本發(fā)明涉及化學(xué)成分定量檢測領(lǐng)域，具體涉及一種化學(xué)提取-熱能分析法檢測那屈肝素鈣中n-no的系統(tǒng)和方法。

背景技術(shù)：

低分子肝素時(shí)近年發(fā)展起來的新一代肝素類抗血栓藥物，其抗血栓作用優(yōu)于肝素，而抗凝血作用低于肝素，且具有皮下注射吸收良好、生物利用度高、體內(nèi)半衰期長、出血傾向小等優(yōu)點(diǎn)，目前已廣泛應(yīng)用于臨床。那屈肝素鈣是低分子肝素的一種，由亞硝酸降解肝素得到，重均相對(duì)分子質(zhì)量3600～5000，臨床用于預(yù)防手術(shù)后血栓栓塞、預(yù)防深靜脈血栓形成、肺栓塞、血液透析時(shí)體外循環(huán)的抗凝劑、末端血管病變等。近年許多研究表明，那屈肝素鈣的臨床適應(yīng)癥越來越廣泛。

那屈肝素鈣的生產(chǎn)過程中使用了亞硝酸，亞硝酸和肝素在一定的條件下生成亞硝胺化合物，含有n-no基團(tuán)。大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已確認(rèn)，亞硝胺是強(qiáng)致癌物，并能通過胎盤和乳汁引發(fā)后代腫瘤。因此，檢測那屈肝素鈣中n-no的含量，即是對(duì)亞硝胺化合物的含量控制，對(duì)保證患者用藥安全具有重要意義。檢測原理：樣品釋放出no2·和no·，通過過濾&冷阱除去裂解副產(chǎn)物，在反應(yīng)室中，no·與o3反應(yīng)，得到電子激發(fā)態(tài)no2，經(jīng)過光電倍增管檢測，在紅外區(qū)域發(fā)射光譜，最后通過積分儀顯示信號(hào)。

目前那屈肝素鈣中n-no基團(tuán)主要是用熱能分析儀進(jìn)行檢測。體系載氣為氬氣，傳統(tǒng)裝置中需要配置氣泡捕捉器和冷阱中用到的試劑，裝填至裝置后進(jìn)行試驗(yàn)，該試劑配置過程復(fù)雜，裝置耗費(fèi)空間較大，冷阱溫度控制麻煩，加熱反應(yīng)體系時(shí)無法振蕩混勻。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明的目的是提供一種化學(xué)提取-熱能分析法檢測那屈肝素鈣中n-no的系統(tǒng)和方法，解決了現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

一種化學(xué)提取-熱能分析法檢測那屈肝素鈣中n-no的檢測系統(tǒng)，包括tea分析儀，所述tea分析儀內(nèi)設(shè)有化學(xué)發(fā)光檢測器，tea分析儀上設(shè)有能夠?yàn)閠ea分析儀提供氧氣的氧氣源入口、與化學(xué)發(fā)光檢測器連通的n-no混合氣體入口和真空泵接口；所述檢測系統(tǒng)還包括一級(jí)冷凝裝置、二級(jí)冷凝裝置、蠕動(dòng)泵、加熱器、反應(yīng)器、氧氣源、真空泵和氮?dú)庠础?/p>

所述一級(jí)冷凝裝置上設(shè)有冷凝介質(zhì)流動(dòng)腔和第一混合氣體流動(dòng)腔，所述冷凝介質(zhì)流動(dòng)腔上設(shè)有第一冷凝介質(zhì)出口和第一冷凝介質(zhì)入口，所述第一混合氣體流動(dòng)腔上設(shè)有第一混合氣體入口和第一混合氣體出口；

所述二級(jí)冷凝裝置內(nèi)設(shè)有冷凝介質(zhì)存放腔和第二混合氣體流動(dòng)腔，所述冷凝介質(zhì)存放腔上設(shè)有第二冷凝介質(zhì)出口和第二冷凝介質(zhì)入口，所述第二混合氣體流動(dòng)腔上設(shè)有相互連通的第二混合氣體入口和第二混合氣體出口，所述第二混合氣體入口與一級(jí)冷凝裝置上的第一混合氣體出口連接以使反應(yīng)器內(nèi)的混合氣體通過一級(jí)冷凝裝置進(jìn)入二級(jí)冷凝裝置內(nèi)，所述第二混合氣體出口通過氣路管與tea上的n-no混合氣體入口連接；所述第二冷凝介質(zhì)入口與所述第一冷凝介質(zhì)出口連接；

