本發(fā)明屬于食品檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
：，涉及一種馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
：：目前，馬鈴薯已成為我國第四大主糧，國家馬鈴薯主食化項(xiàng)目進(jìn)程正在推進(jìn)，一大批豐富多樣的馬鈴薯主食應(yīng)運(yùn)而生，而馬鈴薯主食用復(fù)配粉是制作許多馬鈴薯主食產(chǎn)品必不可少的原料。由于馬鈴薯復(fù)配主食原料中常用的馬鈴薯全粉或薯泥包含了馬鈴薯除薯皮以外的全部干物質(zhì)，營養(yǎng)豐富，且加工成本遠(yuǎn)高于馬鈴薯淀粉和小麥粉，因此市售的馬鈴薯復(fù)配原料或馬鈴薯主食中的馬鈴薯全粉或薯泥百分含量是否與產(chǎn)品標(biāo)簽所注一致，是否存在摻假、以少稱多等情況。比如以馬鈴薯淀粉或者其他淀粉代替馬鈴薯全粉或薯泥，成為消費(fèi)者和監(jiān)管部門共同關(guān)注的問題。因此，馬鈴薯主食產(chǎn)品中馬鈴薯全粉或薯泥含量的檢測(cè)方法的建立刻不容緩。目前，馬鈴薯全粉或薯泥含量的測(cè)定沒有成熟的方法，且由于馬鈴薯全粉或薯泥的主成分物質(zhì)與其他糧食相近，特征物質(zhì)難以確定。為此，亟需建立一種準(zhǔn)確測(cè)定馬鈴薯全粉或薯泥百分含量的方法，規(guī)范馬鈴薯復(fù)配粉的生產(chǎn)與市場(chǎng)流通，進(jìn)而保證消費(fèi)者的合法權(quán)益。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述問題和/或缺陷，并提供至少后面將說明的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法。為此，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：一種馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法，包括：步驟一，基于熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中是否含有如seqidno：1所示的特異堿基序列中的部分序列，若含有，則判定所述待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中含有馬鈴薯全粉或薯泥，若該待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中含有馬鈴薯全粉，則進(jìn)入步驟二；步驟二，基于近紅外光譜技術(shù)測(cè)定待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中的馬鈴薯全粉或薯泥含量：2.1)取多個(gè)樣品，該多個(gè)樣品中的馬鈴薯全粉或薯泥含量已知，利用近紅外光譜儀于掃描范圍890～1100nm內(nèi)掃描每個(gè)樣品，經(jīng)過處理得到每個(gè)樣品的近紅外光譜特征峰；2.2)利用建模軟件將該多個(gè)樣品的近紅外光譜特征峰與馬鈴薯全粉或薯泥含量之間進(jìn)行分析，經(jīng)過多元散射校正進(jìn)行近紅外光程的校正以消除光程差異，同時(shí)采用卷積平滑一階導(dǎo)數(shù)對(duì)光譜進(jìn)行平滑預(yù)處理，在全光譜850-1100nm范圍內(nèi)，采用偏最小二乘法合并交互驗(yàn)證的方法，建立馬鈴薯的近紅外光譜特征峰與馬鈴薯全粉含量的定標(biāo)方程；2.3)利用近紅外掃描儀于掃描范圍890～1100nm內(nèi)掃描待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食，經(jīng)過處理得到待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的近紅外光譜特征峰，基于所述定標(biāo)方程計(jì)算得到待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中的馬鈴薯全粉或薯泥的含量。優(yōu)選的是，所述的馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，所述馬鈴薯全粉包括馬鈴薯熟全粉和馬玲薯生全粉。該發(fā)明中馬鈴薯含量包括馬鈴薯熟全粉、馬鈴薯生全粉和馬鈴薯薯泥的折干物質(zhì)的量。優(yōu)選的是，所述的馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，步驟2.1)中，所述多個(gè)樣品的馬鈴薯全粉或薯泥含量從0％至100％，且每個(gè)樣品中的馬鈴薯全粉或薯泥的含量均不相同，其中任意兩個(gè)樣品的馬鈴薯全粉或薯泥的含量的差值不小于1％。優(yōu)選的是，所述的馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，步驟2.1)和2.3)中，利用近紅外掃描儀掃描后得到某一樣品的原始光譜，采用msc和s-g-1st平滑處理分別對(duì)原始光譜進(jìn)行預(yù)處理得到所述近紅外光譜特征峰。優(yōu)選的是，所述的馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，步驟2.1)中，每個(gè)樣品利用近紅外光譜儀重復(fù)掃描3次。優(yōu)選的是，所述的馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，步驟2.2)中，所述建模軟件為grams，所述定標(biāo)方程中，馬鈴薯全粉或薯泥的最佳主因子數(shù)為9。優(yōu)選的是，所述的馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，在所述步驟二中，基于近紅外光譜技術(shù)測(cè)定待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中的馬鈴薯全粉或薯泥含量之前，首先將馬鈴薯復(fù)配主食根據(jù)主成份和加工工藝的不同而分成若干類，基于所述近紅外光譜技術(shù)測(cè)定待測(cè)同一類馬鈴薯復(fù)配主食中的馬鈴薯全粉或薯泥含量。優(yōu)選的是，所述的馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，基于熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中是否含有如seqidno：1所示的堿基序列中的部分序列時(shí)，采用的熒光定量pcr的引物為如seqidno：2和3所示的堿基序列。