wt％，罌粟堿含量為0.04wt％，那可丁含量為0.03wt％。3、一次混合：根據(jù)罌粟殼生物堿的含量，稱量3g罌粟殼粉末，3kg基體粉末，將基體粉末與罌、粟殼粉末按5:1比例進(jìn)行初次混合，混合均勻后的樣品與基體粉末以1:10的比例再次混合，混合均勻后的樣品與剩余的基體粉末混合，根據(jù)混合后參考物質(zhì)的總量按0.5wt％的比例加入sio2抗拮劑，混合均勻。對(duì)混合方法進(jìn)行了試驗(yàn)研究，在混合時(shí)的最大混合比例為1:10，研究方法為混合方法為：三維混合，40r/min，混合2h。儀器設(shè)備廠家：常州海堯干燥設(shè)備有限公司，型號(hào)syh-5。4、二次干燥、二次過(guò)篩、二次混合：對(duì)混合均勻的參考物質(zhì)進(jìn)行二次干燥，使干燥后的基體粉末水分含量控制在5wt％以下，干燥后過(guò)40目篩，進(jìn)行二次混合，混合方法為：三維混合，40r/min，混合2h。5、分裝：采用普通西林瓶充氮包裝，進(jìn)行編號(hào)，每瓶裝10g，總數(shù)為200瓶。6、殺菌：采用輻照殺菌法對(duì)樣品進(jìn)行殺菌，殺菌條件為：輻照源鈷60，輻照劑量10kgy，輻照時(shí)間24h。7、均勻性檢驗(yàn)：按照gb/t15000.5-1994標(biāo)準(zhǔn)對(duì)參考物質(zhì)進(jìn)行均勻性實(shí)驗(yàn)，使用的檢測(cè)方法為：db312010-2012《食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》檢測(cè)，檢測(cè)條件為：(1)色譜條件：儀器：waters超高效液質(zhì)聯(lián)用儀quattropremierxe色譜柱：behhilic流動(dòng)相：乙腈+含0.1％甲酸的10mmol/l甲酸銨溶液鞘氣溫度：400℃色譜梯度洗脫條件：時(shí)間(分鐘)流動(dòng)相a流動(dòng)相b090100.39010180202.580203901069010均勻性檢驗(yàn)的總體樣本數(shù)共200個(gè)，順序編號(hào)后按總體樣本數(shù)n的3×n1/3隨機(jī)抽取15個(gè)樣品進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)，每個(gè)樣品在重復(fù)條件下檢測(cè)3次為一組，共15組數(shù)據(jù)，采用單因素方差分析方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算組內(nèi)的均方差與組間均方差，以及各自的自由度，顯著性水平α，按方差檢驗(yàn)給定的計(jì)算方法計(jì)算統(tǒng)計(jì)量f，通過(guò)查gb/t15000.5-1994附錄b，找出臨界值f，進(jìn)行比較，做出結(jié)論。計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表2～6，由表可以看出，均勻性實(shí)驗(yàn)所得的f值均小于通過(guò)查gb/t15000.5-1994附錄b，找出的臨界值fa(14，30)，表明樣品間不存在顯著性差異，證明所得的樣本是均勻的。表2：可待因均勻性檢驗(yàn)結(jié)果及方差分析結(jié)果表3：蒂巴因均勻性檢驗(yàn)結(jié)果及方差分析結(jié)果表4：?jiǎn)岱染鶆蛐詸z驗(yàn)結(jié)果及方差分析結(jié)果表5：罌粟堿均勻性檢驗(yàn)結(jié)果及方差分析結(jié)果表6：那可丁均勻性檢驗(yàn)結(jié)果及方差分析結(jié)果計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表2～6，由表可以看出，均勻性實(shí)驗(yàn)所得的f值均小于通過(guò)查gb/t15000.5-1994附錄b，找出的臨界值fa(14，30)，表明樣品間不存在顯著性差異，證明所得的樣本是均勻的。8、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)依據(jù)gb/t15000.3-2008，參考物質(zhì)在進(jìn)行定值時(shí)，需考慮長(zhǎng)期穩(wěn)定性(有效期)與短期穩(wěn)定性(運(yùn)輸條件下參考物質(zhì)的穩(wěn)定性)，因該參考物質(zhì)為常溫保存，可不考慮短期穩(wěn)定性，只考察長(zhǎng)期穩(wěn)定性。實(shí)驗(yàn)方法：在對(duì)參考物質(zhì)分裝完后、一個(gè)月、二個(gè)月、三個(gè)月、四個(gè)月、六個(gè)月、八個(gè)月、十個(gè)月、十二個(gè)月考察穩(wěn)定性，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)抽取3個(gè)樣品，每個(gè)樣品平行測(cè)定2次，以三瓶樣品的總平均值為該時(shí)間穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果，0個(gè)月檢驗(yàn)結(jié)果使用均勻性檢驗(yàn)結(jié)果的總平均值；檢測(cè)方法與均勻性研究檢驗(yàn)方法一致。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法依據(jù)gb/t15000.3-2008采用線性擬合方程模型為穩(wěn)定性研究基本模型，可表示為：y＝β0+β1x+ε式中：x——時(shí)間；y——參考物質(zhì)的特性量值；β0、β1——回歸系數(shù)；ε——隨機(jī)誤差分量。對(duì)于穩(wěn)定性較好的樣品，β0為測(cè)定得到的值，β1期望值為0，x與y之間的線性關(guān)系可用t檢驗(yàn)法進(jìn)行檢驗(yàn)，具體計(jì)算方法如下：直線斜率的計(jì)算：截距的計(jì)算：直線上點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)偏差的計(jì)算：與斜率相關(guān)的不確定度的計(jì)算：計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表7～11，查gb/t15000.5-1994附錄f，得自由度為6，置信水平為0.95的t因子為2.48，由計(jì)算結(jié)果可以看出，|b1|＜t0.95，6×s(b1)，故斜率是不顯著的，因而說(shuō)明樣品在14個(gè)月期間有良好的穩(wěn)定性。