本發(fā)明屬于生物檢測領(lǐng)域，涉及一種用于檢測白血病的試劑盒。血管生成素樣蛋白3(angio-poietin-likeprotein3,angptl3)是一種分泌性蛋白因子,具有促進(jìn)腫瘤新生血管形成的作用。conklin發(fā)現(xiàn)并克隆angptl3基因，在人和小鼠中分別定位于1號和4號染色體，包括7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子。其表達(dá)產(chǎn)物angptl3是分子量約為70kda的分泌蛋白，人angptl3特異性的表達(dá)于肝臟，在人腎臟也有少量表達(dá)。angptl3是一種分泌性蛋白因子即人angptl3是由ip31編碼的460個(gè)氨基酸組成的多肽,其蛋白結(jié)構(gòu)由分泌信號膚、n-端螺旋形卷曲結(jié)構(gòu)域和c-端fbn樣區(qū)組成.最先發(fā)現(xiàn)在發(fā)育的肝臟中特異的表達(dá),成人肝臟中也有少量持續(xù)表達(dá).和促血管生成素家族不同,angptl3的fbn區(qū)和他們只有37％-39％的同源區(qū),故不能和tic2受體結(jié)合,但其fbn樣區(qū)可以和整合素ανβ3結(jié)合.camenisch等研究發(fā)現(xiàn)angptl3通過和內(nèi)皮細(xì)胞表面整合素ανβ3結(jié)合,導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞黏附、遷移,刺激整合素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑包括akt,mapk,fak磷酸化.已經(jīng)發(fā)現(xiàn)整合素ανβ3不僅可以影響腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移,也和腫瘤血管的生成相關(guān),國外已有通過抑制其表達(dá)來治療腫瘤的臨床實(shí)驗(yàn)研究.此外ανβ3還和肝星形細(xì)胞的增殖和凋亡相關(guān),因此也可能影響肝纖維化過程.動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)ngptl3和vegf具有相似的促進(jìn)鼠角膜血管生長活性.可能和vegf一樣,angptl3同樣具有促進(jìn)腫瘤新生血管形成,從而誘發(fā)侵襲轉(zhuǎn)移作用.其中angptl3和腫瘤新生血管形成的關(guān)系尚未見報(bào)道.宋其同等還發(fā)現(xiàn),angptl3mrna表達(dá)和腫瘤新生血管生成,癌栓的形成和腫瘤分級相關(guān),而和腫瘤大小,包膜的完整性無明顯相關(guān),因此認(rèn)為angptl3在hcc的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用,可以促進(jìn)腫瘤血管形成以及hcc的侵襲和轉(zhuǎn)移；可以通過angptl3的表達(dá)強(qiáng)度判斷hcc的預(yù)后,設(shè)想通過調(diào)控ang-ptl3的表達(dá)以控制血糖,并抑制腫瘤血管生成。目前的研究表明，angptl3在人肝癌組織、癌旁肝組織中均表達(dá),但在肝癌組織中表達(dá)明顯高于癌旁組織.同時(shí)發(fā)現(xiàn)腫瘤血管密度較高的腫瘤組織,其angptl3表達(dá)也較高.研究表明angptl3的表達(dá)與腫瘤血管生成呈正相關(guān),表明其可能在促進(jìn)hcc的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中起著重要作用。同時(shí)angptl3本身作為活性蛋白質(zhì)也參與脂質(zhì)代謝及血管生成過程，通過激活不同靶蛋白協(xié)同其他活性物質(zhì)完成其生理功能。進(jìn)一步了解angptl3可能的調(diào)控因素、生物學(xué)效應(yīng)及作用通路，對于尋找與其相關(guān)疾病新的治療途徑有積極意義。急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia，aml)是一種異質(zhì)性髓細(xì)胞腫瘤，也稱急性非淋巴細(xì)胞性白血病，常進(jìn)展迅速，其特點(diǎn)是由造血干細(xì)胞惡變而形成的原始細(xì)胞克隆取代了正常骨髓造血。由于白血病細(xì)胞代替了正常血細(xì)胞，它們不具備正常血細(xì)胞的功能，由此導(dǎo)致貧血，血小板和粒細(xì)胞減少而引發(fā)一系列并發(fā)癥。若不經(jīng)過治療，存活期一般不超過半年。有的病例從診斷到死亡，甚至不過一周，死亡的主要原因是出血和感染。檢測急性髓系白血病目前主要通過測血液組分來實(shí)現(xiàn)，但是目前對于angptl3與白血病的關(guān)系沒有相關(guān)報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：根據(jù)第一方面，本發(fā)明提供一種檢測急性髓系白血病該方法包括通過檢測angptl3在血液中的表達(dá)水平，來鑒定時(shí)候患有急性髓系白血病。本發(fā)明的另外一方面，提供一種檢測急性髓系白血病的試劑盒，該試劑盒中包含有特異性結(jié)合angptl3的單克隆抗體，以及elasa檢測相關(guān)的試劑以及酶標(biāo)板。所述的試劑盒中還包括：固相載體(如多孔板)；較佳地，單克隆抗體包被于所述的固相載體；較佳的，所述的單克隆抗體還連接有標(biāo)記物。在另一優(yōu)選例中，所述的標(biāo)記物選自：辣根過氧化物酶、堿性磷酸酯酶、葡萄糖氧化酶、3-d-半乳糖苷酶、脲酶、過氧化氫酶、熒光素或葡萄糖淀粉酶。在另一優(yōu)選例中，所述的試劑盒中還包括：與標(biāo)記物相對應(yīng)的底物；顯色劑；]洗滌液；和/或終止液。在本發(fā)明的另一方面，提供所述的試劑盒的用途，用于特異性檢測急性髓系白血病。在另外一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種angptl3的單克隆抗體，其重鏈可變區(qū)序列如seqidno：1所示，其輕鏈可變區(qū)如seqidno：2所示。