本發(fā)明涉及一種豬肉溯源方法，尤其涉及一種通過基因熒光標(biāo)記的豬肉溯源方法.

背景技術(shù)：

隨著生活水平和保健意識的提高，人們越來越注重食品安全問題。豬肉制品作為人膳食中重要的蛋白質(zhì)來源，如何確保其安全衛(wèi)生，保障消費(fèi)者的身體健康和生命安全已成為全球性的熱點(diǎn)問題。世界各國政府紛紛采取一系列的技術(shù)措施來強(qiáng)化對肉產(chǎn)品的安全管理，以期最大程度上減少食品安全事件的發(fā)生。我國各大城市也紛紛建立了肉產(chǎn)品的追溯系統(tǒng)，通過肉制品的溯源管理，能夠為消費(fèi)者提供準(zhǔn)確而詳細(xì)的有關(guān)產(chǎn)品的信息，有利于生產(chǎn)經(jīng)營者及時發(fā)現(xiàn)各環(huán)節(jié)中存在的不安全隱患，為消費(fèi)者提供一個獲取有效可靠信息的途徑。更為重要的是，大大加強(qiáng)了政府部門對肉質(zhì)品質(zhì)量安全的監(jiān)管，為國家迅速建立食品安全風(fēng)險的應(yīng)對機(jī)制提供有效信息，將有助于社會的安定。

但是目前豬肉產(chǎn)品追溯系統(tǒng)所采用的標(biāo)簽技術(shù)存在標(biāo)簽丟失、記錄出差、標(biāo)記圖案模糊不清以及標(biāo)簽容易人為改換等缺點(diǎn)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，現(xiàn)提供一種通過基因熒光標(biāo)記的豬肉溯源方法，實現(xiàn)了充分利用該科學(xué)方法應(yīng)用于豬肉產(chǎn)品的安全性溯源，保證在豬肉的生產(chǎn)、屠宰、加工和銷售等環(huán)節(jié)進(jìn)行豬肉溯源檢測，保證供應(yīng)環(huán)節(jié)的每一步責(zé)任到位，有效地避免了人為的干預(yù)因素，保證人類食用豬肉的安全。

本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案來解決上述技術(shù)問題：

本發(fā)明通過基因熒光標(biāo)記的豬肉溯源方法，其特征在于，其包括步驟：

步驟一，提取豬個體組織中的基因組dna；

步驟二，對所述基因組dna的四種的雙脫氧核苷酸分別進(jìn)行熒光標(biāo)記；

步驟三，對所述基因組dna進(jìn)行電泳，使不同長度的dna分子彼此分開，對所述dna分子分別進(jìn)行予以標(biāo)記；

步驟四，采用紫外線照射，四種被標(biāo)記的所述雙脫氧核苷酸的所述dna分子發(fā)出不同波長的熒光，通過分析所述熒光的光譜便可以分辨出dna分子序列；

步驟五，結(jié)合步驟三中的通過電泳產(chǎn)生的四種所述雙脫氧核苷酸的dna分子對應(yīng)的基因型，將所述dna分子序列分組匯編成與所述豬個體對應(yīng)的dna條形碼。

優(yōu)選地，所述步驟二中，進(jìn)行所述熒光標(biāo)記，再用激光束激發(fā)使之產(chǎn)生特定的熒光，然后用光學(xué)系統(tǒng)檢測并將信號傳輸?shù)接嬎銠C(jī)進(jìn)行分析，從而得到豬肉細(xì)胞相應(yīng)的各種特性。

優(yōu)選地，進(jìn)行所述熒光標(biāo)記是采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行標(biāo)記。

優(yōu)選地，所述步驟四中，添加熒光染料，使所述熒光染料嵌入所述雙脫氧核苷酸的核酸雙鏈的堿基對之間與所述dna分子結(jié)合從而使所述dna分子發(fā)出強(qiáng)熒光。

