本發(fā)明涉及食品領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及組合試劑及利用其檢測的方法。更具體地，本發(fā)明涉及組合試劑、組合試劑在酶聯(lián)免疫檢測中的用途、利用組合試劑檢測的方法以及測定液態(tài)乳品中氯霉素含量的方法。
背景技術(shù)：
：試劑盒廣泛的應(yīng)用于乳及乳制品中毒素、激素、抗生素等殘留量的檢測，具有快速、準確和方便等優(yōu)點。然而，目前的試劑盒仍有待開發(fā)。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明提出了組合試劑、其在酶聯(lián)免疫檢測中的用途、利用組合試劑檢測的方法以及測定液態(tài)乳品中氯霉素含量的方法。由此，利用本發(fā)明的組合試劑進行酶聯(lián)免疫檢測能夠有效地避免出現(xiàn)漏加或者重復(fù)添加等操作失誤，從而提高了檢測效率及準確率，降低成本。需要說明的是，本發(fā)明是基于發(fā)明人的下列發(fā)現(xiàn)而完成的：目前，酶標記物工作液及抗體工作液通常是透明無色的，不易辨別是否加入反應(yīng)體系中，即加入這兩種液體后，反應(yīng)體系無肉眼可見的顏色變化。另外，其加入量通常較少，僅為幾十微升，加入后液面無明顯肉眼可見的變化。因此，不易準確、快速地判斷是否出現(xiàn)漏加或者重復(fù)添加等操作失誤。然而，這兩種試劑的添加與否會顯著影響檢測結(jié)果的準確性。有鑒于此，發(fā)明人經(jīng)過大量實驗，提出了在酶標記物工作液及抗體工作液中加入染色劑的構(gòu)思，以便區(qū)別這兩個顏色。進一步地，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，結(jié)晶紫和亞甲基藍作為染色劑的效果較好，各自獨立地加入酶標記物工作液或者抗體工作液中，能夠得到顏色明顯不同的兩種工作液。將所得到的兩種工作液加入反應(yīng)體系中，會發(fā)現(xiàn)明顯地、肉眼可見的顏色變化，從而可以推斷出是否出現(xiàn)漏加或者重復(fù)添加等操作失誤。由此，提高了檢測效率及準確率，降低成本。為此，在本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提出了一種組合試劑。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述組合試劑包括：第一試劑，所述第一試劑為結(jié)晶紫溶液；以及第二試劑，所述第二試劑為亞甲基藍溶液。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，以結(jié)晶紫和亞甲基藍作為染色劑，各自獨立地與酶標記物工作液及抗體工作液進行混合，以便區(qū)分酶標記物工作液及抗體工作液。將這兩種工作液加入反應(yīng)體系中，會發(fā)現(xiàn)明顯地、肉眼可見的顏色變化，從而可以推斷出是否出現(xiàn)漏加或者重復(fù)添加等操作失誤。由此，利用根據(jù)本發(fā)明實施例的組合試劑進行酶聯(lián)免疫檢測能夠有效地提高檢測效率及準確率，降低成本。根據(jù)本發(fā)明的實施例，上述組合試劑還可以具有下列附加技術(shù)特征：根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述結(jié)晶紫溶液的濃度為10％質(zhì)量％。由此，利用根據(jù)本發(fā)明實施例的組合試劑進行酶聯(lián)免疫檢測能夠有效地提高檢測效率及準確率，降低成本。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述亞甲基藍溶液的濃度為10質(zhì)量％。由此，利用根據(jù)本發(fā)明實施例的組合試劑進行酶聯(lián)免疫檢測能夠有效地提高檢測效率及準確率，降低成本。在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提出了前面所述組合試劑在酶聯(lián)免疫檢測中的用途。