本發(fā)明公開了一種不孕不育檢測(cè)試劑盒，具體涉及一種不孕不育快速檢測(cè)試劑盒，本發(fā)明還是涉及該不孕不育快速檢測(cè)試劑盒的制備方法。
背景技術(shù)：
：近幾年來，由于環(huán)境污染加重、生活方式改變、婚育時(shí)間推遲、性傳播疾病增加等影響，不孕不育發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。在工業(yè)化國(guó)家，不孕不育的患病率大約為8.5％-20％。相關(guān)調(diào)查顯示，我國(guó)的育齡夫婦中大約有8％-15％發(fā)生不孕癥，其發(fā)病率呈增長(zhǎng)趨勢(shì)。世界衛(wèi)生組織預(yù)測(cè)，不孕癥21世紀(jì)將成為僅次于腫瘤、心血管病的第三大疾病。不孕主要分為原發(fā)不孕及繼發(fā)不孕。原發(fā)不孕為從未受孕；繼發(fā)不孕為曾經(jīng)懷孕以后又不孕。引起不孕的原因有排卵障礙、精液異常、輸卵管異常、不明原因的不孕、子宮內(nèi)膜異位癥和其他如免疫性不孕。免疫性不孕不育是由生殖系統(tǒng)抗原的同種免疫或自身免疫引起常見病和多發(fā)病之一，占各種原因不孕不育癥的20-40％，且近年來呈增多的趨勢(shì)。免疫性因素造成的不孕不育是大部分不明原因不孕不育、繼發(fā)性不孕不育和反復(fù)流產(chǎn)的主要原因，因此，對(duì)免疫性因素造成的不孕進(jìn)行檢測(cè)還是非常有必要的。不孕不育的免疫學(xué)診斷主要包括抗精子抗體(asa,anti-spermatozoaantibody)、抗卵巢抗體(aoa,anti-ovarianantibody)、抗子宮內(nèi)膜抗體(aea,anti-endometrialantibody)、抗透明帶抗體(azp,anti-zonapellucidantibody)、抗滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗體(ata,anti-trophoblastmcmbraneantibody)、抗人絨毛膜促性腺激素抗體(hcg，anti-humanchorionicgonadotropinantibody)等指標(biāo)。目前不孕不育的檢測(cè)方法主要有玻片法、斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫法和膠體金法，但是玻片法、斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫法需要反復(fù)洗滌等步驟，操作比較繁瑣，對(duì)操作人員的技術(shù)要求較高；膠體金法操作簡(jiǎn)單，但是靈敏度低，不能滿足臨床需要。專利申請(qǐng)?zhí)?00810204669.7提供了一種蛋白芯片檢測(cè)方法，可以對(duì)幾種抗體同時(shí)檢測(cè)，但是其需要洗滌、孵育等步驟，操作繁瑣，需要化學(xué)發(fā)光儀器，不適合基層應(yīng)用。專利申請(qǐng)?zhí)?01510444789.4采用酶法，但是操作繁瑣，完成整個(gè)樣本檢測(cè)需要7步才能完成，不適合臨床應(yīng)用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對(duì)上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種操作方便，檢測(cè)功能多樣化，檢測(cè)結(jié)果可靠的不孕不育快速檢測(cè)試劑盒及其制備方法。為此，本發(fā)明提供的第一個(gè)技術(shù)方案是這樣的：一種不孕不育快速檢測(cè)試劑盒，包括帶盒蓋的盒體，所述的盒蓋設(shè)有兩個(gè)加樣孔和一個(gè)觀察窗口；所述的盒體平行排列含紅色乳膠微球的精子抗體檢測(cè)卡、粉色乳膠微球的卵巢抗體檢測(cè)卡、橙色乳膠微球的子宮內(nèi)膜抗體檢測(cè)卡、黃色乳膠微球的透明帶抗體檢測(cè)卡、綠色乳膠微球的滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗體檢測(cè)卡和藍(lán)色乳膠微球的人絨毛膜促性腺激素抗體檢測(cè)卡。