優(yōu)選地，所述熒光染料為溴化乙啶。

優(yōu)選地，所述熒光染料為水母發(fā)光蛋白。

本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于：

本發(fā)明通過基因熒光標(biāo)記對豬肉進(jìn)行溯源，充分利用該科學(xué)方法應(yīng)用于豬肉產(chǎn)品的安全性溯源，保證在豬肉的生產(chǎn)、屠宰、加工和銷售等環(huán)節(jié)進(jìn)行豬肉溯源檢測，保證供應(yīng)環(huán)節(jié)的每一步責(zé)任到位，有效地避免了人為的干預(yù)因素，保證人類食用豬肉的安全。

具體實施方式

下面通過實施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實施例范圍之中。

步驟一，提取豬個體組織中的基因組dna；

步驟二，對基因組dna的四種的雙脫氧核苷酸分別進(jìn)行熒光標(biāo)記；

步驟三，對基因組dna進(jìn)行電泳，使不同長度的dna分子彼此分開，對dna分子分別進(jìn)行予以標(biāo)記；

步驟四，采用紫外線照射，四種被標(biāo)記的雙脫氧核苷酸的所述dna分子發(fā)出不同波長的熒光，通過分析熒光的光譜便可以分辨出dna分子序列；

步驟五，結(jié)合步驟三中的通過電泳產(chǎn)生的四種雙脫氧核苷酸的dna分子對應(yīng)的基因型，將所述dna分子序列分組匯編成與所述豬個體對應(yīng)的dna條形碼。

步驟二中，進(jìn)行熒光標(biāo)記，再用激光束激發(fā)使之產(chǎn)生特定的熒光，然后用光學(xué)系統(tǒng)檢測并將信號傳輸?shù)接嬎銠C(jī)進(jìn)行分析，從而得到豬肉細(xì)胞相應(yīng)的各種特性。

進(jìn)行所述熒光標(biāo)記可采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行標(biāo)記。

步驟四中，添加熒光染料，使熒光染料嵌入雙脫氧核苷酸的核酸雙鏈的堿基對之間與dna分子結(jié)合從而使dna分子發(fā)出強(qiáng)熒光。熒光染料可為溴化乙啶。熒光染料可為水母發(fā)光蛋白。

水母發(fā)光蛋白最早是從海洋生物水母中分離出來的。當(dāng)它與ca離子共存時，可以發(fā)出綠色的熒光。這一性質(zhì)已經(jīng)被應(yīng)用于實時觀察細(xì)胞內(nèi)ca離子的流動。水母發(fā)光蛋白的發(fā)現(xiàn)推動了人們進(jìn)一步研究海洋水母并發(fā)現(xiàn)了綠色熒光蛋白。綠色熒光蛋白的多肽鏈中含有特殊的生色團(tuán)結(jié)構(gòu)，無需外加輔助因子或進(jìn)行任何特殊處理，便可以在紫外線的照射下發(fā)出穩(wěn)定的綠色熒光，作為生物分子或基因探針具有很大的優(yōu)越性，所以綠色熒光蛋白及相關(guān)蛋白已經(jīng)成為生物化學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的重要工具.

某些物質(zhì)受一定波長的光激發(fā)后，在極短時間內(nèi)會發(fā)射出波長大于激發(fā)波長的光，這種光稱為熒光。這一發(fā)光現(xiàn)象在各方面的應(yīng)用及有關(guān)的方法稱為熒光技術(shù)。

