本發(fā)明屬于材料檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種快速檢測聚多巴胺穩(wěn)定分散液濃度的方法。

背景技術(shù)：

聚多巴胺是海洋貽貝類生物體分泌蛋白質(zhì)的主要成分，其結(jié)構(gòu)中存在大量的酚羥基、氨基和亞氨基等多種功能基團(tuán)，它們可以作為反應(yīng)的結(jié)合位點，采取成共價鍵的方式固定相應(yīng)的目標(biāo)分子，也可以通過它的氧化還原特性與金屬離子或者過渡金屬離子進(jìn)行螯合等制備功能復(fù)合材料。此外，聚多巴胺具有極強的粘附性，可粘附在各類有機物和無機物的基底表面，穩(wěn)定性較好。與此同時，聚多巴胺還具備光學(xué)、電學(xué)、磁性等優(yōu)良的特點，其中最為突出的是聚多巴胺的生物相容性。自2007年起，聚多巴胺復(fù)合材料的制備與應(yīng)用受到國內(nèi)外的廣泛關(guān)注，早期的研究主要是基底材料的功能化及材料在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用，故聚多巴胺衍生復(fù)合材料相關(guān)應(yīng)用的研究為先進(jìn)材料的快速發(fā)展開辟了新的途徑。

聚多巴胺可以作為新型納米材料的表面修飾劑，在chemicalreviews，2014，114(9)，5057-5115中l(wèi)iu報道聚多巴胺作為表面修飾劑有兩個顯著的特點：(1)幾乎能在所有的材料表面附著成膜，對材料表面無幾何結(jié)構(gòu)要求；(2)形成的薄膜表面有大量活性官能團(tuán)如苯醌，能夠與其他底物發(fā)生共價結(jié)合，有利于進(jìn)一步的修飾改性。它通過在納米材料表面形成薄膜來調(diào)控表面結(jié)構(gòu)和組成，改善材料的性能，特別是親水性和生物相容性，提高了其在生物學(xué)和藥物研究中的應(yīng)用價值。此外，納米材料具有很大的表面積，能夠有效吸附藥物分子，通過納米材料載藥可以達(dá)到靶向給藥、定點釋放的效果。但是納米材料對藥物分子的吸附是通過非共價作用力，強度相對較弱并且容易解離。除此之外，很多納米材料的生物兼容性不足，大大限制了納米材料載藥方面的運用，而聚多巴胺的出現(xiàn)恰好可以解決這些難題。研究發(fā)現(xiàn)，聚多巴胺幾乎可以吸附疏水性藥物和親水性藥物。聚多巴胺負(fù)載藥物的機理一般認(rèn)為是：利用聚多巴胺表面富含的氨基、羥基和醌作為活性官能團(tuán)與藥物分子通過邁克爾加成或席夫堿反應(yīng)等共價結(jié)合，達(dá)到高效載藥的目的，故在生物材料中被廣泛應(yīng)用。

然而，聚多巴胺的檢測方法鮮有報道。在polymerchemistry，2015，6(3)，353-358中l(wèi)i報道聚多巴胺是真黑色素的主要成分，因而具有與黑色素相似的光學(xué)吸收特性。研究發(fā)現(xiàn)(spectrochimicaactaparta,1999,55,65-72)，聚多巴胺對紫外光的吸收能力呈指數(shù)增長，因此聚多巴胺可作為一種有效的光保護(hù)試劑。此外，多巴胺的氧化使得聚多巴胺對可見光具有顯著的吸收能力，但發(fā)生的自聚合反應(yīng)會促使聚多巴胺的吸收光譜延長至近紅外區(qū)(acc.chem.res.2000,33,307-313)。然而，本發(fā)明則是利用聚多巴胺在近紅外光區(qū)的穩(wěn)定吸收特性，建立的一種快速測定聚多巴胺穩(wěn)定分散液濃度的方法，可以為聚多巴胺應(yīng)用的擴(kuò)展提供便利。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種基于紫外光分光光度法的快速檢測聚多巴胺穩(wěn)定分散液濃度的方法，為實現(xiàn)該目的，根據(jù)本發(fā)明的檢測方法包括以下步驟：

