本發(fā)明涉及化學(xué)分析領(lǐng)域，具體涉及一種檢測銀杏葉提取液中總銀杏酸的方法。
背景技術(shù)：
：銀杏素有“植物界的活化石”之稱，原產(chǎn)中國，銀杏資源在中國的擁有量占有世界總量的70％。銀杏葉為銀杏科植物銀杏(ginkgobilobal.)的干燥葉，性甘、苦、澀、平，歸心、肺經(jīng)，具有斂肺、平喘、活血化瘀、止痛等功效；常用于治療冠心病、心絞痛及高脂血癥。銀杏葉經(jīng)加工制成的銀杏葉提取物，其制劑是目前國內(nèi)外暢銷的藥品及保健品；作為天然藥物，在治療心腦血管疾病及老年癡呆癥中具有非常顯著的效果。因此銀杏葉和銀杏葉提取物作為原料，被廣泛用于治療心腦血管等疾病的藥品制劑中，僅《中國藥典》就收載了包括銀杏葉在內(nèi)的5個相關(guān)品種。銀杏中有一類毒性成分—銀杏酸，銀杏酸具有致敏性、胎盤毒性和免疫毒性，對人類的健康具有潛在的危害。其主要存在于銀杏葉、果和外種皮中，在常規(guī)的銀杏葉提取物中也經(jīng)常含有，且部分提取物中含量不低，為控制產(chǎn)品質(zhì)量進而確?；颊叩挠盟幇踩?，因此對銀杏葉提取物中銀杏酸含量的檢測顯得尤為重要。who及多國藥典對銀杏提取物及其制劑中總銀杏酸的含量都進行了限定。例如，舒血寧注射液制劑就由銀杏葉提取液制成，其中限定總銀杏酸的含量每1ml不得過20ng。但現(xiàn)有的總銀杏酸的檢測方法并不能準(zhǔn)確測定樣品中的含量，因此，建立更為準(zhǔn)確、便捷的銀杏酸分析方法就顯得極其重要。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供了一種檢測銀杏葉提取液中總銀杏酸的方法，具體包括以下步驟：1)取待測銀杏葉提取液，加工成粉末，得供試品；以甲醇水溶液為溶劑充分溶解，過濾，取濾液，即得供試品溶液；2)取白果新酸對照品，以甲醇水溶液為溶劑溶解，即得對照品溶液；3)采用高效液相色譜法，分別對所述供試品溶液和對照品溶液進行檢測，分別獲得供試品色圖譜和對照品色譜圖；所述檢測的條件具體為：色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相由流動相a和流動相b組成，其中，含0.1％-0.2％三氟乙酸的乙腈為流動相a，0.1％-0.2％三氟乙酸的水溶液為流動相b；按如下條件進行梯度洗脫：4)依據(jù)所述對照品色譜圖與供試品色譜圖中各自的銀杏酸峰面積，采用外標(biāo)法計算所述待測銀杏葉提取液中總銀杏酸的含量。其中，所述梯度洗脫中，0～35min，“75→90”代表的含義是，流動相a的比例由75％逐漸增加至90％，“25→10”代表的含義是，流動相b的比例由25％逐漸降低至10％；其他時間段的含義與之類似。該梯度洗脫條件，可將供試品溶液中總銀杏酸中的5個銀杏酸成分有效分離，同時可避免梯度變化對色譜基線的影響?？傘y杏酸包含了銀杏酸c15∶0、銀杏酸c17∶1、銀杏酸c13∶0、銀杏酸c15∶1、銀杏酸c17∶2等。由于樣品中待測定的總銀酸非單一成分，是一類酚酸類物質(zhì)；供試品中除了含有黃酮類、內(nèi)酯類，可能還涉及很多其他成分，而白果新酸對照品及總銀杏酸對照品的成分固定，又是固體粉末狀態(tài)，只需直接溶解即可，因此對照溶液與供試品溶液的制備方法有所不同。供試品溶液的制備過程不僅可使供試品中總銀杏酸完全溶解，又可降低供試品中的其他成分對檢測的影響。步驟4)中所述銀杏酸峰面積，其中供試品色譜圖中指總銀杏酸峰面積；對照品色譜圖中指白果新酸峰面積。所述外標(biāo)法采用如下計算公式：式中：a供：為供試品溶液中總銀杏酸成分的總峰面積；a對：為白果新酸對照品溶液的峰面積；m對：為白果新酸對照品的稱樣量，mg；v對：為白果新酸對照品稀釋體積，ml；v供：為供試品的稀釋體積，ml；v：用于制粉的銀杏葉提取液體積，ml；w供：為供試品溶液制備過程中稱取銀杏葉提取粉樣品重量，g；w：銀杏葉提取液制成粉的總重量，g；t：銀杏葉提取液中總黃酮醇苷含量，mg/ml；在檢測過程中，白果新酸對照品與供試品溶液色譜圖的總銀杏酸峰面積是供后續(xù)計算總銀杏酸含量的重要依據(jù)，因此需要充分注重色譜圖中各個峰的整體形狀特征；發(fā)明人針對銀杏葉提取液中總銀杏酸的檢測方法進行了大量研究，發(fā)現(xiàn)在檢測過程中會出現(xiàn)溶劑效應(yīng)，導(dǎo)致色譜峰的峰形不好，峰面積的重復(fù)性不好。