利用前面所述組合試劑進行酶聯(lián)免疫檢測，能夠有效地提高檢測效率及準確率，降低成本。在本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明提出了一種利用前面所述組合試劑檢測的方法。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述方法包括：分別將酶結(jié)合物和抗體配制得到酶結(jié)合物工作液和抗體工作液；將所述第一試劑和第二試劑分別獨立地加入所述酶結(jié)合物工作液和抗體工作液之一中，以便得到不同顏色的染色酶結(jié)合物工作液和染色抗體工作液；以及利用所述染色酶結(jié)合物工作液和染色抗體工作液對待測樣品進行酶聯(lián)免疫檢測。由此，根據(jù)本發(fā)明實施例的利用前面所述組合試劑檢測的方法能夠有效地提高檢測效率及準確率，降低成本。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述利用染色酶結(jié)合物工作液和染色抗體工作液對待測樣品進行酶聯(lián)免疫檢測包括：將空白樣品加入空白孔中，將不同濃度標準品溶液加入不同標準品孔中，將樣品加入樣品孔中；分別向所述標準品孔和樣品孔中加入所述染色酶結(jié)合物工作液；分別向所述標準品孔和樣品孔中加入所述染色抗體工作液；封板并進行孵育后，洗板；向所述空白孔、標準品孔和樣品孔中加入底物溶液，并進行孵育；以及向所述空白孔、標準品孔和樣品孔中加入終止液，并測定所得到的反應(yīng)液的吸光值，計算得到所述待測樣品中待測組分的含量。由此，根據(jù)本發(fā)明實施例的利用前面所述組合試劑檢測的方法能夠有效地提高檢測效率及準確率，降低成本。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述結(jié)晶紫溶液或亞甲基藍溶液與酶結(jié)合物工作液或抗體工作液之間的體積比為1:1000。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施例，向所述酶結(jié)合物工作液中加入所述結(jié)晶紫溶液，向所述抗體工作液中加入所述亞甲基藍溶液。由此，根據(jù)本發(fā)明實施例的利用前面所述組合試劑檢測的方法能夠有效地提高檢測效率及準確率，降低成本。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述待測樣品選自生牛乳以及液態(tài)乳制品。由此，根據(jù)本發(fā)明實施例的利用前面所述組合試劑檢測的方法能夠有效地提高檢測效率及準確率，降低成本。在本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明提出了一種測定液態(tài)乳品中氯霉素含量的方法。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述方法包括：(1)提供下列至少之一：10體積％的結(jié)晶紫母液；10體積％的亞甲基藍母液；緩沖液；酶標記氯霉素；氯霉素特異性結(jié)合抗體；tmb顯色液；0.1m硫酸；包被液；磷酸鹽緩沖液；氯霉素標準品；以及待測乳品；(2)分別將所述酶標記氯霉素和氯霉素特異性結(jié)合抗體與4ml緩沖液進行混合，以便得到酶結(jié)合物工作液和抗體工作液；(3)按照1:1000的比例將所述結(jié)晶紫母液加入所述酶結(jié)合物工作液，混勻，得到染色酶結(jié)合物工作液；(4)按照1:1000的比例將所述亞甲基藍母液加入所述抗體工作液，混勻，得到染色抗體工作液；(5)滴加100μl緩沖液于空白孔中，滴加50μl各標準品于不同的標準品孔中(標準品的濃度為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.5和2.0ng/ml)；(6)將所述待測乳品在3000g的轉(zhuǎn)速下離心10分鐘，取50μl中間層的液體滴加至樣品孔中；(7)分別滴加25μl染色酶結(jié)合物工作液于所述標準品孔和樣品孔中