所述蠕動(dòng)泵，其與第一冷凝介質(zhì)入口和第二冷凝介質(zhì)出口連接以使二級(jí)冷凝裝置中的冷凝介質(zhì)進(jìn)入一級(jí)冷凝裝置中；

所述反應(yīng)器上設(shè)有氣體出口和能夠加入樣品并通入氮?dú)獾臉悠啡肟?，所述氣體出口與第一混合氣體入口連接以使反應(yīng)器中的混合氣體進(jìn)入一級(jí)冷凝裝置中，所述樣品入口通過氮?dú)夤芘c氮?dú)庠催B接；

所述加熱器上放置有反應(yīng)器；

所述熱能分析儀上的氧氣源入口與氧氣源連接，所述真空泵接口與真空泵連接。

進(jìn)一步地，所述氮?dú)夤苌显O(shè)有氮?dú)夥謮洪y；所述tea分析儀內(nèi)設(shè)有能夠調(diào)節(jié)混合氣體進(jìn)入量的氮?dú)庹{(diào)節(jié)閥、氧氣進(jìn)入量的氧氣調(diào)節(jié)閥。

進(jìn)一步地，所述一級(jí)冷凝裝置為冷凝管；所述二級(jí)冷凝裝置為冷凝器。

進(jìn)一步地，所述氮?dú)夤茇灤┧鰳悠啡肟谏系纳w子從而通往反應(yīng)器；所述反應(yīng)器中設(shè)置有攪拌裝置。

一種化學(xué)提取-熱能分析法檢測那屈肝素鈣中n-no的方法，按照上述的檢測系統(tǒng)將檢測中所用到的設(shè)備進(jìn)行連接，該方法包括以下步驟：

s1：溶液配制：直接采用甲酰胺溶液稀釋配制供試品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

s2：①打開真空泵將tea分析儀抽真空，真空度穩(wěn)定在0.15torr以下以后，打開tea分析儀；②tea分析儀所顯示的真空度在20min內(nèi)均維持在0.13torr以下時(shí)，打開氮?dú)庹{(diào)節(jié)閥和氮?dú)夤苌系牡獨(dú)夥謮洪y，并將氮?dú)夥謮赫{(diào)節(jié)至4～6psi；③轉(zhuǎn)動(dòng)氧氣調(diào)節(jié)閥，使真空度達(dá)到0.50±0.01torr，然后轉(zhuǎn)動(dòng)氮?dú)夥謮洪y和氮?dú)庹{(diào)節(jié)閥，使分壓閥壓力為5psi時(shí)，真空度達(dá)到1.67±0.01torr；④依次打開tea分析儀中的臭氧發(fā)生器和光度計(jì)；

s3：打開二級(jí)冷凝裝置，使冷凝介質(zhì)的溫度維持在0-5℃，再打開蠕動(dòng)泵，使一級(jí)冷凝裝置和二級(jí)冷凝裝置內(nèi)的冷凝介質(zhì)循環(huán)；

s4：從反應(yīng)器的樣品入口加入乙酸乙酯和氫溴酸，使密閉整個(gè)系統(tǒng)，調(diào)節(jié)進(jìn)入反應(yīng)器中的氮?dú)饬魉贋?5±0.5ml/min，調(diào)節(jié)加熱器溫度，使之保持持續(xù)穩(wěn)定沸騰的狀態(tài)；

s5：將標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液分別注入反應(yīng)器中，反應(yīng)生成的no氣體經(jīng)兩次冷卻進(jìn)入化學(xué)發(fā)光檢測器中，記錄色譜圖；并將采集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算，得出結(jié)果。

進(jìn)一步地，進(jìn)入反應(yīng)器中的氮?dú)饬魉贋?5ml/min。

進(jìn)一步地，在步驟s1中，溶液配制的具體方法為：供試品溶液：配制甲酰胺溶液，然后精密稱定供試品，加甲酰胺溶液稀釋制成供試品溶液；

配制標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液：(1)配制標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液：取標(biāo)準(zhǔn)品ndpa，加入無水乙醇溶解，制成ndpa濃度為10μg/ml的溶液，密封避光儲(chǔ)存；(2)配制標(biāo)準(zhǔn)品濃配液：精密量取標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，用無水乙醇稀釋，制成ndpa的濃配液；(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液：精密量取標(biāo)準(zhǔn)品濃配液適量，用甲酰胺溶液稀釋，制成含ndpa濃度為逐漸增高的梯度濃度溶液。