發(fā)明人經(jīng)過研究，最終確定了溶劑甲醇溶液的體積百分比為70％-90％，優(yōu)選80％的甲醇水溶液。該體積比的甲醇效果可消除溶劑效應(yīng)，可使色譜峰的峰形尖銳、峰面積的重復(fù)性好，保證色譜圖的穩(wěn)定性。本發(fā)明進一步還包括所述銀杏葉提取是以銀杏葉為原料，采用如下方式制備：用乙醇提取銀杏葉，樹脂吸附，乙醇洗脫，回收乙醇，水稀釋，即得；優(yōu)選地，所述銀杏葉提取液的制備方法為：銀杏葉采用乙醇回流提取，回收乙醇，加水定容，采用樹脂吸附，乙醇洗脫，過濾取濾液，回收乙醇，濃縮、醇沉、濾過，回收乙醇，加水稀釋，即得。具體制備銀杏葉提取液工藝為：取銀杏葉，凈選，采用乙醇回流提取，調(diào)節(jié)ph值后靜置，過濾，取濾液將乙醇回收至無醇味，再加水定容；調(diào)節(jié)ph值，離心分取上清液；采用大孔吸附樹脂對所述上清液進行吸附，使用純化水沖洗樹脂柱，使用乙醇對樹脂柱進行洗脫；將洗脫液過濾，取濾液將乙醇回收至無醇味，濃縮，醇沉，調(diào)節(jié)ph值，靜置；過濾，取濾液將乙醇回收至無醇味，加入注射用水稀釋，即得銀杏葉提取液。本發(fā)明進一步還包括制備定位用對照品溶液，具體為：取總銀杏酸對照品，以甲醇水溶液為溶劑溶解，即得；采用步驟3)所述高效液相色譜法檢測所述定位用對照品溶液，獲得定位用對照品色譜圖；所述步驟4)依據(jù)所述對照品色譜圖、所述供試品色譜圖以及所述定位用對照品色譜圖中各自的銀杏酸峰及峰面積，采用外標(biāo)法計算所述待測銀杏葉提取液中總銀杏酸的含量；優(yōu)選地，所述步驟4)依據(jù)所述定位用對照品色譜圖，確定所述供試品色譜圖中總銀杏酸峰。實際待檢測樣品中可能包含多種成分，這類成分需要用總銀杏酸對照品來進行定位，即通過色譜圖上各峰的比對進行定位；再根據(jù)供試品色譜圖中總銀杏酸成分的色譜峰面積總和與白果新酸對照品色譜圖的峰面積進行比較，采用外標(biāo)法計算這類成分的含量。本發(fā)明進一步包括所述供試品溶液的濃度為40～65mg/ml；所述對照品溶液的濃度為0.5～2μg/ml；優(yōu)選地，所述供試品溶液的濃度為50mg/ml；所述對照品溶液的濃度為1μg/ml。另外需要制備定位用對照溶液，該溶液的濃度是白果新酸對照品溶液的20倍，即對照品溶液中白果新酸c13∶0對照品溶解在所述80％甲醇中的濃度為1μg/ml，則定位用對照溶液中總銀杏酸對照品溶解在所述80％甲醇中的濃度為20μg/ml。本發(fā)明進一步包括所述采用高效液相色譜法時，所述供試品溶液與對照品溶液的進樣量均為50μl。本發(fā)明進一步包括步驟1)所述加工采用噴霧干燥法。由于所檢測銀杏葉提取液樣品是液體，并且銀杏酚酸類物質(zhì)本身在樣品中的含量就極低；實驗室采用的熱濃縮法或者其他類似溶解方法，經(jīng)常會造成樣品損失，導(dǎo)致檢測的數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確。發(fā)明人經(jīng)過大量研究，發(fā)現(xiàn)若將樣品制成固體粉末，可明顯增強樣品的溶解效果，所述固體粉末可達到待測成分濃縮富集作用。因此發(fā)明人想到采用噴霧干燥法使提取液轉(zhuǎn)變?yōu)楣腆w粉末，所述噴霧干燥法不僅大大降低了樣品的損失，并且在噴霧過程中，液體成霧狀會大大增加比表面積，顯著提高溶解的效率和溶解率。本發(fā)明進一步包括步驟3)所述檢測條件還包括：檢測波長220nm-240nm、300nm-320nm；和/或，柱溫為25℃-35℃；流速為0.8-1.2ml/min。優(yōu)選地，所述檢測波長為310nm；柱溫為30℃。