本發(fā)明涉及液相色譜測(cè)定方法、液相色譜測(cè)定裝置和液相色譜測(cè)定程序存儲(chǔ)介質(zhì)，特別涉及血液等生物試樣的分析中使用的液相色譜測(cè)定方法、液相色譜測(cè)定裝置和液相色譜測(cè)定程序存儲(chǔ)介質(zhì)。

背景技術(shù)：

以往，提出了利用液相色譜法對(duì)例如血液等測(cè)定試樣的糖化血紅蛋白(hba1c)和變異hb進(jìn)行測(cè)定的方法(例如參照專利文獻(xiàn)1和非專利文獻(xiàn)1)。

以往，在對(duì)測(cè)定試樣的糖化血紅蛋白(hba1c)進(jìn)行測(cè)定的情況下，在檢測(cè)變異血紅蛋白、將其分離或除去來(lái)測(cè)定hba1c和變異血紅蛋白這兩者的情況(變體模式)以及主要測(cè)定血紅蛋白a1c的情況(快速模式)下，通常是使用分開(kāi)的測(cè)定裝置來(lái)進(jìn)行測(cè)定或者更換分析柱來(lái)進(jìn)行測(cè)定。這是因?yàn)?，特別是配管中的洗脫液的濃度等條件對(duì)測(cè)定的精度產(chǎn)生影響，因此，在各個(gè)情況下需要使用不同的洗脫液進(jìn)行測(cè)定。因此，以往，在液相色譜裝置中，即使是能夠進(jìn)行快速模式和變體模式的測(cè)定的裝置，在變更測(cè)定模式的情況下，也需要柱和配管內(nèi)的清洗工序和平衡化工序。具體而言，在變更測(cè)定模式的情況下，在測(cè)定模式結(jié)束時(shí)在終止程序中對(duì)柱和配管內(nèi)進(jìn)行清洗后變更測(cè)定模式。而且，在變更后的測(cè)定模式中，實(shí)施用于使柱和配管內(nèi)達(dá)到平衡狀態(tài)的開(kāi)始程序。以往，對(duì)于多個(gè)測(cè)定試樣切換多個(gè)測(cè)定模式，不能在不追加多余工序的情況下連續(xù)地進(jìn)行測(cè)定。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)1：日本特開(kāi)2009-236768號(hào)公報(bào)

非專利文獻(xiàn)

非專利文獻(xiàn)1：bio-rad公司“variantiidualprogram”的目錄

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明所要解決的問(wèn)題

如上所述，在變更測(cè)定模式的情況下，需要柱和配管內(nèi)的清洗工序和平衡化工序，因此，洗脫液的使用量增多，并且測(cè)定時(shí)間也變成長(zhǎng)時(shí)間。另外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了如下問(wèn)題：在1臺(tái)液相色譜裝置中，在對(duì)多個(gè)測(cè)定試樣切換變體模式和快速模式而連續(xù)地進(jìn)行測(cè)定的情況下，有時(shí)僅在變體模式下使用的洗脫液會(huì)對(duì)其下一個(gè)測(cè)定產(chǎn)生影響，有時(shí)使hba1c的保留時(shí)間(retentiontime)產(chǎn)生偏移。該問(wèn)題在1臺(tái)液相色譜裝置中在主要僅執(zhí)行變體模式和快速模式中的任一者的情況下并不怎么成為問(wèn)題。

但是，在1臺(tái)液相色譜裝置中切換兩個(gè)測(cè)定模式而連續(xù)地執(zhí)行的情況下，如果測(cè)定的hba1c的保留時(shí)間存在偏移，則存在如下問(wèn)題：在使用者基于hba1c的保留時(shí)間來(lái)鑒定hba1c的峰時(shí)產(chǎn)生混亂，或者在液相色譜裝置中確定hba1c的峰的過(guò)程變得復(fù)雜。因此，在1臺(tái)液相色譜裝置中切換兩個(gè)測(cè)定模式來(lái)執(zhí)行的情況下，需要設(shè)置充分的切換時(shí)間，難以縮短測(cè)定時(shí)間。

本發(fā)明的目的在于提供在切換多個(gè)測(cè)定模式來(lái)測(cè)定hba1c的情況下能夠抑制hba1c的保留時(shí)間產(chǎn)生偏移并且能夠縮短測(cè)定時(shí)間的液相色譜測(cè)定方法、液相色譜測(cè)定裝置和液相色譜測(cè)定程序存儲(chǔ)介質(zhì)。

用于解決問(wèn)題的方法

本發(fā)明的液相色譜測(cè)定方法的一個(gè)方式包含：

使用液相色譜法，切換通過(guò)將第一成分分離用洗脫液、第二成分分離用洗脫液和清洗用洗脫液依次輸送至分析柱來(lái)對(duì)測(cè)定試樣的血紅蛋白a1c和變異血紅蛋白進(jìn)行測(cè)定的第一測(cè)定模式與通過(guò)將所述第一成分分離用洗脫液和所述清洗用洗脫液依次輸送至所述分析柱來(lái)對(duì)所述血紅蛋白a1c進(jìn)行測(cè)定的第二測(cè)定模式的工序；

以使所述第一測(cè)定模式下的所述血紅蛋白a1c的第一保留時(shí)間與所述第二測(cè)定模式下的所述血紅蛋白a1c的第二保留時(shí)間相同的方式，在所述第一測(cè)定模式中所述第二成分分離用洗脫液的影響消失之前，輸送所述清洗用洗脫液的工序；以及