進(jìn)一步地，所述配制標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液的濃度為10μg/ml；標(biāo)準(zhǔn)品濃配液的濃度為1000ng/ml；用甲酰胺溶液稀釋所制成的ndpa梯度濃度溶液分別為：0ng/ml、60ng/ml、120ng/ml、180ng/ml的溶液，其中，0ng/ml為甲酰胺溶液中不加取標(biāo)準(zhǔn)品濃配液。

進(jìn)一步地，甲酰胺溶液的配制濃度為：在1g的氨基磺酸中加入19ml甲酰胺和1ml水，振搖使成均勻溶液。

進(jìn)一步地，步驟s4中，反應(yīng)容器內(nèi)加入磁力攪拌子進(jìn)行攪拌，乙酸乙酯和氫溴酸的加入量分別為15ml和5ml；加熱器溫度的溫度調(diào)節(jié)為60～70℃；標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液每次的進(jìn)樣量均為30～60ul。

本發(fā)明至少具有以下有益效果：

本發(fā)明提供了一種化學(xué)提取-熱能分析法檢測那屈肝素鈣中n-no的系統(tǒng)和方法，該系統(tǒng)設(shè)置巧妙，簡單、明了，能夠更精確的檢測no，可完全適宜那屈肝素鈣中no的檢測。

本發(fā)明的方法比傳統(tǒng)方法的檢出結(jié)果穩(wěn)定性更高、更精確、檢出限更低、檢出速度更快、更簡單，且得到的色譜圖峰型漂亮，圖譜基線平穩(wěn)，使得計(jì)算速度更快更方便，誤差率極低，其計(jì)算結(jié)果與實(shí)際結(jié)果基本一致，具有極其重要的應(yīng)用意義；具體地，本發(fā)明只需50ul的進(jìn)樣量，便可精確檢測出ppb級(jí)濃度的亞硝胺類化合物，其檢出限能達(dá)到0.06ppm以下。而且該方法的試劑配置過程非常簡單，大大簡化了程序，節(jié)省了時(shí)間、成本和人力；本發(fā)明具有極高的靈敏度和對(duì)含氮化合物的高選擇性，是專一性極強(qiáng)的檢測方法。

具體地，①采用氮?dú)饬鞑⒌獨(dú)饬髁烤芸刂颇軌蝻@著提高檢測精度和穩(wěn)定性，且使檢測結(jié)果更清晰、檢出限更低。②通過具體的一級(jí)冷凝裝置和二級(jí)冷凝裝置等具體的設(shè)置使得控制溫度等等更精確，且顯著提高了精確度并降低了檢出限。③在溶液配制中，本發(fā)明去除了傳統(tǒng)中關(guān)鍵步驟“用五氧化二磷真空干燥”，大大節(jié)約了周期、節(jié)省了時(shí)間和成本，且直接溶解于甲酰胺溶液中能夠完全檢測出其中no基團(tuán)的含量。標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液的配制及保存方式方便了多次試驗(yàn)，在儲(chǔ)存期內(nèi)無需單獨(dú)配制，為實(shí)際試驗(yàn)節(jié)約了時(shí)間成本。標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制采用了標(biāo)準(zhǔn)曲線法，標(biāo)準(zhǔn)曲線法能更簡便快速的進(jìn)行樣品定量，結(jié)果計(jì)算更為準(zhǔn)確，比傳統(tǒng)方法的結(jié)果誤差范圍明顯縮小。此外，上述這些方法配合本發(fā)明中的反應(yīng)體系等使得本發(fā)明的效果明顯由于傳統(tǒng)方法，并且更適宜于工業(yè)化應(yīng)用。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例所述的檢測系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2是本發(fā)明實(shí)施例所述的實(shí)施例3(即實(shí)驗(yàn)組)中標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖；

圖3是本發(fā)明實(shí)施例所述的實(shí)施例3(即實(shí)驗(yàn)組)中供試品的色譜圖；

圖4是本發(fā)明實(shí)施例所述的實(shí)施例4中對(duì)比組的標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖；