本發(fā)明進一步包括所述色譜柱尺寸為：柱長150mm-200mm、250mm，柱內(nèi)徑4mm-5mm；優(yōu)選地，所述柱長為150mm，柱內(nèi)徑4.6mm；所述填充劑的粒徑為3.5-5μm，優(yōu)選為5μm。本發(fā)明的檢測過程優(yōu)先采用agilentzorbaxxdbc18色譜柱，由實施例方法學(xué)考察8中，不同廠家色譜柱考察的結(jié)果可以看出agilent色譜柱的效果最好，分離效果好于另外兩根色譜柱。作為優(yōu)選方案，提供一種檢測銀杏葉提取液總銀杏酸的方法，其中，包括以下步驟：1)取待測銀杏葉提取液，采用噴霧干燥法加工成粉末，得供試品；以百分比為70％～90％的甲醇水溶液為溶劑充分溶解，過濾，取濾液，即得供試品溶液；2)取白果新酸對照品，以百分比為70％～90％的甲醇水溶液為溶劑溶解，即得對照品溶液；取總銀杏酸對照品，以百分比為70％～90％的甲醇水溶液為溶劑溶解，即得定位用對照品溶液；3)采用高效液相色譜法，分別對所述供試品溶液、對照品溶液及定位用對照品溶液進行檢測，分別獲得供試品色圖譜、對照品色譜圖及定位用對照品色譜圖；所述檢測的條件具體為：色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相由流動相a和流動相b組成，其中，含0.1％-0.2％三氟乙酸的乙腈為流動相a，0.1％-0.2％三氟乙酸的水溶液為流動相b；按如下條件進行梯度洗脫：0～35min：流動相a占流動相總體積的百分比由75％增加至90％；35～36min：流動相a占流動相總體積的百分比為90％；36～45min：流動相a占流動相總體積的百分比為90％減少至75％；所述檢測波長為310nm；所述柱溫為30℃；所述柱長為150mm，柱內(nèi)徑4.6mm；所述填充劑的粒徑為5μm。4)依據(jù)所述定位用對照品色譜圖與供試品色譜圖，確定供試品溶液中總銀杏酸峰及其峰面積，再與對照品色譜圖中白果新酸峰面積比較，采用外標(biāo)法計算所述待測銀杏葉提取液中總銀杏酸的含量。本發(fā)明所提供的檢測方法，是一種采用通過快速溶解、定容樣品，準(zhǔn)確、便捷的檢測銀杏葉提取液中總銀杏酸含量的方法。本發(fā)明中制備樣品溶液的方法操作簡便、快捷；不僅大大提高了溶解率，幾乎對樣品中的銀杏酸不會造成任何損失。發(fā)明人通過優(yōu)化梯度洗脫條件以及色譜儀的檢測條件，從而達到增加檢測的準(zhǔn)確性、便捷性，從而快速、準(zhǔn)確的反應(yīng)出待測樣品中真實情況。本發(fā)明的檢測方法能夠有效地判斷銀杏葉提取液樣品中總銀杏酸的含量，本發(fā)明保證其檢測的穩(wěn)定、均一、可控，具有方法簡便、穩(wěn)定性好、精密度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點。附圖說明圖1為總銀杏酸對照品色譜圖圖2為供試品色譜圖圖3為白果新酸對照品色譜圖(檢測限)圖4為白果新酸對照品色譜圖(定量限)圖5為銀杏酸線性關(guān)系圖圖6為1#柱總銀杏酸對照品色譜圖圖7為2#柱總銀杏酸對照品色譜圖圖8為3#柱總銀杏酸對照品色譜圖圖9為流速為0.8ml/min的總銀杏酸對照品色譜圖圖10為流速為1ml/min的總銀杏酸對照品色譜圖圖11流速為1.2ml/min的總銀杏酸對照品色譜圖圖12為柱溫為25℃的總銀杏酸對照品色譜圖圖13為柱溫為30℃的總銀杏酸對照品色譜圖圖14為柱溫為35℃的總銀杏酸對照品色譜圖具體實施方式為更進一步闡述本發(fā)明為達成預(yù)定發(fā)明目的所采取的技術(shù)手段及功效,以下結(jié)合附圖及較佳實施例進行詳細說明；以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明實施例采用的儀器和試劑如下：1、樣品及來源銀杏葉提取液：黑龍江珍寶島藥業(yè)股份有限公司雞西分公司批號：b20160301(提取液457.92g，制粉5.87g)批號：b20160302(提取液455.24g，制粉6.24g)批號：b201603032、儀器噴霧干燥機(型號：dc1500廠家：上海達程實驗設(shè)備有限公司)高效液相色譜儀(型號：