本發(fā)明屬于藥品質(zhì)量檢測領(lǐng)域，特別是涉及一種布洛芬、其鈉鹽及其制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方法。

背景技術(shù)：

布洛芬(ibuprofen)是世界衛(wèi)生組織、美國聯(lián)邦藥品管理局(fda)唯一共同推薦的兒童退燒藥，是公認(rèn)的兒童首選抗炎藥。布洛芬具有抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱作用。治療風(fēng)濕和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的療效稍遜于乙酰水楊酸和保泰松。適用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、強直性脊椎炎和神經(jīng)炎等。而布洛芬鈉由于溶解性好，更容易達到高的血藥濃度。

目前，歐洲藥典8.0版分別采用了反相色譜和氣相色譜兩套系統(tǒng)對布洛芬有關(guān)物質(zhì)進行了檢查，其中反相色譜控制了雜質(zhì)a、b、d和雜質(zhì)e，選擇了柱長為15cm的十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱及磷酸溶液-乙腈與乙腈的流動相體系梯度洗脫，一次洗脫時間為70min，洗脫時間較長。但經(jīng)本發(fā)明人重復(fù)該檢測方法，發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)a與主峰分離度低于1.5，無法實現(xiàn)有效分離，后將方法略作調(diào)整仍無法實現(xiàn)雜質(zhì)a與主峰的完全分離。歐洲藥典8.0版還利用衍生化氣相色譜的方法試圖對布洛芬中存在的毒性雜質(zhì)g進行控制，但衍生化氣相色譜法操作繁瑣，且采用不常用的氦氣作載氣，因此該檢測方法便利性較低，技術(shù)要求較高。

美國藥典36版利用反相色譜只介紹了對布洛芬雜質(zhì)f作為已知雜質(zhì)進行控制，其監(jiān)測的已知雜質(zhì)較少。中國藥典2015版與日本藥典16版均采用薄層色譜法來檢查布洛芬中的有關(guān)物質(zhì)，但該方法無法實現(xiàn)雜質(zhì)的準(zhǔn)確定性與定量，只是粗略檢查布洛芬中雜質(zhì)情況。

此外，針對布洛芬鈉鹽的檢測方法，尚未在各國藥典或文獻見到收載或報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

面對上述技術(shù)問題，本發(fā)明提出一種布洛芬、其鈉鹽及其制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，本方法采用反相色譜系統(tǒng)對布洛芬及其鈉鹽中6中已知雜質(zhì)(雜質(zhì)a、b、c、d、e和雜質(zhì)f)進行檢測，以實現(xiàn)各色譜峰之間的有效分離(分離度大于1.5)，準(zhǔn)確定性及定量布洛芬及其鈉鹽中雜質(zhì)情況。此外，本發(fā)明還提出一種采用正相色譜檢測雜質(zhì)g的方法，使得雜質(zhì)g的檢查更為方便。并且，利用上述方法可以對布洛芬及其鈉鹽制成的制劑的有關(guān)物質(zhì)的檢測。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所述的一種布洛芬或其鈉鹽有關(guān)物質(zhì)檢測的方法，其中，所述有關(guān)物質(zhì)包括雜質(zhì)a、b、c、d、e和f，其包括：