圖5是本發(fā)明實(shí)施例所述的實(shí)施例4中對(duì)比組的供試品的色譜圖。

圖6是本發(fā)明實(shí)施例所述的改變載氣的色譜圖；

圖7是本發(fā)明實(shí)施例所述的增大氮?dú)鈿饬鞯纳V圖；

圖8是本發(fā)明實(shí)施例所述的減小氮?dú)鈿饬鞯纳V圖；

圖9是本發(fā)明實(shí)施例所述的變?yōu)橹挥幸粋€(gè)冷凝裝置的色譜圖。

1、加熱器，2、反應(yīng)器，3、一級(jí)冷凝裝置，4、二級(jí)冷凝裝置，5、蠕動(dòng)泵，6、tea分析儀，7、氧氣源，8、真空泵，9、氮?dú)庠矗?0、氮?dú)夤埽?1、軟管，12、氣路管，21、氣體出口，22、樣品入口，31、冷凝介質(zhì)流動(dòng)腔，32、第一混合氣體流動(dòng)腔，41、冷凝介質(zhì)存放腔，42、第二混合氣體流動(dòng)腔，61、n-no混合氣體入口，62、真空泵接口，63、氧氣源入口，91、氮?dú)夥謮洪y，311、第一冷凝介質(zhì)出口，312、第一冷凝介質(zhì)入口，321、第一混合氣體出口，322、第一混合氣體入口，411、第二冷凝介質(zhì)入口，412、第二冷凝介質(zhì)出口，421、第二混合氣體入口，422、第二混合氣體出口。

具體實(shí)施方式

下面對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。以下提供的本發(fā)明的實(shí)施例的詳細(xì)描述并非旨在限制要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍，而是僅僅表示本發(fā)明的選定實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通方法人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1

一種化學(xué)提取-熱能分析法檢測那屈肝素鈣中n-no的檢測系統(tǒng)，如圖1所示，包括熱能分析儀(tea分析儀)6，所述tea分析儀6內(nèi)設(shè)有化學(xué)發(fā)光檢測器，tea分析儀6上設(shè)有能夠?yàn)閠ea分析儀6提供氧氣的氧氣源入口、63與化學(xué)發(fā)光檢測器連通的n-no混合氣體入口61和真空泵接口62，n-no混合氣體入口61使標(biāo)準(zhǔn)品或供試品等中的n-no氣體隨著氮?dú)鈴脑摽谶M(jìn)入tea中進(jìn)行色譜圖記錄；所述檢測系統(tǒng)還包括一級(jí)冷凝裝置3、二級(jí)冷凝裝置4、蠕動(dòng)泵5、加熱器1、反應(yīng)器2、氧氣源7、真空泵8和氮?dú)庠?。

所述一級(jí)冷凝裝置3上設(shè)有冷凝介質(zhì)流動(dòng)腔31和第一混合氣體流動(dòng)腔32，所述冷凝介質(zhì)流動(dòng)腔31環(huán)繞設(shè)置于第一混合氣體流動(dòng)腔32外圍，則可對(duì)第一混合氣體流動(dòng)腔32內(nèi)進(jìn)行冷卻；所述冷凝介質(zhì)流動(dòng)腔31上設(shè)有相互連通的第一冷凝介質(zhì)出口311和第一冷凝介質(zhì)入口312，所述第一混合氣體流動(dòng)腔32上設(shè)有相互連通的第一混合氣體入口322和第一混合氣體出口321。