agilent1260vl廠家：美國安捷倫公司)高效液相色譜儀(型號：waterse2685/2489廠家：美國沃特世公司)超聲波清洗器(型號：p180h廠家：elma公司)電子天平(百萬分之一)(型號：mse6.6s-oce，廠家：德國賽多利斯公司)電子天平(萬分之一)(型號：bs224s，廠家：德國賽多利斯公司)電子天平(百分之一)(型號：jd2000-2，廠家：沈陽龍騰電子有限公司)色譜柱：1#/agilentzorbaxxdbc18150×4.6mm5μm(廠家：美國安捷倫公司)2#/waterssymmtryc18150×4.6mm5μm(廠家：美國沃特世公司)3#/phenomenexgeminic18150×4.6mm5μm(廠家：美國菲羅門公司)3、試劑、對照品三氟乙酸(級別：hplc，廠家：天津科密歐化學(xué)試劑有限公司)乙腈(級別：hplc，廠家：dikma)冰醋酸(級別：hplc，廠家：國藥集團化學(xué)試劑有限公司)甲醇(級別：hplc，廠家：dikma)甲醇(級別：a.r，廠家：天津科密歐化學(xué)試劑有限公司)白果新酸對照品(批號：111690-201403，中國食品藥品檢定研究院)總銀杏酸對照品(批號：111594-201304，中國食品藥品檢定研究院)以下實施例中涉及到的樣品提取粉均是采用噴霧干燥法制成固體粉末，并詳細記錄銀杏葉提取液的噴入量和制粉量。實施例1取黑龍江珍寶島藥業(yè)股份有限公司雞西分公司生產(chǎn)的批號為b20160301的銀杏葉提取液，檢測銀杏葉提取液中總銀杏酸的檢測方法，包括以下步驟：1)對照品溶液的制備：精密稱取白果新酸對照品適量，加入體積百分比為80％的甲醇溶液內(nèi)，其中添加比例為：每1ml80％甲醇溶液中加入1μg的白果新酸對照品。另外再制備定位用對照品溶液：精密稱取總銀杏酸對照品適量，加入體積百分比為80％的甲醇溶液內(nèi)，其中添加比例為：每lml80％甲醇溶液中加入20μg總銀杏酸對照品，作為定位用對照溶液。2)供試品溶液的制備：樣品銀杏葉提取液采用噴霧干燥法制成固體粉末，精密稱取樣品粉末0.5g，置于具塞錐形瓶中，加入體積百分比為80％的甲醇10ml，稱定重量并記錄，采用超聲使其溶解，自然放置常溫，用體積百分比為80％的甲醇補足溶解過程中缺失的重量，使其重量與前述所記錄的重量一致；搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。3)高效液相色譜法測定色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑，其中色譜柱長為150mm，柱內(nèi)徑為4.6mm，填充劑的粒徑為5μm；檢測波長為310nm；流動相a為含0.1％三氟乙酸的乙腈，流動相b為含0.1％三氟乙酸的水，按如下條件進行梯度洗脫：精密吸取供試品溶液、對照品溶液及定位用對照品溶液各50μ1,注入液相色譜儀，獲得供試品、對照品及定位用對照品色譜圖。4)、計算總銀杏酸含量；依據(jù)定位用對照品色譜圖的總銀杏酸峰，確定供試品色譜圖中總銀杏酸峰及峰面積；以白果新酸色譜圖的峰面積，采用外標(biāo)法計算供試品溶液中與總銀杏酸對照品相應(yīng)色譜峰的總峰面積，計算待測樣品中總銀杏酸含量。經(jīng)檢測，未檢出樣品中含有銀杏酸。采用相同的方法分別檢測批號b20160302和批號b20160303的銀杏提取液中銀杏酸，均未檢出。實施例2分別選擇百分比為70％的甲醇溶液、百分比為80％的甲醇溶液、百分比為90％的甲醇溶液以及純甲醇做為溶劑，進行溶劑的實驗對比；采用實施例1相同的實驗方法，制備白果新酸對照品溶液及供試品溶液，僅有甲醇溶液的百分比不同，采用高效液相色譜法檢測。通過測定對照品溶液的響應(yīng)因子及色譜峰的對稱性來考察上述不同百分比的甲醇溶劑，如表1所示：表1不同濃度甲醇的對比由上述數(shù)值可知，70％的甲醇溶液、80％的甲醇溶液及90％的甲醇溶液的供試品溶液峰形都對稱。