優(yōu)選的是，所述的馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，基于熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中是否含有如seqidno：1所示的堿基序列中的部分序列的具體步驟包括：1.1)取標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品，利用如seqidno：2和3所示的堿基序列進(jìn)行熒光定量pcr反應(yīng)，并繪制標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的馬鈴薯質(zhì)量百分比的對(duì)數(shù)值與循環(huán)閾值ct值之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線和溶解曲線；1.2)取待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食，利用如seqidno：2和3所示的堿基序列進(jìn)行熒光定量pcr反應(yīng)，并繪制待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的馬鈴薯質(zhì)量百分比的對(duì)數(shù)值與循環(huán)閾值ct之間的擴(kuò)增曲線和溶解曲線；1.3)比較待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的擴(kuò)增曲線和溶解曲線各自分別與標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線和溶解曲線的相似性，若待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的擴(kuò)增曲線與標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線基本相同，且待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的溶解曲線與標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的溶解曲線基本相同，則判定所述待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中含有馬鈴薯全粉或薯泥。優(yōu)選的是，所述的馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，在步驟1.3)中，比較待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的擴(kuò)增曲線和溶解曲線各自分別與標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線和溶解曲線的相似性時(shí)，若待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的擴(kuò)增曲線與標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線基本相同，且ct≤34.5，同時(shí)，待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的溶解曲線與標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的溶解曲線基本相同，且tm值介于78.19℃～78.59℃之間，則判定所述待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中含有馬鈴薯全粉或薯泥；在判定所述待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中含有馬鈴薯全粉之后，還包括將待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的循環(huán)閾值ct值帶入所述標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線中，計(jì)算得到待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯全粉或薯泥的質(zhì)量百分比。優(yōu)選的是，所述的馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，其特征在于，熒光定量pcr反應(yīng)以樣品的dna作為模板，采用天恩澤植物dna提取試劑盒柱式植物dnaout(20ml，50t，貨號(hào)60602-50，北京天恩澤生物技術(shù)有限公司，下同)提取方法提取樣品dna，直至加入吸附柱前一步，用4/5體積異丙醇或2倍體積無水乙醇代替1.5倍體積試劑盒溶液lp3，與前一步得到上清液混合，然后于溫度-20℃冷凍30min，再于12000rpm離心15min，取沉淀，清洗后，用洗脫液2.0溶解，得到樣品dna。本發(fā)明至少包括以下有益效果：本發(fā)明通過提供一對(duì)特異性引物，并利用所述特異性引物對(duì)待測(cè)樣品及標(biāo)準(zhǔn)品中的dna進(jìn)行擴(kuò)增，得到擴(kuò)增曲線和溶解曲線，通過對(duì)擴(kuò)增曲線和溶解曲線的分析，通過比較待檢測(cè)樣品及標(biāo)準(zhǔn)品的ct和tm值，能夠方便、快捷、準(zhǔn)確地檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配粉中是否含有馬鈴薯成分，克服了傳統(tǒng)檢測(cè)方法耗時(shí)長(zhǎng)、操作步驟復(fù)雜、結(jié)果不夠精確的缺點(diǎn)，使得檢測(cè)方法更加快速、簡(jiǎn)單、高效、精準(zhǔn)。本發(fā)明的結(jié)果表明，采用近紅外法測(cè)定馬鈴薯復(fù)配粉中的馬鈴薯全粉或薯泥含量是可行的，所得模型相關(guān)性高，標(biāo)準(zhǔn)偏差較小，重復(fù)性高。利用近紅外技術(shù)進(jìn)行樣品的無損分析，方法可靠、準(zhǔn)確，對(duì)樣品無需進(jìn)行任何預(yù)處理，是一種環(huán)保、快速的分析測(cè)定方法。但發(fā)明可為馬鈴薯復(fù)配粉中的馬鈴薯全粉或薯泥分含量快速測(cè)定提供一定的理論依據(jù)，有利于馬鈴薯主食產(chǎn)品市場(chǎng)的規(guī)范。本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征將部分通過下面的說明體現(xiàn)，部分還將通過對(duì)本發(fā)明的研究和實(shí)踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。