供試品溶液的制備：取布洛芬或布洛芬鈉原料適量，置一定體積量瓶中，加色譜條件下的流動相溶解后稀釋至刻度，搖勻、濾過，得到一定濃度的供試品溶液；

樣品檢測：上述述供試品溶液注入色譜儀得到色譜圖，其中色譜條件如下，

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(250×4.6mm，5μm)；

柱溫：20～40℃；

流動相：有機相乙腈占水相磷酸水溶液的體積比為32％～48％，磷酸水溶液中磷酸加入量為0.01～0.1％(質(zhì)量分?jǐn)?shù))；

流速：1.0～2.3ml/min；

檢測波長：205-225nm；

進樣量：20μl。

進一步地，所述供試品溶液的濃度為2mg/ml；所述柱溫為30℃。

具體地，所述磷酸水溶液中磷酸加入量為0.05％；所述乙腈占所述磷酸水溶液的體積比為40:60。

優(yōu)選地，所述流速為2.0ml/min；所述檢測波長為214nm。

本發(fā)明所述的一種檢測有關(guān)物質(zhì)雜質(zhì)g的方法，包括：

供試品溶液的制備：取布洛芬或布洛芬鈉原料適量，置一定體積量瓶中，加色譜條件下的流動相溶解后稀釋至刻度，搖勻、濾過，得到一定濃度的供試品溶液；

樣品檢測：將上述供試品溶液注入色譜儀得到色譜圖，其中色譜條件如下，

色譜柱：硅膠柱(4.6×250mm，5μm)；

柱溫：20～40℃；

流動相：正己烷、乙酸乙酯以及三氟乙酸混合物，其中，乙酸乙酯占總體積的2％～8％，三氟乙酸加入量為總體積的0.2％～1％；

流速：0.5～1.5ml/min；

檢測波長：260～280nm；

進樣量：20μl。

具體地，所述供試品溶液的濃度為5mg/ml；所述柱溫為35℃。

進一步地，所述流動相正己烷：乙酸乙酯：三氟乙酸的體積比為97:3:0.95。

優(yōu)選地，所述流速為1.0ml/min；所述檢測波長為264nm。

本發(fā)明還提出了一種布洛芬鈉片劑的有關(guān)物質(zhì)進行檢測的方法，其特征在于，所述方法包括：

供試品溶液的制備：取布洛芬鈉片劑，除去包衣后，研細，取細粉適量，置一定體積量瓶中，加流動相適量，超聲使布洛芬鈉溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻、濾過，制成布洛芬鈉濃度約為2mg/ml和5mg/ml供試品溶液，分別注入色譜儀；其中，

2mg/ml的供試品溶液用于雜質(zhì)a、b、c、d、e、f的檢測，其色譜條件如下：

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，250×4.6mm，5μm；

柱溫：20～40℃；

流動相：有機相乙腈占水相磷酸水溶液的體積比例為32％～48％，磷酸水溶液中磷酸加入量為0.01～0.1％；

流速：1.0～2.3ml/min；

檢測波長：205-225nm；

5mg/ml的供試品溶液用于雜質(zhì)g的檢測，其色譜條件如下：

色譜柱：硅膠柱，4.6×250mm，5μm；

柱溫：20～40℃；

流動相：正己烷、乙酸乙酯以及三氟乙酸混合物，乙酸乙酯占總體積的2％～8％，三氟乙酸加入量為總體積的0.2％～1％；

流速：0.5～1.5ml/min；

檢測波長：260～280nm。

此外，本發(fā)明提出了上述任一檢測有關(guān)物質(zhì)的方法在布洛芬或布洛芬鈉制劑有關(guān)物質(zhì)檢測中的應(yīng)用。

本發(fā)明所述方法能實現(xiàn)多種雜質(zhì)的有效分離及定量檢測，即實現(xiàn)各色譜峰之間的有效分離(分離度大于1.5)，準(zhǔn)確定性及定量布洛芬及其鈉鹽中雜質(zhì)情況；采用本發(fā)明提出的雜質(zhì)g的檢測方法能更為便利地實現(xiàn)雜質(zhì)g的控制；此外，利用本發(fā)明檢測有關(guān)物質(zhì)雜質(zhì)a、b、c、d、e、f、g的方法可以實現(xiàn)對布洛芬或者布洛芬鈉制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測，并且該方法簡便易行，能夠準(zhǔn)確地對雜質(zhì)進行定性和定量。與現(xiàn)有技術(shù)相比，能夠用更為簡便的方法實現(xiàn)對布洛芬、布洛芬鈉以及其制劑更多雜質(zhì)的定性和定量，從而能提高藥品的安全性。

附圖說明

圖1為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)a、b、c、d、e和f的檢測方法篩選過程中采用ep8.0布洛芬有關(guān)物質(zhì)檢測方法檢測含有6種雜質(zhì)的布洛芬鈉溶液的典型色譜圖。

圖2為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)a、b、c、d、e和f的檢測方法篩選過程中采用經(jīng)修改的ep8.0布洛芬有關(guān)物質(zhì)檢測方法檢測混有6種雜質(zhì)的布洛芬鈉溶液的典型色譜圖。

圖3為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)a、b、c、d、e和f的檢測方法篩選過程中柱溫在20℃時含有6種雜質(zhì)的布洛芬鈉溶液的色譜圖。

圖4為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)a、b、c、d、e和f的檢測方法篩選過程中柱溫在40℃時含有6種雜質(zhì)的布洛芬鈉溶液的色譜圖。

圖5為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)a、b、c、d、e和f的檢測方法篩選過程中流動相中有機相比例為32％時含有6種雜質(zhì)的布洛芬鈉溶液的色譜圖。

