本發(fā)明涉及金黃色葡萄球菌的檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其指一種金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

金黃色葡萄球菌是是人類的一種重要病原菌，隸屬于葡萄球菌屬（Staphylococcus），有“嗜肉菌"的別稱，是革蘭氏陽性菌的代表，可引起許多嚴(yán)重感染。金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，空氣、水、灰塵及人和動(dòng)物的排泄物中都可找到。因此，食品受到污染的機(jī)會(huì)很多。美國疾病控制中心報(bào)告，由金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位，僅次于大腸桿菌。金黃色葡萄球菌腸毒素是個(gè)世界性衛(wèi)生難題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒，占整個(gè)細(xì)菌性食物中毒的33%，加拿大則更多，占到45%，中國金黃色葡萄球菌引起的食物中毒事件也時(shí)有發(fā)生。

準(zhǔn)確及時(shí)的檢測(cè)手段是預(yù)防和控制病原微生物傳播的關(guān)鍵。目前金黃色葡萄球菌的檢測(cè)多采用傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)的方法， 主要包括前增菌、選擇性增菌、平板分離、生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定等步驟，涉及的實(shí)驗(yàn)較多、操作較煩瑣、檢測(cè)周期較長(一般需要4～7d)、準(zhǔn)備和收尾工作繁重，已無法滿足現(xiàn)階段食品中致病菌快速檢測(cè)的現(xiàn)實(shí)需要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)方法。

一種金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)方法，包括以下步驟：

1.培養(yǎng)基配制

1）增菌培養(yǎng)基配制：稱取 26.5 g 增菌培養(yǎng)基，加入預(yù)熱 42±1 ℃去離子水 1 L，充分溶解，備用；

2）選擇性培養(yǎng)基配制：稱取 7.5 g 選擇培養(yǎng)基，加入預(yù)熱 42±1 ℃去離子水 100 mL，充分溶解，備用；

2. 無菌操作取 25 g(mL)樣品到均質(zhì)袋中，并向其中加入 225 mL 預(yù)熱后的增菌培養(yǎng)基，放入均質(zhì)器中均質(zhì) 2 min；42 ℃靜止或者振蕩培養(yǎng) 6 h，根據(jù)需要也可以延長至 24 h；取 0.1 mL 上述增菌液，加入含 1 mL 選擇性培養(yǎng)基的 5 mL 玻璃管內(nèi)，42±1 ℃繼續(xù)培養(yǎng) 18-24 h；

3. 將培養(yǎng)物混合均勻，取 1 mL 到試管中沸水（100 ℃）加熱 10 min，冷卻至室溫，用滴管滴加 3-4 滴至膠體金檢測(cè)卡的樣品孔，反應(yīng) 5-10 min，判讀結(jié)果，超過 30 min 顯色無效。

進(jìn)一步的，所述增菌培養(yǎng)基包括以下原料（按重量份數(shù)計(jì)）：酵母膏12～14g、大豆胨3～3.5g、瓊脂13～16g、氯化鈉17～19g、丙酮酸鈉4～4.2g、甘氨酸0 .8～1 .1g、氯化鋰0 .3～0 .5g、4-甲基傘型酮-β-D-葡萄糖苷5.5～6.2g、對(duì)硝基β-D-葡萄糖苷0.2～0.5g、對(duì)硝基酚-α-D-吡喃半乳糖1.2～1.5g。