在另外一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種angptl3的單克隆抗體，其重鏈可變區(qū)序列如seqidno：3所示，其輕鏈可變區(qū)如seqidno：2所示。在另外一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種angptl3的單克隆抗體，其重鏈可變區(qū)序列如seqidno：4所示，其輕鏈可變區(qū)如seqidno：2所示。在另外一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種angptl3的單克隆抗體，其重鏈可變區(qū)序列如seqidno：5所示，其輕鏈可變區(qū)如seqidno：2所示。在另外一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種angptl3的單克隆抗體，其重鏈可變區(qū)序列如seqidno：6所示，其輕鏈可變區(qū)如seqidno：2所示。在另外一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種angptl3的單克隆抗體，其重鏈可變區(qū)序列如seqidno：7所示，其輕鏈可變區(qū)如seqidno：2所示。在另外一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種angptl3的單克隆抗體，其重鏈可變區(qū)序列如seqidno：8所示，其輕鏈可變區(qū)如seqidno：2所示。在另外一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種angptl3的單克隆抗體，其重鏈可變區(qū)序列如seqidno：9所示，其輕鏈可變區(qū)如seqidno：2所示。在另外一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種angptl3的單克隆抗體，其重鏈可變區(qū)序列如seqidno：10所示，其輕鏈可變區(qū)如seqidno：2所示。在另外一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種angptl3的單克隆抗體，其重鏈可變區(qū)序列如seqidno：11所示，其輕鏈可變區(qū)如seqidno：2所示。在另外一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種angptl3的單克隆抗體，其重鏈可變區(qū)序列如seqidno：12所示，其輕鏈可變區(qū)如seqidno：2所示。本發(fā)明高的另外一個(gè)方面，其中所述單克隆抗體是抗體片段。優(yōu)選的，其中所述抗體片段選自scfv片段、fab片段、f(ab’)2片段和fab’片段。發(fā)明的有益效果本發(fā)明通過大量的實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)了angptl3與白血病表達(dá)密切相關(guān)，angptl3可以作為檢測靶標(biāo)用于白血病的快速檢測中的用途。另外，發(fā)明人通過提供了改進(jìn)的angptl3單克隆抗體，從而用于構(gòu)建檢測angptl3的表達(dá)量的試劑盒從而為快速檢測白血病打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，并且所述試劑盒成本低廉，制備簡單，不需要大型儀器，即可快速實(shí)現(xiàn)目的蛋白的定量，從而實(shí)現(xiàn)物美價(jià)廉的白血病的檢測。具體實(shí)施方式發(fā)明人在前期通過蛋白質(zhì)組學(xué)分析大數(shù)據(jù)比對，發(fā)現(xiàn)了angptl3在白血病患者和正常人群中表達(dá)有顯著差異，因此，初步判定angptl3可以作為檢測白血病的初步靶標(biāo)。實(shí)施例1白血病患者和正常人群血液中angptl3表達(dá)量的區(qū)分取急性髓系白血病患者和正常人群的血液2ml，按總rna抽提試劑盒說明操作提取細(xì)胞總rna，用uv法定量分析rna得率和純度，瓊脂糖凝膠電泳分析其完整性。經(jīng)檢測，rna提取成功。cdna合成(10μl反應(yīng)體系)：取mgcl22μl，10×rt緩沖液1μl，無核酸酶蒸餾水3.75μl，dntp混合液1μl，rna酶抑制劑0.25μl，amv逆轉(zhuǎn)錄酶0.5μl，隨機(jī)引物0.5μl，總rna1μl.。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件：30℃10min，42℃30min，99℃5min，5℃5min，所得產(chǎn)物用于pcr擴(kuò)增.pcr反應(yīng)：采用primerpremier5.0軟件設(shè)計(jì)angptl3引物和β-actin引物。angptl3上游引物序列：5′tccagaacacccagaagtaac-3′，下游引物序列:5′-ccagcctcctgaataaccct-3′；β-actin上游引物序列:5′-tcctccctggagaagagcta-3′，下游引物序列：5′-tcaggaggagcaatgatcttg3′.angptl3和β-actin反應(yīng)同管進(jìn)行，終體積50μl。pcr反應(yīng)條件：94℃2min，1個(gè)循環(huán)；94℃30s，55℃30s，72℃1min，共35個(gè)循環(huán).取8μl反應(yīng)液進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)采集圖片，quantityone軟件分析，將angptl3與β-actin面積灰度值的比值作為angptl3的mrna表達(dá)量參數(shù)。結(jié)果如表1所示：angptl3的mrna表達(dá)量倍數(shù)關(guān)系患者2.57正常人1從表1可以看出，在患者中angptl3高表達(dá)，可以作為特異性的檢測靶標(biāo)。實(shí)施例2改進(jìn)的單克隆抗體的制備首先按照本領(lǐng)域常規(guī)的試驗(yàn)方法制備重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列分別為seqidno：1和2所述的單克隆抗體angptl3-1。