圖6為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)a、b、c、d、e和f的檢測方法篩選過程中流動相中有機相比例為48％時含有6種雜質(zhì)的布洛芬鈉溶液的色譜圖。

圖7為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)a、b、c、d、e和f的檢測方法篩選過程中流速為1.0ml/min時含有6種雜質(zhì)的布洛芬鈉溶液的色譜圖。

圖8為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)a、b、c、d、e和f的檢測方法篩選過程中流速為2.3ml/min時含有6種雜質(zhì)的布洛芬鈉溶液的色譜圖。

圖9為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)a、b、c、d、e和f的檢測方法篩選過程中流動相中不加磷酸時含有6種雜質(zhì)的布洛芬鈉溶液的色譜圖。

圖10為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)a、b、c、d、e和f的檢測方法篩選過程中流動相磷酸加入量為0.025％時含有6種雜質(zhì)的布洛芬鈉溶液的色譜圖。

圖11為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)a、b、c、d、e和f的檢測方法篩選過程中流動相磷酸加入量為0.1％時含有6種雜質(zhì)的布洛芬鈉溶液的色譜圖。

圖12為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)g的檢測方法篩選過程中柱溫在20℃時含有雜質(zhì)g的布洛芬鈉溶液的色譜圖。

圖13為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)g的檢測方法篩選過程中柱溫在40℃時含有雜質(zhì)g的布洛芬鈉溶液的色譜圖。

圖14為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)g的檢測方法篩選過程中流動相中乙酸乙酯比例為2％時含有雜質(zhì)g的布洛芬鈉溶液色譜圖。

圖15為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)g的檢測方法篩選過程中流動相中乙酸乙酯比例為8％時含有雜質(zhì)g的布洛芬鈉溶液色譜圖。

圖16為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)g的檢測方法篩選過程中流速0.5ml/min時含有雜質(zhì)g的布洛芬鈉溶液色譜圖。

圖17為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)g的檢測方法篩選過程中流速1.5ml/min時含有雜質(zhì)g的布洛芬鈉溶液色譜圖。

圖18為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)g的檢測方法篩選過程中三氟乙酸加入量為0.2％時含有雜質(zhì)g的布洛芬鈉溶液色譜圖。

圖19為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)g的檢測方法篩選過程中三氟乙酸加入量為0.8％時含有雜質(zhì)g的布洛芬鈉溶液色譜圖。

圖20為本發(fā)明關(guān)于雜質(zhì)g的檢測方法篩選過程中三氟乙酸加入量為1％時含有雜質(zhì)g的布洛芬鈉溶液色譜圖。

圖21為本發(fā)明關(guān)于布洛芬鈉反向檢測條件下的典型色譜圖。

圖22為本發(fā)明關(guān)于布洛芬鈉正向檢測條件下的典型色譜圖。

圖23為本發(fā)明關(guān)于布洛芬鈉片劑反向檢測條件下的典型色譜圖。

圖24為本發(fā)明關(guān)于布洛芬鈉片劑正向檢測條件下的典型色譜圖。

圖25為本發(fā)明關(guān)于反向色譜系統(tǒng)的方法學(xué)研究的系統(tǒng)適應(yīng)性色譜圖；其中，(i)空白溶劑，(ii)供試品溶液，(iii)含有6種雜質(zhì)的供試品溶液；其中，峰1-雜質(zhì)a，峰2-雜質(zhì)b，峰3-雜質(zhì)c，峰4-雜質(zhì)d，峰5-主峰，峰6雜質(zhì)e，峰7-雜質(zhì)f。

圖26為本發(fā)明關(guān)于反向色譜系統(tǒng)的方法學(xué)研究的布洛芬鈉破壞性試驗色譜圖；其中，

(a).未破壞；(b).酸破壞；(c).堿破壞；(d).氧化破壞；(e).光照破壞；(f).高溫破壞。

圖27為本發(fā)明關(guān)于正向色譜系統(tǒng)的方法學(xué)研究的含有雜質(zhì)g的供試品溶液的典型色譜圖；其中，峰1-未知雜質(zhì)，峰2-溶劑峰，峰3-主峰和峰4-雜質(zhì)g。

具體實施方式

如前所述，本發(fā)明旨在提出一種布洛芬、其鈉鹽及其制劑有關(guān)物質(zhì)a、b、c、d、e、f和g的檢測方法，以實現(xiàn)各雜質(zhì)色譜峰之間的有效分離(分離度大于1.5)，并準(zhǔn)確定性及定量布洛芬、其鈉鹽及其制劑中的雜質(zhì)情況。