；(8)分別滴加25μl所述tmb顯色液于所述標準品孔和樣品孔中；(9)用膠條封板，并搖板1min；(10)2℃～8℃下在暗處孵育1小時；(11)洗板時將微孔板上端朝下倒空各孔后，再平穩(wěn)快速向下垂直甩動，并將微孔板倒置在吸水紙上拍打以除去孔中的液體，用250～300μl/孔所述磷酸鹽緩沖液注入全部板孔，再次倒掉微孔中液體，重復(fù)上述操作3遍；(12)分別將100μl所述tmb顯色液加入所述空白孔、標準品孔和樣品孔中，20～25℃下暗處溫育30min；(13)分別將100μl所述硫酸加入所述空白孔、標準品孔和樣品孔中；以及(14)立即在450nm波長下讀取步驟(13)所得到的反應(yīng)液的吸光值，并計算得到所述液態(tài)乳品中氯霉素含量。由此，根據(jù)本發(fā)明實施例的測定液態(tài)乳品中氯霉素含量的方法能夠有效地提高檢測效率及準確率，降低成本。本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實踐了解到。具體實施方式下面詳細描述本發(fā)明的實施例。下面描述的實施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。需要說明的是，術(shù)語“第一”、“第二”僅用于描述目的，而不能理解為指示或暗示相對重要性或者隱含指明所指示的技術(shù)特征的數(shù)量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隱含地包括一個或者更多個該特征。進一步地，在本發(fā)明的描述中，除非另有說明，“多個”的含義是兩個或兩個以上。本發(fā)明提出了組合試劑、組合試劑在酶聯(lián)免疫檢測中的用途、利用組合試劑檢測的方法以及測定液態(tài)乳品中氯霉素含量的方法，下面將分別對其進行詳細描述。組合試劑在本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提出了一種組合試劑。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該組合試劑包括：第一試劑，所述第一試劑為結(jié)晶紫溶液；以及第二試劑，所述第二試劑為亞甲基藍溶液。酶結(jié)合物以及抗體對于整個酶聯(lián)免疫反應(yīng)至關(guān)重要。由于這兩個物質(zhì)配成的工作液通常為透明無色的，不易辨別是否加入反應(yīng)體系中，即加入這兩種液體后，反應(yīng)體系無肉眼可見的顏色變化。另外，其加入量通常較少，僅為幾十微升，加入后液面無明顯肉眼可見的變化。因此，不易準確、快速地判斷是否出現(xiàn)漏加或者重復(fù)添加等操作失誤，從而造成檢測結(jié)果不準確。然而，這兩種試劑的添加與否會顯著影響檢測結(jié)果的準確性。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，以結(jié)晶紫和亞甲基藍作為染色劑，分別與酶標記物工作液及抗體工作液進行混合，以便通過顏色區(qū)分酶標記物工作液及抗體工作液。將所得到的兩種工作液加入反應(yīng)體系中，會發(fā)現(xiàn)明顯地、肉眼可見的顏色變化，從而可以推斷出是否出現(xiàn)漏加或者重復(fù)添加等操作失誤。例如，將結(jié)晶紫與酶標記物工作液進行混合，得到紫色酶標記物工作液，將亞甲基藍與抗體工作液進行混合，得到藍色抗體工作液?？梢韵葘⒆仙笜擞浳锕ぷ饕杭尤敕磻?yīng)體系中，則反應(yīng)體系變?yōu)樽仙?，進而可以通過顏色明顯地、肉眼可見地判斷出是否出現(xiàn)漏加或者重復(fù)添加酶標記物工作液等操作失誤。接著，再將藍色抗體工作液加入紫色的反應(yīng)體系中，反應(yīng)體系類似藍紫色，明顯區(qū)別于原先的紫色反應(yīng)體系，進而能夠判斷出是否出現(xiàn)漏加或者重復(fù)添加抗體工作液等操作失誤。另外，結(jié)晶紫和亞甲基藍是發(fā)明人在眾多染色劑中意外發(fā)現(xiàn)具有較好效果的染色劑，其不僅能夠為反應(yīng)體系提供明顯地、肉眼可見的顏色變化，而且不會對檢測結(jié)果造成影響。