本發(fā)明屬于體液檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種對(duì)體液的前處理技術(shù)，尤其涉及一種把體液標(biāo)本沉淀物即刻凝固的試劑。

背景技術(shù)：

在臨床上，體液或排泄物的檢測(cè)能了解體液在生理和病理?xiàng)l件下的變化規(guī)律，對(duì)診斷、防治預(yù)防具有重要意義。由于體液組成較復(fù)雜，針對(duì)不同的檢測(cè)項(xiàng)目，檢測(cè)前會(huì)對(duì)體液進(jìn)行相應(yīng)的前處理。

在體液標(biāo)本的有些檢測(cè)項(xiàng)目中，需要對(duì)體液標(biāo)本沉淀物進(jìn)行凝固處理。目前，各個(gè)醫(yī)院普遍采用的方法要么是采用離心后加瓊脂方法，要么是買進(jìn)口成套的試劑和專用的耗材。離心后加瓊脂方法操作過程復(fù)雜，對(duì)操作者操作技能有較高要求，使用進(jìn)口試劑和專用耗材成本大且方法步驟繁瑣。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種成本低、可快速方便地將體液標(biāo)本沉淀物即刻凝固的一步把體液標(biāo)本沉淀物即刻凝固的試劑，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：

一種把體液標(biāo)本沉淀物即刻凝固的試劑，其特征在于，每100體積數(shù)量的試劑中內(nèi)含有5-20體積數(shù)量的三氯甲烷、0.5-8體積數(shù)量的冰醋酸，1-10體積數(shù)量的甲醛溶液，余下為乙醇溶液；所述乙醇溶液的體積濃度為10-100％，所述甲醛溶液的體積濃度為37～40％。

在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式中，所述乙醇溶液的體積濃度為40-80％。

蛋白質(zhì)溶液是一穩(wěn)定的親水性溶膠液，其穩(wěn)定的因素有二：一是蛋白質(zhì)膠粒上的電荷使之相互排斥，不易凝集成團(tuán)；二是膠粒表面的水化膜，它使膠粒與水融洽相依又在膠粒之間起了隔離作用。如果上述兩種穩(wěn)定蛋白質(zhì)溶液的因素被破壞，蛋白質(zhì)將于溶液中沉淀析出。

促使蛋白質(zhì)沉淀的因素很多，大致可分為兩類：

第一類是可逆的沉淀反應(yīng)。這時(shí)蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象未受到很大改變，除去沉淀因素后，可以重新溶解，例如鹽析和低溫乙醇沉淀蛋白。

第二類是不可逆的沉淀反應(yīng)，重金屬鹽類或生物堿試劑沉淀蛋白后，由于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生重大改變，所以不再溶于水中。不可逆的蛋白質(zhì)沉淀多表示蛋白質(zhì)已經(jīng)變性。變性的蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)附近加熱時(shí)，蛋白質(zhì)分子間相互盤繞而變成堅(jiān)實(shí)的凝塊。

天然蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)是通過氫鍵等次級(jí)鍵維持的，而變性后次級(jí)鍵被破壞，蛋白質(zhì)分子就從原來(lái)有序的卷曲的緊密結(jié)構(gòu)變?yōu)闊o(wú)序的松散的伸展?fàn)罱Y(jié)構(gòu)(但一級(jí)結(jié)構(gòu)并未改變)。所以，原來(lái)處于分子內(nèi)部的疏水基團(tuán)大量暴露在分子表面，而親水基團(tuán)在表面的分布則相對(duì)減少，至使蛋白質(zhì)顆粒不能與水相溶而失去水膜，很容易引起分子間相互碰撞而聚集沉淀。在溶液的ph值小于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，帶正電荷的蛋白質(zhì)與生物堿試劑的負(fù)離子結(jié)合成鹽而沉淀。

在本發(fā)明中，甲醛作為細(xì)胞固定劑，冰醋酸作為細(xì)胞核固定加強(qiáng)劑；三氯甲烷作為助蛋白質(zhì)萃取沉淀劑。乙醇一方面作為脫水劑，可與體液沉淀物中的蛋白質(zhì)爭(zhēng)奪水化膜；加入乙醇還可使水的介電常數(shù)變小，蛋白質(zhì)解離度降低，帶電量減少。故加入乙醇能破壞蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)而使蛋白質(zhì)沉淀；另一方面，乙醇作為還作為穩(wěn)定劑可以與三氯甲烷產(chǎn)生的有毒光氣作用生成無(wú)毒的碳酸二乙酸，減少配制過程對(duì)人呼吸系統(tǒng)和眼睛的損害。