所述二級(jí)冷凝裝置4內(nèi)設(shè)有冷凝介質(zhì)存放腔41和第二混合氣體流動(dòng)腔42，所述冷凝介質(zhì)存放腔41環(huán)繞設(shè)置于第二混合氣體流動(dòng)腔42外圍，則可對(duì)第二混合氣體流動(dòng)腔42內(nèi)進(jìn)行冷卻；所述冷凝介質(zhì)存放腔41上設(shè)有相互連通的第二冷凝介質(zhì)出口412和第二冷凝介質(zhì)入口411，所述第二混合氣體流動(dòng)腔42上設(shè)有相互連通的第二混合氣體入口421和第二混合氣體出口422，所述第二混合氣體入口421通過軟管11與一級(jí)冷凝裝置3上的第一混合氣體出口321連接以使反應(yīng)器2內(nèi)的混合氣體通過一級(jí)冷凝裝置3進(jìn)入二級(jí)冷凝裝置4內(nèi)的第二混合氣體流動(dòng)腔42中，最后再進(jìn)入tea分析儀6內(nèi)進(jìn)行色譜分析等；所述第二混合氣體出口422通過氣路管12與tea分析儀6上的n-no混合氣體入口61連接，則反應(yīng)器2內(nèi)混合有no的氮?dú)膺M(jìn)入化學(xué)發(fā)光檢測器中。所述第二冷凝介質(zhì)入口411與所述第一冷凝介質(zhì)出口311連接，使得從一級(jí)冷凝裝置3回來的冷凝介質(zhì)從第二冷凝介質(zhì)入口411循環(huán)回到二級(jí)冷凝裝置4內(nèi)的冷凝介質(zhì)存放腔41中。

所述蠕動(dòng)泵5，其與第一冷凝介質(zhì)入口312和第二冷凝介質(zhì)出口412連接，從而將二級(jí)冷凝裝置4中的冷凝介質(zhì)泵入一級(jí)冷凝裝置3中。

所述反應(yīng)器2上設(shè)有氣體出口21和能夠加入樣品并通入氮?dú)獾臉悠啡肟?2，所述氣體出口21與第一混合氣體入口連接，以使反應(yīng)器2中的混合氣體進(jìn)入一級(jí)冷凝裝置3的第一混合氣體流動(dòng)腔中；所述樣品入口22通過氮?dú)夤芘c氮?dú)庠?連接，所述氮?dú)夤?0上設(shè)有氮?dú)夥謮洪y91；氮?dú)庠?與反應(yīng)器2的連接方式為：所述氮?dú)夤?0貫穿所述樣品入口上的蓋子從而使氮?dú)夤?0的出氣口伸入反應(yīng)器2中，則氮?dú)饬鞅隳苓M(jìn)入反應(yīng)器2。

所述加熱器1上放置有反應(yīng)器2，該加熱器1能夠?yàn)榉磻?yīng)器2加熱并保持一定溫度。

所述tea分析儀6上的氧氣源入口63與氧氣源7連接，所述真空泵接口62與真空泵8連接。所述tea分析儀6內(nèi)還設(shè)有能夠調(diào)節(jié)從n-no混合氣體入口61所進(jìn)入的混合氣體進(jìn)入量的氮?dú)庹{(diào)節(jié)閥以及調(diào)控從氧氣源7所進(jìn)入的氧氣量的氧氣調(diào)節(jié)閥。

作為進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式，所述一級(jí)冷凝裝置3優(yōu)選為冷凝管；所述二級(jí)冷凝裝置4優(yōu)選為冷凝器。

在本發(fā)明中，tea分析儀可購買獲得，本發(fā)明所用的是ellutia公司所生產(chǎn)、售賣的tea分析儀；冷凝管和冷凝器只需要能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明的功能便可，該冷凝管和冷凝器也可以購買，如冷凝管(廠家：ellutia)，冷凝器(廠家：ellutia)。

實(shí)施例2

一種化學(xué)提取-熱能分析法檢測那屈肝素鈣中n-no的方法，該方法包括以下步驟：

s1：按照實(shí)施例1中所述的檢測系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)將檢測中所用到的設(shè)備進(jìn)行合理放置并連接；

s2：溶液配制：

(1)甲酰胺溶液配制：稱取氨基磺酸1g，加入19ml甲酰胺和1ml水，振搖使成均勻溶液。

(2)供試品溶液配制：精密稱定供試品那屈肝素鈣，加甲酰胺溶液定量稀釋制成每1ml中約含那屈肝素鈣100mg的溶液。

(3)標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液配制：取ndpa(n-亞硝基二丙胺)標(biāo)準(zhǔn)品100mg，加入78.62g無水乙醇溶解配制成初級(jí)液，再取初級(jí)液適量，用無水乙醇稀釋，制成ndpa濃度為10μg/ml的溶液即為標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，密封避光5℃儲(chǔ)存。

(4)標(biāo)準(zhǔn)品濃配液：精密量取標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液適量，用無水乙醇稀釋，制成ndpa濃度為1000ng/ml的溶液。