其他染色劑的效果不佳，例如溴百里香酚蘭和溴甲酚紅。由此，利用根據(jù)本發(fā)明實施例的組合試劑能夠有效地提高檢測效率及準確率，降低成本。根據(jù)本發(fā)明的實施例，結(jié)晶紫溶液的濃度為10％質(zhì)量％，亞甲基藍溶液的濃度為10質(zhì)量％。由此，利用根據(jù)本發(fā)明實施例的組合試劑進行酶聯(lián)免疫檢測能夠有效地提高檢測效率及準確率，降低成本。組合試劑在酶聯(lián)免疫檢測中的用途在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提出了前面所描述組合試劑在酶聯(lián)免疫檢測中的用途。由此，利用前面所描述的組合試劑進行酶聯(lián)免疫檢測，能夠有效地提高檢測效率及準確率，降低成本。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解的是，前面針對組合試劑所描述的特征和優(yōu)點，同樣適用于該組合試劑在酶聯(lián)免疫檢測中的用途，在此不再贅述。利用組合試劑檢測的方法在本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明提出了一種利用前面所描述組合試劑檢測的方法。根據(jù)本發(fā)明的實施例，方法包括：分別將酶結(jié)合物和抗體配制得到酶結(jié)合物工作液和抗體工作液；將第一試劑和第二試劑分別獨立地加入酶結(jié)合物工作液和抗體工作液之一中，以便得到不同顏色的染色酶結(jié)合物工作液和染色抗體工作液；以及利用染色酶結(jié)合物工作液和染色抗體工作液對待測樣品進行酶聯(lián)免疫檢測。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，以結(jié)晶紫和亞甲基藍作為染色劑，分別獨立地與酶標記物工作液及抗體工作液進行混合，以便通過顏色區(qū)分酶標記物工作液及抗體工作液。將所得到的兩種工作液加入反應(yīng)體系中，會發(fā)現(xiàn)明顯地、肉眼可見的顏色變化，從而可以推斷出是否出現(xiàn)漏加或者重復(fù)添加等操作失誤。例如，將結(jié)晶紫與酶標記物工作液進行混合，得到紫色酶標記物工作液，將亞甲基藍與抗體工作液進行混合，得到藍色抗體工作液?？梢韵葘⒆仙笜擞浳锕ぷ饕杭尤敕磻?yīng)體系中，則反應(yīng)體系變?yōu)樽仙?，進而可以通過顏色明顯地、肉眼可見地判斷出是否出現(xiàn)漏加或者重復(fù)添加酶標記物工作液等操作失誤。接著，再將藍色抗體工作液加入紫色的反應(yīng)體系中，反應(yīng)體系類似藍紫色，明顯區(qū)別于原先的紫色反應(yīng)體系，進而能夠判斷出是否出現(xiàn)漏加或者重復(fù)添加抗體工作液等操作失誤。由此，根據(jù)本發(fā)明實施例的利用前面所述組合試劑檢測的方法能夠有效地提高檢測效率及準確率，降低成本。需要說明的是，根據(jù)本發(fā)明的實施例，“將結(jié)晶紫溶液和亞甲基藍溶液分別獨立地加入酶結(jié)合物工作液和抗體工作液之一中”是指將一種染色劑加入一種工作液中，將另一種染色劑加入另一種工作液中，使得到的兩種工作液顏色不同，分別為紫色和藍色。例如，可以將結(jié)晶紫溶液加入到酶結(jié)合物工作液中，亞甲基藍溶液加入到抗體工作液中；或者將結(jié)晶紫溶液加入到抗體工作液中，亞甲基藍溶液加入到酶結(jié)合物工作液中。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施例，向酶結(jié)合物工作液中加入結(jié)晶紫溶液，向抗體工作液中加入亞甲基藍溶液。由此，利用根據(jù)本發(fā)明實施例的組合試劑能夠有效地提高檢測效率及準確率，降低成本。