進(jìn)一步的，上述的一種不孕不育快速檢測(cè)試劑盒，所述的含紅色乳膠微球的精子抗體檢測(cè)卡包括第一底板，所述的第一底板上依次銜接有第一樣品墊、羊抗人igg抗體標(biāo)記的紅色乳膠微球標(biāo)記墊、精子抗原包被的第一包被膜和第一吸水墊，所述的第一包被膜上設(shè)有一條精子抗原檢測(cè)區(qū)t1線和一條第一人igg質(zhì)控區(qū)線c1線，兩條線平行排列。進(jìn)一步的，上述的一種不孕不育快速檢測(cè)試劑盒，所述的含粉色乳膠微球的卵巢抗體檢測(cè)卡包括第二底板，所述的第二底板上依次銜接有第二樣品墊、羊抗人igg抗體標(biāo)記的粉色乳膠微球標(biāo)記墊、卵巢抗原包被的第二包被膜和第二吸水墊，所述的第二包被膜上設(shè)有一條卵巢抗原檢測(cè)區(qū)t2線和一條人第二igg質(zhì)控區(qū)線c2線，兩條線平行排列。進(jìn)一步的，上述的一種不孕不育快速檢測(cè)試劑盒，所述的含橙色乳膠微球的子宮內(nèi)膜抗體檢測(cè)卡包括第三底板，所述的第三底板上依次銜接有第三樣品墊、羊抗人igg抗體標(biāo)記的橙色乳膠微球標(biāo)記墊、子宮內(nèi)膜抗原包被的第三包被膜和第三吸水墊，所述的第三包被膜上設(shè)有一條子宮內(nèi)膜抗原檢測(cè)區(qū)t3線和一條第三人igg質(zhì)控區(qū)c3線，兩條線平行排列。進(jìn)一步的，上述的一種不孕不育快速檢測(cè)試劑盒，所述的含黃色乳膠微球的透明帶抗體檢測(cè)卡包括第四底板，所述的第四底板上依次銜接有第四樣品墊、羊抗人igg抗體標(biāo)記的黃色乳膠微球標(biāo)記墊、抗透明帶抗原包被的第四包被膜和第四吸水墊，所述的第四包被膜上設(shè)有一條抗透明帶抗原檢測(cè)區(qū)t4線和一條人igg質(zhì)控區(qū)c4線，兩條線平行排列。進(jìn)一步的，上述的一種不孕不育快速檢測(cè)試劑盒，所述的含綠色乳膠微球的滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗體檢測(cè)卡包括第五底板，所述的第五底板上依次銜接有第五樣品墊、羊抗人igg抗體標(biāo)記的綠色乳膠微球標(biāo)記墊、滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗原包被的第五包被膜和第五吸水墊，所述的第五包被膜上設(shè)有一條滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗原檢測(cè)區(qū)t5線和一條第五人igg質(zhì)控區(qū)c5線，兩條線平行排列。進(jìn)一步的，上述的一種不孕不育快速檢測(cè)試劑盒，所述的含藍(lán)色乳膠微球的人絨毛膜促性腺激素抗體檢測(cè)卡包括第六底板，所述的第六底板上依次銜接有第六樣品墊、羊抗人igg抗體標(biāo)記的藍(lán)色乳膠微球標(biāo)記墊、人絨毛膜促性腺激素抗原包被的第六包被膜和第六吸水墊，所述的第六包被膜上設(shè)有一條人絨毛膜促性腺激素t6線和一條第六人igg質(zhì)控區(qū)線，兩條線平行排列。進(jìn)一步的，上述的一種不孕不育快速檢測(cè)試劑盒，所述的兩個(gè)加樣孔位于盒蓋的同一側(cè)，每三個(gè)順序排列的檢測(cè)卡上方的盒蓋有一個(gè)加樣孔。