在所述清洗用洗脫液之后，輸送所述第一成分分離用洗脫液的工序。

由此，在一個(gè)方式中，在切換多個(gè)測(cè)定模式來(lái)測(cè)定hba1c的情況下，能夠抑制hba1c的保留時(shí)間產(chǎn)生偏移，并且能夠縮短測(cè)定時(shí)間。需要說(shuō)明的是，“保留時(shí)間相同”不僅是兩者完全相同的情況，而且，即使保留時(shí)間具有差，如果為±5％以內(nèi)的差，則也包含在“相同”中。

另外，本發(fā)明的一個(gè)方式中，所述第一測(cè)定模式下的輸送所述清洗用洗脫液后的輸送所述第一成分分離用洗脫液的送液時(shí)間比所述第二測(cè)定模式下的輸送所述清洗用洗脫液后的輸送所述第一成分分離用洗脫液的送液時(shí)間長(zhǎng)。

另外，本發(fā)明的一個(gè)方式中，使兩測(cè)定份的低濃度用校準(zhǔn)器和高濃度用校準(zhǔn)器中的一個(gè)校準(zhǔn)器保持于能夠保持至少兩測(cè)定份以上的所述測(cè)定試樣的保持單元中，執(zhí)行所述第一測(cè)定模式和所述第二測(cè)定模式的校準(zhǔn)，

使兩測(cè)定份的低濃度用校準(zhǔn)器和高濃度用校準(zhǔn)器中的另一個(gè)校準(zhǔn)器保持于所述保持單元中，執(zhí)行所述第一測(cè)定模式和所述第二測(cè)定模式的校準(zhǔn)。

另外，本發(fā)明的液相色譜測(cè)定裝置的一個(gè)方式包含：

使用液相色譜法，切換通過(guò)將第一成分分離用洗脫液、第二成分分離用洗脫液和清洗用洗脫液依次輸送至分析柱來(lái)對(duì)測(cè)定試樣的血紅蛋白a1c和變異血紅蛋白進(jìn)行測(cè)定的第一測(cè)定模式與通過(guò)將所述第一成分分離用洗脫液和所述清洗用洗脫液依次輸送至所述分析柱來(lái)對(duì)所述血紅蛋白a1c進(jìn)行測(cè)定的第二測(cè)定模式的切換單元；

以使所述第一測(cè)定模式下的所述血紅蛋白a1c的第一保留時(shí)間與所述第二測(cè)定模式下的所述血紅蛋白a1c的第二保留時(shí)間相同的方式，在所述第一測(cè)定模式中所述第二成分分離用洗脫液的影響消失之前，輸送所述清洗用洗脫液的第一送液?jiǎn)卧?；以?/p>

在所述清洗用洗脫液之后，輸送所述第一成分分離用洗脫液的第二送液?jiǎn)卧?/p>

由此，在一個(gè)方式中，在切換多個(gè)測(cè)定模式來(lái)測(cè)定hba1c的情況下，能夠抑制hba1c的保留時(shí)間產(chǎn)生偏移，并且能夠縮短測(cè)定時(shí)間。

另外，本發(fā)明的一個(gè)方式中，所述第一測(cè)定模式下的輸送所述清洗用洗脫液后的輸送所述第一成分分離用洗脫液的送液時(shí)間比所述第二測(cè)定模式下的輸送所述清洗用洗脫液后的輸送所述第一成分分離用洗脫液的送液時(shí)間長(zhǎng)。

本發(fā)明的一個(gè)方式中，用于過(guò)濾所述測(cè)定試樣、所述第一成分分離用洗脫液、所述第二成分分離用洗脫液和所述清洗用洗脫液的預(yù)濾器與所述分析柱成為一體化。

由此，在一個(gè)方式中，例如能夠減小預(yù)濾器的連接部分中的死體積、配管的容量，能夠減小裝置間差異。在不進(jìn)行測(cè)定模式的切換的情況下，這樣的裝置間差異，即使放置也不會(huì)特別產(chǎn)生問(wèn)題，但在進(jìn)行測(cè)定模式的切換的裝置中，這樣的裝置間差異會(huì)對(duì)保留時(shí)間的偏移產(chǎn)生影響。因此，從減小保留時(shí)間的偏移的觀點(diǎn)考慮，使上述預(yù)濾器與分析柱一體化是有利的。

本發(fā)明的一個(gè)方式的液相色譜測(cè)定程序存儲(chǔ)介質(zhì)是存儲(chǔ)有用于使計(jì)算機(jī)執(zhí)行液相色譜測(cè)定處理的程序的非暫時(shí)性(non-transitory)存儲(chǔ)介質(zhì)，其中，所述液相色譜測(cè)定處理包含：

使用液相色譜法，切換通過(guò)將第一成分分離用洗脫液、第二成分分離用洗脫液和清洗用洗脫液依次輸送至分析柱來(lái)對(duì)測(cè)定試樣的血紅蛋白a1c和變異血紅蛋白進(jìn)行測(cè)定的第一測(cè)定模式與通過(guò)將所述第一成分分離用洗脫液和所述清洗用洗脫液依次輸送至所述分析柱來(lái)對(duì)所述血紅蛋白a1c進(jìn)行測(cè)定的第二測(cè)定模式，

以使所述第一測(cè)定模式下的所述血紅蛋白a1c的第一保留時(shí)間與所述第二測(cè)定模式下的所述血紅蛋白a1c的第二保留時(shí)間相同的方式，在所述第一測(cè)定模式中所述第二成分分離用洗脫液的影響消失之前，輸送所述清洗用洗脫液，

在所述清洗用洗脫液之后，輸送所述第一成分分離用洗脫液。

由此，在一個(gè)方式中，在切換多個(gè)測(cè)定模式來(lái)測(cè)定hba1c的情況下，能夠抑制hba1c的保留時(shí)間產(chǎn)生偏移，并且能夠縮短測(cè)定時(shí)間。