附圖說明圖1為本發(fā)明所述的馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法的流程示意圖；圖2為本發(fā)明其中一個(gè)實(shí)施例中小麥粉、大米粉、玉米粉、大西洋馬鈴薯、夏波蒂馬鈴薯dna的熒光反應(yīng)曲線；圖3為本發(fā)明其中一個(gè)實(shí)施例中夏波蒂生全粉-面粉的熒光反應(yīng)曲線；圖4為本發(fā)明其中一個(gè)實(shí)施例中夏波蒂馬鈴薯熟全粉-面粉的熒光反應(yīng)曲線；圖5為本發(fā)明其中一個(gè)實(shí)施例中小麥粉、大米粉、玉米粉、大西洋馬鈴薯、夏波蒂馬鈴薯dna的溶解曲線；圖6為本發(fā)明其中一個(gè)實(shí)施例中夏波蒂馬鈴薯生全粉-面粉標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖7為本發(fā)明其中一個(gè)實(shí)施例中夏波蒂馬鈴薯熟全粉-面粉標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖8為本發(fā)明其中一個(gè)實(shí)施例中馬鈴薯全粉-小麥復(fù)配粉近紅外光譜圖；圖9為本發(fā)明其中一個(gè)實(shí)施例中馬鈴薯全粉-小麥復(fù)配粉中馬鈴薯全粉百分含量實(shí)際值和預(yù)測(cè)值相關(guān)圖；圖10為本發(fā)明其中一個(gè)實(shí)施例中驗(yàn)證樣品的馬鈴薯全粉百分含量實(shí)際值和近紅外預(yù)測(cè)值相關(guān)圖。圖11為本發(fā)明其中一個(gè)實(shí)施例中馬鈴薯(夏波蒂)薯泥-小麥粉復(fù)配原料中馬鈴薯泥(折干物質(zhì))百分含量實(shí)際值和預(yù)測(cè)值相關(guān)圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書文字能夠據(jù)以實(shí)施。應(yīng)當(dāng)理解，本文所使用的諸如“具有”、“包含”以及“包括”術(shù)語并不配出一個(gè)或多個(gè)其它元件或其組合的含有或添加。如圖1所示，本發(fā)明提供一種馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法，包括：步驟一，基于熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中是否含有如seqidno：1所示的特異堿基序列中的部分序列，若含有，則判定所述待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中含有馬鈴薯全粉或薯泥，若該待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中含有馬鈴薯全粉或薯泥，則進(jìn)入步驟二；步驟二，基于近紅外光譜技術(shù)測(cè)定待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中的馬鈴薯全粉或薯泥含量：2.1)取多個(gè)樣品，該多個(gè)樣品中的馬鈴薯全粉或薯泥含量已知，利用近紅外光譜儀于掃描范圍890～1100nm內(nèi)掃描每個(gè)樣品，經(jīng)過處理得到每個(gè)樣品的近紅外光譜特征峰；2.2)利用建模軟件將該多個(gè)樣品的近紅外光譜特征峰與馬鈴薯全粉含量之間進(jìn)行分析，經(jīng)過多元散射校正(multiplicativescattercorrection，msc)進(jìn)行近紅外光程的校正以消除光程差異，同時(shí)采用卷積平滑一階導(dǎo)數(shù)(savitzky-golaysmoothingfirst-orderderivative，s-g-1st)對(duì)光譜進(jìn)行平滑預(yù)處理，在全光譜(850-1100nm)范圍內(nèi)，采用偏最小二乘法(partialleastsquares，pls)合并交互驗(yàn)證(cross-validation，cv)的方法，建立馬鈴薯的近紅外光譜特征峰與馬鈴薯全粉或薯泥含量的定標(biāo)方程；2.3)利用近紅外掃描儀于掃描范圍890～1100nm內(nèi)掃描待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食，經(jīng)過處理得到待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的近紅外光譜特征峰，基于所述定標(biāo)方程計(jì)算得到待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中的馬鈴薯全粉的含量。由于單純的近紅外光譜技術(shù)適合定量檢測(cè)馬鈴薯全粉或薯泥的含量的特異性不強(qiáng)，容易出現(xiàn)誤判結(jié)果，只有在確定定性前提下方可進(jìn)行定性分析，而熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)馬鈴薯特異性非常強(qiáng)，因此本發(fā)明將基于熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)待測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食是否含有馬鈴薯全粉或薯泥和近紅外光譜技術(shù)測(cè)定馬鈴薯全粉或薯泥含量相結(jié)合，以實(shí)現(xiàn)對(duì)馬鈴薯的特異性檢測(cè)和含量的精確檢測(cè)。在本發(fā)明中，所述馬鈴薯全粉包括馬鈴薯熟全粉和馬玲薯生全粉。該發(fā)明中馬鈴薯含量包括馬鈴薯熟全粉、馬鈴薯生全粉和馬鈴薯薯泥的折干物質(zhì)的量。在上述方案中，作為優(yōu)選，該馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，步驟2.1)中，所述多個(gè)樣品的馬鈴薯全粉或薯泥含量從0％至100％，且每個(gè)樣品中的馬鈴薯全粉或薯泥的含量均不相同，其中任意兩個(gè)樣品的馬鈴薯全粉或薯泥的含量的差值不小于1％。在本發(fā)明的其中一個(gè)實(shí)施例中，作為優(yōu)選，該馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，步驟2.1)和2.3)中，利用近紅外掃描儀掃描后得到某一樣品的原始光譜，采用msc和s-g-1st平滑處理分別對(duì)原始光譜進(jìn)行預(yù)處理得到所述近紅外光譜特征峰。在本發(fā)明的其中一個(gè)實(shí)施例中，作為優(yōu)選，該馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，步驟2.1)中，每個(gè)樣品利用近紅外光譜儀重復(fù)掃描3次。在本發(fā)明的其中一個(gè)實(shí)施例中，作為優(yōu)選，該馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，步驟2.2)中，所述建模軟件為grams，所述定標(biāo)方程中，馬鈴薯全粉或薯泥的最佳主因子數(shù)為9。