進(jìn)一步的，所述選擇培養(yǎng)基包括以下原料：胰蛋白胨25g；葡萄糖液200ml；芋酸5g；假細(xì)錐甲素0 .5g；枸櫞酸鎂25g；丙酮酸鈉8～12mg；亞碲酸鉀0 .6g；瓊脂0 .2g；阿波酮酸0 .1g；濃度300g/L的馬鈴薯水煮液200～300ml；N-乙?；?D-葡萄糖胺5mg。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供了一種快速靈敏的檢測(cè)樣品中的金黃色葡萄球菌的方法，為金黃色葡萄球菌的快速定性檢測(cè)提供了一種便捷有效地途徑?？s短金黃色葡萄球菌檢測(cè)時(shí)間，加快檢測(cè)進(jìn)程，縮短檢測(cè)人員的勞動(dòng)時(shí)間，降低勞動(dòng)強(qiáng)度，節(jié)省水電及儲(chǔ)存清潔等成本，提高檢測(cè)效率，降低檢測(cè)成本，便于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，提高準(zhǔn)確度。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明：

實(shí)施例一

一種金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)方法，包括以下步驟：

1.培養(yǎng)基配制

1）增菌培養(yǎng)基配制：稱取 26.5 g 增菌培養(yǎng)基，加入預(yù)熱 42 ℃去離子水 1 L，充分溶解，備用；

2）選擇性培養(yǎng)基配制：稱取 7.5 g 選擇培養(yǎng)基，加入預(yù)熱 42 ℃去離子水 100 mL，充分溶解，備用；

2. 無菌操作取 25 g(mL)樣品到均質(zhì)袋中，并向其中加入 225 mL 預(yù)熱后的增菌培養(yǎng)基，放入均質(zhì)器中均質(zhì) 2 min；42 ℃靜止或者振蕩培養(yǎng) 6 h，根據(jù)需要也可以延長至 24 h；取 0.1 mL 上述增菌液，加入含 1 mL 選擇性培養(yǎng)基的 5 mL 玻璃管內(nèi)，42 ℃繼續(xù)培養(yǎng) 21 h；

3. 將培養(yǎng)物混合均勻，取 1 mL 到試管中沸水（100 ℃）加熱 10 min，冷卻至室溫，用滴管滴加 3-4 滴至膠體金檢測(cè)卡的樣品孔，反應(yīng) 5-10 min，判讀結(jié)果，超過 30 min 顯色無效。

其中，所述增菌培養(yǎng)基包括以下原料（按重量份數(shù)計(jì)）：酵母膏13g、大豆胨3.3g、瓊脂15g、氯化鈉18g、丙酮酸鈉4.1g、甘氨酸1g、氯化鋰0.4g、4-甲基傘型酮-β-D-葡萄糖苷6、對(duì)硝基β-D-葡萄糖苷0.3g、對(duì)硝基酚-α-D-吡喃半乳糖1.4g。

其中，所述選擇培養(yǎng)基包括以下原料（按重量份數(shù)計(jì)）：胰蛋白胨25g；葡萄糖液200ml；芋酸5g；假細(xì)錐甲素0 .5g；枸櫞酸鎂25g；丙酮酸鈉8mg；亞碲酸鉀0 .6g；瓊脂0 .2g；阿波酮酸0 .1g；濃度300g/L的馬鈴薯水煮液200ml；N-乙?；?D-葡萄糖胺5mg。

實(shí)施例二

一種金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)方法，包括以下步驟：

1.培養(yǎng)基配制

1）增菌培養(yǎng)基配制：稱取 26.5 g 增菌培養(yǎng)基，加入預(yù)熱 43 ℃去離子水 1 L，充分溶解，備用；

2）選擇性培養(yǎng)基配制：稱取 7.5 g 選擇培養(yǎng)基，加入預(yù)熱 43 ℃去離子水 100 mL，充分溶解，備用；

2. 無菌操作取 25 g(mL)樣品到均質(zhì)袋中，并向其中加入 225 mL 預(yù)熱后的增菌培養(yǎng)基，放入均質(zhì)器中均質(zhì) 2 min；42 ℃靜止或者振蕩培養(yǎng) 6 h，根據(jù)需要也可以延長至 24 h；取 0.1 mL 上述增菌液，加入含 1 mL 選擇性培養(yǎng)基的 5 mL 玻璃管內(nèi)，43 ℃繼續(xù)培養(yǎng) 18-24 h；