發(fā)明效果

根據(jù)本發(fā)明，在一個(gè)方式中具有如下效果：在切換多個(gè)測(cè)定模式來(lái)測(cè)定hba1c的情況下，能夠抑制hba1c的保留時(shí)間產(chǎn)生偏移并且能夠縮短測(cè)定時(shí)間。

附圖說(shuō)明

圖1是hplc裝置的概略構(gòu)成圖。

圖2是hplc裝置的控制系統(tǒng)的構(gòu)成圖。

圖3是液相色譜測(cè)定程序的流程圖。

圖4是表示色譜圖的一例的線圖。

圖5(a)是用于對(duì)連續(xù)進(jìn)行快速模式的情況下的各洗脫液的送液時(shí)機(jī)等進(jìn)行說(shuō)明的圖，圖5(b)是用于對(duì)從變體模式切換為快速模式的情況下的各洗脫液的送液時(shí)機(jī)等進(jìn)行說(shuō)明的圖，圖5(c)是用于對(duì)變體模式中將在c液之后輸送的a液的送液時(shí)間延長(zhǎng)的情況進(jìn)行說(shuō)明的圖，圖5(d)是用于對(duì)變體模式中將在b液之后輸送的a液的送液時(shí)間延長(zhǎng)的情況進(jìn)行說(shuō)明的圖。

圖6(a)是用于對(duì)基于保留時(shí)間的偏移不進(jìn)行反饋控制的情況進(jìn)行說(shuō)明的圖，圖6(b)是用于對(duì)基于保留時(shí)間的偏移進(jìn)行反饋控制的情況進(jìn)行說(shuō)明的圖。

圖7是表示hplc裝置的變形例的概略構(gòu)成圖。

符號(hào)說(shuō)明

xhplc裝置

5試樣制備單元

6分析單元

7測(cè)光單元

11采血管

13血液試樣

60分析柱

100控制部

具體實(shí)施方式

以下，對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式進(jìn)行說(shuō)明。

圖1中示出了利用高速液相色譜(highperformanceliquidchromatography：hplc)的hplc裝置x的概略構(gòu)成圖。

hplc裝置x以設(shè)置采血管11、自動(dòng)測(cè)定全血中的糖化血紅蛋白(hba1c)的濃度的方式構(gòu)成。該hplc裝置x具備包含多個(gè)洗脫液瓶12a、12b、12c、12d、12e(在圖1中為5個(gè))等的裝置主體2。

各洗脫液瓶12a～12e分別保持應(yīng)供給至后述的分析柱60的洗脫液a～e。各洗脫液根據(jù)用途而使例如組成、成分比、ph、滲透壓等有所不同。

裝置主體2具有試樣制備單元5、分析單元6和測(cè)光單元7。

采血管11例如以收納于架子(未圖示)上、移動(dòng)至可利用后述的試樣制備單元5中的噴嘴51進(jìn)行采樣的位置的方式來(lái)構(gòu)成。

試樣制備單元5用于由從采血管11采集的血液制備導(dǎo)入至分析柱60的試樣。該試樣制備單元5具有噴嘴51和稀釋槽53。

噴嘴51用于采集以采血管11的血液試樣13為代表的各種液體，可以進(jìn)行液體的抽吸和噴出，并且可以在上下方向和水平方向上移動(dòng)。該噴嘴51的工作利用后述的控制部100進(jìn)行控制。

分析單元6用于控制生物成分相對(duì)于分析柱60的填充劑的吸附和解吸，將各種生物成分供給至測(cè)光單元7。分析單元6中的設(shè)定溫度例如設(shè)定為約40℃。分析柱60保持有用于選擇性地吸附試樣中的血紅蛋白的填充劑。作為填充劑，例如使用甲基丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物。

分析單元6中，除了分析柱60以外，還具有分流器61、送液泵62和進(jìn)樣閥63。

分流器61用于從多個(gè)洗脫液瓶12a～12e中的特定的洗脫液瓶向分析柱60選擇性地供給洗脫液。該分流器61經(jīng)由配管80a～80e而分別與洗脫液瓶12a、12b、12c、12d、12e連接，經(jīng)由配管84而與進(jìn)樣閥63連接。

送液泵62用于賦予用于使洗脫液移動(dòng)至進(jìn)樣閥63的動(dòng)力，設(shè)置在配管84的中途。

進(jìn)樣閥63可以采集一定量的導(dǎo)入用試樣并且將該導(dǎo)入用試樣導(dǎo)入至分析柱60，具備多個(gè)導(dǎo)入口和排出口(省略圖示)。在該進(jìn)樣閥63上連接有進(jìn)樣環(huán)64。該進(jìn)樣環(huán)64可以保持一定量(例如數(shù)μl)的液體，可以通過(guò)適當(dāng)切換進(jìn)樣閥63來(lái)選擇進(jìn)樣環(huán)64與稀釋槽53連通而從稀釋槽53向進(jìn)樣環(huán)64供給導(dǎo)入用試樣的狀態(tài)、進(jìn)樣環(huán)64經(jīng)由預(yù)濾器pf和配管85與分析柱60連通而從進(jìn)樣環(huán)64將導(dǎo)入用試樣導(dǎo)入至分析柱60的狀態(tài)。作為這樣的進(jìn)樣閥63，可以使用例如六通閥。需要說(shuō)明的是，預(yù)濾器pf是用于過(guò)濾試樣、洗脫液的過(guò)濾器。