在本發(fā)明的其中一個(gè)實(shí)施例中，作為優(yōu)選，該馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，在所述步驟二中，基于近紅外光譜技術(shù)測(cè)定待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中的馬鈴薯全粉或薯泥含量之前，首先將馬鈴薯復(fù)配主食根據(jù)主成份和加工工藝的不同而分成若干類，基于所述近紅外光譜技術(shù)測(cè)定待檢測(cè)同一類馬鈴薯復(fù)配主食中的馬鈴薯全粉含量。在本發(fā)明的其中一個(gè)實(shí)施例中，作為優(yōu)選，該馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，基于熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中是否含有如seqidno：1所示的堿基序列中的部分序列時(shí)，采用的熒光定量pcr的引物為如seqidno：2和3所示的堿基序列。在本發(fā)明的其中一個(gè)實(shí)施例中，作為優(yōu)選，該馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，基于熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中是否含有如seqidno：1所示的堿基序列中的部分序列的具體步驟包括：1.1)取標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品，利用如seqidno：2和3所示的堿基序列進(jìn)行熒光定量pcr反應(yīng)，并繪制標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的馬鈴薯質(zhì)量百分比的對(duì)數(shù)值與循環(huán)閾值ct值之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線和溶解曲線；1.2)取待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食，利用如seqidno：2和3所示的堿基序列進(jìn)行熒光定量pcr反應(yīng)，并繪制待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的馬鈴薯質(zhì)量百分比的對(duì)數(shù)值與循環(huán)閾值ct值之間的擴(kuò)增曲線和溶解曲線；1.3)比較待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的擴(kuò)增曲線和溶解曲線各自分別與標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線和溶解曲線的相似性，若待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的擴(kuò)增曲線與標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線基本相同，且待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的溶解曲線與標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的溶解曲線基本相同，則判定所述待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中含有馬鈴薯全粉或薯泥。seqidno：1所示的堿基序列為馬鈴薯龍葵素鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶基因的cds序列(solanumtuberosumrhamnose:beta-solanine/beta-chaconinerhamnosyltransferase(sgt3)gene)。在上述方案中，作為優(yōu)選，該馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，在步驟1.3)中，比較待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的擴(kuò)增曲線和溶解曲線各自分別與標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線和溶解曲線的相似性時(shí)，若待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的擴(kuò)增曲線與標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線基本相同，且ct≤34.5，同時(shí)，待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的溶解曲線與標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的溶解曲線基本相同，且tm值介于78.19℃～78.59℃之間，則判定所述待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中含有馬鈴薯全粉或薯泥；在判定所述待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中含有馬鈴薯全粉之后，還包括將待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的循環(huán)閾值ct值帶入所述標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線中，計(jì)算得到待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯全粉的質(zhì)量百分比。熒光定量pcr技術(shù)在一定精度范圍內(nèi)也可以進(jìn)行的定量分析，該結(jié)果與近紅外檢測(cè)的結(jié)果有機(jī)結(jié)合方可準(zhǔn)確確定絕對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。在本發(fā)明的其中一個(gè)實(shí)施例中，作為優(yōu)選，該馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法中，熒光定量pcr反應(yīng)以樣品的dna作為模板，采用天恩澤植物dna提取方法提取樣品dna，直至加入吸附柱前一步，用4/5體積異丙醇或2倍體積無水乙醇代替1.5倍體積試劑盒溶液lp3，與前一步得到上清液混合，然后于溫度-20℃冷凍30min，再于12000rpm離心15min，取沉淀，清洗后，用洗脫液2.0溶解，得到樣品dna。