本發(fā)明涉及人工牛黃的質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于人工牛黃原料藥質(zhì)量控制的指紋圖譜。

背景技術(shù)：

人工牛黃是由牛膽粉、膽酸、豬去氧膽酸、?；撬?，膽紅素、膽固醇、微量元素等加工制成。是一種天然牛黃的替代物。收載于中國藥典2015年版一部。具有清熱解毒，化痰定驚功效。用于痰熱譫狂，神昏不語，小兒急驚風，咽喉腫痛，口舌生瘡，癰腫疔瘡。

眾所周知，中成藥的藥效不是來自任何單一的活性成分，而是多種有效部位群共同作用的結(jié)果，由于人工牛黃成份復(fù)雜，各組成份目前沒有有效的檢測手段監(jiān)控，存在質(zhì)量隱患。而指紋圖譜能比較全面的表征人工牛黃成分，更加嚴格的控制人工牛黃的質(zhì)量。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種用于人工牛黃原料藥質(zhì)量控制的指紋圖譜，以解決上述技術(shù)問題。

本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題，采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：

一種用于人工牛黃原料藥質(zhì)量控制的指紋圖譜，其特征在于，指紋圖譜的建立包括如下步驟：

第一步，先建立人工牛黃中成分標準特征圖譜，方法如下：

（1）供試品溶液的制備：精密稱取人工牛黃0.1g，置50ml量瓶中，加甲醇適量，以能夠?qū)⑷斯づ｜S完全溶解為宜，超聲1分鐘助溶，并用甲醇稀釋至量瓶滿容量，搖勻，放冷，用微孔濾膜濾過，用甲醇補足濾過損失重量，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

（2）參照物溶液的制備：取膽酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml中含10μg膽酸的溶液，作為參照物溶液；

（3）色譜條件：依利特hypersilods色譜柱4.6mm×250mm，粒度為5um；流動相為乙腈-水-磷酸，體積比為35∶65∶0.1；檢測波長為192nm，柱溫25℃，流速1.5ml/min；理論塔板數(shù)按膽酸計，不低于3000；

（4）測定：分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，用液相色譜法測定，制定人工牛黃特征圖譜；

所述人工牛黃特征圖譜中，有8個特征峰，以參照物膽酸對照品的色譜峰的相對保留時間和相對峰面積為1，計算其它色譜峰的相對保留時間和相對峰面積，上述8個特征峰分別是1號峰：平均相對保留時間rrt為0.18，相對峰面積為11.08；2號峰的平均相對保留時間rrt為0.32，相對峰面積為0.48；3號峰平均相對保留時間rrt為0.37，相對峰面積為4.77；4號峰平均相對保留時間rrt為0.44，相對峰面積為0.53；5號峰平均相對保留時間rrt為0.54，相對峰面積為3.11；6號峰平均相對保留時間rrt為1，相對峰面積為1；7號峰平均相對保留時間rrt為1.34，相對峰面積為0.54；8號峰平均相對保留時間rrt為1.48，相對峰面積為0.82；其中6號峰為參照峰；

第二步，以上述相同的方法測定待測人工牛黃樣品特征圖譜；

第三步，將待測人工牛黃樣品特征圖譜與標準的人工牛黃特征圖譜比對，判斷待測人工牛黃的質(zhì)量及真?zhèn)巍?/p>

作為優(yōu)選，所述微孔濾膜采用0.45um微孔濾膜。

本發(fā)明是結(jié)合大量生產(chǎn)批次統(tǒng)計情況和試驗研究工作，建立了人工牛黃的標準特征圖譜，能較好地保證人工牛黃在生產(chǎn)過程中投料的準確性與正確性。到目前為止，尚無關(guān)于上述人工牛黃指紋圖譜控制方法的公開報道。

本發(fā)明的有益效果是：

1、整體性、宏觀性和模糊性，本發(fā)明克服了單一成分含量測定難以反映產(chǎn)品真實投料情況。本發(fā)明為完整、準確評價人工牛黃的質(zhì)量提供了新的方法和手段。