另外通過本領(lǐng)域常規(guī)的重疊pcr技術(shù)，分別在重鏈可變區(qū)seqidno：1的區(qū)域中進(jìn)行突變?nèi)〈?，通過300多個(gè)取代以及檢測，共發(fā)現(xiàn)了12個(gè)取代形式可以導(dǎo)致單克隆抗體的效果顯著提升，其余280多種均沒有提高或者效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)差于原始抗體，在此不一一列舉。按照本領(lǐng)域常規(guī)的抗體活性檢測方式，分別檢測各個(gè)單克隆抗體的活性，結(jié)果如表2所示：從表2可以看出，經(jīng)過改造后的單克隆抗體具有較好的親和性，比原始抗體具有性能上的改進(jìn)優(yōu)勢。另外檢測抗體結(jié)合能力(elisa法)：以包被緩沖液(50mmna2co3,nahco3ph9.6)稀釋angptl3抗原蛋白至2μg/m1,100μl/well,4℃過夜。甩掉板中液體，pbst(ph7.4,0.05％tween-20,v/v)洗板后，3％bsa-pbs封閉1h。將抗體分別從2000ng/ml開始，進(jìn)行2倍梯度稀釋，共11個(gè)濃度，稀釋液(1％bsa-pbs)作對照，37℃孵育2h。加入羊抗人igg-hrp(goatanti-humanigg-hrpconjugated)，孵育1h。加可溶性單組分tmb底物顯色液，室溫避光顯色5-10min。2nh2so450μl/well，終止顯色反應(yīng)。置mdspectramaxplus384酶標(biāo)儀上讀od450nm-650nm值，應(yīng)用軟件sotfmaxprov5.4進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和作圖分析，結(jié)果如下表二所示，抗體的結(jié)合抗原ec50常數(shù)。實(shí)施例3試劑盒檢測取30例白血病患者血液，10例正常人群的血液各2ml，離心取血清，按照實(shí)施例2中(elisa法)用血清代替抗原蛋白進(jìn)行相應(yīng)檢測，血清的加入量為20微升；通過elasa檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在30例白血病患者中均有較強(qiáng)顯色，而10例正常人群中顯色幾乎沒有，通過這次檢測，可以發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的試劑盒能夠較好的實(shí)現(xiàn)白血病患者的區(qū)分。實(shí)施例4白細(xì)胞抑制試驗(yàn)將人人急性髓系白血病細(xì)胞株kgla細(xì)胞接種于rpmi-1640培養(yǎng)液中，37'c、5％(1)2飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)傳代，接種于96孔培養(yǎng)板，加入溶解于乙醇生理鹽水混合液的單克隆抗體(濃度為30ug.ml-1、50ug.ml-1、100ug.ml-1)48h后mtt法測定生長抑制率。試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明的單克隆抗體對白血病細(xì)胞有明顯的抑制作用，且生長抑制作用與抗體濃度呈正相關(guān)，即隨著抗體濃度升高，其對白血病細(xì)胞的生長抑制作用越明顯。盡管本發(fā)明的具體實(shí)施方式已經(jīng)得到詳細(xì)的描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解。根據(jù)已經(jīng)公開的所有教導(dǎo)，可以對那些細(xì)節(jié)進(jìn)行各種修改和替換，這些改變均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的全部范圍由所附權(quán)利要求及其任何等同物給出。序列表〈110〉蘇州立豪生物科技有限公司〈120〉一種用于檢測白血病的試劑盒〈210〉1<212>prt<213>人工序列<400>重鏈可變區(qū)gluvalglnleuglnglnserglyprogluleuvallysproglyala151015servallysmetsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr202530valmethistrpvallysglnlysproglyglnglyleuglutrpile354045glytyrpheasnprotyrasnaspglythrlystyrasnglulysphe505560lysglylysalathrleuthrserasplysserserserthralatyr65707580metgluleuserserleuthrsergluaspseralavaltyrtyrcys859095alaarggluglyasptyrtyrglytyrpheasptyrtrpglyglngly100105110thrthrleuthrvalserserala115120<210>2<212>prt<213>人工序列<400>輕鏈可變區(qū)aspileglnmetthrglnthrthrserserleuseralaserleugly151015aspargvalthrilesercysargalaserglnaspileserasnphe202530leuasntrptyrglnglnlysproaspglythrvallysleuleuile354045tyrtyrthrserargleuhisserglyvalproserargphesergly505560serglyserglythrasptyrserleuthrileserasnleuglugln65707580gluaspilealathrtyrphecysglnglnglyasnthrleupropro859095thrpheglyglyglythrlysleugluilelysarg100105〈210〉3<212>prt<213>人工序列<400>重鏈可變區(qū)gluvalglnleuglnglnserglyprogluleuvallysproglyala151