本發(fā)明提供的后一個(gè)技術(shù)方案是該試劑盒的制備方法：一種不孕不育快速檢測(cè)試劑盒的制備方法，先制備各個(gè)檢測(cè)卡，再將制備好的各個(gè)檢測(cè)卡放置于盒體內(nèi)，所述的各個(gè)檢測(cè)卡制備方法是在底板上依次銜接有對(duì)應(yīng)的樣品墊、對(duì)應(yīng)的乳膠微球標(biāo)記墊、對(duì)應(yīng)的包被膜和對(duì)應(yīng)的吸水墊：所述的抗精子抗體的紅色乳膠微球標(biāo)記墊的制備方法依次包括下述步驟：①微球預(yù)處理：取粒徑200nm的紅色乳膠微球10μl加入到0.1m的ph5.5的1ml的檸檬酸緩沖液中，混勻；②微球的活化：取濃度為20mg/ml的cmc(羧甲基纖維素鈉鹽)50μl，加入上述溶液中，混勻；在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)10min；③微球淬滅：加入終濃度為0.02m的2-巰基乙醇淬滅多余的cmc；④偶聯(lián)抗體：加入羊抗人igg抗體30ug至上述溶液中，在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)1h；⑤微球封閉：加入封閉劑5％的ova200μl，在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)30min；⑥微球純化：用脫鹽柱將蛋白微球復(fù)合物從溶液中分離出來；⑦保存：向脫鹽柱中加入體積為200μl的保存液，移至ep管中，超聲打散2次；所述的保存液為0.1m的ph8.0的甘氨酸-naoh緩沖液含1wt％酪蛋白鈉，10％海藻糖，2％peg20000，0.5％edta和0.2mg/ml鼠igg。⑧將上述所得的溶液用噴金劃膜儀噴至聚酯纖維素膜上，噴量為1～5μl/cm，放入37℃烘箱，干燥2～5小時(shí)；所述的抗卵巢抗體檢測(cè)卡的粉色乳膠微球標(biāo)記墊的制備方法與所述的抗精子抗體檢測(cè)卡的紅色乳膠微球標(biāo)記墊的制備方法不同之處在于，在步驟①微球預(yù)處理中選取粒徑200nm的粉色乳膠微球；所述的抗子宮內(nèi)膜抗體檢測(cè)卡的橙色乳膠微球標(biāo)記墊的制備方法與所述的抗精子抗體檢測(cè)卡的紅色乳膠微球標(biāo)記墊的制備方法不同之處在于，在步驟①微球預(yù)處理中選取粒徑200nm的橙色乳膠微球；所述的抗透明帶抗體檢測(cè)卡的黃色乳膠微球標(biāo)記墊的制備方法與所述的抗精子抗體檢測(cè)卡的紅色乳膠微球標(biāo)記墊的制備方法不同之處在于，在步驟①微球預(yù)處理中選取粒徑200nm的黃色乳膠微球；所述的抗滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗體檢測(cè)卡的綠色乳膠微球標(biāo)記墊的的制備方法與所述的抗精子抗體檢測(cè)卡的紅色乳膠微球標(biāo)記墊的制備方法不同之處在于，在步驟①微球預(yù)處理中選取粒徑200nm的綠色乳膠微球；所述的抗人絨毛膜促性腺激素抗體檢測(cè)卡的藍(lán)色乳膠微球標(biāo)記墊的制備方法與所述的抗精子抗體檢測(cè)卡的紅色乳膠微球標(biāo)記墊的制備方法不同之處在于，在步驟①微球預(yù)處理中選取粒徑200nm的藍(lán)色乳膠微球；①精子抗原包被檢測(cè)線：在硝酸纖維膜上劃線，在硝酸纖維膜的一端用記號(hào)筆做好c線和t線的標(biāo)記，用含有3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將精子抗原稀釋到1.0mg/ml進(jìn)行包被，劃線濃度為1μl/cm，速度100mm/s；質(zhì)控線：用含有3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將人igg多克隆抗體稀釋到0.8mg/ml進(jìn)行包被，劃線濃度為1μl/cm，速度100mm/s；②干燥放入37℃烘箱，干燥6～8小時(shí)；所述的第二包被膜的制備方法與第一包被膜的制備方法不同之處在于用含有3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將卵巢抗原稀釋到1.0mg/ml進(jìn)行包被；所述的第三包被膜的制備方法與第一包被膜的制備方法不同之處在于用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將子宮內(nèi)膜抗原稀釋到1.0mg/ml進(jìn)行包被；所述的第四包被膜的制備方法與第一包被膜的制備方