達到本發(fā)明本發(fā)明目的主要使用的儀器與試藥如下：

dv215cd電子天平(美國ohaus公司)；dionexultimate3000高效液相色譜儀(美國dionex公司)；shimadzulc-15c島津高效液相色譜儀(島津儀器(蘇州)有限公司)。

磷酸(分析純，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司)；乙腈(色譜純，美國tedia公司)；正己烷(色譜純，天津康科德科技有限公司)；三氟乙酸(分析純，南京化學(xué)試劑有限公司)；乙酸乙酯(分析純，無錫市亞盛化工有限公司)；水為市售純凈水(杭州娃哈哈集團)。

雜質(zhì)a對照品，含量：99.5％(tlcpharmachem.,inc.)；雜質(zhì)b對照品，含量：97.4％(tlcpharmachem.,inc.)；雜質(zhì)c對照品，含量：99.8％(tlcpharmachem.,inc.)；雜質(zhì)d，含量：98.1％(tlcpharmachem.,inc.)；雜質(zhì)e對照品，含量：99.2％(tlcpharmachem.,inc.)；雜質(zhì)f對照品，含量：99.8％(tlcpharmachem.,inc.)；雜質(zhì)g(councilofeurope,europeandirectorateforthequalitycontrolofmedicines)。

布洛芬原料藥：南京九壽堂醫(yī)藥科技有限公司；布洛芬鈉原料藥，批號：150630、150703、150710，南京九壽堂醫(yī)藥科技有限公司；布洛芬鈉片劑，規(guī)格256mg，pfizerinc.。

需要注意的是，如未注明具體條件者，均按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行，如所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

本發(fā)明所檢測的雜質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下表：

下面，關(guān)于本發(fā)明布洛芬、其鈉鹽及其制劑雜質(zhì)a、b、c、d、e、f和g的檢測方法，將分以下幾個方面逐一介紹。

一、關(guān)于雜質(zhì)a、b、c、d、e和f的檢測方法

本發(fā)明提供了一種布洛芬或其鈉鹽有關(guān)物質(zhì)檢測的方法，其有關(guān)物質(zhì)包括雜質(zhì)a、b、c、d、e和f，所述方法包括，供試品溶液的配制和樣品檢測兩個步驟。

供試品溶液配制

分別取布洛芬鈉樣品和各雜質(zhì)對照品適量，置于一定體積量瓶中，加流動相溶解稀釋至刻度，搖勻、濾過。

樣品檢測

為了實現(xiàn)雜質(zhì)a、b、c、d、e和f的有效分離(分離度大于1.5)，我們參考了歐洲藥典8.0版關(guān)于布洛芬的檢測方法，擬定采用反相色譜系統(tǒng)圍繞色譜柱、檢測波長、柱溫、流動相中有機相比例、流速、ph的考察(磷酸加入量)對色譜的條件進行篩選。具體篩選過程如下：

色譜柱的選擇

在前期實驗中，我們參考歐洲藥典8.0中布洛芬有關(guān)物質(zhì)條件，使用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑(柱長：15cm)的色譜柱，發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)d與主峰分離度無法滿足要求，典型色譜圖見圖1，即使適當(dāng)改變歐洲藥典8.0方法，分離效果有所改善，仍無法實現(xiàn)雜質(zhì)d與主峰的分離度大于1.5，且保留時間較長，典型色譜圖見圖2。經(jīng)過嘗試增加色譜柱柱長以改善分離效果，即選擇柱長為25cm的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱進行嘗試，經(jīng)初步試驗，發(fā)現(xiàn)該類型色譜柱可實現(xiàn)各色譜峰之間的有效分離，分離度和峰形良好，滿足檢測的要求，因此，采用該類型色譜柱作進一步色譜條件優(yōu)化。

檢測波長的選擇

利用紫外-可見分光光度計對各雜質(zhì)及布洛芬鈉進行全波長掃描，發(fā)現(xiàn)各雜質(zhì)與布洛芬鈉在低波長段200-225nm有較大吸收，同時我們參考了歐洲藥典8.0布洛芬有關(guān)物質(zhì)檢查的檢測波長選擇波長，考慮205-225nm范圍作為檢測波長。