(5)標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液：精密量取標(biāo)準(zhǔn)品濃配液適量，用甲酰胺溶液稀釋，制成各含ndpa濃度為0ng/ml、60ng/ml、120ng/ml、180ng/ml的溶液，該標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度單位ng/ml即為ppb，其中，0ng/ml為甲酰胺溶液中不加取標(biāo)準(zhǔn)品濃配液。

s2：①打開真空泵將tea分析儀6抽真空，真空度穩(wěn)定在0.13torr以下以后，打開tea分析儀6；②tea分析儀6所顯示的真空度在20min內(nèi)均維持在0.13torr以下時(shí)，打開氮?dú)庹{(diào)節(jié)閥和氮?dú)夤苌系牡獨(dú)夥謮洪y，并將氮?dú)夥謮赫{(diào)節(jié)至5psi，然后關(guān)閉氮?dú)夥謮洪y和氮?dú)庹{(diào)節(jié)閥；分壓閥壓力不下降即可進(jìn)行后續(xù)步驟；③轉(zhuǎn)動(dòng)氧氣調(diào)節(jié)閥，使真空度達(dá)到0.50±0.01torr，然后轉(zhuǎn)動(dòng)氮?dú)夥謮洪y和氮?dú)庹{(diào)節(jié)閥，使分壓閥壓力為5psi時(shí)，真空度達(dá)到1.67±0.01torr；④依次打開tea分析儀中的臭氧發(fā)生器和光度計(jì)；

s3：打開二級(jí)冷凝裝置，使冷凝介質(zhì)的溫度維持在0-5℃，再打開蠕動(dòng)泵，使一級(jí)冷凝裝置和二級(jí)冷凝裝置內(nèi)的冷凝介質(zhì)循環(huán)；

s4：旋開樣品入口的蓋子，向反應(yīng)容器內(nèi)加入磁力攪拌子，從反應(yīng)器的樣品入口加入15ml乙酸乙酯和5ml氫溴酸，旋緊樣品入口蓋子，密閉整個(gè)系統(tǒng)，然后用氣體流量計(jì)測定進(jìn)入反應(yīng)器中的氮?dú)饬魉?，并使氮?dú)饬魈K35±0.5ml/min，氮?dú)饬髁康目刂瓶梢灾苯佑绊懙綄?shí)驗(yàn)精密度，本方法優(yōu)選進(jìn)入反應(yīng)器中的氮?dú)饬魉?5ml/min，調(diào)節(jié)加熱器溫度為60～70℃，并將攪拌子轉(zhuǎn)速調(diào)至適中，使反應(yīng)器內(nèi)的溶液保持持續(xù)穩(wěn)定沸騰的狀態(tài)；

s5：將每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別注入反應(yīng)器中，每個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品平行進(jìn)樣3針，每次每針的進(jìn)樣量50ul，標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣完畢以后，將供試品溶液也注入反應(yīng)器中，供試品溶液平行進(jìn)樣2次，每次50ul。

標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液均與反應(yīng)器中的溶液反應(yīng)并生成no氣體，該no氣體隨著氮?dú)饬鹘?jīng)一級(jí)冷凝裝置和二級(jí)冷凝裝置這兩次冷卻后進(jìn)入化學(xué)發(fā)光檢測器中進(jìn)行檢測，記錄色譜圖；并將采集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算，得出結(jié)果。

實(shí)施例3

一種化學(xué)提取-熱能分析法檢測那屈肝素鈣中n-no的方法，該方法包括以下步驟：

s1：按照實(shí)施例1中所述的檢測系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)將檢測中所用到的設(shè)備進(jìn)行合理放置并連接；

s2：溶液配制：

(1)甲酰胺溶液配制：稱取氨基磺酸1g，加入19ml甲酰胺和1ml水，振搖使成均勻溶液。

(2)供試品溶液配制：精密稱定供試品那屈肝素鈣，加甲酰胺溶液定量稀釋制成每1ml中約含那屈肝素鈣100mg的溶液。預(yù)先制定的供試品溶液中n-no基團(tuán)的實(shí)際含量為0.065ppm；

(3)標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液配制：取ndpa(n-亞硝基二丙胺)標(biāo)準(zhǔn)品100mg，加入78.62g無水乙醇溶解配制成初級(jí)液，再取初級(jí)液適量，用無水乙醇稀釋，制成ndpa濃度為10μg/ml的溶液即為標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，密封避光5℃儲(chǔ)存。