法不同之處在于用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將透明帶抗原稀釋到1.0mg/ml進(jìn)行包被；所述的第五包被膜的制備方法與第一包被膜的制備方法不同之處在于用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗原稀釋到1.0mg/ml進(jìn)行包被；所述的第六包被膜的制備方法與第一包被膜的制備方法不同之處在于用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將人絨毛膜促性腺激素抗原稀釋到1.0mg/ml進(jìn)行包被。進(jìn)一步的，上述的一種不孕不育快速檢測(cè)試劑盒的制備方法，所述的精子抗原來自于人精液；所述的卵巢抗原來自于猴卵巢；所述的子宮內(nèi)膜抗原來自于牛子宮內(nèi)膜；所述的透明帶抗原來自于牛卵泡；所述的滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗原來自于人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞；所述的人絨毛膜促性腺激素來自于人孕尿。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所提供的不孕不育快速檢測(cè)試劑盒具有如下優(yōu)點(diǎn)：1、本發(fā)明提供的技術(shù)方案方法采用六種不同顏色的彩色乳膠微球檢測(cè)六種指標(biāo)，根據(jù)乳膠微球的顏色即可判斷出來檢測(cè)哪個(gè)項(xiàng)目，避免了項(xiàng)目之間相混淆；2、本發(fā)明提供的技術(shù)方案方法在每三個(gè)檢測(cè)卡上方的盒蓋有一個(gè)加樣孔，操作時(shí)，只需要加兩次樣，10min內(nèi)即可獲得六個(gè)檢測(cè)結(jié)果；3、本發(fā)明提供的技術(shù)方案有效解決了目前市場(chǎng)上不孕不育檢測(cè)試劑操作繁瑣的問題；本發(fā)明提供的方法只需要2步即可，操作簡(jiǎn)單，10min即能出結(jié)果，只需要加兩次樣即可檢測(cè)6個(gè)項(xiàng)目，對(duì)操作人員要求較低，適合基層應(yīng)用；4、本發(fā)明提供的技術(shù)方案與膠體金法相比，其靈敏度高于膠體金法，由于膠體金的粒徑較小，一般40nm；本發(fā)明提供的技術(shù)方案中采用彩色乳膠微球，其粒徑200nm，靈敏度高，更好的滿足臨床應(yīng)用。附圖說明圖1是本發(fā)明提供的孕不育六聯(lián)檢快速檢測(cè)試劑盒結(jié)構(gòu)示意圖；圖2是紅色乳膠微球的精子抗體檢測(cè)卡a結(jié)構(gòu)示意圖；圖3是粉色乳膠微球的卵巢抗體檢測(cè)卡b結(jié)構(gòu)示意圖；圖4是橙色乳膠微球的子宮內(nèi)膜抗體檢測(cè)卡c結(jié)構(gòu)示意圖；圖5是黃色乳膠微球的透明帶抗體檢測(cè)卡d結(jié)構(gòu)示意圖；圖6是綠色乳膠微球的滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗體檢測(cè)卡e結(jié)構(gòu)示意圖；圖7是藍(lán)色乳膠微球的人絨毛膜促性腺激素抗體檢測(cè)卡f結(jié)構(gòu)示意圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的權(quán)利要求做進(jìn)一步的限定，但是不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何限制。