本發(fā)明涉及食品質(zhì)量安全檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)鮮切蓮藕產(chǎn)品腐敗的便捷方法。

技術(shù)背景

蓮藕為睡蓮科草本植物蓮的根莖，在我國有3000多年的種植歷史，全國栽培面積估計(jì)達(dá)50～70萬公頃，產(chǎn)量近1000萬噸，居世界前茅。蓮藕口感脆嫩味微甜，營養(yǎng)豐富，同時(shí)又具有消食止瀉，開胃清熱，是優(yōu)良的水生蔬菜和副食佳品，同時(shí)又具有滋補(bǔ)養(yǎng)性等藥用價(jià)值，深受廣大消費(fèi)者喜愛。目前，國內(nèi)外市場(chǎng)對(duì)蓮藕制品需求很大，尤其是清潔、衛(wèi)生、新鮮和方便的鮮切蓮藕制品最為暢銷。然而，蓮藕鮮切過程中由于去皮、切分等工序，使其細(xì)胞受損，汁液外滲（汁液中營養(yǎng)成分含量較高，有利于微生物的生長(zhǎng)），加之加工機(jī)械、空氣及加工用水中的各種微生物污染，導(dǎo)致鮮切蓮藕產(chǎn)品在貯藏過程中極易受微生物影響而腐爛變質(zhì)，嚴(yán)重威脅產(chǎn)品的質(zhì)量安全。因此，研究鮮切蓮藕產(chǎn)品的腐敗檢測(cè)技術(shù)具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

然而，鮮切蔬菜腐敗是一個(gè)非常復(fù)雜的過程，國內(nèi)還沒有統(tǒng)一的界定標(biāo)準(zhǔn)和評(píng)價(jià)方法，各級(jí)食品藥品監(jiān)督管理部門均未將腐敗列為食品質(zhì)量安全的監(jiān)管項(xiàng)目，而僅是從傳統(tǒng)的微生物菌落總數(shù)、大腸菌群數(shù)和致病菌是否檢出等衛(wèi)生指標(biāo)判斷其質(zhì)量品質(zhì)。目前，現(xiàn)行的食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中微生物菌落總數(shù)、食品大腸菌群最近似數(shù)等傳統(tǒng)的檢測(cè)方法操作步驟繁瑣，檢測(cè)周期較長(zhǎng)，結(jié)果判定也受現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的局限。因此，研究建立一種相對(duì)簡(jiǎn)單地檢測(cè)鮮切蓮藕腐敗的方法，明確鮮切蓮藕的生物安全問題，對(duì)鮮切蓮藕產(chǎn)業(yè)的發(fā)展、人們生活質(zhì)量的提高有重要的意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

在當(dāng)今快節(jié)奏社會(huì)，方便衛(wèi)生的鮮切蔬菜產(chǎn)品需求量日益增加，但鮮切蔬菜極易腐爛變質(zhì)，嚴(yán)重影響其銷售和質(zhì)量安全。為更好地評(píng)估鮮切蓮藕產(chǎn)品的腐敗變質(zhì)問題，本發(fā)明提出了一種檢測(cè)鮮切蓮藕產(chǎn)品腐敗的便捷方法，其相對(duì)與傳統(tǒng)方法操作簡(jiǎn)單，方便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確。

本發(fā)明方法的主要步驟是：鮮切蓮藕產(chǎn)品隨機(jī)抽樣，剪碎后以無菌生理鹽水制成樣品懸液，接入金氏b培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)一段時(shí)間后于紫外燈照射下檢查是否產(chǎn)生熒光，有明顯黃綠色熒光的即已腐敗變質(zhì)。

本發(fā)明方法具體包括以下步驟：

（1）樣品采集：隨機(jī)取鮮切蓮藕樣品；

（2）樣品懸液制備：將樣品剪碎成小粒，將小粒加入無菌生理鹽水中，充分搖勻即得樣品懸液，所述小粒與無菌生理鹽水的質(zhì)量體積比為1:8至1:10，所述質(zhì)量體積比中質(zhì)量單位為g，體積單位為ml；

（3）接種培養(yǎng)：取樣品懸液，用體積8—12倍于樣品懸液的無菌生理鹽水稀釋后，移取4—6μl稀釋后的樣品懸液接種至kb培養(yǎng)基斜面，于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2—3d，得培養(yǎng)好的斜面；同時(shí)做3—5個(gè)平行實(shí)驗(yàn)和一個(gè)陰性對(duì)照；

（4）熒光檢測(cè)：將培養(yǎng)好的斜面從培養(yǎng)箱取出，在紫外燈照射下檢查是否產(chǎn)生熒光，有明顯熒光出現(xiàn)則表明樣品腐敗。

優(yōu)選地，步驟（2）中，所述小粒與無菌生理鹽水的質(zhì)量體積比為1:9。步驟（2）中，所述小粒的尺寸為5mm×5mm。步驟（3）所述陰性對(duì)照是在kb培養(yǎng)基斜面接種大腸桿菌懸液。步驟（3）所述kb培養(yǎng)基為金氏b培養(yǎng)基，金氏b培養(yǎng)基配方為：水解蛋白胨20.0g/l，磷酸氫二鉀1.5g/l，硫酸鎂1.5g/l，瓊脂15.0g/l，ph為7.0—7.4。