測(cè)光單元7用于對(duì)來(lái)自于分析柱60的解吸液中包含的血紅蛋白進(jìn)行光學(xué)檢測(cè)，經(jīng)由配管87而與用于將來(lái)自于分析柱60的解吸液排出的廢液槽88連接。

圖2中示出了hplc裝置x的控制系統(tǒng)的框圖。如圖2所示，hplc裝置x具備控制部100?？刂撇?00形成為cpu(centralprocessingunit，中央處理器)100a、rom(readonlymemory，只讀存儲(chǔ)器)100b、ram(randomaccessmemory，隨機(jī)存取存儲(chǔ)器)100c、非揮發(fā)性存儲(chǔ)器100d和輸入輸出接口(i/o)100e經(jīng)由總線100f分別連接的構(gòu)成。另外，hplc裝置x具備接收來(lái)自于操作員的輸入的操作部(未圖示)。

在i/o100e上連接有試樣制備單元5、分析單元6和測(cè)光單元7。

需要說(shuō)明的是，后述的液相色譜測(cè)定程序在本實(shí)施方式中作為一例而預(yù)先存儲(chǔ)于非揮發(fā)性存儲(chǔ)器100d中。cpu100a讀入存儲(chǔ)于非揮發(fā)性存儲(chǔ)器100d中的液相色譜測(cè)定程序并執(zhí)行。另外，也可以在cd-rom等記錄介質(zhì)中記錄液相色譜測(cè)定程序，將其用cd-rom驅(qū)動(dòng)器等讀入，由此來(lái)執(zhí)行。

接著，對(duì)本實(shí)施方式的作用進(jìn)行說(shuō)明。

圖3中示出了利用控制部100的cpu100a執(zhí)行的液相色譜測(cè)定處理的流程圖。

首先，操作員設(shè)置加入有血液試樣13的采血管11。通過(guò)使收容有多個(gè)采血管11的架子移動(dòng)，將采血管11搬送至采樣位置。

如果操作員指示測(cè)定開(kāi)始，則cpu100a讀入存儲(chǔ)于非揮發(fā)性存儲(chǔ)器100d中的液相色譜測(cè)定程序并執(zhí)行。

在步驟s10中，判定是在變體模式下對(duì)測(cè)定對(duì)象的血液試樣13進(jìn)行測(cè)定還是在快速模式(也稱為通常模式)下進(jìn)行測(cè)定，在快速模式下進(jìn)行測(cè)定的情況下，向步驟s12轉(zhuǎn)移，在變體模式下進(jìn)行測(cè)定的情況下，向步驟s26轉(zhuǎn)移。此處，變體模式(第一測(cè)定模式)是指，使用液相色譜法通過(guò)將后述的多個(gè)種類的洗脫液以預(yù)先確定的順序依次輸送至分析柱60來(lái)測(cè)定血液試樣13的hba1c和變異血紅蛋白的測(cè)定模式。另外，快速模式(第二測(cè)定模式)是指，將多個(gè)種類的洗脫液中與在變體模式中使用的洗脫液共通的多個(gè)共通洗脫液以預(yù)先確定的順序依次輸送至分析柱60來(lái)測(cè)定hba1c的測(cè)定模式。

需要說(shuō)明的是，關(guān)于在變體模式和快速模式中的哪種測(cè)定模式下進(jìn)行測(cè)定，對(duì)于每個(gè)血液試樣13例如由使用者預(yù)先設(shè)定。例如，可以讀取粘貼在采血管11上的條形碼信息或者接收來(lái)自于主機(jī)的指示信號(hào)，通過(guò)來(lái)自于操作部的輸入識(shí)別測(cè)定模式，并進(jìn)行設(shè)定。即使在架子上混合地收納有在快速模式和變體模式下進(jìn)行測(cè)定的采血管11，也可以應(yīng)對(duì)。

此處，多個(gè)種類的洗脫液在本實(shí)施方式中為a液～c液。a液(第一成分分離用洗脫液)為用于溶出hba1c和用于使分析柱60平衡化的洗脫液。b液(清洗用洗脫液)為用于使殘留在分析柱60中的血紅蛋白全部溶出的洗脫液、即用于清洗分析柱60的洗脫液。c液(第二成分分離用洗脫液)為用于使hba1c溶出后使hba1c以外的血紅蛋白溶出的洗脫液。需要說(shuō)明的是，血紅蛋白的溶出能力高低的順序是b液、c液、a液。

另外，在變體模式中，將a液、b液和c液以預(yù)先確定的順序輸送至分析柱60來(lái)進(jìn)行測(cè)定，在快速模式中，將a液和b液以預(yù)先確定的順序輸送至分析柱60來(lái)進(jìn)行測(cè)定。即，a液和b液是在變體模式和快速模式下共通地使用的共通洗脫液，c液是僅在變體模式下使用的非共通洗脫液。

在步驟s12中，導(dǎo)入血液試樣13。具體而言，首先從采血管11采集血液試樣13。即，通過(guò)使噴嘴51工作，從采血管11采集血液試樣13。利用噴嘴51采集的血液試樣13通過(guò)使噴嘴51工作而被供給至稀釋槽53。

然后，通過(guò)切換進(jìn)樣閥63而將保持于進(jìn)樣環(huán)64的試樣利用預(yù)濾器pf進(jìn)行過(guò)濾，導(dǎo)入至分析柱60中。將試樣導(dǎo)入至分析柱60中時(shí)，hba1c和變異hb等吸附于填充劑。

