本發(fā)明涉及法庭科學毒品標準品的制備。更具體地，涉及一種用于法庭科學毒品檢測的四氫大麻酚標準物質的純化制備方法。
背景技術：
：目前，日趨嚴重的毒品問題已成為全球性的災難。毒品的泛濫直接危害人民的身心健康，并給經(jīng)濟發(fā)展和社會進步帶來巨大威脅。因此，建立法庭科學毒品檢測量值溯源體系，提高毒品成份量測量技術，保證測量結果的可靠性和可比性，建立測量數(shù)據(jù)的共享與互認，為法庭提供準確可靠的證據(jù)，已成為世界各國毒品鑒定機構普遍關注的問題。毒品成份量測量技術及溯源性保障是一個有機的整體，是核心測量能力在法庭科學毒品成份量測量領域的重要體現(xiàn)。標準物質是貫穿于這個整體的骨架，是量值的載體，是毒品成份量溯源體系的關鍵要素，是保證測量結果在時間和空間上的準確性和可比性的重要基礎，是實現(xiàn)有效測量即準確、可比、可溯源測量的根本保證。歐美等國家技術先進的毒品檢測實驗室大多采用sigma等公司生產(chǎn)的國際上公認的標準物質，但在我國只能依賴進口的標準物質，量少價高，有許多還不能向中國提供。目前國內毒品分析中使用的“對照品”不僅種類極為有限，而且普遍缺乏完善的結構鑒定、純度測定、均勻性和穩(wěn)定性等相應的技術指標。這些都給涉毒案件檢測帶來一定的不確定性，直接影響到定量結果的準確性。而且，國內毒品標準物質的匱乏，已經(jīng)成為制約我國實現(xiàn)法庭科學毒品檢測化學測量方法標準化、測量結果的溯源和互認的主要障礙。因此，能夠制備出用于法庭科學毒品檢測的毒品標準物質已經(jīng)成為我國毒品研究領域亟需解決的問題。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個目的在于提供一種用于法庭科學毒品檢測的四氫大麻酚標準物質的純化制備方法。為達到上述目的，本發(fā)明采用下述技術方案：用于法庭科學毒品檢測的四氫大麻酚標準物質的純化制備方法，包括如下步驟：(1)檢測繳獲四氫大麻酚樣品中四氫大麻酚的純度，選擇四氫大麻酚質量分數(shù)大于或等于10wt％的繳獲四氫大麻酚樣品作為純化制備四氫大麻酚標準物質的原料；(2)利用高效液相色譜制備四氫大麻酚標準物質。上述用于法庭科學毒品檢測的四氫大麻酚標準物質的純化制備方法，在步驟(1)中，包括如下步驟：(1.1)標準溶液的制備：配制成需要濃度的標準品溶液，使用前經(jīng)過0.45μm微孔濾膜過濾；(1.2)確定液相色譜條件：色譜柱為shim-packvp-ods柱,250mm×4.6mmi.d.，5μm；流動相為v甲醇(b)-v水(a)體系，梯度洗脫條件(b)：0-30min80％-90％，30-60min90％；紫外檢測波長210nm；流速1.0ml/min；柱溫35℃；所述v甲醇(b)-v水(a)體系為v甲醇：v水＝83:17混合，充分混勻脫氣；(1.3)計算標準曲線的回歸方程及確定線性范圍：用色譜甲醇稀釋標準儲備液，精密配制成對照品溶液，按步驟(1.2)中的色譜條件測定，每個濃度重復3次，以平均值計算，記錄色譜峰面積，以對照品的進樣濃度(μg/ml)為橫坐標，色譜峰面積值為縱坐標作圖，并計算標準曲線的回歸方程，并確定線性范圍；(1.4)按步驟(1.2)中的色譜方法分析測定樣品溶液，重復測定3次，記錄峰面積，計算其平均值，按峰面積外標法計算樣品中的四氫大麻酚含量。上述用于法庭科學毒品檢測的四氫大麻酚標準物質的純化制備方法，在步驟(2)中，包括如下步驟：(2.1)樣品溶液的制備：取繳獲的大麻脂，加入甲醇，分離出甲醇液，離心濃縮至干，加甲醇定容，使用前經(jīng)過0.45μm微孔濾膜過濾；(2.2)確定液相色譜條件：色譜柱為shim-packvp-ods制備柱，250mm×20mmi.d.，5μm；流動相為v甲醇(b)-v水(a)體系，等度洗脫條件(b)：83％；紫外檢測波長210nm；流速10ml/min；上樣量900μl；柱溫為室溫。自動餾分收集器收集thc組分；(2.3)制備液相收集到得餾分，四氫大麻酚是溶解在甲醇和水的混合溶劑中，采用離心濃縮儀，真空低溫冷阱捕集的方法脫去其中的甲醇成分，采用冷凍干燥技術獲得黃色油狀的四氫大麻酚液體，再以真空干燥箱進一步脫去水分和殘留溶劑。本發(fā)明的有益效果如下：本發(fā)明制備純化方法得到的四氫大麻酚晶體中，按照高效液相色譜峰面積歸一化法計算四氫大麻酚純度大于或等于99.1wt％。