因此，使用本發(fā)明的試劑，能夠把體液標(biāo)本沉淀物即刻凝固，具有如下優(yōu)點(diǎn)：

1、試劑原料價(jià)格低廉，制備方便，成本低；

2、可以在離心同時(shí)快速完成液體標(biāo)本沉淀物凝固，保持細(xì)胞形態(tài)，診斷準(zhǔn)確率高；

3、所用設(shè)備為一般實(shí)驗(yàn)室用試管及普通離心機(jī)，操作方法便捷。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明的把體液標(biāo)本沉淀物即刻凝固的試劑，一種把體液標(biāo)本沉淀物即刻凝固的試劑，每100體積數(shù)量的試劑中內(nèi)含有5-20體積數(shù)量的三氯甲烷、0.5-8體積數(shù)量的冰醋酸，1-10體積數(shù)量的甲醛溶液，余下為乙醇溶液；所述乙醇溶液的體積濃度為10-100％，所述甲醛溶液的體積濃度為37～40％。

試劑配制：

在乙醇溶液中加入三氯甲烷、甲醛溶液、冰醋酸混合、攪拌均勻配制成試劑。

具體配制舉例：如果用體積濃度40％的乙醇溶液配制，就是先在50毫升體積濃度40％的乙醇溶液中加三氯甲烷5毫升，冰醋酸0.5毫升，甲醛溶液1毫升，然后用體積濃度40％的乙醇溶液補(bǔ)足至100毫升。

試驗(yàn)方法

將乙醇溶液代號(hào)設(shè)為a，三氯甲烷代號(hào)設(shè)為b，冰醋酸代號(hào)設(shè)為c，甲醛溶液代號(hào)設(shè)為d。

將乙醇溶液a的體積濃度由低到高分成6梯度,依次用a、b、c、d、e、f表示。將三氯甲烷b、冰醋酸c、甲醛溶液d分的加入體積按從低到高分成3梯度，配制的每一份試劑如下表1所示。

表1

本試驗(yàn)以a的a、b、c、d、e、f6個(gè)體積濃度、對(duì)應(yīng)b、c、d分別加入的a、b、c3種體積，制成不同配比的試劑共6組18份實(shí)施例，每份實(shí)施例的試劑體積均是100ml，如下表2所示。

表2

上述18個(gè)不同配比的實(shí)施例試劑統(tǒng)一用同一個(gè)病人的樣本進(jìn)行測(cè)試。試驗(yàn)時(shí)以10毫升體液為量離心沉淀，均加入1毫升的上述試劑，觀察凝固情況、切片細(xì)胞、背景情況，觀察結(jié)果如下表3。

表3

上表3中，

凝固：肉眼細(xì)胞凝固成塊的情況，以+～+++表示，“+”越多表示凝固狀態(tài)越好；

背景：細(xì)胞塊中含血等背景情況，以+++～+表示，“+”越少表示背景情況越好；

細(xì)胞：細(xì)胞形態(tài)，染色清晰度情況，以+～+++表示，“+”越多染色清晰度越好。

從表3橫行方向上，a^a組實(shí)施例a^ab^ac^ad^a、a^ab^bc^bd^b、a^cb^cc^cd^c凝固出來(lái)的組織量少，散；a^b組實(shí)施例a^bb^ac^ad^a、a^bb^bc^bd^b，凝固出來(lái)的組織量稍多，實(shí)施例a^bb^cc^cd^c明顯增多；a^c組實(shí)施例a^cb^ac^ad^a、a^cb^bc^bd^b，凝固出來(lái)的組織量比a^b明顯的增多，實(shí)施例a^cb^cc^cd^c與a^bb^cc^cd^c沒有明顯差異。

從表3豎列方向上，在實(shí)施例a^ab^ac^ad^a至a^fb^ac^ad^a，細(xì)胞組織凝固情況從實(shí)施例a^cb^ac^ad^a開始基本>0.2cm：在實(shí)施例a^ab^bc^bd^b至a^fb^bc^bd^b細(xì)胞組織凝固情況從實(shí)施例a^cb^bc^bd^b開始基本>0.4cm；在實(shí)施例a^ab^cc^cd^c至a^fb^cc^cd^c細(xì)胞組織凝固情況從a^bb^cc^cd^c開始基本>0.4cm。

肉眼看凝固>0.4cm的a^bb^cc^cd^c，a^cb^bc^bd^b凝固狀態(tài)最好。

顯微鏡下：a^cb^cc^cd^c，a^db^ac^ad^a，a^db^bc^bd^b，a^eb^ac^ad^a在細(xì)胞形態(tài)保存上優(yōu)良。其中，實(shí)施例a^cb^cc^cd^c凝固狀態(tài)、細(xì)胞形態(tài)、染色極佳，具高診斷價(jià)值；實(shí)施例a^db^bc^bd^b雖然背景稍多，但凝固狀態(tài)、細(xì)胞形態(tài)、染色較佳，具有診斷價(jià)值。實(shí)施例a^eb^ac^ad^a凝固狀態(tài)、細(xì)胞形態(tài)、染色較佳，背景太多細(xì)胞碎片，影響顯微鏡觀察。實(shí)施例a^db^ac^ad^a在細(xì)胞形態(tài)、染色較佳，背景稍多，但凝固狀態(tài)不理想。