光照射物質(zhì)時，光子打到分子上，大約在10-15秒內(nèi)被吸收，原來處于基態(tài)的電子被激發(fā)到較高的能級，從而使分子處在激發(fā)態(tài)。此后，激發(fā)態(tài)分子通過內(nèi)轉(zhuǎn)換過程把部分能量轉(zhuǎn)移給周圍分子，使較高激發(fā)態(tài)的電子很快回到最低激發(fā)態(tài)的最低振動能級(亦稱第一單線態(tài))。處在第一單線態(tài)的分子的平均壽命是10^-8秒左右。如果這種分子通過發(fā)射出相應(yīng)的光子而回到基態(tài)的各個不同的振動能級，即可產(chǎn)生熒光，根據(jù)回到的振動能級的不同，熒光的波長就不同，從而形成熒光發(fā)射帶光譜。由于發(fā)射熒光前已有一部分能量被消耗，所以發(fā)射熒光所相應(yīng)的能量要比物質(zhì)吸收的光能量小，故而熒光的發(fā)射特征波長總比激發(fā)特征波長長。

熒光技術(shù)在生物化學(xué)及分子生物學(xué)研究中應(yīng)用主要包括以下幾個方面：

1、物質(zhì)的定性：不同的熒光物質(zhì)有不同的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜，因此可用熒光進(jìn)行物質(zhì)的鑒別。與吸收光譜法相比，熒光法具有更高的選擇性。

2、定量測定：利用在較低濃度下熒光強(qiáng)度與樣品濃度成正比這一關(guān)系可以定量分析樣品中熒光組分的含量，常用于測定氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸的含量。熒光定量測定的一個優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，例如維生素b2的測定限量可達(dá)1毫微克/毫升，這一優(yōu)點(diǎn)使測定時所需要樣品量大大減少。

這種定量測定方法還可應(yīng)用于酶催化的反應(yīng)，只要反應(yīng)前后有熒光強(qiáng)度的變化，就可用來測定酶的含量及酶反應(yīng)的速率等。

3、研究生物大分子的物理化學(xué)特性及其分子的結(jié)構(gòu)和構(gòu)象：熒光的激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、量子產(chǎn)率和熒光壽命等參數(shù)不僅和分子內(nèi)熒光發(fā)色基團(tuán)的本身結(jié)構(gòu)有關(guān)，而且還強(qiáng)烈地依賴于發(fā)色團(tuán)周圍的環(huán)境，即對周圍環(huán)境十分敏感。利用此特點(diǎn)可通過測定上述有關(guān)熒光參數(shù)的變化來研究熒光發(fā)色團(tuán)所在部位的微環(huán)境的特征及其變化。在此研究中，除了利用生物大分子本身具有的熒光發(fā)色團(tuán)(如色氨酸、酪氨酸、鳥苷酸等，此類熒光稱為內(nèi)源熒光)以外，可將一些特殊的熒光染料分子共價地結(jié)合或吸附在生物大分子的某一部位，通過測定該染料分子的熒光特性變化來研究生物大分子，這種染料分子被稱為“熒光探針”，它們發(fā)出的熒光一般稱為外源熒光。熒光探針的應(yīng)用，大大地開拓了熒光技術(shù)在分子生物學(xué)中的應(yīng)用范圍。

4、利用熒光壽命、量子產(chǎn)率等參數(shù)可以研究生物大分子中的能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象：通過該現(xiàn)象的研究，可以獲得生物大分子內(nèi)部的許多信息。

5、在醫(yī)療診斷中的應(yīng)用之dna測序熒光染料：dna序列的破譯是新世紀(jì)基因工程研究的重要前提。近年來，dna測序的新技術(shù)、新方法不斷涌現(xiàn)，熒光染料標(biāo)記dna的基因芯片技術(shù)使其中最引人注目的。在熒光染料標(biāo)記dna測序技術(shù)中所用的熒光染料要求是：吸收光譜應(yīng)在可見光區(qū)發(fā)射，光譜盡量靠近紅光區(qū)，以避免dna自身的藍(lán)色熒光干擾；能發(fā)射足夠強(qiáng)度的熒光；不影響dna片段在電場中的泳動；染料本身無毒害。