在步驟s14中，將a液供給至分析柱60預(yù)先確定的時(shí)間。由此，使hba1c從分析柱60溶出。

在步驟s16中，將b液供給至分析柱60預(yù)先確定的時(shí)間。由此，使殘留在分析柱60中的血紅蛋白全部溶出，將分析柱60清洗。

在步驟s18中，將a液供給至分析柱60預(yù)先確定的時(shí)間。由此，使分析柱60平衡化。

這樣，在快速模式中，以a液→b液→a液的順序向分析柱60進(jìn)行送液。

包含從分析柱60排出的各種血紅蛋白的解吸液經(jīng)由配管86而供給至測(cè)光單元7。該解吸液經(jīng)由配管87而導(dǎo)入至廢液槽88。

在測(cè)光單元7中，對(duì)解吸液連續(xù)地照射光，將其受光結(jié)果(吸光度)輸出至控制部100。然后，在控制部100中演算色譜圖。

如圖4所示，色譜圖是表示從開(kāi)始測(cè)定起經(jīng)過(guò)的時(shí)間與作為受光結(jié)果的吸光度的關(guān)系的圖。根據(jù)該色譜圖的峰出現(xiàn)在哪個(gè)位置，可以獲知檢測(cè)到哪種血紅蛋白，并且，通過(guò)峰部分(弧形的部分)中的吸光度的積分值、即峰部分的面積的大小，可以獲知血紅蛋白的濃度。

在本實(shí)施方式中，例如，在測(cè)定試樣中含有hba1c和hba0、某種血紅蛋白、特定的變異血紅蛋白、例如變異血紅蛋白c及變異血紅蛋白s的情況下，切換洗脫液而依次輸送至分析柱60時(shí)，如圖4所示，預(yù)先設(shè)想在ta、tb、tc、tf、tg的各時(shí)刻出現(xiàn)峰。在這種情況下，根據(jù)演算出的色譜圖判斷在ta秒的時(shí)刻是否出現(xiàn)峰，由此，可以判斷是否檢測(cè)到某種血紅蛋白。同樣地，可以通過(guò)判斷在tb的時(shí)刻是否出現(xiàn)峰來(lái)判斷是否檢測(cè)到hba1c，可以通過(guò)判斷在tc的時(shí)刻是否出現(xiàn)峰來(lái)判斷是否檢測(cè)到hba0，可以通過(guò)判斷在tf的時(shí)刻是否出現(xiàn)峰來(lái)判斷是否檢測(cè)到hbs，可以通過(guò)判斷在tg的時(shí)刻是否出現(xiàn)峰來(lái)判斷是否檢測(cè)到變異血紅蛋白c。另外，在ta、tb、tc、tf、tg以外的時(shí)刻出現(xiàn)峰時(shí)，可以判斷為檢測(cè)到預(yù)先未設(shè)想到的血紅蛋白。另外，根據(jù)各時(shí)刻處的吸光度的大小，可以測(cè)定各血紅蛋白的濃度。

在本實(shí)施方式中，在快速模式中，例如在測(cè)定試樣中含有hba1c、hba0、某種血紅蛋白、變異血紅蛋白c和變異血紅蛋白s的情況下，通過(guò)上述控制程序切換洗脫液并依次輸送至分析柱60時(shí)，如圖4所示，預(yù)先設(shè)想到從測(cè)定開(kāi)始至tb的時(shí)刻出現(xiàn)hba1c的峰。在這種情況下，根據(jù)演算出的色譜圖判斷在tb附近是否出現(xiàn)峰，由此，可以判斷是否檢測(cè)到hba1c。

因此，在步驟s20中，基于演算出的色譜圖，測(cè)定hba1c。即，如前所述，判斷在tb附近是否出現(xiàn)峰，如果在tb附近出現(xiàn)峰，則判斷為檢測(cè)到hba1c。而且，由tb附近的峰部分的吸光度的積分值來(lái)測(cè)定hba1c的濃度。

在步驟s24中，將測(cè)定結(jié)果存儲(chǔ)于非揮發(fā)性存儲(chǔ)器100d中。即，將hba1c的濃度和變異血紅蛋白的檢測(cè)的有無(wú)存儲(chǔ)于非揮發(fā)性存儲(chǔ)器100d中。

在步驟s44中，對(duì)于全部的采血管11判斷上述的測(cè)定是否結(jié)束，在對(duì)于全部的采血管11測(cè)定已結(jié)束的情況下，結(jié)束本程序，在存在測(cè)定未結(jié)束的采血管11的情況下，返回至步驟s10，判定將測(cè)定對(duì)象的血液試樣13是在變體模式下進(jìn)行測(cè)定還是在快速模式下進(jìn)行測(cè)定。

在步驟s10中判定為在變體模式下進(jìn)行測(cè)定的情況下，向步驟s26轉(zhuǎn)移。

在步驟s26中，以與步驟s12同樣的方式導(dǎo)入血液試樣13。

在步驟s28中，將a液供給至分析柱60預(yù)先確定的時(shí)間。由此，使hba1c從分析柱60溶出。

在步驟s30中，將c液供給至分析柱60預(yù)先確定的時(shí)間。由此，在使hba1c從分析柱60溶出后使hba1c以外的血紅蛋白溶出。

在步驟s32中，將a液供給至分析柱60預(yù)先確定的時(shí)間。由此，使分析柱60平衡化。

在步驟s34中，將b液供給至分析柱60預(yù)先確定的時(shí)間。由此，使殘留在分析柱60中的血紅蛋白全部溶出，將分析柱60清洗。

在步驟s36中，將a液供給至分析柱60預(yù)先確定的時(shí)間。由此，使分析柱60平衡化。

這樣，在變體模式中，以a液→c液→a液→b液→a液的順序向分析柱60進(jìn)行送液。

在步驟s38中，以與步驟s20同樣的方式測(cè)定hba1c。

在步驟s40中，測(cè)定變異血紅蛋白。即，如前所述，通過(guò)判斷在tb和tc以外的時(shí)刻是否出現(xiàn)峰來(lái)判斷是否檢測(cè)到變異血紅蛋白。而且，在tb和tc以外的時(shí)刻出現(xiàn)峰的情況下，由該峰部分的積分值測(cè)定變異血紅蛋白的濃度。