(4)標(biāo)準(zhǔn)品濃配液：精密量取標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液適量，用無水乙醇稀釋，制成ndpa濃度為1000ng/ml的溶液。

(5)標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液：精密量取標(biāo)準(zhǔn)品濃配液適量，用甲酰胺溶液稀釋，制成各含ndpa濃度為0ng/ml、60ng/ml、120ng/ml、180ng/ml的溶液，該標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度單位ng/ml即為ppb，其中，0ng/ml為甲酰胺溶液中不加取標(biāo)準(zhǔn)品濃配液。

s2：①打開真空泵將tea分析儀6抽真空，真空度穩(wěn)定在0.13torr以下以后，打開tea分析儀6；②tea分析儀6所顯示的真空度在20min內(nèi)均維持在0.13torr以下時(shí)，打開氮?dú)庹{(diào)節(jié)閥和氮?dú)夤苌系牡獨(dú)夥謮洪y，并將氮?dú)夥謮赫{(diào)節(jié)至5psi，然后關(guān)閉氮?dú)夥謮洪y和氮?dú)庹{(diào)節(jié)閥；分壓閥壓力不下降即可進(jìn)行后續(xù)步驟；③轉(zhuǎn)動(dòng)氧氣調(diào)節(jié)閥，使真空度達(dá)到0.50torr，然后轉(zhuǎn)動(dòng)氮?dú)夥謮洪y和氮?dú)庹{(diào)節(jié)閥，使分壓閥壓力為5psi時(shí)，真空度達(dá)到1.67；④依次打開tea分析儀中的臭氧發(fā)生器和光度計(jì)；

s3：打開二級(jí)冷凝裝置，使冷凝介質(zhì)的溫度維持在2-3℃，再打開蠕動(dòng)泵，使一級(jí)冷凝裝置和二級(jí)冷凝裝置內(nèi)的冷凝介質(zhì)循環(huán)；

s4：旋開樣品入口的蓋子，向反應(yīng)容器內(nèi)加入磁力攪拌子，從反應(yīng)器的樣品入口加入15ml乙酸乙酯和5ml氫溴酸，旋緊樣品入口蓋子，密閉整個(gè)系統(tǒng)，然后用氣體流量計(jì)測定進(jìn)入反應(yīng)器中的氮?dú)饬魉伲⑹沟獨(dú)饬魈K35ml/min，調(diào)節(jié)加熱器溫度為65℃，并將攪拌子轉(zhuǎn)速調(diào)至適中，使反應(yīng)器內(nèi)的溶液保持持續(xù)穩(wěn)定沸騰的狀態(tài)；

s5：將每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別注入反應(yīng)器中，每個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品平行進(jìn)樣3針，每次每針的進(jìn)樣量50ul，標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣完畢以后，將供試品溶液也注入反應(yīng)器中，供試品溶液平行進(jìn)樣2次，每次50ul。

s6：結(jié)果：所得到的標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖如附圖2所示，樣品色譜圖如附圖3所示。

由圖2所示，標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積和平均值如下表1所示。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為0ng、60ng、120ng、180ng，每個(gè)濃度分別平行進(jìn)樣三針，存在三個(gè)峰面積，而平均值是取三次平均值進(jìn)行計(jì)算。

表1標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積

n-no含量計(jì)算公式為：標(biāo)準(zhǔn)品峰面積和濃度計(jì)算得出線性回歸方程:cr＝kar+b；將樣品峰面積代入以上線性回歸方程中計(jì)算得出樣品溶液中ndpa濃度cs(ng/ml)；再根據(jù)公式cs*44*v/m/130得出供試品中n-no基團(tuán)含量(ppm)，其中m為樣品稱樣量，mg；v為樣品溶液體積，ml。

由表1的結(jié)果可得出線性回歸方程，即為：c＝0.0016a-92.8196；r＝0.99。

由圖3所示的樣品色譜峰可知，其峰面積為:峰1：61956；峰2：79814，平均值為70885，按公式計(jì)算，得到供試品(即樣品)中n-no基團(tuán)含量為0.07ppm。