根據(jù)本發(fā)明的實施例，利用染色酶結(jié)合物工作液和染色抗體工作液對待測樣品進行酶聯(lián)免疫檢測包括：將空白樣品加入空白孔中，將不同濃度標準品溶液加入不同標準品孔中，將樣品加入樣品孔中；分別向標準品孔和樣品孔中加入染色酶結(jié)合物工作液；分別向標準品孔和樣品孔中加入染色抗體工作液；封板并進行孵育后，洗板；向空白孔、標準品孔和樣品孔中加入底物溶液，并進行孵育；以及向所述空白孔、標準品孔和樣品孔中加入終止液，并測定所得到的反應(yīng)液的吸光值，計算得到所述待測樣品中待測組分的含量。由此，根據(jù)本發(fā)明實施例的利用前面所述組合試劑檢測的方法能夠有效地提高檢測效率及準確率，降低成本。根據(jù)本發(fā)明的實施例，結(jié)晶紫溶液或亞甲基藍溶液與酶結(jié)合物工作液或抗體工作液之間的體積比為1:1000，即染色劑與工作液的體積比為1:1000。發(fā)明人經(jīng)過大量實驗得到較佳的體積比，由此，染色劑與工作液混合后所得到的染色酶結(jié)合物工作液和染色抗體工作液之間的顏色明顯地、肉眼可見地不同。若結(jié)晶紫溶液或亞甲基藍溶液的用量過多，加入后會稀釋反應(yīng)體系，易造成檢測結(jié)果不準確，且增加了檢測成本，另外過多地添加染色劑也容易引入過多雜質(zhì)，造成檢測結(jié)果不準確；若結(jié)晶紫溶液或亞甲基藍溶液的用量過少，染色酶結(jié)合物工作液或染色抗體工作液的顏色較淺，加入體系后不易觀察顏色變化，易出現(xiàn)漏加或者重復(fù)添加酶標記物工作液等操作失誤。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施例，向酶結(jié)合物工作液中加入結(jié)晶紫溶液，向抗體工作液中加入亞甲基藍溶液。由此，根據(jù)本發(fā)明實施例的利用前面所述組合試劑檢測的方法能夠有效地提高檢測效率及準確率，降低成本。根據(jù)本發(fā)明的實施例，待測樣品選自生牛乳以及液態(tài)乳制品。由此，根據(jù)本發(fā)明實施例的利用前面所述組合試劑檢測的方法能夠有效地提高檢測效率及準確率，降低成本。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解的是，前面針對組合試劑所描述的特征和優(yōu)點，同樣適用于該利用組合試劑檢測的方法，在此不再贅述。測定液態(tài)乳品中氯霉素含量的方法在本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明提出了一種測定液態(tài)乳品中氯霉素含量的方法。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該方法包括：(1)提供下列至少之一：10體積％的結(jié)晶紫母液；10體積％的亞甲基藍母液；緩沖液；酶標記氯霉素；氯霉素特異性結(jié)合抗體；tmb顯色液；0.1m硫酸；包被液；磷酸鹽緩沖液；氯霉素標準品；以及待測乳品；(2)分別將酶標記氯霉素和氯霉素特異性結(jié)合抗體與4ml緩沖液進行混合，以便得到酶結(jié)合物工作液和抗體工作液；(3)按照1:1000的比例將結(jié)晶紫母液加入酶結(jié)合物工作液，混勻，得到染色酶結(jié)合物工作液；(4)按照1:1000的比例將亞甲基藍母液加入抗體工作液，混勻，得到染色抗體工作液；(5)滴加100μl緩沖液于空白孔中，滴加50μl各標準品于不同的標準品孔中(標準品的濃度為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.5和2.0ng/ml)；(6)將所述待測乳品在3000g的轉(zhuǎn)速下離心10分鐘，取50μl中間層的液體滴加至樣品孔中；(7)分別滴加25μl染色酶結(jié)合物工作液于所述標準品孔和樣品孔中；(8)分別滴加25μl所述tmb顯色液于所述標準品孔和樣品孔中；(9)用膠條封板，并搖板1min；(10)2℃～8℃下在暗處孵育1小時；(11)洗板時將微孔板上端朝下倒空各孔后，再平穩(wěn)快速向下垂直甩動，并將微孔板倒置在吸水紙上拍打以除去孔中的液體，用250～300μl/孔磷酸鹽緩沖液注入全部板孔，再次倒掉微孔中液體，重復(fù)上述操作3遍；(12)分別將100μltmb顯色液加入空白孔、標準品孔和樣品孔中，20～25℃下暗處溫育30min；(13)分別將100μl硫酸加入空白孔、標準品孔和樣品孔中；以及(14)立即在450nm波長下讀取步驟(13)所得到的反應(yīng)液的吸光值，并計算得到液態(tài)乳品中氯霉素含量。