本發(fā)明制備純化方法得到的四氫大麻酚經(jīng)核磁共振、液相色譜-串聯(lián)質譜聯(lián)用、紅外光譜分析確認，其純度經(jīng)液相色譜、氣相色譜確認定值，并對色譜無響應雜質進行測定；根據(jù)標準物質研制要求，其穩(wěn)定性、均勻性、定值、總不確定度的估計均符合相關規(guī)定，達到預期指標。本發(fā)明的制備純化方法可為我國司法鑒定部門提供量值準確、可溯源的四氫大麻酚標準物質，填補我國法庭科學領域毒品標準物質空白，以改進分析測量質量，提高定量結果的準確度，最大程度地保證測量結果的有效性。有助于建立法庭科學毒品檢測量值溯源體系，有利于實現(xiàn)國內法庭科學毒品檢測化學測量方法標準化，實現(xiàn)測量結果的可靠、有效和互認?？朔爽F(xiàn)有技術制備純化方法得到的四氫大麻酚樣品存在的純度低、穩(wěn)定性差、均勻性差、制備過程復雜等缺陷，提供了一種利用高效液相色譜分離法獲得高純度、高穩(wěn)定性、回收率高、便于規(guī)?；a(chǎn)的四氫大麻酚標準物質制備方法。附圖說明下面結合附圖對本發(fā)明的具體實施方式作進一步詳細的說明。圖1-1大麻粗提液中δ9-四氫大麻酚的紫外光譜圖；圖1-2大麻粗提液中大麻二酚的紫外光譜圖；圖1-3大麻粗提液中大麻酚的紫外光譜圖；圖2大麻粗提液hplc色譜圖；圖3大麻粗提液hplc制備色譜圖；圖4四氫大麻酚餾分的hplc色譜圖；圖5四氫大麻酚標準物質制備工藝流程圖；圖6四氫大麻酚的氫譜圖；圖7四氫大麻酚的碳譜圖；圖8四氫大麻酚的質譜圖。具體實施方式為了更清楚地說明本發(fā)明，下面結合優(yōu)選實施例和附圖對本發(fā)明做進一步的說明。附圖中相似的部件以相同的附圖標記進行表示。本領域技術人員應當理解，下面所具體描述的內容是說明性的而非限制性的，不應以此限制本發(fā)明的保護范圍。一、儀器、試劑及材料1.1主要儀器分析型高效液相色譜儀(日本島津)，包括：lc-20ad高壓輸液泵；sil-10a自動進樣器；spd-20a二極管陣列檢測器；cto-20a柱溫箱。制備型高效液相色譜儀(agilent)，包括：g1361a高壓輸液泵；g2260a自動進樣器；g1315d二極管陣列檢測器；g1364b自動餾分收集器。氣相色譜質譜聯(lián)用儀(日本島津)，包括：gc-2010氣相色譜儀；gcms-qp2010質譜儀；aoc-20i自動進樣器。kq3200型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；xs105dualrange電子天平(瑞士mettlertoledo公司)。1.2主要試劑及材料甲醇(色譜純，國藥集團化學試劑有限公司)，超純水(經(jīng)millipore超純水制備系統(tǒng)凈化，法國millipore公司)。δ9-四氫大麻酚(thc)標準品溶液(0.1mg/ml)、大麻二酚(cbd)標準品溶液(1mg/ml)、大麻酚(cbn)標準品溶液(1mg/ml)均由北京百靈威公司提供。大麻脂由案件提供并應用于本研究中。二、繳獲四氫大麻酚樣品中四氫大麻酚的純度測定及四氫大麻酚標準物質的純化制備2.1樣品溶液的制備分析型：配制成需要濃度的標準品溶液，使用前經(jīng)過0.45μm微孔濾膜過濾。制備型：取繳獲的大麻脂，加入甲醇，分離出甲醇液，離心濃縮至干，加甲醇定容，使用前經(jīng)過0.45μm微孔濾膜過濾。2.2液相色譜條件2.2.1高效液相色譜分析條件色譜柱為shim-packvp-ods柱(250mm×4.6mmi.d.，5μm)；流動相為甲醇(b)-水(a)體系，梯度洗脫條件(b)：0-30min80％-90％，30-60min90％；紫外檢測波長210nm；流速1.0ml/min；柱溫35℃。2.2.2高效液相色譜制備條件色譜柱為shim-packvp-ods制備柱(250mm×20mmi.d.，5μm)；流動相為甲醇(b)-水(a)體系，等度洗脫條件(b)：83％；紫外檢測波長210nm；流速10ml/min；上樣量900μl；柱溫為室溫。自動餾分收集器收集thc組分。2.3高效液相色譜分析條件的選擇2.3.1色譜柱的選擇采用的反相色譜柱為shim-packvp-ods柱(250mm×4.6mmi.d.，5μm)。2.3.2檢測波長的選擇經(jīng)過hplc-dad分析，在190-500nm范圍內，thc、cbd、cbn的最大吸收波長分別為209、205、219nm，如圖1-1至圖1-3所示，所以綜合考慮選擇檢測波長為210nm。