在步驟s42中，將測(cè)定結(jié)果存儲(chǔ)于非揮發(fā)性存儲(chǔ)器100d中。即，將hba1c的濃度和變異血紅蛋白的濃度存儲(chǔ)于非揮發(fā)性存儲(chǔ)器100d中。

這樣，在本實(shí)施方式中，可以在一個(gè)裝置中切換快速模式和變體模式來(lái)進(jìn)行測(cè)定。

接著，參照?qǐng)D5(a)，對(duì)連續(xù)進(jìn)行快速模式下的測(cè)定的情況下的a液和b液的送液時(shí)機(jī)、hba1c的峰出現(xiàn)的時(shí)機(jī)和將b液輸送至分析柱60后的分析柱60內(nèi)的b液的殘留量進(jìn)行說(shuō)明。

在圖5(a)中，由陰影線表示的波形w1表示hba1c的吸光度的峰的波形。另外，波形w2表示b液的送液時(shí)機(jī)。另外，波形w3表示分析柱60內(nèi)的b液的殘留量。即，圖5(a)中的縱軸具有hba1c的吸光度和b液的殘留量這兩個(gè)含義。

例如，如圖5(a)所示，在快速模式的第n個(gè)測(cè)定中，從t1時(shí)刻至t2時(shí)刻輸送a液，從t2時(shí)刻至t3時(shí)刻輸送b液，從t3時(shí)刻至t4時(shí)刻輸送a液。此處，在從t2時(shí)刻至t3時(shí)刻輸送b液時(shí)，b液在進(jìn)入至分析柱60之前的配管內(nèi)與a液混合，因此，分析柱60內(nèi)的b液的殘留量(濃度)實(shí)際上并不像波形w2那樣，而是形成像波形w3那樣緩慢地增加、然后緩慢地減小的波形。另外，hba1c的峰在tpn時(shí)刻出現(xiàn)。將從作為測(cè)定開(kāi)始時(shí)刻的t1時(shí)刻至出現(xiàn)hba1c的峰的tpn時(shí)刻的時(shí)間t秒稱為保留時(shí)間。

然后，從t4時(shí)刻起開(kāi)始第(n+1)個(gè)測(cè)定中的a液的輸送，盡管是第n個(gè)測(cè)定中輸送的b液少量殘留在分析柱60中的狀態(tài)，但開(kāi)始第(n+1)個(gè)測(cè)定中的a液的輸送。這是因?yàn)闀?huì)極力縮短1次的測(cè)定時(shí)間，但如果下一個(gè)的第(n+2)個(gè)測(cè)定也是快速模式的測(cè)定，則在第(n+2)個(gè)測(cè)定的開(kāi)始時(shí)殘留在分析柱60中的b液的殘留量與在第(n+1)個(gè)測(cè)定的開(kāi)始時(shí)殘留在分析柱60中的b液的殘留量大致相同。這樣，在連續(xù)進(jìn)行快速模式的情況下，測(cè)定開(kāi)始時(shí)的b液的殘留量大致相同。因此，例如第(n+1)個(gè)測(cè)定中的保留時(shí)間、即從t1時(shí)刻至tpn時(shí)刻的時(shí)間與第(n+1)個(gè)測(cè)定中的保留時(shí)間、即從t4時(shí)刻至tp(n-1)時(shí)刻的時(shí)間大致相同，沒(méi)有特別的問(wèn)題。

接著，對(duì)在從變體模式切換為快速模式的情況下的、a液～c液的送液時(shí)機(jī)、hba1c的峰出現(xiàn)的時(shí)機(jī)、將c液輸送至分析柱60后的分析柱60內(nèi)的c液的殘留量和將b液輸送至分析柱60后的分析柱60內(nèi)的b液的殘留量進(jìn)行說(shuō)明。

例如，如圖5(b)所示，在變體模式的第n個(gè)測(cè)定中，從t1時(shí)刻至t2時(shí)刻輸送a液，從t2時(shí)刻至t3時(shí)刻輸送c液，從t3時(shí)刻至t4時(shí)刻輸送a液，從t4時(shí)刻至t5時(shí)刻輸送b液，從t5時(shí)刻至t6時(shí)刻輸送a液。需要說(shuō)明的是，圖5(b)的t4至t6的時(shí)刻各自對(duì)應(yīng)于圖5(a)的t2至t4的時(shí)刻。即，圖5(b)的b液的送液時(shí)間(從t4至t5的時(shí)間)與圖5(a)的b液的送液時(shí)間(從t2至t3的時(shí)間)相同，圖5(b)的a液的送液時(shí)間(從t5至t6的時(shí)間)與圖5(a)的a液的送液時(shí)間(從t3至t4的時(shí)間)相同。

此處，波形w4表示c液的送液時(shí)機(jī)。另外，波形w5表示分析柱60內(nèi)的c液的殘留量。在從t2時(shí)刻至t3時(shí)刻輸送c液的情況下，分析柱60內(nèi)的c液的殘留量與前述的b液的情況同樣，實(shí)際上并不像波形w4那樣，而是形成像波形w5那樣緩慢地增加、然后緩慢地減小的波形。因此，在第(n+1)個(gè)測(cè)定開(kāi)始的t6時(shí)刻，形成第n個(gè)測(cè)定中輸送的c液少量殘留在分析柱60中的狀態(tài)。另外，與圖5(a)同樣，形成b液也少量殘留的狀態(tài)。