并且試驗中發(fā)現(xiàn)，全波長掃描時發(fā)現(xiàn)在214nm波長時，色譜峰多，可代表的信息較全面，色譜峰基線平穩(wěn)且各色譜峰分離較好，因此優(yōu)選214nm作為檢測波長。

柱溫的考察

實驗考察了不同柱溫下樣品與雜質(zhì)的分離情況，發(fā)現(xiàn)柱溫對保留時間有一定的影響。如果柱溫增加，則保留時間降低，但不同溫度如20℃、40℃下，各色譜峰均能各雜質(zhì)與主峰及各雜質(zhì)之間的分離度均符合要求，詳見圖3-4，因此考慮選擇的溫度范圍為20～40℃。后期試驗中，暫以30℃作為柱溫做進一步色譜條件優(yōu)化。

流動相中有機相比例考察

雖然隨著流動相中有機相比例的增加，各色譜峰出峰時間縮短，但最難分離對雜質(zhì)d與主峰的分離度卻減小，詳見圖5-6。實驗發(fā)現(xiàn)，流動相中有機相乙腈比例范圍32％～48％時，分離度均能達到要求。后期試驗中，暫以有機相乙腈比例為40％做進一步色譜條件優(yōu)化。

流速的考察

在一定范圍內(nèi)，流速降低能夠提高色譜峰的分離度，但同時保留時間也增加，典型色譜圖見圖7-8。實驗發(fā)現(xiàn)，流速范圍在1.0～2.3ml/min，分離度均能達到要求。后期試驗中，暫選擇流速2.0ml/min做進一步色譜條件優(yōu)化。

ph的考察(磷酸加入量)

磷酸的加入降低了流動相ph，抑制酸性化合物的解離，因而能夠改善峰形，但加入量過多，ph過低會對色譜柱有損傷，不同磷酸加入量的典型色譜圖見圖9-11。由圖中可以看出，不加磷酸時峰形很差，磷酸加入量達到磷酸水溶液中的0.01％和0.1％時峰形均較好，優(yōu)選磷酸加入量為0.05％。

通過以上篩選，我們得到的布洛芬鈉有關(guān)物質(zhì)雜質(zhì)a、b、c、d、e和f的檢測方法包括：

供試品溶液的制備：取布洛芬鈉原料適量，置一定體積量瓶中，加色譜條件下的流動相溶解后稀釋至刻度，搖勻、濾過，得到一定濃度的供試品溶液；

樣品檢測：上述述供試品溶液注入色譜儀得到色譜圖，其中色譜條件如下，

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(250×4.6mm，5μm)；

柱溫：20～40℃；

流動相：有機相乙腈占水相磷酸水溶液的體積比為32％～48％，磷酸水溶液中磷酸加入量為0.01～0.1％(質(zhì)量分?jǐn)?shù))；

流速：1.0～2.3ml/min；

檢測波長：205-225nm；

進樣量：20μl。

進一步地，所述供試品溶液的濃度為2mg/ml；所述柱溫為30℃。

具體地，所述磷酸水溶液中磷酸加入量為0.05％；所述乙腈占所述磷酸水溶液的體積比為40:60。

優(yōu)選地，所述流速為2.0ml/min；所述檢測波長為214nm。

二、雜質(zhì)g的檢測方法

本發(fā)明還提供了一種布洛芬或其鈉鹽有關(guān)物質(zhì)檢測的方法，其有關(guān)物質(zhì)包括雜質(zhì)g，所述方法包括，供試品溶液的配制和樣品檢測兩個步驟。

供試品溶液配制

分別取布洛芬鈉樣品和雜質(zhì)g對照品適量，置于一定體積量瓶中，加流動相溶解稀釋至刻度，搖勻、濾過。

樣品檢測

歐洲藥典8.0版關(guān)于布洛芬雜質(zhì)g的檢測采用了衍生化氣相色譜的方法，但此法操作繁瑣，本發(fā)明為了更為方便實現(xiàn)雜質(zhì)g的檢測，擬定采用正相色譜圍繞色譜柱、檢測波長、柱溫、流動相中乙酸乙酯比例、流速、流動相中三氟乙酸加入量對色譜的條件進行篩選。具體篩選過程如下：

色譜柱的選擇

選擇正相色譜常用的硅膠柱。

檢測波長的選擇

利用紫外-可見分光光度計對布洛芬鈉和雜質(zhì)g進行全波長掃描，發(fā)現(xiàn)兩者在低波長段260～280nm有較大吸收，并且試驗中發(fā)現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)兩者均在272nm和264nm處有最大吸收波長，色譜峰基線平穩(wěn)且各色譜峰分離較好。后期試驗中，暫選擇264nm作為檢測波長。