2.3.3流動相體系的選擇分別考察了甲醇-0.05％tfa/水、甲醇-0.02％h2so4/水以及甲醇-水體系。發(fā)現(xiàn)三種體系對于大麻粗提液中thc、cbd、cbn的分離效果差別不大?？紤]到本方法還要應用到制備液相中，本著體系越簡單越利于餾分純化的原則，最終，選擇了甲醇-水的體系來對大麻粗提液中的各組分進行分離，色譜圖如圖2所示。2.3.4標準曲線和線性關系用色譜甲醇稀釋標準儲備液，精密配制成對照品溶液，按步驟(2.2.1)中的色譜條件測定，每個濃度重復3次，以平均值計算，記錄色譜峰面積，以對照品的進樣濃度(μg/ml)為橫坐標，色譜峰面積值為縱坐標作圖，并計算標準曲線的回歸方程。2.3.5繳獲樣品中四氫大麻酚含量的測定按步驟(2.2.1)中的色譜方法分析測定樣品溶液，重復測定3次，記錄峰面積，計算其平均值，按峰面積外標法計算樣品中的四氫大麻酚含量大于10wt％。2.4高效液相色譜制備條件的選擇將分析液相轉化到制備液相時，分離度會下降，為了使要分離的四氫大麻酚能與其他雜質組分達到較好的分離，對色譜條件進行了考察(選定的色譜條件：色譜柱為shim-packvp-ods制備柱(250mm×20mmi.d.，5μm)；流動相為甲醇(b)-水(a)體系，等度洗脫條件(b)：83％；紫外檢測波長210nm；流速10ml/min；上樣量900μl；柱溫為室溫。自動餾分收集器收集thc組分)，最終的制備液相譜圖如圖3所示。收集thc組分(thc：四氫大麻酚)，經(jīng)hplc分析，峰面積歸一化法測定百分含量，thc含量為99.72wt％。2.5批處理程序由于經(jīng)過試驗考察，在實驗所采用的制備液相色譜條件下，65min內四氫大麻酚組分流出色譜柱，但仍有大量的雜質成分在色譜中保留。又由于制備分離的流動相體系是由甲醇和水組成，當水與甲醇混合時，將出現(xiàn)放熱現(xiàn)象，混合溶劑體積減小，同時有大量氣泡釋放。因此，試驗采用進泵前將甲醇和水(二者體積比為83:17)按比例混合，充分混勻脫氣后使用，制備方法運行65分鐘后以100％甲醇沖洗色譜柱，使殘留在柱中的雜質成分迅速被洗脫。建立的批處理程序為以下三個方法按順序多次循環(huán)，即首先甲醇沖洗色譜柱，之后流動相平衡色譜柱后運行制備方法。2.6四氫大麻酚組分的進一步純化制備液相收集到得餾分，四氫大麻酚是溶解在甲醇和水的混合溶劑中，考慮到四氫大麻酚對光和熱的不穩(wěn)定性，實驗中采用離心濃縮儀，真空低溫冷阱捕集的方法脫去其中的甲醇成分，采用冷凍干燥技術獲得黃色油狀的四氫大麻酚液體，再以真空干燥箱進一步脫去水分和殘留溶劑。四氫大麻酚餾分的液相色譜圖如圖4所示。利用案件鑒定剩余的大麻樣品制備四氫大麻酚標準物質，制備工藝流程如圖5所示。2.7四氫大麻酚標準物質的結構確證2.7.1核磁共振分析利用500m核磁(bruker)對四氫大麻酚進行了結構確證。樣品溶于氘代甲醇。結果如圖6、圖7所示。位置化學位移13c化學位移1h氫譜裂分1143.3732108.4316.08d3155.8104110.4385157.2196109.7626.16d735.2173.16m8126.1656.43m9133.5141032.0311.94；1.38m；m1127.9902.15；1.57m；m1247.4742.14dt1377.8901423.5811.37s1523.5211.05s1626.2891.65s1736.5942.40t1832.6431.56m1932.2661.33m2019.0431.31m2114.3660.90t2.7.2液相色譜-串聯(lián)質譜聯(lián)用分析在agilentlc-ms/ms6410儀上測定了四氫大麻酚的質譜。在esi正離子模式下，破碎電壓80v，碰撞能8ev，樣品的質譜圖如圖8所示。從質譜圖中可以得到下列信息：分子離子峰[m+h]+的m/z315.2295，與四氫大麻酚的相對分子質量314g/mol相差1，因而檢測樣品的分子量與四氫大麻酚的相符。顯然，本發(fā)明的上述實施例僅僅是為清楚地說明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對本發(fā)明的實施方式的限定，對于所屬領域的普通技術人員來說，在上述說明的基礎上還可以做出其它不同形式的變化或變動，這里無法對所有的實施方式予以窮舉，凡是屬于本發(fā)明的技術方案所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明的保護范圍之列。當前第1頁12