實(shí)施例4

實(shí)驗(yàn)組：實(shí)施例3中記載的方法以及所得到的結(jié)果；由實(shí)施例3可知，供試品中n-no基團(tuán)的實(shí)際含量為0.065ppm，而實(shí)驗(yàn)組(即實(shí)施例3)方法計(jì)算得到的含量為0.07ppm，與實(shí)際含量相差極小，結(jié)果基本接近實(shí)際結(jié)果。

對(duì)比組：按傳統(tǒng)方法配制標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為單一濃度，配制濃度等與實(shí)驗(yàn)組相同，供試品溶液中n-no基團(tuán)的含量同樣為0.065ppm；測試方法也采用傳統(tǒng)方法。所得的標(biāo)準(zhǔn)品溶液的色譜圖如圖4所示，樣品的色譜圖如圖5所示。計(jì)算所得標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積為：28256，樣品的峰面積為10040，采用實(shí)施例3中的公式計(jì)算得到的樣品中n-no基團(tuán)含量為0.1ppm。由于實(shí)際含量為0.065ppm，而該對(duì)比組得到的含量為0.1ppm，相差0.35ppm，該方法本身的不穩(wěn)定性等導(dǎo)致其與實(shí)際含量相差大，結(jié)果與實(shí)際結(jié)果一致性非常差。

由圖2～3可知，本發(fā)明方法所得到的色譜圖，無論是標(biāo)準(zhǔn)品還是樣品，其峰形標(biāo)準(zhǔn)，每個(gè)峰均無裂變的多個(gè)小峰，圖譜基線平穩(wěn)，峰面積容易確定，計(jì)算非常容易且準(zhǔn)確度高，工作人員只需要幾分鐘便可輕松得出最終結(jié)果，且不同的工作人員所計(jì)算的結(jié)果基本一致，誤差率極小。

由圖4～5可知，傳統(tǒng)方法試驗(yàn)得出的圖譜基線不平穩(wěn)，峰型難看，每個(gè)峰的頂部裂變出多個(gè)小峰，且難以判斷該峰的起始和結(jié)束段，為工作人員造成了計(jì)算的困難，有時(shí)難以分辨峰的數(shù)量，且有時(shí)候一個(gè)樣品需要計(jì)算大半天，且準(zhǔn)確度不高，誤差率較高，不同的工作人員所計(jì)算的結(jié)果相差較大，對(duì)于最終結(jié)果的呈現(xiàn)存在較大的誤差。

上述的基線不平穩(wěn)就是基線噪音比較大，基線噪音會(huì)干擾檢測結(jié)果，如果樣品濃度低的話，便會(huì)和噪音分不出來，而且基線對(duì)峰面積的計(jì)算具有極大的干擾作用。因此，平穩(wěn)的基線對(duì)于精確的結(jié)果以及低的檢測限影響很大。

因此，本發(fā)明的最終結(jié)果遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于傳統(tǒng)方法。

此外，還需要說明的是，對(duì)于實(shí)施例3中的方法，若將載氣變?yōu)闅鍤?、增加或減小氮?dú)獾臍饬?、將兩?jí)冷凝變?yōu)橹挥衅渲腥我庖环N冷凝裝置等等，均對(duì)最終結(jié)果影響較大，色譜圖的效果也有明顯變化，如附圖6～9所示，圖6采用氬氣為載體，圖7和圖8分別為增大氣流和減小氣流，圖9為改為只含有一個(gè)冷凝裝置，由這些圖可知，這些因素對(duì)于譜圖影響均比較大，改變?nèi)魏我粋€(gè)因素可能都會(huì)使譜圖基線不平穩(wěn)、峰進(jìn)行裂變等等，為后期的計(jì)算以及結(jié)果的精確性造成了很多的影響。而本發(fā)明將這些改進(jìn)均集合于本發(fā)明中，這些改進(jìn)在彼此的影響下，使得結(jié)果非常驚喜，譜圖極其漂亮，計(jì)算非常方便，誤差率極低。本發(fā)明人從本行業(yè)研究者基本不會(huì)注意或考量的地方入手，通過多個(gè)地方的改進(jìn)，最終得到了極佳的效果，基線平穩(wěn)，峰面積計(jì)算方便、精確、結(jié)果精度高。

以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，本發(fā)明可以有各種改動(dòng)和變化。凡在本發(fā)明的精神和原理之內(nèi)所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。