方法學(xué)考察1、專屬性試驗取總銀杏酸對照品溶液與供試品溶液進樣，銀杏葉提取粉供試品色譜圖(如圖2所示)與總銀杏酸對照品色譜圖(如圖1所示)比較，供試品色譜圖中無與總銀杏酸對照品的5個色譜峰保留時間相同的色譜峰，且無其它峰干擾測定，本法專屬性良好。2、檢測限與定量限采用信噪比法確定檢測限與定量限，取白果新酸對照品溶液稀釋至適宜濃度，注入液相色譜儀，考察其峰高與基線噪音的比值(即信噪比s/n)，如圖3及圖4所示，當(dāng)s/n為3∶1時，此時的濃度為檢測限；當(dāng)s/n為10∶1時，此時的濃度為定量限。結(jié)果：本法的檢測限為3.04ng、定量限為11.16ng。3、線性關(guān)系考察制備濃度為10μg/ml的白果新酸對照品溶液：精密稱取白果新酸對照品適量，加入體積百分比為80％的甲醇內(nèi)，充分溶解，過濾，取濾液，即得白果新酸對照品溶液；其中添加比例為，每1ml甲醇水溶液中加入10μg的白果新酸對照品。分別吸取對照品溶液1μl、2μl、5μl、8μl、10μl、15μl、20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；如圖5所示，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以進樣量(ng)為橫坐標(biāo)，進行線性回歸，回歸方程為：y＝bx+a，結(jié)果見表2。表2白果新酸線性關(guān)系考察結(jié)果結(jié)果表明：銀杏酸進樣量在10.15ng～203.00ng之間，峰面積與進樣量呈良好的線性關(guān)系。4、精密度考察取白果新酸對照品溶液，并按照上述高效液相色譜法的色譜條件連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，計算峰面積平均值及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表3。表3進樣精密度考察結(jié)果(n＝6)進樣次數(shù)峰面積130.702230.821331.000431.196531.000630.552平均值30.879rsd％0.76結(jié)果表明：連續(xù)6次進樣銀杏酸峰面積的rsd值為0.76％，說明儀器進樣精密度良好。5、重復(fù)性考察取本品制備供試品溶液，平行制備六份，按上述高效液相色譜法的色譜條件進樣，記錄色譜圖，計算含量，結(jié)果見表4。表4銀杏葉提取液重復(fù)性試驗結(jié)果(n＝6)結(jié)果表明：六份平行銀杏葉提取液樣品總銀杏酸含量結(jié)果均未檢出，重復(fù)性試驗良好。6、穩(wěn)定性試驗取對照品溶液及供試品溶液，按上述高效液相色譜法的色譜條件分別在0小時、2小時、4小時、6小時、8小時、12小時、16小時、20、24小時進樣測定其峰面積，考察供試品溶液的穩(wěn)定性，結(jié)果見表5、表6。表5白果新酸溶液穩(wěn)定性考察結(jié)果時間(小時)峰面積030.778231.182430.619631.031831.2261230.9981630.7842030.9502431.307平均值30.986rsd％0.26結(jié)果表明：不同進樣時間銀杏酸峰面積的rsd值為0.26％，對照品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。表6銀杏葉提取液供試品溶液穩(wěn)定性考察結(jié)果結(jié)果表明：六份平行銀杏葉提取液樣品總銀杏酸含量結(jié)果均未檢出。7、回收率試驗制備白果新酸對照品溶液：精密稱取白果新酸對照品10.15mg，置于100ml量瓶中，加入甲醇使用溶解并定容至量瓶刻度，制成每1ml甲醇中含銀杏酸0.1mg的對照品貯備液。精密量取對照品貯備液1ml，置于100ml量瓶中，加適量甲醇及20ml水混勻后用甲醇稀釋至量瓶刻度混勻，即得濃度為1.015μg/ml的白果新酸對照品溶液。