1)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線：將蒸餾水加入紫外光分光光度儀樣品池中，測量吸光度；將制備好的聚多巴胺配制成由低到高多種不同濃度的聚多巴胺標(biāo)準(zhǔn)分散液，然后將其分別放入樣品池中，測量吸光度，利用紫外分光光度儀檢測聚多巴胺標(biāo)準(zhǔn)分散液在750nm-900nm的近紅外光區(qū)的吸光度，建立聚多巴胺標(biāo)準(zhǔn)分散液濃度與吸光度標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；

2)將待測聚多巴胺樣品溶液加入紫外光分光光度儀樣品池中，測定吸光度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線來實現(xiàn)對未知濃度的聚多巴胺分散液濃度的快速檢測。

優(yōu)選地，作為吸光度測量區(qū)域的所述近紅外光區(qū)為780nm-850nm，進(jìn)一步優(yōu)選為780nm-830nm。

優(yōu)選地，所述不同濃度的聚多巴胺標(biāo)準(zhǔn)分散液可以為選自濃度為10μg/ml至200μg/ml的至少5至10個不同的濃度，進(jìn)一步優(yōu)選為選自20μg/ml至120μg/ml的至少5至10個不同的濃度，更進(jìn)一步優(yōu)選為20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml和100μg/ml。

在上述步驟中，所述聚多巴胺可以根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)(scientificreports，2014，4，6070)中所記載的方法制備。，然后超聲分散，超聲功率為50w～100w，超聲時間是5min～60min，得到聚多巴胺分散液，然后將其冷凍干燥，得到聚多巴胺黑色顆粒。

優(yōu)先地，實施聚多巴胺標(biāo)準(zhǔn)分散液濃度的確定是將制備好的聚多巴胺黑色顆粒在容量瓶里面定容到一定體積得到高濃度的聚多巴胺標(biāo)準(zhǔn)分散液，然后逐級稀釋得到不同濃度的聚多巴胺標(biāo)準(zhǔn)分散液。

優(yōu)先地，聚多巴胺穩(wěn)定分散液的溶劑是水、乙醇、甲醇、異丙醇、二甲基亞砜、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、四氫呋喃、吡啶、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、苯、甲苯、乙腈、乙醚、石油醚、氯仿、甲酸、乙酸等溶劑中的一種或者幾種。

有益效果

本發(fā)明利用聚多巴胺在近紅外光區(qū)的吸收特性，建立了一種快速檢測聚多巴胺穩(wěn)定分散液濃度的方法，為聚多巴胺的廣泛利用提供了一定的便利條件。

附圖說明

圖1為聚多巴胺的紅外光吸收波譜圖。

圖2為聚多巴胺分散液在800nm處建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

具體實施方式

在下文的描述之前，應(yīng)當(dāng)了解在說明書和所附權(quán)利要求中使用的術(shù)語，并不應(yīng)解釋為局限于一般及辭典意義，而是應(yīng)當(dāng)基于允許發(fā)明人為最好的解釋而適當(dāng)定義術(shù)語的原則，基于對應(yīng)于本發(fā)明技術(shù)層面的意義及概念進(jìn)行解釋。因此，在此的描述僅為說明目的的優(yōu)選實例，而并非是意指限制本發(fā)明的范圍，因而應(yīng)當(dāng)了解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以做出其他等同實施和修改。

在根據(jù)本發(fā)明的檢測方法中，作為吸光度測量區(qū)域的所述近紅外光區(qū)為750nm-900nm，優(yōu)選為780nm-850nm，進(jìn)一步優(yōu)選為780nm-830nm。當(dāng)檢測區(qū)小于750nm時，建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)r²很差(＜0.9)，不能用于檢測；而當(dāng)大于850nm時，存在同樣的問題，不能準(zhǔn)確的檢測聚多巴胺的濃度。

此外，聚多巴胺粒徑對檢測沒有影響，通常聚多巴胺的粒徑大小范圍在1-1000nm，優(yōu)選為50-800nm之間，在此范圍內(nèi)根據(jù)本發(fā)明的檢測方法均可以實現(xiàn)對聚多巴胺穩(wěn)定分散液濃度的準(zhǔn)確測量。

以下實施例僅是作為本發(fā)明的實施方案的例子列舉，并不對本發(fā)明構(gòu)成任何限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解在不偏離本發(fā)明的實質(zhì)和構(gòu)思的范圍內(nèi)的修改均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實施例1