柱溫的考察

實驗考察了各柱溫下雜質(zhì)g與主峰分離效果，發(fā)現(xiàn)在較寬的溫度范圍內(nèi)雜質(zhì)g與主峰均能有效分離，如圖12-13，因此考慮選擇的溫度范圍為20～40℃。后期試驗中，暫以35℃作為柱溫做進一步色譜條件優(yōu)化。

流動相中乙酸乙酯比例的選擇

隨著乙酸乙酯比例的降低，雜質(zhì)g與主峰分離度提高，且在一定范圍內(nèi)，主峰峰形有所改善，典型色譜圖見14-15。實驗發(fā)現(xiàn)流動相中乙酸乙酯占總體積比例范圍為2％～8％時，分離度均能達到要求。后期試驗中，暫以乙酸乙酯比例為3％做進一步色譜條件優(yōu)化。

流速的選擇

色譜圖見圖16-17。當(dāng)流速范圍在0.5～1.5ml/min時，分離度均能達到要求。后期試驗中，暫以流速1.0ml/min做進一步色譜條件優(yōu)化。

流動相中三氟乙酸加入量考察

三氟乙酸加入量的增加可明顯改善色譜峰拖尾的情況，但加入量過高，色譜峰會出現(xiàn)前延現(xiàn)象。實驗發(fā)現(xiàn)三氟乙酸加入量體積分?jǐn)?shù)為0.2％～1％時，峰形良好，典型色譜圖見圖18-20，優(yōu)選三氟乙酸加入量的體積分?jǐn)?shù)為0.95％。

通過以上篩選，我們得到的布洛芬鈉有關(guān)物質(zhì)雜質(zhì)g的方法，包括：

供試品溶液的制備：取布洛芬或布洛芬鈉原料適量，置一定體積量瓶中，加色譜條件下的流動相溶解后稀釋至刻度，搖勻、濾過，得到一定濃度的供試品溶液；

樣品檢測：將上述供試品溶液注入色譜儀得到色譜圖，其中色譜條件如下，

色譜柱：硅膠柱(4.6×250mm，5μm)；

柱溫：20～40℃；

流動相：正己烷、乙酸乙酯以及三氟乙酸混合物，其中，乙酸乙酯占總體積的2％～8％，三氟乙酸加入量為總體積的0.2％～1％；

流速：0.5～1.5ml/min；

檢測波長：260～280nm；

進樣量：20μl。

具體地，所述供試品溶液的濃度為5mg/ml；所述柱溫為35℃。

進一步地，所述流動相正己烷：乙酸乙酯：三氟乙酸的體積比為97:3:0.95。

優(yōu)選地，所述流速為1.0ml/min；所述檢測波長為264nm。

此外，由于布洛芬鈉鹽由布洛芬和氫氧化鈉反應(yīng)成鹽而來，且通過實驗檢測已表明兩者均含有雜質(zhì)a、b、c、d、e、f和g，并均可以用同樣的方法檢測。

綜上所述，我們確定了最優(yōu)選的布洛芬或其鈉鹽有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其測定色譜條件為：

(1)反相色譜條件，即雜質(zhì)a、b、c、d、e和f的檢測條件：

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(250×4.6mm，5μm)

柱溫：30℃

流動相：乙腈：0.05％磷酸水(40:60，v/v)

流速：2.0ml/min

檢測波長：214nm

進樣量：20μl

(2)正相色譜條件，即雜質(zhì)g的檢測條件

色譜柱：硅膠柱(4.6×250mm，5μm)

柱溫：35℃

流動相：正己烷：乙酸乙酯：三氟乙酸(97:3:0.95，v/v/v)

流速：1.0ml/min

檢測波長：264nm

進樣量：20μl

反相及正相檢測條件下布洛芬鈉典型圖譜分別見圖21和圖22，根據(jù)圖譜我們發(fā)現(xiàn)，在上述反相色譜條件下，布洛芬鈉的雜質(zhì)a、b、c、d、e、f能被同時有效分離，主峰與雜質(zhì)之間分離度均符合規(guī)定，因而該法能夠用于雜質(zhì)的定性和定量；利用上述正相色譜條件，布洛芬鈉的雜質(zhì)g能夠被檢測，將該發(fā)用于雜質(zhì)g的定性和定量大大提高了其檢測的簡便程度。