為使本發(fā)明領(lǐng)域技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明，現(xiàn)提供如下的實(shí)施例進(jìn)行說明。(1)引物合成參照genbank已發(fā)表的馬鈴薯基因序列，設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物：上游引物f：5'-ggcgatggaacagaatgaag-3'(seqidno：2)下游引物r：5'-tgctgaggggcaatgatagt-3'(seqidno：3)。預(yù)期擴(kuò)增片段大小144bp。(2)dna提取將含水樣品冷凍干燥，打粉，過80目篩；粉狀樣品過篩后混合均勻，參照天恩澤植物dna提取試劑盒柱式植物dnaout說明書提取總dna。并且在此試劑盒方法進(jìn)行改進(jìn)，解決了部分樣品利用試劑盒提取dna濃度過低的問題，擴(kuò)大了此方法的適用范圍。改進(jìn)方法：按照天恩澤植物dna提取試劑盒說明書操作，直至加入吸附柱前一步，用4/5體積異丙醇或2倍體積無水乙醇代替1.5倍體積試劑盒溶液lp3，與前一步得到上清液混合，-20℃冷凍30min，12000rpm離心15min，留沉淀，用75％乙醇清洗2遍，開蓋放置5-10min直至乙醇揮發(fā)干凈，用洗脫液2.0溶解，-20℃保存。復(fù)配粉基因組dna模板組成；所述系列馬鈴薯質(zhì)量占復(fù)配粉質(zhì)量百分比2％，5％，10％，20％，40％，60％，80％，100％的復(fù)配粉樣品。提取的dna樣品用紫外可見分光光度計(jì)核酸蛋白測(cè)定儀濃度與純度，od260/od280值在1.8-2.0之間dna樣品純度可用。濃度稀釋到10-30ng/μl。瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，降解dna片段大小不得低于200bp。(3)sybrgreeni熒光定量pcr以標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品待測(cè)樣品分別為模板，f和r為引物，進(jìn)行sybrgreeni熒光定量pcr反應(yīng)。sybrgreeni熒光定量pcr反應(yīng)體系為：2x的sybrgreenpcrmastermix10.0μl，10pmol/l的上游引物f、下游引物r各4.0μl，dna模板20ng，用滅菌超純水補(bǔ)足至20.0μl；反應(yīng)程序?yàn)椋侯A(yù)變性95℃，5min；95℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，40循環(huán)；設(shè)定延伸階段收集熒光信號(hào)；溶解曲線從60℃開始，每步上升0.5℃，停留10s，共70循環(huán)，升至95℃。(4)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和溶解曲線根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品中馬鈴薯質(zhì)量百分比對(duì)應(yīng)的循環(huán)閾值ct馬鈴薯，得到馬鈴薯質(zhì)量百分比的對(duì)數(shù)值與ct的線性關(guān)系，繪制成馬鈴薯質(zhì)量百分比的對(duì)數(shù)值與ct值之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線；根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品進(jìn)行sybrgreeni熒光定量pcr反應(yīng)結(jié)果，采用軟件自動(dòng)分析繪制溶解曲線。將復(fù)配粉基因擴(kuò)增曲線和熔解曲線與馬鈴薯特異性基因擴(kuò)增曲線和熔解曲線比較相似性，基本相同說明待測(cè)復(fù)配粉中有馬鈴薯成分；將待測(cè)樣品的ct值帶入已建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算待測(cè)樣品中馬鈴薯成分的質(zhì)量百分比：其中，ctx表示試樣某馬鈴薯樣品特異性檢測(cè)體系擴(kuò)增ct值；k表示標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率；b表示標(biāo)準(zhǔn)曲線的截距。(5)結(jié)果判定待測(cè)樣品sybrgreeni熒光定量pcr反應(yīng)曲線呈“s”型(見圖1～3)，而且結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線和溶解曲線得出：ct值≤34.5，且tm值介于為78.19℃～78.59℃之間，所以判定待測(cè)樣品中含有馬鈴薯成分。(6)sybrgreeni熒光定量pcr的敏感性和特異性驗(yàn)證實(shí)施例1)敏感性試驗(yàn)取200ng純馬鈴薯dna樣品稀釋9個(gè)梯度，取1μl為模板進(jìn)行sybrgreeni熒光定量pcr和普通pcr，測(cè)定sybrgreeni熒光定量pcr的敏感性，并與普通pcr進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果發(fā)現(xiàn)該方法能檢出0.02ng的標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品，而常規(guī)pcr只能檢出4ng的標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品，即sybrgreeni熒光定量pcr的敏感性是常規(guī)pcr的200倍。復(fù)配原料樣品本方法可以檢測(cè)出1％的馬鈴薯。2)特異性實(shí)施例用小麥粉、大米粉、玉米粉和大西洋馬鈴薯、夏波蒂馬鈴薯的dna做為模板進(jìn)行sybrgreeni熒光定量pcr。如圖1～6中，結(jié)果顯示：大西洋馬鈴薯、夏波蒂馬鈴薯樣品的反應(yīng)曲線呈“s”型，ct值為19～22之間；而小麥粉、大米粉、黃米粉、玉米粉、莜面粉dna的反應(yīng)曲線為一條直線，為陰性結(jié)果。重復(fù)實(shí)施例ct值變異系數(shù)小于5％，表明sybrgreeni熒光定量pcr的特異性強(qiáng)。在本發(fā)明的其中幾個(gè)實(shí)施例中，如圖1所示，提取馬鈴薯熟粉質(zhì)量百分比為100％、80％、60％、40％、20％、10％、5％以及2％的復(fù)配粉中的dna，利用seqidno：2和3所示的引物序列進(jìn)行熒光定量pcr，并進(jìn)行后續(xù)分析。