目前用于dna序列的熒光染料主要是咕噸類化合物、菁類化合物、1,8-萘酰亞胺類染料以及二吡咯烷硼二氟類染料，熒光多為黃、綠、紅色，熒光量子產(chǎn)率較高。

6、熒光技術(shù)在醫(yī)療診斷中的應(yīng)用之光動力治療用色素：將特定的光敏感材料注入體內(nèi)，它富集在腫瘤組織內(nèi)，在正常細(xì)胞組織被代謝排除體外。用適當(dāng)?shù)墓饧ぐl(fā)，可以檢測出癌癥病處，再用特定波長的激光激發(fā)，產(chǎn)生能破壞腫瘤組織的自由基物質(zhì)或引發(fā)氧分子轉(zhuǎn)變?yōu)槟軞绨┘?xì)胞的單線態(tài)氧，達(dá)到治療的目的。

本發(fā)明也可采用熒光分光光度計，該儀器的基本結(jié)構(gòu)主要由激發(fā)光源(常用氙燈)、激發(fā)單色器、發(fā)射單色器、樣品池及檢測器(光電倍增管)等組成。分光光度計不同，熒光檢測是在與激發(fā)光垂直方向上進(jìn)行。結(jié)果的顯示方式有記錄儀、表頭、數(shù)字顯示、打印機(jī)等。一些高級熒光分光光度計還連有微處理機(jī)處理數(shù)據(jù)，可進(jìn)行光譜積分、微分、本底扣除等。在熒光分光光度計的激發(fā)光路和發(fā)射光路中分別插入一塊偏振鏡，并使之可以旋轉(zhuǎn)，即可進(jìn)行熒光偏振的測量。利用熒光分光光度計，可進(jìn)行熒光激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、量子產(chǎn)率、熒光強(qiáng)度等參數(shù)的測定。

本發(fā)明也可采用毫微秒熒光計，根據(jù)工作原理的不同可分為毫微秒脈沖熒光計、位相式毫微秒熒光計，單光子計數(shù)毫微秒熒光計等。用一持續(xù)時間極短的光脈沖(大約在毫微秒數(shù)量級，10－9秒)激發(fā)熒光樣品，產(chǎn)生的熒光用快響應(yīng)的光電倍增管或其他光電轉(zhuǎn)換器件轉(zhuǎn)換成電信號，在相應(yīng)的示波器上顯示出熒光隨時間衰減的曲線，用計算機(jī)處理該曲線即可得到熒光壽命及其他有關(guān)參數(shù)。濾光片是用來選擇合適波長的激發(fā)光和熒光。

本發(fā)明也可采用熒光定量pcr技術(shù)，是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，對pcr產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實時監(jiān)控反應(yīng)過程。隨著pcr反應(yīng)的進(jìn)行，反應(yīng)產(chǎn)物不斷累積，熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一次熒光強(qiáng)度信號，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，結(jié)合相應(yīng)的軟件對產(chǎn)物進(jìn)行分析，可以得到熒光擴(kuò)增曲線，計算待測樣品初始模版的量。實時熒光定量pcr技術(shù)是一次由定性技術(shù)向定量技術(shù)的飛躍，運(yùn)用該項技術(shù)，可以對dna、rna樣品進(jìn)行相對定量、絕對定量和定性分析。

本發(fā)明通過基因熒光標(biāo)記對豬肉進(jìn)行溯源，充分利用該科學(xué)方法應(yīng)用于豬肉產(chǎn)品的安全性溯源，保證在豬肉的生產(chǎn)、屠宰、加工和銷售等環(huán)節(jié)進(jìn)行豬肉溯源檢測，保證供應(yīng)環(huán)節(jié)的每一步責(zé)任到位，有效地避免了人為的干預(yù)因素，保證人類食用豬肉的安全。

以上結(jié)合實施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域中普通技術(shù)人員可根據(jù)上述說明對本發(fā)明做出種種變化例。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。因而，實施例中的某些細(xì)節(jié)不應(yīng)構(gòu)成對本發(fā)明的限定，本發(fā)明將以所附權(quán)利要求書界定的范圍作為本發(fā)明的保護(hù)范圍。