下面對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明：

本發(fā)明隨機(jī)抽取鮮切蓮藕樣品10~20份，裝入潔凈保鮮袋。然后將樣品以無菌剪刀剪碎成大小約5mm×5mm的小粒，稱取25g加入225ml無菌生理鹽水中，充分搖勻即為樣品懸液。取1ml樣品懸液按體積比用無菌生理鹽水稀釋8~12倍，移取4~6μl接種至kb培養(yǎng)基斜面，于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48~72h；同時(shí)做3~5個(gè)平行實(shí)驗(yàn)和一個(gè)陰性對(duì)照【陰性對(duì)照為kb培養(yǎng)基斜面按相同方法接種大腸桿菌（escherichiacoli，atcc25922）懸液】。所述的kb培養(yǎng)基為金氏b培養(yǎng)基（king’sbmedium），其配方為：水解蛋白胨20.0g/l，磷酸氫二鉀1.5g/l，硫酸鎂1.5g/l，瓊脂15.0g/l；其用法為稱取適量kb培養(yǎng)基，按質(zhì)量體積比（m/ml）加入25倍體積蒸餾水或去離子水和1/4體積的甘油，攪拌加熱煮沸至完全溶解，調(diào)節(jié)ph為7.0~7.4,分裝包扎后于121℃高壓滅菌15min，擺成斜面?zhèn)溆?。斜面培養(yǎng)完成后，取出置于紫外燈暗室或熒光成像系統(tǒng)中檢查是否有藍(lán)色熒光出現(xiàn)，有明顯藍(lán)色熒光出現(xiàn)則表明樣品腐敗，以同期培養(yǎng)的大腸桿菌（escherichiacoli，atcc25922）斜面作為陰性對(duì)照。

本發(fā)明根據(jù)鮮切蓮藕冷藏過程中特異腐敗微生物產(chǎn)生自發(fā)熒光的特征，通過樣品預(yù)處理方法、樣品懸液稀釋度比例及接種量等條件的優(yōu)化，準(zhǔn)確的將樣品開始觀察到明顯熒光的時(shí)間點(diǎn)與其衛(wèi)生指標(biāo)超標(biāo)的腐敗時(shí)間點(diǎn)對(duì)應(yīng)，建立了一種基于腐敗指示菌自發(fā)熒光檢測(cè)來判斷鮮切蓮藕產(chǎn)品是否腐敗變質(zhì)的方法，操作簡(jiǎn)單便捷，結(jié)果準(zhǔn)確率可達(dá)95%以上。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

（1）在特定條件下，以檢測(cè)到樣品腐敗指示菌的固有熒光表征樣品腐敗，準(zhǔn)確率95%以上。

（2）腐敗指示菌產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度與樣品微生物菌落總數(shù)具有高度一致性，以熒光顯色技術(shù)替代傳統(tǒng)食品衛(wèi)生指標(biāo)測(cè)定，操作方便快捷。

具體實(shí)施方式：

實(shí)施例1

隨機(jī)抽取鮮切蓮藕樣品10份，裝入潔凈保鮮袋。上述樣品以無菌剪刀剪碎成大小約5mm×5mm的小粒，稱取25g加入225ml無菌生理鹽水中，充分搖勻制得樣品表面菌懸液。取1ml上述懸液加入預(yù)先準(zhǔn)備的9ml無菌生理鹽水中，重復(fù)振蕩均勻，以微量移液器移取5.0μl接種至金氏b培養(yǎng)基斜面，同時(shí)做5個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，并以接種大腸桿菌（escherichiacoli，atcc25922）的金氏b培養(yǎng)基斜面為陰性對(duì)照，于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；72h后從培養(yǎng)箱取出斜面，置于紫外燈暗室觀察是否產(chǎn)生熒光，有明顯熒光出現(xiàn)表明樣品腐敗。該方法腐敗樣品檢出率可達(dá)95%以上。

其中金氏b培養(yǎng)基（king’sbmedium）配方為：水解蛋白胨20.0g/l，磷酸氫二鉀1.5g/l，硫酸鎂1.5g/l，瓊脂15.0g/l；其用法為稱取適量kb培養(yǎng)基，按質(zhì)量體積比（m/ml）加入25倍體積蒸餾水或去離子水和1/4體積的甘油，攪拌加熱煮沸至完全溶解，調(diào)節(jié)ph為7.0~7.4,分裝包扎后于121℃高壓滅菌15min，擺成斜面?zhèn)溆谩?/p>

實(shí)施例2

隨機(jī)抽取鮮切蓮藕樣品15份，裝入潔凈保鮮袋。上述樣品以無菌剪刀剪碎成大小約5.0mm×5.0mm的小粒，稱取25.0g加入225.0ml無菌生理鹽水中，充分搖勻制得樣品表面菌懸液。取1.0ml上述懸液加入預(yù)先準(zhǔn)備的11.0ml無菌生理鹽水中，重復(fù)振蕩均勻，以微量移液器移取6.0μl接種至金氏b培養(yǎng)基斜面，同時(shí)做3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，并以接種大腸桿菌（escherichiacoli，atcc25922）的金氏b培養(yǎng)基斜面為陰性對(duì)照，于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；60h后從培養(yǎng)箱取出斜面，置于凝膠成像系統(tǒng)的紫外燈下觀察是否產(chǎn)生熒光，有明顯熒光出現(xiàn)表明樣品腐敗。該方法腐敗樣品檢出率可達(dá)95%以上。

其中金氏b培養(yǎng)基（king’sbmedium）配方為：水解蛋白胨20.0g/l，磷酸氫二鉀1.5g/l，硫酸鎂1.5g/l，瓊脂15.0g/l；其用法為稱取適量kb培養(yǎng)基，按質(zhì)量體積比（m/ml）加入25倍體積蒸餾水或去離子水和1/4體積的甘油，攪拌加熱煮沸至完全溶解，調(diào)節(jié)ph為7.0~7.4,分裝包扎后于121℃高壓滅菌15min，擺成斜面?zhèn)溆谩?/p>