如圖2所示，為本發(fā)明其中一個(gè)實(shí)施例中，以小麥粉、大米粉、玉米粉、大西洋馬鈴薯、夏波蒂馬鈴薯dna為模板，利用seqidno：2和3所示的引物序列進(jìn)行熒光定量pcr獲得的熒光反應(yīng)曲線圖，圖中線ⅰ為大西洋馬鈴薯dna的熒光反應(yīng)曲線，線ⅱ為夏波蒂馬鈴薯dna的熒光反應(yīng)曲線，線ⅲ為小麥粉dna的熒光反應(yīng)曲線，線ⅳ為玉米粉dna的熒光反應(yīng)曲線圖，線ⅴ為大米粉dna的熒光反應(yīng)曲線。從圖中可以看出，當(dāng)樣品中含有馬鈴薯時(shí)，能夠擴(kuò)增出s型的曲線，而未含有馬鈴薯的樣品，擴(kuò)增不出連續(xù)曲線，為斷斷續(xù)續(xù)的曲線。如圖3中所示，以馬鈴薯含量不同的馬鈴薯生全粉dna為模板，利用seqidno：2和3所示的引物序列進(jìn)行熒光定量pcr獲得的熒光反應(yīng)曲線圖，取δrn＝0.1的值處觀察，多條“s”型的曲線于此處是分開的，從左到右依次馬鈴薯含量為100％、80％、60％、40％、20％、10％、5％、2％的馬鈴薯生全粉的熒光擴(kuò)增曲線，非“s”型的曲線為馬鈴薯含量為0％的樣品的熒光擴(kuò)增曲線，為陰性反應(yīng)。如圖4中所示，以馬鈴薯含量不同的馬鈴薯熟全粉dna為模板，利用seqidno：2和3所示的引物序列進(jìn)行熒光定量pcr獲得的熒光反應(yīng)曲線圖，取δrn＝0.1的值處觀察，多條“s”型的曲線于此處是分開的，從左到右依次馬鈴薯含量為100％、80％、60％、40％、20％、10％、5％、2％的馬鈴薯熟全粉的熒光擴(kuò)增曲線，非“s”型的曲線為馬鈴薯含量為0％的樣品的熒光擴(kuò)增曲線，為陰性反應(yīng)。圖5為小麥粉、大米粉、玉米粉、大西洋馬鈴薯、夏波蒂馬鈴薯dna的溶解曲線，圖中線ⅰ為大西洋馬鈴薯dna的溶解曲線，對(duì)應(yīng)tm值為78.59℃，線ⅱ為夏波蒂馬鈴薯dna的溶解曲線，對(duì)應(yīng)tm值為78.19℃，線ⅲ為小麥粉dna的溶解曲線，線ⅳ為玉米粉dna的溶解曲線，線ⅴ為大米粉dna的溶解曲線。圖6為根據(jù)圖3中每條擴(kuò)增曲線的循環(huán)閾值和其對(duì)應(yīng)的馬鈴薯熟粉質(zhì)量百分比得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖7為根據(jù)圖4中每條擴(kuò)增曲線的循環(huán)閾值和其對(duì)應(yīng)的馬鈴薯生粉質(zhì)量百分比得到圖6中的標(biāo)準(zhǔn)曲線。由圖7曲線可看出，當(dāng)樣品中馬鈴薯含量為2.5％，ct值最大，為31.52，且由圖7曲線可看出，若樣品中待測(cè)馬鈴薯含量為0.5％，計(jì)算可知此時(shí)ct值為34.33，近似計(jì)為34.5。故此，利用熒光定量pcr的方法，比較待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的擴(kuò)增曲線和溶解曲線各自分別與標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線和溶解曲線的相似性，若待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的擴(kuò)增曲線與標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線基本相同或一致，且待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的溶解曲線與標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的溶解曲線基本相同或一致，則判定所述待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中含有馬鈴薯全粉。進(jìn)一步更加準(zhǔn)確地判定方法是，若待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的擴(kuò)增曲線與標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線基本相同，且ct≤34.5(如圖7中說明)，同時(shí)，待測(cè)樣品溶解曲線與標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品溶解曲線相似，有且只有一個(gè)峰，tm值介于78.19℃～78.59℃之間(如圖5中所示)，則判定所述待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中含有馬鈴薯全粉。在判定所述待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中含有馬鈴薯全粉之后，還包括將待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食的循環(huán)閾值ct值帶入所述標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線中，初級(jí)計(jì)算得到待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯全粉的質(zhì)量百分比，以可以與后期基于近紅外光譜技術(shù)獲得的主食中馬鈴薯全粉的質(zhì)量百分比做出比較。通過上述方法判定到主食中確實(shí)含有馬鈴薯全粉后，基于近紅外光譜技術(shù)測(cè)定待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中的馬鈴薯全粉含量?；诮t外光譜技術(shù)測(cè)定待檢測(cè)馬鈴薯復(fù)配主食中的馬鈴薯全粉含量如下介紹：1.材料與方法1.1材料小麥粉、內(nèi)蒙古恒豐河套雪花粉；夏波蒂馬鈴薯雪花粉、內(nèi)蒙古凌志馬鈴薯科技股份有限公司。1.2儀器設(shè)備infraneojunior型近紅外光譜分析儀、chopin(法國)技術(shù)公司mr2l混樣儀chopin(法國)技術(shù)公司電子天平上海英衡稱重有限公司1.3方法1.3.1樣品準(zhǔn)備將馬鈴薯全粉按照0％、1％、2％....100％的比例分別于相應(yīng)比例的面粉進(jìn)行混合，共獲得101個(gè)待測(cè)馬鈴薯復(fù)配粉樣品，樣品編號(hào)以馬鈴薯全粉比例為依據(jù)，分別為0、1、2…100。其中隨機(jī)抽取8、23、44、46、77和93號(hào)樣品，分成2份，一份留作建模樣品，另一份為驗(yàn)證樣品。再選取編號(hào)為10、20、30…90的9個(gè)樣品直接作為驗(yàn)證樣品。故用于建模的樣品共有92個(gè)，用于驗(yàn)證模型表現(xiàn)的樣品共有15個(gè)。為保證馬鈴薯粉與小麥粉充分混合均勻，本實(shí)施例采用chopin(法國)公司的mr2l混樣儀進(jìn)行樣品的混合，每個(gè)樣品混合5min。