2、用視覺直觀辨識圖譜的異同；用半定量指標量化樣品的真?zhèn)?、?yōu)劣。

附圖說明

圖1為人工牛黃標準特征圖譜。

具體實施方式

為了使本發(fā)明實現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明，但下述實施例僅僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例，并非全部?；趯嵤┓绞街械膶嵤├绢I(lǐng)域技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動的前提下所獲得其它實施例，都屬于本發(fā)明的保護范圍。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法，下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。

實施例1：人工牛黃特征圖譜的建立

1、儀器與試藥

1.1儀器

島津高效液相色譜儀lc-solution色譜工作站

1.2試藥

膽酸對照品由中國藥品生物制品檢定所提供；磷酸為分析純；乙腈、甲醇為色譜純；人工牛黃由合肥今越制藥有限公司提供，批號為160101、160102、160103、160104、160105、160106、160107、160108、160109、160110。

2、方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性

依利特hypersilods色譜柱（4.6mm×250mm5um）；流動相為乙腈-水-磷酸(35∶65∶0.1)，檢測波長為192nm，柱溫25℃，流速1.5ml/min。理論塔板數(shù)按膽酸計，不得低于3000。

3、特征圖譜特征峰的測定

3.1人工牛黃特征圖譜特征峰的建立

（1）供試品溶液的制備：精密稱取人工牛黃約0.1g，置50ml量瓶中，加甲醇適量，超聲1分鐘助溶，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，放冷，用甲醇補足損失重量，用微孔濾膜(0.45um)濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

（2）參照物溶液的制備：取膽酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml中含10μg的溶液，作為參照物溶液。

分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，照液相色譜法測定，即得。以參照物的色譜峰保留時間和峰面積為1，計算相對保留時間和峰面積比值，即得人工牛黃標準特征圖譜。

3.2特征峰確定

通過10批人工牛黃特征圖譜的測定，比較其圖譜，確定特征峰為8個，以參照物膽酸的色譜峰的相對保留時間和相對峰面積為1，計算10批樣品共有峰相對保留時間以及相對峰面積。結(jié)果見下表1、表2。

表1：10批樣品保留時間統(tǒng)計結(jié)果

表2：10批樣品峰面積比值統(tǒng)計結(jié)果

3.3特征峰的描述

（1）特征峰共有8個，其中1號峰峰面積最大。

（2）1、2、3、4、5、6、7、8號峰的相對保留時間的平均值分別為：0.18、0.32、0.37、0.44、0.54、1（參照峰）、1.34、1.48。

（3）1、2、3、4、5、6、7、8號峰的峰面積比值的平均值分別為：11.08、0.48、4.77、0.53、3.11、1（參照峰）、0.54、0.82。

3.4特征圖譜精密度試驗

按照特征圖譜精密度規(guī)定方法操作，以批號為160101的人工牛黃為供試品，依法制備，連續(xù)進樣6次，對對照特征峰時間以及峰面積進行統(tǒng)計，對照特征峰保留時間的rsd為0.75%，峰面積的rsd為1.14%。

3.5特征圖譜穩(wěn)定性試驗

按照特征圖譜穩(wěn)定性測定方法操作，以批號160101的人工牛黃為供試品，依法制備，于不同時間（0、2、4、8、16、24h）檢測，對對照特征峰時間以及峰面積比值進行統(tǒng)計，對照特征峰保留時間的rsd為0.58%，峰面積的rsd為0.74%。

3.6特征圖譜重復(fù)性試驗

按照特征圖譜重復(fù)性規(guī)定方法操作，以批號為160101的人工牛黃為供試品，依法制備6份樣品，進樣檢測，對對照特征峰時間以及峰面積進行統(tǒng)計，對照特征峰保留時間的rsd為1.63%，峰面積的rsd為1.24%。

以上試驗結(jié)果表明，應(yīng)用此方法對人工牛黃標準特征圖譜進行測定方法可靠，能比較全面的反映本品中的主要成分信息，確保產(chǎn)品投料的準確性與正確性。

以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的僅為本發(fā)明的優(yōu)選例，并不用來限制本發(fā)明，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護范圍由所附的權(quán)利要求書及其等效物界定。