其中，銀杏葉提取液(批號b20160302)：455.24g制粉量6.24g，總銀杏酸含量(ng/g)：未檢出加樣回收供試品溶液制備：取銀杏葉提取物粉0.25g,精密稱定，置具塞錐形瓶中，平行操作12份；其中6份分別精密加入10ml濃度為1.015μg/ml的白果新酸對照品溶液，稱定重量，超聲溶解，冷卻至室溫，采用體積百分比為80％甲酵補足在前述操作中缺失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得；其中3份分別精密加入5ml濃度為1.015μg/ml的白果新酸對照品溶液，再精密加入5ml體積百分比為80％的甲醇,稱定重量，超聲溶解，冷卻至室溫，采用體積百分比為80％甲酵補足在前述操作中缺失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得；其中3份分別精密加入2ml濃度為1.015μg/ml的白果新酸對照品溶液，再精密加入8ml體積百分比為80％的甲醇,稱定重量，超聲溶解，冷卻至室溫，采用體積百分比為80％甲酵補足在前述操作中缺失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得；按上述高效液相色譜法的色譜條件進樣，測定回收率，結(jié)果見表7。表7銀杏葉提取物粉白果新酸加樣回收試驗(n＝6)結(jié)果表明：銀杏葉提取物粉白果新酸加樣回收樣品平均回收率為：96.7％，12個樣品rsd值為3.10％，該方法測定總銀杏酸準(zhǔn)確度良好。8、不同廠家色譜柱考察分別采用三種不同廠家填料的色譜柱，取總銀杏酸對照品溶液按上述高效液相色譜法的色譜條件的方法進樣，考察對照品五個峰與相臨色譜峰的最小分離度。(如圖6-8所示))表8不同廠家色譜柱考察色譜柱峰1(銀杏酸)峰2峰3峰4峰51#2.602.604.131.551.552#1.361.363.3611.6611.663#1.441.442.580.810.81結(jié)果表明：2#色譜柱和3#色譜柱對總銀杏酸五個成分分離情況不如1#柱理想，故標(biāo)準(zhǔn)方法使用1#色譜柱效果最好。9、流速考察取總銀杏酸對照品溶液按上述高效液相色譜法的色譜條件的方法進樣，其中色譜柱采用1#色譜柱。流動相流速分別為0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min，進樣考察流速的變化對總銀杏酸對照品五個峰與相臨色譜峰分離度的影響。(如圖9-11所示)表9流速考察流速峰1(白果新酸)峰2峰3峰4峰50.82.552.554.081.451.451.02.642.644.181.551.551.22.662.664.211.611.61結(jié)果表明：使用1#色譜柱，在0.8ml/min～1.2ml/min流速下能夠?qū)⒖傘y杏酸對照品五個成分較好分離。10、柱溫考察取總銀杏酸對照品溶液按上述高效液相色譜法的色譜條件的方法進樣，其中柱溫分別設(shè)置為25℃、30℃、35℃，進樣考察柱溫的變化對總銀杏酸對照品五個峰與相臨色譜峰分離度的影響。(如圖12-14所示)表10柱溫考察柱溫峰1(白果新酸)峰2峰3峰4峰525℃2.542.544.151.291.2930℃2.632.634.151.551.5535℃2.682.684.141.751.75結(jié)果表明：柱溫為25℃時總銀杏酸對照品五個成分峰分離較稍差；柱溫為30℃時效果最優(yōu)11、中間精密度考察上述實驗由化驗員a完成，再安排化驗員b于不同日期，使用另外一臺液相色譜儀(與上述化驗員a使用的不是同一臺)，按照上述方法，考察總銀杏酸對照品五個峰與相臨色譜峰的最小分離度。表11中間精密度考察條件峰1(銀杏酸)峰2峰3峰4峰5人員a/安儀器2.632.634.151.551.55人員b/沃儀器2.962.964.791.681.68結(jié)果表明：所檢測的總銀杏酸對照品中，五個成分峰分離度無明顯差異，表明隨機變動因素對精密度影響較小，該方法準(zhǔn)確可靠。雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明、具體實施方式及試驗，對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。當(dāng)前第1頁12