1.3.2建模樣品的掃描將混合均勻的樣品裝入圓形黑色樣品盒內(nèi)，用刮板刮去多余的粉末使樣品表面平整，然后旋緊樣品盒蓋，將樣品盒放入近紅外光譜儀的樣品室內(nèi)，開始掃描。掃描范圍890～1100nm，每個(gè)樣品重復(fù)掃描3次。1.3.3近紅外光譜處理近紅外光譜采集時(shí)，會(huì)夾入許多高頻隨機(jī)噪聲、基線漂移和光散射等噪聲信息，從而干擾光譜信息與樣本內(nèi)有效成分，因此建立模型前必須對(duì)原始光譜進(jìn)行預(yù)處理。常用的預(yù)處理方法有：s-g平滑、導(dǎo)數(shù)處理、msc、變量標(biāo)準(zhǔn)化等。s-g平滑針對(duì)光譜曲線進(jìn)行低通濾波，保留有用低頻信息，提高信噪比。導(dǎo)數(shù)處理可以消除基線漂移或平緩背景干擾的影響，強(qiáng)化譜帶特征、克服譜帶重疊。msc可以有效地消除散射影響，增強(qiáng)了與成分含量相關(guān)的光譜吸收信息。本實(shí)施例采用msc進(jìn)行近紅外光程的校正以消除光程差異。同時(shí)采用1階導(dǎo)數(shù)或2階導(dǎo)數(shù)對(duì)光譜進(jìn)行平滑預(yù)處理，以減少光譜中噪音等因素影響。1.3.4近紅外定標(biāo)模型的建立定標(biāo)過程是將近紅外光譜特征峰與復(fù)配粉中馬鈴薯全粉百分含量之間建立起相關(guān)關(guān)系。將從近紅外儀器中導(dǎo)出的光譜導(dǎo)入到建模grams軟件中，并將每個(gè)光譜對(duì)應(yīng)的目標(biāo)值(實(shí)際馬鈴薯全粉比例)錄入到軟件中，通過各種計(jì)算方法，如偏最小二乘法pls，以及交互驗(yàn)證，已經(jīng)光譜范圍的篩選等，將光譜特征吸收峰與目標(biāo)值之間進(jìn)行回歸分析，建立定標(biāo)方程。1.3.5模型的驗(yàn)證將建立的定標(biāo)模型導(dǎo)入近紅外光譜儀中，并對(duì)15個(gè)驗(yàn)證樣品進(jìn)行掃描，每個(gè)樣品掃描5次，得到驗(yàn)證樣品的檢測(cè)結(jié)果，和樣品的實(shí)際百分含量對(duì)比，以此來驗(yàn)證定標(biāo)方程的準(zhǔn)確性和可靠性。通過驗(yàn)證相關(guān)系數(shù)(r2p)、驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)偏差(sep)、重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差(sdr)為0.246，重復(fù)性變異系數(shù)(cvr)等參數(shù)對(duì)模型進(jìn)行內(nèi)部驗(yàn)證，最后通過外部驗(yàn)證考察模型的準(zhǔn)確性和適應(yīng)性。2.結(jié)果分析2.1馬鈴薯全粉-小麥復(fù)配粉近紅外光譜圖馬鈴薯復(fù)配粉樣品的原始光譜圖如圖8所示，由圖可知所有樣品的近紅外光譜均在890-960nm范圍內(nèi)有一吸收峰，在960-1100nm范圍內(nèi)有一強(qiáng)吸收峰，圖8中，ⅰ所示的線為小麥粉的光譜圖，ⅱ所示的線為含馬鈴薯全粉的樣品的光譜圖，如圖中所示，小麥粉(馬鈴薯含量為0)的近紅外光譜圖和含馬鈴薯全粉的樣品光譜圖具有相同位置的吸收峰，但吸收峰值大小不同，因此近紅外光譜可以區(qū)分小麥粉和添加了馬鈴薯的樣品。且樣品所含馬鈴薯全粉的百分含量不同吸收峰的大小不同，說明近紅外定量馬鈴薯全粉含量理論上可行。2.2定標(biāo)模型的建立按1.3.3所述方法對(duì)原始光譜進(jìn)行處理后，經(jīng)過多種計(jì)算方法的嘗試，最終確定采用msc和s-g-1st分別對(duì)原始光譜進(jìn)行預(yù)處理得到最佳預(yù)測(cè)模型。在全光譜(850-1100nm)范圍內(nèi)，采用pls合并cv的方法，并根據(jù)最佳的定標(biāo)集交互驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)差secv值和模型決定系數(shù)r2c的大小，確定預(yù)測(cè)混合粉中馬鈴薯全粉的最佳主因子數(shù)為9。用此定標(biāo)方程計(jì)算出樣品的近紅外預(yù)測(cè)值?；旌戏壑械鸟R鈴薯全粉比例的實(shí)際值及近紅外預(yù)測(cè)值相關(guān)圖如圖8所示。分析建模的92個(gè)馬鈴薯全粉-麥粉混合粉樣品中的馬鈴薯全粉百分含量從0％-100％，且跨度為1％，涵蓋范圍較廣。從結(jié)果可知，預(yù)測(cè)模型的定標(biāo)決定系數(shù)r2c為0.9997，交互定標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)誤差secv＝0.51相對(duì)于1％的跨度也較小，表明預(yù)測(cè)模型具有較好的相關(guān)性。2.3模型的驗(yàn)證結(jié)果15個(gè)驗(yàn)證樣品的近紅外預(yù)測(cè)平均值與驗(yàn)證樣品的實(shí)際馬鈴薯百分含量，以及平均預(yù)測(cè)值與實(shí)際值的預(yù)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)誤sep和每個(gè)樣品5次掃描結(jié)果的sdr和cvr，如表1所示，其中近紅外預(yù)測(cè)值為去除掉系統(tǒng)偏差的結(jié)果(系統(tǒng)偏差為-0.527)。驗(yàn)證樣品集的馬鈴薯全粉百分含量實(shí)際值和近紅外預(yù)測(cè)值相關(guān)圖見圖9。表1.驗(yàn)證樣品馬鈴薯全粉的實(shí)際值與預(yù)測(cè)值及重復(fù)性評(píng)價(jià)參數(shù)table1repeatabilityevaluationforactualvaluesandpredictedvaluesofpotatomixedpowder由表1和圖3可以看到，15個(gè)驗(yàn)證樣品的sdr平均值和cvr平均值分別是0.246和0.967，數(shù)值較小，表明近紅外測(cè)定混合粉中馬鈴薯比例具有較好的重復(fù)性。用所建近紅外模型來預(yù)測(cè)混合粉中的馬鈴薯全粉比例，近紅外法預(yù)測(cè)結(jié)果與實(shí)際值的sep為0.69，驗(yàn)證集的決定系數(shù)r2v為0.9995，且15個(gè)樣品除一個(gè)馬鈴薯全粉高含量的90號(hào)樣品的偏差為1.62％，大于1％外，其余14個(gè)樣品的預(yù)測(cè)值與實(shí)際值偏差均小于1％。證明測(cè)定混合粉中馬鈴薯全粉比例的近紅外法定標(biāo)模型具有較好的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，且預(yù)測(cè)誤差符合預(yù)期。且本實(shí)施例選擇的驗(yàn)證樣品集的分布較廣，有很強(qiáng)的代表性，可以比較全面的檢驗(yàn)儀器的實(shí)測(cè)效果。