由此，如圖5(b)所示，第(n+1)個(gè)測(cè)定中hba1c的峰出現(xiàn)的時(shí)機(jī)比圖5(a)的情況早a秒，保留時(shí)間為(t-a)秒。這是因?yàn)?，在t6時(shí)刻，雖然b液的殘留量與圖5(a)的情況相同，但殘留有c液。

因此，在本實(shí)施方式中，如圖5(c)所示，使在c液之后輸送的a液的送液時(shí)間比圖5(b)的情況長(zhǎng)。即，使在c液之后輸送的a液的送液量比圖5(b)的情況多。在圖5(c)的例中，與圖5(b)的情況相比，將在c液之后輸送的a液的送液時(shí)間(從t3至t4的時(shí)間)延長(zhǎng)。即，將在步驟s32中輸送的a液的送液時(shí)間延長(zhǎng)。需要說(shuō)明的是，在c液、a液之后輸送的b液和a液的送液時(shí)間與圖5(b)的情況相同。

由此，如圖5(c)所示，在第(n+1)個(gè)測(cè)定開(kāi)始的t6時(shí)刻，第n個(gè)測(cè)定中輸送的c液消失，c液的影響消失。b液的殘留量與圖5(a)的情況相同，因此，第(n+1)個(gè)測(cè)定的hba1c的保留時(shí)間為t秒，與如圖5(a)所示在連續(xù)進(jìn)行快速模式的情況下的hba1c的保留時(shí)間相同。需要說(shuō)明的是，對(duì)于在c液之后輸送的a液的送液時(shí)間，可以不一定設(shè)定為c液從分析柱60中消失的時(shí)間，設(shè)定為即使在分析柱60中少量殘留有c液也不會(huì)使保留時(shí)間產(chǎn)生偏移的時(shí)間即可。

另外，如圖5(d)所示，可以不延長(zhǎng)在c液之后輸送的a液的送液時(shí)間，而是使在b液之后輸送的a液的送液時(shí)間比圖5(b)的情況延長(zhǎng)b秒。即，將步驟s36中輸送的a液的送液時(shí)間延長(zhǎng)。由此，能夠使第n個(gè)測(cè)定的測(cè)定時(shí)間(從t1至t6的時(shí)間)與圖5(c)的情況相比縮短。這是因?yàn)?，c液的殘留增加，相應(yīng)地b液的殘留減少。

這樣，在本實(shí)施方式中，在變體模式下測(cè)定hba1c的情況下，以使hba1c的保留時(shí)間與在快速模式下測(cè)定的hba1c的保留時(shí)間相同的方式，對(duì)在c液的輸送后輸送至分析柱60的a液、即緊隨著c液之后輸送的a液和緊隨著b液之后輸送的a液中的至少一者的送液時(shí)間進(jìn)行控制。由此，可以設(shè)定為在快速模式和變體模式的測(cè)定開(kāi)始時(shí)，使b液和c液的殘留成分以及殘留量對(duì)hba1c的溶出產(chǎn)生的影響實(shí)質(zhì)上相同。因此，在切換變體模式和快速模式來(lái)測(cè)定hba1c的情況下，能夠抑制hba1c的保留時(shí)間產(chǎn)生偏移。

需要說(shuō)明的是，在本實(shí)施方式中，作為控制分析柱60內(nèi)的洗脫條件的一個(gè)方式，對(duì)以使在變體模式和快速模式下測(cè)定的hba1c的保留時(shí)間相同的方式控制洗脫液的送液時(shí)間的情況進(jìn)行了說(shuō)明，但作為控制分析柱60內(nèi)的洗脫條件的方式，并不限定于此。例如，作為控制分析柱60內(nèi)的洗脫條件的其他方式，包含：控制洗脫液的送液時(shí)機(jī)，控制洗脫液的送液量，控制洗脫液的流速，添加消去液和變更洗脫液的濃度。通過(guò)使這樣的洗脫條件與不切換變體模式和快速模式的情況下的洗脫條件不同，可以以使在變體模式和快速模式下測(cè)定的hba1c的保留時(shí)間相同的方式進(jìn)行控制。

另外，在變體模式下測(cè)定的第一保留時(shí)間與在快速模式下測(cè)定的第二保留時(shí)間不同的情況下，可以根據(jù)第一保留時(shí)間與第二保留時(shí)間的差而使變體模式中的b液的送液時(shí)機(jī)有所不同。

一般而言，在變體模式中，與快速模式相比，所使用的洗脫液的種類多，因此，通常c液的影響殘留至下一個(gè)測(cè)定中，在下一個(gè)測(cè)定中使hba1c的保留時(shí)間變?cè)?。需要說(shuō)明的是，b液可以在變體模式下使用也可以在快速模式下使用，因此認(rèn)為，不會(huì)影響保留時(shí)間的差，c液的殘留量的差會(huì)影響保留時(shí)間的差。

因此，例如，如圖6(b)所示，根據(jù)第一保留時(shí)間與第二保留時(shí)間的差(c秒)，進(jìn)行使b液的送液時(shí)機(jī)提前d秒的反饋控制。由此，調(diào)節(jié)第n個(gè)測(cè)定中的c液和b液的合成的殘留量，如圖6(b)所示，在下一個(gè)的變體模式下測(cè)定的第一保留時(shí)間t1秒與在快速模式下測(cè)定的第二保留時(shí)間t2秒相同。需要說(shuō)明的是，在圖6(b)的例中，在變體模式下測(cè)定的第一保留時(shí)間比在快速模式下測(cè)定的第二保留時(shí)間短c秒，因此使b液的送液時(shí)機(jī)提早了d秒，但例如在變體模式下測(cè)定的第一保留時(shí)間比在快速模式下測(cè)定的第二保留時(shí)間晚c秒的情況下，使b液的送液時(shí)機(jī)晚d秒即可。對(duì)于根據(jù)第一保留時(shí)間與第二保留時(shí)間的差而以何種程度調(diào)節(jié)b液的送液時(shí)機(jī)、即c秒與d秒的對(duì)應(yīng)關(guān)系，可以預(yù)先通過(guò)實(shí)驗(yàn)求出，也可以實(shí)際反復(fù)進(jìn)行測(cè)定而由測(cè)定結(jié)果求出。