015servallysmetsercysseralaserglytyrthrphethrsertyr202530valmethistrpvallysglnlysproglyglnglyleuglutrpile354045glytyrpheasnprotyrasnaspglythrlystyrasnglulysphe505560lysglylysalathrleuthrserasplysserserserthralatyr65707580metgluleuserserleuthrsergluaspseralavaltyrtyrcys859095alaarggluglyasptyrtyrglytyrpheasptyrtrpglyglngly100105110thrthrleuthrvalserserala115120〈210〉4<212>prt<213>人工序列<400>重鏈可變區(qū)gluvalglnleuglnglnserglyprogluleuvallysproglyala151015servallysmetsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr202530valmethistrpvallysglnlysproglyglnglyleuglutrpile354045glytyrpheasnprotyrasnaspglyprolystyrasnglulysphe505560lysglylysalathrleuthrserasplysserserserthralatyr65707580metgluleuserserleuthrsergluaspseralavaltyrtyrcys859095alaarggluglyasptyrtyrglytyrpheasptyrtrpglyglngly100105110thrthrleuthrvalserserala115120〈210〉5<212>prt<213>人工序列<400>重鏈可變區(qū)gluvalglnleuglnglnserglyprogluleuvallysproglyala151015servallysmetsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr202530valmethistrpvallysglnlysproglyglnglyleulystrpile354045glytyrpheasnprotyrasnaspglythrlystyrasnglulysphe505560lysglylysalathrleuthrserasplysserserserthralatyr65707580metgluleuserserleuthrsergluaspseralavaltyrtyrcys859095alaarggluglyasptyrtyrglytyrpheasptyrtrpglyglngly100105110thrthrleuthrvalserserala115120〈210〉6<212>prt<213>人工序列<400>重鏈可變區(qū)gluvalglnleuglnglnserglyprogluleuvallysproglyala151015servallysmetsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr202530valmethistrpvallysglnlysproglyglnglyleuglutrpile354045glytyrglnasnprotyrasnaspglythrlystyrasnglulysphe505560lysglylysalathrleuthrserasplysserserserthralatyr65707580metgluleuserserleuthrsergluaspseralavaltyrtyrcys859095alaarggluglyasptyrtyrglytyrpheasptyrtrpglyglngly100105110thrthrleuthrvalserserala115120〈210〉7<212>prt<213>人工序列<400>重鏈可變區(qū)gluvalglnleuglnglnserglyprogluleuvallysproglyala151015servallysmetsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr202530valmethistrpvallysglnlysproglyglnglyleuglutrpile354045glytyrpheasnprotyrasnaspglythrlystyrasnglulysphe505560lysglylysalathrleuthrserasplysserserserthrsertyr65707580metgluleuserserleuthrsergluaspseralavaltyrtyrcys859095alaarggluglyasptyrtyrglytyrpheasptyrtrpglyglngly100105110thrthrleuthrvalserserala115120〈210〉8<212>prt<213>人工序列<400>重鏈可變區(qū)gluvalglnleuglnglnserglyprogluleuvallysproglyala151015servallysmetsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr202530valmethistrpvallysglnlysproglyglnglyleuglutrpile354045glytyrpheasnprotyrasnaspglythrlystyrasnglulysgly505560lysglylysalathrleuthrserasplysserserserthralatyr65707580metgluleuserserleuthrsergluaspseralavaltyrtyrcys859095alaarggluglyasptyrtyrglytyrpheasptyrtrpglyglngly100105110thrthrleuthrvalserserala115120〈210〉9<212>prt<213>人工序列<400>重鏈可變區(qū)gluval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