表7：可待因穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果及分析結(jié)果表8：蒂巴因穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果及分析結(jié)果表9：?jiǎn)岱确€(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果及分析結(jié)果表10：罌粟堿穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果及分析結(jié)果表11：那可丁穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果及分析結(jié)果計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表7～11，查gb/t15000.5-1994附錄f，得自由度為6，置信水平為0.95的t因子為2.48，由計(jì)算結(jié)果可以看出，|b1|＜t0.95，6×s(b1)，故斜率是不顯著的，因而說(shuō)明樣品在14個(gè)月期間有良好的穩(wěn)定性。9、定值及不確定度評(píng)估。參考物質(zhì)的定值由10個(gè)認(rèn)可實(shí)驗(yàn)室協(xié)作完成，采用的方法為：db312010-2012《食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，檢測(cè)數(shù)據(jù)見(jiàn)表12～16。對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析：(1)柯克倫檢驗(yàn)先利用柯克倫檢驗(yàn)，對(duì)其標(biāo)準(zhǔn)差的最大值進(jìn)行檢驗(yàn)，查看是否有離群數(shù)據(jù)，要求所有標(biāo)準(zhǔn)差都是在重復(fù)條件下獲得，且由相同數(shù)目計(jì)算結(jié)果得出?？驴藗悪z驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量：其結(jié)果判定規(guī)則為：實(shí)驗(yàn)室數(shù)p＝10，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室測(cè)定數(shù)n＝3，查柯克倫檢驗(yàn)5％的臨界值為0.445，1％的臨界值為0.536。對(duì)于可待因，2號(hào)實(shí)驗(yàn)室與4號(hào)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)偏差最大，柯克倫檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量對(duì)于蒂巴因，5號(hào)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)偏差最大，柯克倫檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量對(duì)于嗎啡，5號(hào)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)偏差最大，柯克倫檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量對(duì)于罌粟堿，6號(hào)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)偏差最大，柯克倫檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量對(duì)于那可丁，3號(hào)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)偏差最大，柯克倫檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量由以上計(jì)算結(jié)果可以看出，5個(gè)指標(biāo)的檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量c≤c(5％)，則10個(gè)實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)結(jié)果全部通過(guò)柯克倫檢驗(yàn)。(2)對(duì)10個(gè)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)均值進(jìn)行單值格拉布斯檢驗(yàn)利用單格拉布斯檢驗(yàn)分析10個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果平均值之間的變異，格拉布斯檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量計(jì)算公式gp為：或式中：g1p(g11)——平均值中最大值(最小值)統(tǒng)計(jì)量；x(1p)(x(11))——平均值最大值(最小值)；——總平均值；s——平均值標(biāo)準(zhǔn)偏差。其結(jié)果判定規(guī)則為：實(shí)驗(yàn)室數(shù)p＝10，查格拉布速檢驗(yàn)的臨界值表，g(5％)的臨界值為2.290，g(1％)的臨界值為2.482。對(duì)于可待因，按上述公式計(jì)算得：g1p＝1.398，g11＝1.398；對(duì)于蒂巴因，按上述公式計(jì)算得：g1p＝1.091，g11＝1.273；對(duì)于嗎啡，按上述公式計(jì)算得：g1p＝1.410，g11＝1.586；對(duì)于罌粟堿，按上述公式計(jì)算得：g1p＝1.730，g11＝1.730；對(duì)于那可丁，按上述公式計(jì)得：g1p＝1.835，g11＝1.223；由以上計(jì)算結(jié)果可以看出，5個(gè)指標(biāo)的g1＜c(5％)，所有數(shù)據(jù)的均值可保留參加雙值格拉布斯檢驗(yàn)。