3. 將培養(yǎng)物混合均勻，取 1 mL 到試管中沸水（100 ℃）加熱 10 min，冷卻至室溫，用滴管滴加 3-4 滴至膠體金檢測(cè)卡的樣品孔，反應(yīng) 5-10 min，判讀結(jié)果，超過 30 min 顯色無效。

其中，所述增菌培養(yǎng)基包括以下原料（按重量份數(shù)計(jì)）：酵母膏14g、大豆胨3.5g、瓊脂16g、氯化鈉19g、丙酮酸鈉4.2g、甘氨酸1 .1g、氯化鋰0 .5g、4-甲基傘型酮-β-D-葡萄糖苷6.2g、對(duì)硝基β-D-葡萄糖苷0.5g、對(duì)硝基酚-α-D-吡喃半乳糖1.5g。

其中，所述選擇培養(yǎng)基包括以下原料（按重量份數(shù)計(jì)）：胰蛋白胨25g；葡萄糖液200ml；芋酸5g；假細(xì)錐甲素0 .5g；枸櫞酸鎂25g；丙酮酸鈉12mg；亞碲酸鉀0 .6g；瓊脂0 .2g；阿波酮酸0 .1g；濃度300g/L的馬鈴薯水煮液300ml；N-乙?；?D-葡萄糖胺5mg。

實(shí)施例三

一種金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)方法，包括以下步驟：

1.培養(yǎng)基配制

1）增菌培養(yǎng)基配制：稱取 26.5 g 增菌培養(yǎng)基，加入預(yù)熱41℃去離子水 1 L，充分溶解，備用；

2）選擇性培養(yǎng)基配制：稱取 7.5 g 選擇培養(yǎng)基，加入預(yù)熱41 ℃去離子水 100 mL，充分溶解，備用；

2. 無菌操作取 25 g(mL)樣品到均質(zhì)袋中，并向其中加入 225 mL 預(yù)熱后的增菌培養(yǎng)基，放入均質(zhì)器中均質(zhì) 2 min；42 ℃靜止或者振蕩培養(yǎng) 6 h，根據(jù)需要也可以延長至 24 h；取 0.1 mL 上述增菌液，加入含 1 mL 選擇性培養(yǎng)基的 5 mL 玻璃管內(nèi)，41 ℃繼續(xù)培養(yǎng) 18-24 h；

3. 將培養(yǎng)物混合均勻，取 1 mL 到試管中沸水（100 ℃）加熱 10 min，冷卻至室溫，用滴管滴加 3-4 滴至膠體金檢測(cè)卡的樣品孔，反應(yīng) 5-10 min，判讀結(jié)果，超過 30 min 顯色無效。

其中，所述增菌培養(yǎng)基包括以下原料（按重量份數(shù)計(jì)）：酵母膏12g、大豆胨3g、瓊脂13、氯化鈉17g、丙酮酸鈉4g、甘氨酸0 .8g、氯化鋰0 .3g、4-甲基傘型酮-β-D-葡萄糖苷5.5g、對(duì)硝基β-D-葡萄糖苷0.2g、對(duì)硝基酚-α-D-吡喃半乳糖1.2g。

其中，所述選擇培養(yǎng)基包括以下原料（按重量份數(shù)計(jì)）：胰蛋白胨25g；葡萄糖液200ml；芋酸5g；假細(xì)錐甲素0 .5g；枸櫞酸鎂25g；丙酮酸鈉10mg；亞碲酸鉀0 .6g；瓊脂0 .2g；阿波酮酸0 .1g；濃度300g/L的馬鈴薯水煮液250ml；N-乙?；?D-葡萄糖胺5mg。

最后需要說明的是，具體實(shí)施方式是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明而非限制，對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，可以在不脫離本發(fā)明實(shí)質(zhì)內(nèi)容的情況下做進(jìn)一步變換，而所有這些變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍。