本發(fā)明涉及一種預測血脂異常的方法，具體涉及一種預測乳腺癌內(nèi)分泌治療后血脂異常的方法。
背景技術(shù)：
多數(shù)乳腺癌患者為激素依賴性腫瘤，內(nèi)分泌治療的主要對象就是雌激素受體(er)和/或孕激素受體(pr)陽性的乳腺癌患者，er陽性乳腺癌占全部乳腺癌的60-75％，其中65％pr陽性。內(nèi)分泌治療是er陽性乳腺癌患者術(shù)后重要治療手段，它是一種作用溫和、作用持久的治療方式。其療程往往達5-10年，甚至15年之久，是絕經(jīng)后早期乳腺癌患者的標準治療方案。內(nèi)分泌治療以降低患者體內(nèi)雌激素水平為主要環(huán)節(jié)，涉及的藥物有抗雌激素類、芳香化酶抑制劑、促黃體生成素釋放激素類藥物和孕激素等。
血脂異常是內(nèi)分泌治療的常見不良反應之一，血脂異常還會導致罹患心血管疾病的風險增加。目前，血脂檢測的項目較多，基本檢測項目為總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇。絕經(jīng)后患者體內(nèi)雌激素水平顯著降低，從而導致絕經(jīng)后乳腺癌患者膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平升高，部分表現(xiàn)為高密度脂蛋白的輕度降低。對于血脂異常的乳腺癌患者而言，血脂異常增加乳腺癌婦女的復發(fā)轉(zhuǎn)移風險、心血管疾病(atheroscleroticcardiovasculardisease,ascvd)及代謝綜合征的風險。如果能夠事先預測乳腺癌內(nèi)分泌治療后出現(xiàn)血脂異常的可能性，就可以盡早進行干預治療，減少上述風險的發(fā)生。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種預測乳腺癌內(nèi)分泌治療后血脂異常的方法，該方法通過hla-drb5/hla-drb4/hla-drb3/hla-drb1基因在不同乳腺組織內(nèi)的表達水平可以有效區(qū)分乳腺癌內(nèi)分泌前血脂異常，從而為乳腺癌內(nèi)分泌治療后出現(xiàn)血脂異常的可能性提供了參考依據(jù)。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案具體如下：
一種預測乳腺癌內(nèi)分泌治療后血脂異常的方法，包括以下步驟：
步驟1、樣本組織收集：
取乳腺癌組織及癌旁相對正常組織，一分部進行石蠟切片，另一部分進行冰凍切片；
步驟2、hla-dr免疫組織化學染色：
從每一例樣本中隨機取多張切片，對樣品組織進行hla-drb5/hla-drb4/hla-drb3/hla-drb1基因免疫組織化學染色；
步驟3、結(jié)果判斷與圖像分析：
每個樣本在顯微鏡下隨機選取不重疊的多個高倍視野，進行陽性細胞率分析和染色分數(shù)分析，其中：
陽性細胞率分析為：
陽性腫瘤細胞率在10％以下，評分為0分；
陽性腫瘤細胞率在11％～30％，評分為1分；
陽性腫瘤細胞率在31％～70％，評分為2分；
陽性腫瘤細胞率在71％～100％，評分為3分；
染色分數(shù)分析為：
腫瘤細胞無著色，評分為0分；
腫瘤細胞為淺黃色，評分為1分；
腫瘤細胞為棕黃色，評分為2分；
腫瘤細胞為深棕色，評分為3分；
步驟4、內(nèi)分泌治療后血脂異常可能性判斷：
以染色分數(shù)評分與陽性細胞率評分的乘積作為染色指數(shù)，當染色指數(shù)＜3時，判斷為低表達，乳腺癌內(nèi)分泌治療后出現(xiàn)血脂異常的可能性低于80％；當染色指數(shù)≥3時，判斷為高表達，乳腺癌內(nèi)分泌治療后出現(xiàn)血脂異常的可能性高于或等于80％。
在上述技術(shù)方案中，步驟2具體為：取保存的石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水；用枸櫞酸鹽溶液通過煮沸法進行抗原熱修復后進行sabc法免疫組織化學染色；
取冰凍切片，吹干，放入冷丙酮中固定10min，然后進行sabc法免疫組織化學染色。
在上述技術(shù)方案中，步驟3具體為：用hpias圖像分析儀進行圖像分析，每例樣本檢測3塊標本，每塊標本切30片，隨機取5張切片檢測，每片間隔24μm，每個標本隨機選取不重疊的10個視野，選擇切片空白處進行校正，并調(diào)整灰度，然后對細胞核或細胞質(zhì)內(nèi)的陽性物質(zhì)進行二值化處理和圖像修整，由計算機系統(tǒng)自動計算出陽性表達的面數(shù)密度，并進行陽性細胞率分析和染色分數(shù)分析。
本發(fā)明的有益效果是：
本發(fā)明提供的預測乳腺癌內(nèi)分泌治療后血脂異常的方法，通過hla-drb5/hla-drb4/hla-drb3/hla-drb1表達水平有效區(qū)分乳腺癌內(nèi)分泌前血脂異常，從而為乳腺癌內(nèi)分泌治療后出現(xiàn)血脂異常的判斷提供了新途徑，為乳腺癌內(nèi)分泌治療后出現(xiàn)血脂異常的可能性提供了參考依據(jù)。
具體實施方式
本發(fā)明的發(fā)明思想為：
目前，學界普遍認為存在于乳腺癌微環(huán)境中的免疫細胞可有效促進與抑制腫瘤的生長，可作為較好的預后指標。免疫反應在血脂代謝、動脈粥樣硬化形成及發(fā)展過程中起到十分重要的作用。特別是hla-ii類基因與免疫性疾病的相關(guān)性。研究發(fā)現(xiàn)多種自身免疫性疾病與hla-dr或dq相關(guān)，疾病的易感性有時可能與一種hla等位基因相關(guān)，一般情況下可能是多個hla基因共同作用的結(jié)果。
本發(fā)明的預測乳腺癌內(nèi)分泌治療后血脂異常的方法，在公共數(shù)據(jù)庫geo(www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)中篩選出hla-drb5/hla-drb4/hla-drb3/hla-drb1基因，以其基因表達水平作為血脂異?？赡苄耘袛嗟母鶕?jù)。
血脂相關(guān)指標
根據(jù)《中國成人血脂異常防治指南》，定義血脂異常為：高膽固醇血癥tc>5.18mmol/l)；高甘油h醋血癥(tag>1.70mmol/l)；低水平的高密度脂蛋白血癥
實施例：
本發(fā)明的預測乳腺癌內(nèi)分泌治療后血脂異常的方法具體包括以下步驟：
臨床資料收集
收集普外科手術(shù)切除的人乳腺癌組織及癌旁相對正常組織(離癌組織5cm以上)。乳腺癌組織及癌旁相對正常組織，一部分經(jīng)液氮驟冷，恒冷切片機切片，切片厚6μm，每片間隔24μm，-20℃冰箱保存；一部分經(jīng)4％多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋切片，切片厚6μm，每片間隔24μm。
hla-dr免疫組織化學染色
取保存的石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水；用枸櫞酸鹽溶液通過煮沸法進行抗原熱修復后進行sabc法免疫組織化學染色。
取冰凍切片，吹干，放入冷丙酮中固定10min，然后進行sabc法免疫組織化學染色。
每一例標本中隨機取5張切片進行hla-drb5/hla-drb4/hla-drb3/hla-drb1基因免疫組織化學染色。染色時需要用到：hla-dr抗血清1:200；兔抗鼠igg1:50，abc復合物1:100；dab-h2o2顯色液。
結(jié)果判斷和圖像分析
每個標本在顯微鏡下隨機選取不重疊的10個高倍視野，對hla-dr癌細胞計數(shù)分析，每張切片由兩人雙盲觀測。
具體的說，將所有的冰凍切片和石蠟切片標本進行sabc免疫組織化學染色后，用hpias圖像分析儀進行圖像分析，每例檢測3塊標本，每塊標本切30片，隨機取5張切片檢測，每片間隔24μm，每個標本隨機選取不重疊的10個視野，選擇切片空白處進行校正，并調(diào)整灰度，然后對細胞核或細胞質(zhì)內(nèi)的陽性物質(zhì)進行二值化處理和圖像修整，由計算機系統(tǒng)自動計算出陽性表達的面數(shù)密度(sd)，并進行染色分數(shù)分析和陽性細胞率分析。面數(shù)密度(sd)是指某種待測目標的面積占全部參照面積的比例，如：細胞核面密度＝細胞核面積/整個細胞面積核漿面密度＝細胞核面積/(整個細胞面積-細胞核面積)。
染色分數(shù)分析評定：腫瘤細胞無著色為陰性(0分)，淺黃色為弱陽性(1分)，棕黃色為陽性(2分)，深棕色為強陽性(3分)。
陽性細胞率分析評定：陽性腫瘤細胞率10％以下為0分，11％～30％為1分，31％～70％為2分，71％～100％為3分。
染色指數(shù)是染色分數(shù)評分與陽性細胞率評分的乘積。當染色指數(shù)＜3時，判斷為低表達，為陰性，乳腺癌內(nèi)分泌治療后5年內(nèi)出現(xiàn)血脂異常的可能性低于80％；當染色指數(shù)≥3時，判斷為高表達，為陽性，乳腺癌內(nèi)分泌治療后5年內(nèi)出現(xiàn)血脂異常的可能性高于或等于80％。
根據(jù)中國成人血脂異常防治指南，血脂是否異?？梢酝ㄟ^其ldl-c的水平來判斷。一般認為ldl-c的水平<3.4mmol/l為無心血管疾病危險的血脂正常水平。
本發(fā)明的上述實施例中，“乳腺癌內(nèi)分泌治療后5年內(nèi)出現(xiàn)血脂異常的可能性低于80％是指，經(jīng)過乳腺癌內(nèi)分泌治療后的每100人中，有不到80人在5年內(nèi)出現(xiàn)血脂異常；“乳腺癌內(nèi)分泌治療后5年內(nèi)出現(xiàn)血脂異常的可能性高于或等于80％”的情況與上述內(nèi)容道理相同，這里不再贅述。
顯然，上述實施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對實施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護范圍之中。