(3)對(duì)10個(gè)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)均值進(jìn)行雙值格拉布斯檢驗(yàn)雙格拉布斯檢驗(yàn)量g2p的計(jì)算公式為：其中：g2p是檢驗(yàn)最大的兩個(gè)值是否為離群值，g21是檢驗(yàn)最小的兩個(gè)值是否為離群值，s(p-1，p)2為p個(gè)數(shù)據(jù)去除最大兩個(gè)值后的方差，s(1，2)2為p個(gè)數(shù)據(jù)去除最小兩個(gè)值后的方差，s02為原數(shù)組方差。其結(jié)果判定規(guī)則為：實(shí)驗(yàn)室數(shù)p＝10，查格拉布速檢驗(yàn)的臨界值表，g(5％)的臨界值為0.0.1864，g(1％)的臨界值為0.1150。對(duì)于可待因，按上述公式計(jì)算得：g2p＝0.9473，g21＝0.8070；對(duì)于蒂巴因，按上述公式計(jì)算得：g2p＝0.8914，g21＝0.7074；對(duì)于嗎啡，按上述公式計(jì)算得：g2p＝0.8982，g21＝0.8014；對(duì)于罌粟堿，按上述公式計(jì)算得：g2p＝0.8807，g21＝0.6456；對(duì)于那可丁，按上述公式計(jì)得：g2p＝0.7608，g21＝0.8974；由以上計(jì)算結(jié)果可以看出，5個(gè)指標(biāo)的g2≥g(5％)，所有數(shù)據(jù)均為正確值，均可保留并參與定值。表12：可待因定值結(jié)果表13：蒂巴因定值結(jié)果表14：?jiǎn)岱榷ㄖ到Y(jié)果表15：罌粟堿定值結(jié)果表16：那可丁定值結(jié)果10、不確定度評(píng)估：本批參考物質(zhì)采用的定值方式是由10家實(shí)驗(yàn)室協(xié)同定值的方案，引入的不確定度主要包括四個(gè)方面：1、短期穩(wěn)定性引入的不確定度；2、測(cè)定值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度μchar；3、瓶間差異引入的不確定度μbb；4、長(zhǎng)期穩(wěn)定性引入的不確定度μlts。本批參考物質(zhì)定值方式是協(xié)同定值，短期穩(wěn)定性引入的不確定度已包含在實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)值中，故可忽略不計(jì)。①測(cè)定值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度檢測(cè)數(shù)據(jù)經(jīng)柯克倫檢驗(yàn)與格拉布斯檢驗(yàn)分析，所有數(shù)據(jù)均可保留并參與最終定值，參考物質(zhì)的定值即為平均值的均值，與平均值的均值有關(guān)的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定計(jì)算方式為：其中：——實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果總平均值；yi——實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果平均值；p——實(shí)驗(yàn)室數(shù)；s——平均值標(biāo)準(zhǔn)偏差。由表12～16可計(jì)算測(cè)定值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度，計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表16。②瓶間差異引入的不確定度μbb在對(duì)樣品均勻性研究中，瓶間均勻性已被驗(yàn)證，統(tǒng)計(jì)方法采用單因素方差分析，由下列公式計(jì)算瓶間差異引入的不確定度μbb：瓶間方差計(jì)算：瓶間標(biāo)準(zhǔn)偏差：重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差：由瓶間均勻度引入的不確定度：由表2～6可計(jì)算瓶間差異引入的不確定度，計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表16。③長(zhǎng)期穩(wěn)定性引入的不確定度μlts穩(wěn)定性數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用線性擬合方程模型，由穩(wěn)定性研究結(jié)果表明，在14個(gè)月期間樣品是穩(wěn)定均勻的，故由長(zhǎng)期穩(wěn)定性引入的不確定度μlts可按下式計(jì)算：ults＝sb×t由表7～11計(jì)算的sb帶入公式計(jì)算得μlts，計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表16。④合成不確定度合成不確定度是通過(guò)對(duì)參考物質(zhì)的定值、均勻性和穩(wěn)定性對(duì)特性值對(duì)總不確定度的貢獻(xiàn)來(lái)計(jì)算的，計(jì)算方式見(jiàn)下表：其中置信水平為95％時(shí)，k＝2，本批參考物質(zhì)定值方式是協(xié)同定值，短期穩(wěn)定性引入的不確定度已包含在實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)值中，故此處μsts＝0，計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表16。表16：不確定度評(píng)定表名稱μcharμbbμltsμcrm可待因2.041.2210.220.9蒂巴因1.741.058.9818.4嗎啡1.791.187.9916.5罌粟堿0.9141.136.1512.6那可丁1.030.8567.7715.811、測(cè)定結(jié)果本發(fā)明參考物質(zhì)最終確定標(biāo)準(zhǔn)值由定值的總平均值與不確定度組成，結(jié)果為可待因：907±20.9μg/kg，蒂巴因：918±18.4μg/kg，嗎啡：315±16.5μg/kg，罌粟堿171±12.6μg/kg，那可丁139±15.8μg/kg；參考物質(zhì)的穩(wěn)定性只研究至14個(gè)月，則暫定其保質(zhì)期為14個(gè)月，如材料的穩(wěn)定性得到進(jìn)一步證明，則有效期還可延長(zhǎng)。當(dāng)前第1頁(yè)12