近紅外光譜圖主要反應(yīng)物質(zhì)的組成成分和成分含量，因?yàn)槭芏喾N因素(光照、粒度、密度、表面紋理等物理因素)的干擾，原始光譜曲線會(huì)產(chǎn)生基線漂移，并且含有噪聲。由于光譜曲線中部分波段受噪聲影響嚴(yán)重，因此研究范圍以850-1100nm為主。本實(shí)施例中馬鈴薯復(fù)配粉樣品在890-960nm和960-1100nm各有一個(gè)特征吸收峰，吸收峰強(qiáng)度和馬鈴薯百分含量相關(guān)。研究表明o-h伸縮振動(dòng)的三級(jí)和二級(jí)倍頻發(fā)生在譜區(qū)的910nm和980nm；c-h伸縮振動(dòng)的三級(jí)和二級(jí)倍頻分別發(fā)生在譜區(qū)的910nm和1100nm。這些特征吸收峰可能是o-h和c-h伸縮振動(dòng)引起的。s-g卷積平滑法是通過多項(xiàng)式來對(duì)移動(dòng)窗口內(nèi)的數(shù)據(jù)進(jìn)行了多項(xiàng)式最小二乘擬合，是一種加權(quán)平均的方法，常用于光譜的平滑預(yù)處理中。在平滑的基礎(chǔ)上求導(dǎo)，放大了波譜中的特征波段，同時(shí)有效地消除了其他背景的干擾，提高了分辨率。msc主要是消除由于樣品顆粒大小及密度不均勻產(chǎn)生的光散射影響，在固體顆粒樣本光譜中應(yīng)用的比較廣泛。因此，本實(shí)施例采用msc結(jié)合s-g-1st對(duì)光譜進(jìn)行處理，消除散射影響。pls是nirs定量分析中應(yīng)用最多的建模方法。pls不僅可以對(duì)光譜矩陣進(jìn)行分解，同時(shí)也可以對(duì)濃度矩陣進(jìn)行分解。衡量定標(biāo)方程優(yōu)劣的主要參數(shù)包括交互定標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)誤差(secv)，定標(biāo)的決定系數(shù)(r2c)。r2c越好，secv越小，模型預(yù)測(cè)效果越好。本實(shí)施例中r2c為0.9997，secv為0.51。r2c值較高，十分接近1；secv值相對(duì)于樣品中1％的馬鈴薯百分含量的跨度來說，可以滿足預(yù)測(cè)需求，模型預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性能較好。模型的可重復(fù)性也是檢驗(yàn)?zāi)Ｐ偷闹匾笜?biāo)，從本實(shí)施例驗(yàn)證集的結(jié)果來看，樣品實(shí)際百分含量和預(yù)測(cè)值之間整體偏差較小，重復(fù)性也較好。本實(shí)施例研究結(jié)果表明，采用近紅外法測(cè)定馬鈴薯復(fù)配粉中的馬鈴薯全粉含量是可行的，所得模型相關(guān)性高，標(biāo)準(zhǔn)偏差較小，重復(fù)性高。利用近紅外技術(shù)進(jìn)行樣品的無損分析，方法可靠、準(zhǔn)確，對(duì)樣品無需進(jìn)行任何預(yù)處理，是一種環(huán)保、快速的分析測(cè)定方法。本發(fā)明是基于一種面粉和馬鈴薯全粉不同梯度混合得到的，因而其應(yīng)用于其他種類馬鈴薯復(fù)配粉中馬鈴薯全粉含量的測(cè)定有待于進(jìn)一步的研究確認(rèn)。但本發(fā)明結(jié)果可為馬鈴薯復(fù)配粉中的馬鈴薯粉百分含量快速測(cè)定提供一定的理論依據(jù)。如上所述，生物檢測(cè)方法利用某些生物材料(如酶、抗體、組織、細(xì)胞、dna等)對(duì)一定的化學(xué)物質(zhì)具有的特異性識(shí)別能力或靈敏響應(yīng)能力。近紅外光譜技術(shù)是近年來應(yīng)用于某種物質(zhì)含量測(cè)定、中藥摻假、水果糧食品質(zhì)檢測(cè)等較多的一種物理檢測(cè)手段，具有檢測(cè)速度快、樣品需要量少、可實(shí)現(xiàn)無損檢測(cè)等特點(diǎn)。本發(fā)明采用熒光定量pcr技術(shù)對(duì)馬鈴薯進(jìn)行特異性測(cè)定，采用近紅外光譜技術(shù)對(duì)馬鈴薯含量進(jìn)行精確測(cè)定，將近紅外光譜技術(shù)和熒光定量pcr技術(shù)相結(jié)合，兩種技術(shù)相互彌補(bǔ)不足，建立了一種快速準(zhǔn)確的馬鈴薯全粉含量的測(cè)定方法。盡管本發(fā)明的實(shí)施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實(shí)施方式中所列運(yùn)用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對(duì)于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實(shí)現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細(xì)節(jié)和這里示出與描述的圖例。sequencelisting<110>中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工所<120>馬鈴薯復(fù)配主食中馬鈴薯含量的測(cè)定方法<130>2016<160>3<170>patentinversion3.5<210>1<211>2539<212>dna<213>馬鈴薯（solanumtuberosuml.）<400>1gttgtatggaccttttggtttggatatatatgagataatgtacataacaatttgttcaat60ctgaaaatagtagaacaagttgatttggtatacatgatatatacatcagactcaaatggc120agaaaaaaatttgtatatcaatctgaaattaattatgtatataacctaaaaataatcttg180tacaccaatctaatattaattatgtatacaattttaaaattaatcaacatatacacacaa240aatatgtaatgcaaaattcaaacagttatatacattataatagctatacattcaattata300tgtattatgtataactagacaaactttttgagatataatattgtgaaaaaaccgatgtcg360atacaattatcttcatttatgtatataaattataagaatgtatacatatagaatatacac420tgagtaagtcgatttgaaatacacatatatattatagaactatatgtatacattcaattt480aatatggatagttttgtgatatacatgtagtttattttttgaccagtaaacagtatttcc540cccgtccatat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