由此，根據(jù)本發(fā)明實施例的測定液態(tài)乳品中氯霉素含量的方法能夠有效地提高檢測效率及準確率，降低成本。需要說明的是，步驟(6)中，離心后的液體自上而下肉眼可見地分為脂肪層、中間層以及蛋白層，氯霉素主要存在于中間層中。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解的是，前面針對組合試劑和利用組合試劑檢測的方法同樣適用于該測定液態(tài)乳品中氯霉素含量的方法，在此不再贅述。下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明的方案進行解釋。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下面的實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體技術(shù)或條件的，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。實施例1在該實施例中，按照下列方法測定純牛奶中氯霉素含量：1、試劑及溶液10體積％的結(jié)晶紫母液；10體積％的亞甲基藍母液；荷蘭ep氯霉素檢測試劑盒，含有緩沖液、酶結(jié)合物(酶標記氯霉素)、抗體(氯霉素特異性結(jié)合抗體)、底物溶液(tmb顯色液)、終止液(0.1m硫酸)、包被液以及洗滌液(磷酸鹽緩沖液)；氯霉素標準品；以及純牛奶。2、設(shè)備儀器。漩渦混合儀，移液器(10μl、100μl和1ml)，離心管(1.5ml、2ml和15ml)、離心機、洗板機、酶標儀。3、操作步驟(1)將試劑盒恢復(fù)至室溫20-25℃；(2)分別將酶結(jié)合物和抗體與4ml緩沖液進行混合，以便得到酶結(jié)合物工作液和抗體工作液；(3)按照1:1000的比例將結(jié)晶紫母液加入酶結(jié)合物工作液，混勻，得到染色酶結(jié)合物工作液；(4)按照1:1000的比例將亞甲基藍母液加入抗體工作液，混勻，得到染色抗體工作液；(5)滴加100μl緩沖液于零標準品空白孔中、滴加50μl各標準品于不同的標準品孔中(標準品的濃度為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.5和2.0ng/ml)；(6)將待測乳品在3000g的轉(zhuǎn)速下離心10分鐘，取50μl中間層的液體滴加至樣品孔中；(7)分別滴加25μl染色酶結(jié)合物工作液于標準品孔和樣品孔中；(8)分別滴加25μl染色抗體工作液于標準品孔和樣品孔中；(9)用膠條封板，并搖板1min；(10)2℃～8℃下在暗處孵育1小時；(11)洗板時將微孔板上端朝下倒空各孔后，再平穩(wěn)快速向下垂直甩動，并將微孔板倒置在吸水紙上拍打以除去孔中的液體，用250-300μl/孔洗滌液注入全部板孔，再次倒掉微孔中液體，重復(fù)上述操作3遍；(12)分別將100μl底物溶液加入空白孔、標準品孔和樣品孔中，20～25℃下暗處溫育30min；(13)分別將100μl終止液加入空白孔、標準品孔和樣品孔中；以及(14)立即在450nm波長下讀取步驟(13)所得到的反應(yīng)液的吸光值，并計算得到純牛奶中氯霉素含量。4、結(jié)果判定依據(jù)吸光度值通過蝴蝶軟件計算檢測結(jié)果，定量檢出限為0.1ng/ml。實施例2在該實施例中，按照下列方法測定回收率：(1)以純牛奶為本底加入標準品，標準品的添加濃度分別為0.1ng/ml、0.2ng/ml、0.3ng/ml，得到不同濃度的加標樣品；(2)按照實施例1的方法測定不同加標樣品中氯霉素含量，同時，以不添加染色劑作為對照組，并按照下列公式計算回收率：加標回收率＝[(加標樣品測定值-本底樣品測定值)÷加標量]×100％。