需要說(shuō)明的是，上述的反饋控制例如在c液的殘留量影響保留時(shí)間的變體模式的測(cè)定時(shí)進(jìn)行，但并不限定于此。

另外，在本實(shí)施方式中，對(duì)預(yù)濾器pf設(shè)置在進(jìn)樣閥63與分析柱60之間的情況進(jìn)行了說(shuō)明，但并不限定于此，例如如圖7所示，也可以形成使預(yù)濾器pf與分析柱60一體化的構(gòu)成。由此，能夠減少配管85的容量，能夠極力抑制c液的殘留量。因此，能夠極力抑制hba1c的保留時(shí)間產(chǎn)生偏移。

另外，在液相色譜裝置中，在如分析柱的更換時(shí)、液相色譜裝置的維護(hù)時(shí)擔(dān)心測(cè)定條件發(fā)生變更的情況下，通常使用校正用的試樣(以下，稱為校準(zhǔn)器)實(shí)施液相色譜裝置的校正(以下，稱為校準(zhǔn))。另外，即使在不擔(dān)心測(cè)定條件發(fā)生變更的情況下，通常也定期地實(shí)施校正而維持測(cè)定精度。

在這種情況下，需要準(zhǔn)備低濃度的低(low)校準(zhǔn)器和高濃度的高(high)校準(zhǔn)器這兩種校準(zhǔn)器，對(duì)每種校準(zhǔn)器執(zhí)行校準(zhǔn)。

如本實(shí)施方式所示，在1臺(tái)液相色譜裝置中切換變體模式和快速模式的情況下，需要對(duì)每個(gè)測(cè)定模式進(jìn)行校準(zhǔn)，但例如在變體模式下使用low校準(zhǔn)器和high校準(zhǔn)器執(zhí)行校準(zhǔn)后，切換至快速模式并使用低濃度和高濃度的校準(zhǔn)器執(zhí)行校準(zhǔn)時(shí)，裝置的清洗、校準(zhǔn)器的準(zhǔn)備變得繁雜，使用者弄錯(cuò)設(shè)置校準(zhǔn)器的次序、設(shè)置的數(shù)量等的可能性變高。即，在上述例的情況下，必須以low(變體模式)→high(變體模式)→low(快速模式)→high(快速模式)的順序執(zhí)行測(cè)定，執(zhí)行3次校準(zhǔn)器的切換，執(zhí)行3次流路的清洗。另外，必須對(duì)于變體模式和快速模式的每個(gè)測(cè)定模式準(zhǔn)備low校準(zhǔn)器和high校準(zhǔn)器。

因此，將連接稀釋槽53與進(jìn)樣閥63的配管83設(shè)定為具有能夠保持至少兩測(cè)定份以上的測(cè)定試樣的容量的配管，例如可以使兩測(cè)定份的low校準(zhǔn)器保持于配管83中而在變體模式和快速模式的各測(cè)定模式下執(zhí)行基于low校準(zhǔn)器的校準(zhǔn)，記錄各測(cè)定模式的測(cè)定結(jié)果，然后使兩測(cè)定份的high校準(zhǔn)器保持于配管83中而在變體模式和快速模式的各測(cè)定模式下執(zhí)行基于high校準(zhǔn)器的校準(zhǔn)，記錄各測(cè)定模式的測(cè)定結(jié)果。

由此，以low(變體模式)→low(快速模式)→high(變體模式)→high(快速模式)的順序執(zhí)行測(cè)定，校準(zhǔn)器的切換為1次，流路的清洗為1次即可。這樣，能夠使校正作業(yè)簡(jiǎn)化，能夠降低成本，并且能夠降低使用者弄錯(cuò)設(shè)置校準(zhǔn)器的次序、設(shè)置的數(shù)量等的可能性。需要說(shuō)明的是，該方法并不限于校準(zhǔn)，也可以用于精度管理物質(zhì)(樣本)的測(cè)定(控制測(cè)定)等，能夠有助于試藥的使用量削減、精度管理物質(zhì)的使用量削減等的成本降低，并且能夠減少使用者的精度管理物質(zhì)的設(shè)置錯(cuò)誤等。

另外，在將配管83設(shè)定為具有能夠保持兩測(cè)定份的測(cè)定試樣的容量的配管的情況下，首先使用一半測(cè)定試樣而在快速模式下執(zhí)行測(cè)定，在發(fā)生某些異常的情況下，例如在測(cè)定的hba1c的值為異常低的值的情況下，可以使用剩余的一半測(cè)定試樣在變體模式下執(zhí)行測(cè)定。

需要說(shuō)明的是，本發(fā)明并不限定于上述的實(shí)施方式，可以進(jìn)行各種變更。例如，并不限定于用于測(cè)定血液中的血紅蛋白濃度的hplc裝置，對(duì)于使用血液以外的樣本的情況、測(cè)定血紅蛋白濃度以外的成分的情況或hplc裝置以外的液相色譜裝置，也可以應(yīng)用本發(fā)明。