將制備好的聚多巴胺水分散液樣品1(2mg/ml，平均粒徑為200nm)超聲(功率為90w)分散30min，然后稀釋不同倍數(shù)，得到已知濃度的聚多巴胺水分散液，至少配5個不同濃度((20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、100μg/ml)的已知濃度的聚多巴胺水分散液。隨后利用紫外分光光度儀檢測分散液在800nm的吸光度值，建立聚多巴胺水分散液濃度與吸光度值的標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖2)，由此可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到未知濃度的聚多巴胺水分散液的濃度。待測聚多巴胺水分散液樣品的濃度需要在標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，如果超出測試范圍，需要將樣品濃度稀釋或增濃至標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，再進(jìn)行檢測。

對本實例所得到的聚多巴胺水分散液的濃度如表1所示，與實際濃度相比，誤差為2.6％。本實例的重復(fù)性實驗見表2。誤差的計算公式為：誤差＝|測試值的平均值-實際值|×100％/實際值。

結(jié)論：聚多巴胺可以在水分散液中準(zhǔn)確進(jìn)行測定。

表1

表2

實施例2

將制備好的聚多巴胺乙醇分散液樣品2(3mg/ml，平均粒徑為290nm)超聲(功率為80w)分散20min，然后稀釋不同倍數(shù)，得到已知濃度的聚多巴胺乙醇分散液，至少配5個不同濃度(10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、70μg/ml、90μg/ml)的已知濃度的聚多巴胺乙醇分散液。隨后利用紫外分光光度儀檢測在818nm的吸光度值，由此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到聚多巴胺乙醇分散液的濃度。待測聚多巴胺水分散液樣品的濃度需要在標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，如果超出測試范圍，需要將樣品濃度稀釋或增濃至標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，再進(jìn)行檢測。

對本實例所得到的聚多巴胺乙醇分散液的濃度如表1所示，與實際濃度相比，誤差為1.4％。本實例的重復(fù)性實驗見表3。誤差的計算公式：誤差＝|測試值的平均值-實際值|×100％/實際值。

結(jié)論：聚多巴胺可以在乙醇分散液中準(zhǔn)確進(jìn)行測定。

表3

實施例3

將制備好的聚多巴胺二甲基甲酰胺分散液樣品3(5mg/ml，平均粒徑為360nm)超聲(功率為80w)分散30min，然后稀釋不同倍數(shù)，得到已知濃度的聚多巴胺二甲基甲酰胺分散液，至少配5個不同濃度(20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、100μg/ml)的已知濃度的聚多巴胺二甲基甲酰胺分散液。隨后利用紫外分光光度儀檢測在780nm的吸光度值，由此可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到聚多巴胺二甲基甲酰胺分散液的濃度。待測聚多巴胺二甲基甲酰胺分散液樣品的濃度需要在標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，如果超出測試范圍，需要將樣品濃度稀釋或增濃至標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，再進(jìn)行檢測。

對本實例所得到的聚多巴胺二甲基甲酰胺分散液的濃度如表1所示，與實際濃度相比，誤差為3.5％。本實例的重復(fù)性實驗見表4。誤差的計算公式：誤差＝|測試值的平均值-實際值|×100％/實際值。

結(jié)論：聚多巴胺可以在二甲基甲酰胺分散液中準(zhǔn)確進(jìn)行測定。

表4

實施例4

將制備好的聚多巴胺二甲基亞砜分散液樣品4(2.5mg/ml，平均粒徑為400nm)超聲(功率為90w)分散20min，然后稀釋不同倍數(shù)，得到已知濃度的聚多巴胺二甲基亞砜分散液，至少配5個不同濃度(15μg/ml、30μg/ml、45μg/ml、60μg/ml、75μg/ml)的已知濃度的聚多巴胺二甲基亞砜分散液。隨后利用紫外分光光度儀檢測在828m的吸光度值，由此可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到聚多巴胺二甲基亞砜分散液的濃度。待測聚多巴胺二甲基亞砜分散液樣品的濃度需要在標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，如果超出測試范圍，需要將樣品濃度稀釋或增濃至標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，再進(jìn)行檢測。

對本實例所得到的聚多巴胺二甲基亞砜分散液的濃度如表1所示，與實際濃度相比，誤差為1.5％。本實例的重復(fù)性實驗見表5。誤差的計算公式：誤差＝|測試值的平均值-實際值|×100％/實際值。

結(jié)論：聚多巴胺可以在二甲基亞砜分散液中準(zhǔn)確進(jìn)行測定。綜合實施例1到實施例4，聚多巴胺的粒徑大小不會影響檢測結(jié)果。

表5