三、布洛芬鈉片劑有關(guān)物質(zhì)的檢測

本發(fā)明擬將上述雜質(zhì)a、b、c、d、e、f、g的檢測方法用于布洛芬鈉片劑有關(guān)物質(zhì)檢測中，檢測方法包括：

供試品溶液的制備：取布洛芬鈉片劑，除去包衣后，研細，取細粉適量，置一定體積量瓶中，加流動相適量，超聲使布洛芬鈉溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻、濾過，制成布洛芬鈉濃度約為2mg/ml和5mg/ml的供試品溶液，分別注入色譜儀；其中，

2mg/ml的供試品溶液用于雜質(zhì)a、b、c、d、e、f的檢測，其色譜條件如下：

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，250×4.6mm，5μm；

柱溫：20～40℃；

流動相：有機相乙腈占水相磷酸水溶液的體積比例為32％～48％，磷酸水溶液中磷酸加入量為0.01～0.1％；

流速：1.0～2.3ml/min；

檢測波長：205-225nm。

優(yōu)選地，所述供試品溶液的濃度為2mg/ml；所述柱溫為30℃；所述磷酸水溶液中磷酸加入量為0.05％；所述乙腈占所述磷酸水溶液的體積比為40:60；所述流速為2.0ml/min；所述檢測波長為214nm。

5mg/ml的供試品溶液用于雜質(zhì)g的檢測，其色譜條件如下：

色譜柱：硅膠柱，4.6×250mm，5μm；

柱溫：20～40℃；

流動相：正己烷、乙酸乙酯以及三氟乙酸混合物，乙酸乙酯占總體積的2％～8％，三氟乙酸加入量為總體積的0.2％～1％；

流速：0.5～1.5ml/min；

檢測波長：260～280nm。

優(yōu)選地，所述供試品溶液的濃度為5mg/ml；所述柱溫為35℃；所述流動相正己烷：乙酸乙酯：三氟乙酸的體積比為97:3:0.95；所述流速為1.0ml/min；所述檢測波長為264nm。

最終發(fā)現(xiàn)，按上述條件對有關(guān)物質(zhì)進行檢測得到的色譜峰基線平穩(wěn)，各色譜峰分離以及峰形較好，因此，該法能夠被用于布洛芬鈉片劑的有關(guān)物質(zhì)檢測，按優(yōu)選條件下測得的反向和正相典型色譜圖分別見圖23和圖24。并且，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以預(yù)料的是，上述任一檢測有關(guān)物質(zhì)雜質(zhì)a、b、c、d、e、f、g的方法均可以用于布洛芬或布洛芬鈉制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測。

四、反向色譜系統(tǒng)的方法學(xué)研究

反相色譜系統(tǒng)溶液制備：供試品溶液：精密稱取布洛芬鈉樣品適量，用流動相制成每1ml中含布洛芬鈉2mg，作為供試品溶液；空白溶液：即流動相；對照品溶液：取各雜質(zhì)對照品適量，置于同一量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻、濾過，取續(xù)濾液作為對照品溶液；系統(tǒng)適用性溶液：分別取布洛芬鈉樣品與各雜質(zhì)對照品適量，置于同一量瓶中，加流動相溶解稀釋至刻度，搖勻、濾過，取續(xù)濾液作為系統(tǒng)適用性溶液。

系統(tǒng)適用性：各雜質(zhì)與主峰及各雜質(zhì)之間分離度均大于1.5，各色譜峰拖尾因子小于2.0，理論塔板數(shù)大于5000，因此，該方法系統(tǒng)適用性良好。代表性譜圖見圖25。

專屬性：空白溶劑對各色譜峰無干擾，各色譜峰之間分離度良好。此外，樣品經(jīng)破壞，在高溫及氧化破壞條件下有降解產(chǎn)物，降解產(chǎn)物與主峰均能有效分離，峰純度符合要求。因此，該方法專屬性較好，詳見圖26。

溶液穩(wěn)定性：供試品溶液與對照品溶液于室溫下放置24h后，色譜圖均無明顯變化，因此，溶液穩(wěn)定性較好。

檢測限定量限：精密稱取各雜質(zhì)對照品適量，以流動相溶解并依次稀釋，分別取20μl注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明各雜質(zhì)檢測限定量限均低于報告限0.05％。