結(jié)果如下表所示，可以看出，染色劑的添加對樣品檢測結(jié)果無明顯影響，每個樣品經(jīng)兩種方法檢測結(jié)果變異系數(shù)均≤12.3％，符合試劑盒板內(nèi)變異系數(shù)要低于15％的要求；各加標濃度回收率介于82％-108.5％之間，符合試劑盒要求。說明本發(fā)明中結(jié)晶紫和亞甲基藍的添加對于檢測結(jié)果無顯著影響，可以準確地測定樣品中氯霉素含量。同時，能夠為反應(yīng)體系帶來明顯地、肉眼可見的顏色變化，從而避免出現(xiàn)漏加或者重復(fù)添加等操作失誤。實施例3在該實施例中，研究染色劑對檢測方法的精密度影響(1)以純牛奶為本底加入0.1ng/ml的氯霉素標準品，得到加標樣品；(2)按照實施例1的方法測定加標樣品中氯霉素含量。結(jié)果如下表所示，可以看出，本底和加標樣品各20組樣品，cv分別為14.8％和8.0％，精密度滿足要求。說明本發(fā)明中結(jié)晶紫和亞甲基藍的添加對于檢測結(jié)果無顯著影響，可以準確地測定樣品中氯霉素含量。同時，能夠為反應(yīng)體系帶來明顯地、肉眼可見的顏色變化，從而避免出現(xiàn)漏加或者重復(fù)添加等操作失誤。對比例1按照實施例2的方法測定回收率，區(qū)別在于，實施例1中，將結(jié)晶紫母液和亞甲基藍母液分別替換為溴百里香酚蘭和溴甲酚紅。染色劑溶液顏色溴百里香酚蘭黃色溴甲酚紅橙色如上表所示：二者顏色區(qū)分度并不大，分別與酶結(jié)合物和抗體溶液混合，加入微孔后，在牛奶為背景的情況下顏色區(qū)分更加不明顯，不能滿足檢測要求，其中溴百里香酚蘭顏色太淡，因此不再作為備選。對比例2按照實施例2的方法測定回收率，區(qū)別在于，實施例1中，將亞甲基藍母液替換為溴甲酚紅。如果是先加入溴甲酚紅，之后再加結(jié)晶紫則很容易用肉眼判斷；但如果是反過來，則肉眼不易觀察，區(qū)分度不高。綜上，如果選擇用溴甲酚紅替換亞甲基藍母液，則必須注意染色劑和試劑的搭配，因為試劑的加入有先后順序。便利性有一定程度的降低，而結(jié)晶紫和亞甲基藍的組合則可以隨意與試劑搭配，易于操作，失誤率抵。對比例3按照實施例2的方法測定回收率，區(qū)別在于，實施例1中，將結(jié)晶紫母液和亞甲基藍母液分別以2:1000的體積比獨立地加入酶結(jié)合物工作液和抗體工作液。如上表所示：染色劑的含量增加后，檢測結(jié)果的回收率產(chǎn)生明顯的上升，可能的原因是染色劑中的雜質(zhì)對抗原抗體的結(jié)合產(chǎn)生了一定的影響，從而導(dǎo)致酶結(jié)合物的結(jié)合率降低，催化底物顯色較淺，結(jié)果偏高。對比例4按照實施例2的方法測定回收率，區(qū)別在于，實施例1中，將結(jié)晶紫母液和亞甲基藍母液分別以1:1500的體積比獨立地加入酶結(jié)合物工作液和抗體工作液。如上表所示，染色劑濃度較低時檢測回收率無明顯變化，但低濃度的染色劑顯色效果較差，不能形成明顯的色差比對，達到肉眼易于區(qū)分的目的。在本說明書的描述中，參考術(shù)語“一個實施例”、“一些實施例”、“示例”、“具體示例”、或“一些示例”等的描述意指結(jié)合該實施例或示例描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點包含于本發(fā)明的至少一個實施例或示例中。在本說明書中，對上述術(shù)語的示意性表述不必須針對的是相同的實施例或示例。而且，描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點可以在任一個或多個實施例或示例中以合適的方式結(jié)合。此外，在不相互矛盾的情況下，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以將本說明書中描述的不同實施例或示例以及不同實施例或示例的特征進行結(jié)合和組合。盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實施例，可以理解的是，上述實施例是示例性的，不能理解為對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對上述實施例進行變化、修改、替換和變型。當前第1頁12