線性：取雜質(zhì)a對照品約10mg，精密稱定，置于一定體積量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為雜質(zhì)a對照品母液；同法配制雜質(zhì)b、雜質(zhì)c、雜質(zhì)d、雜質(zhì)e和雜質(zhì)f對照品母液。分別精密量取各雜質(zhì)對照品母液適量，稀釋得到一系列濃度對照品溶液，再分別取20μl注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明各雜質(zhì)在一定范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999。

精密度：包括重復(fù)性和中間精密度，按擬定的方法配制6份供試品溶液，分別進樣，結(jié)果表明，各雜質(zhì)與主峰的峰面積rsd值均低于2.0％，方法精密度良好。

準(zhǔn)確度：精密稱取布洛芬鈉樣品一定量，置于一定體積量瓶中，向其中分別加入50％水平、100％水平、150％水平的各雜質(zhì)對照品溶液，再用流動相稀釋至刻度作為樣品溶液。每個濃度水平配制3份平行樣。方法準(zhǔn)確度采用加樣回收率計算，經(jīng)試驗，各雜質(zhì)回收率均在95％～105％范圍內(nèi)，各雜質(zhì)回收率rsd值均低于2.0％，表明各雜質(zhì)回收率良好。

耐用性：通過改變柱溫、流速、流動相中有機相比例以及選擇不同品牌批號色譜柱，各色譜峰均能有效分離，表明該方法耐用性良好。

5正相色譜系統(tǒng)的方法學(xué)研究

正相色譜系統(tǒng)溶液制備：供試品溶液：精密稱取布洛芬鈉樣品適量，用流動相制成每1ml中含布洛芬鈉5mg，作為供試品溶液；空白溶液：即流動相；對照品溶液：取雜質(zhì)g對照品適量，置于一定體積量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻、濾過，作為對照品溶液；系統(tǒng)適用性溶液：分別取布洛芬鈉樣品與雜質(zhì)g對照品適量，置于同一量瓶中，加流動相溶解稀釋至刻度，搖勻、濾過，取續(xù)濾液作為系統(tǒng)適用性溶液。

系統(tǒng)適用性：雜質(zhì)g與主峰間分離度均大于1.5，各色譜峰拖尾因子小于2.0，理論塔板數(shù)大于5000，因此，該方法系統(tǒng)適用性良好。代表性譜圖見圖27。

專屬性：空白溶劑對各色譜峰無干擾，雜質(zhì)與主峰分離度良好。此外，樣品經(jīng)破壞，在高溫及氧化破壞條件下有降解產(chǎn)物，降解產(chǎn)物與主峰均能有效分離。因此，該方法專屬性較好。

溶液穩(wěn)定性：供試品溶液與對照品溶液于室溫下放置24h后，色譜圖均無明顯變化，因此，溶液穩(wěn)定性較好。

檢測限定量限：精密稱取雜質(zhì)g對照品適量，以流動相溶解并依次稀釋，分別取20μl注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，雜質(zhì)g檢測限定量限均低于報告限0.05％。

線性：取雜質(zhì)g對照品約10mg，精密稱定，置于一定體積量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為雜質(zhì)g對照品母液；精密量取雜質(zhì)g對照品母液適量，稀釋得到一系列濃度對照品溶液，再分別取20μl注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，雜質(zhì)g在一定范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)大于0.999。

精密度：包括重復(fù)性和中間精密度，按擬定的方法配制6份供試品溶液，分別進樣，結(jié)果表明，雜質(zhì)g與主峰峰面積rsd值均低于3.0％，方法精密度良好。

準(zhǔn)確度：精密稱取布洛芬鈉樣品一定量，置于一定體積量瓶中，向其中分別加入50％水平、100％水平、150％水平的雜質(zhì)g對照品溶液，再用流動相稀釋至刻度作為樣品溶液。每個濃度水平配制3份平行樣。方法準(zhǔn)確度采用加樣回收率計算，經(jīng)試驗，雜質(zhì)g回收率在95％～105％范圍內(nèi)，回收率rsd值低于3.0％，表明該方法回收率良好。

耐用性：通過改變柱溫、流速以及流動相中有機相比例，各色譜峰均能有效分離，表明該方法耐用性良好。

以上實施方式不用于限制本發(fā)明，本發(fā)明的保護范圍由權(quán)利要求書限定。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在本發(fā)明的實質(zhì)和保護范圍內(nèi)，對本發(fā)明做出各種修改或等同替換，這種修改或等同替換也應(yīng)視為落在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。