本發(fā)明提供的一種不孕不育快速檢測(cè)試劑盒參閱圖1至圖7，包括帶盒蓋11的盒體1，所述的盒蓋11設(shè)有兩個(gè)加樣孔12和一個(gè)觀察窗13，所述的兩個(gè)加樣孔12位于盒蓋11的同一側(cè)，兩個(gè)加樣孔12之間的距離與兩個(gè)檢測(cè)卡的寬度之和，其中每三個(gè)檢測(cè)卡上方的盒蓋11有一個(gè)加樣孔12，操作時(shí)，只需要加兩次樣，10min內(nèi)即可獲得六個(gè)檢測(cè)結(jié)果；所述的盒體1平行排列含紅色乳膠微球的精子抗體檢測(cè)卡a、粉色乳膠微球的卵巢抗體檢測(cè)卡b、橙色乳膠微球的子宮內(nèi)膜抗體檢測(cè)卡c、黃色乳膠微球的透明帶抗體檢測(cè)卡d、綠色乳膠微球的滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗體檢測(cè)卡e和藍(lán)色乳膠微球的人絨毛膜促性腺激素抗體檢測(cè)卡f。更為具體的說，所述的含紅色乳膠微球的精子抗體檢測(cè)卡a包括第一底板1a，所述的第一底板1a上依次銜接有第一樣品墊2a、羊抗人igg抗體標(biāo)記的紅色乳膠微球標(biāo)記墊3a、精子抗原包被的第一包被膜4a和第一吸水墊5a，所述的第一包被膜4a上設(shè)有一條精子抗原檢測(cè)區(qū)t1線和一條第一人igg質(zhì)控區(qū)c1線，兩條線平行排列。更為具體的說，所述的含粉色乳膠微球的卵巢抗體檢測(cè)卡b包括第二底板1b，所述的第二底板1b上依次銜接有第二樣品墊2b、羊抗人igg抗體標(biāo)記的粉色乳膠微球標(biāo)記墊3b、卵巢抗原包被的第二包被膜4b和第二吸水墊5b，所述的第二包被膜4b上設(shè)有一條卵巢抗原檢測(cè)區(qū)t1線和一條人第二igg質(zhì)控區(qū)c2線，兩條線平行排列。更為具體的說，所述的含橙色乳膠微球的子宮內(nèi)膜抗體檢測(cè)卡c包括第三底板1c，所述的第三底板1c上依次銜接有第三樣品墊2c、羊抗人igg抗體標(biāo)記的橙色乳膠微球標(biāo)記墊3c、子宮內(nèi)膜抗原包被的第三包被膜4c和第三吸水墊5c，所述的第三包被膜4c上設(shè)有一條子宮內(nèi)膜抗原檢測(cè)區(qū)t3線和一條第三人igg質(zhì)控區(qū)c3線，兩條線平行排列。更為具體的說，所述的含黃色乳膠微球的透明帶抗體檢測(cè)卡d包括第四底板1d，所述的第四底板1d上依次銜接有第四樣品墊2d、羊抗人igg抗體標(biāo)記的黃色乳膠微球標(biāo)記墊3d、抗透明帶抗原包被的第四包被膜4d和第四吸水墊5d，所述的第四包被膜4d上設(shè)有一條精子抗原檢測(cè)區(qū)t5線和一條人igg質(zhì)控區(qū)c5線，兩條線平行排列。更為具體的說，所述的含綠色乳膠微球的滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗體檢測(cè)卡e包括第五底板1e，所述的第五底板1e上依次銜接有第五樣品墊2e、羊抗人igg抗體標(biāo)記的綠色乳膠微球標(biāo)記墊3e、滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗原包被的第五包被膜4e和第五吸水墊5e，所述的第五包被膜4e上設(shè)有一條精子抗原檢測(cè)區(qū)t線和一條第五人igg質(zhì)控區(qū)c線，兩條線平行排列。更為具體的說，所述的含藍(lán)色乳膠微球的滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗體檢測(cè)卡f包括第六底板1f，所述的第六底板1f上依次銜接有第六樣品墊2f、羊抗人igg抗體標(biāo)記的藍(lán)色乳膠微球標(biāo)記墊3f、人絨毛膜促性腺激素抗原包被的第六包被膜4f和第六吸水墊5f，所述的第六包被膜4f上設(shè)有一條人絨毛膜促性腺激素t6線和一條第六人igg質(zhì)控區(qū)c線，兩條線平行排列。上述的一種不孕不育快速檢測(cè)試劑盒的制備方法，先制備各個(gè)檢測(cè)卡，再將制備好的各個(gè)檢測(cè)卡放置于盒體1內(nèi)。所述的精子抗體檢測(cè)卡a依次包括下述步驟：在第一底板1a上依次銜接第一樣品墊2a、羊抗人igg抗體標(biāo)記的紅色乳膠微球標(biāo)記墊3a、精子抗原包被的第一包被膜4a和第一吸水墊5a，其中：1)第一樣品墊2a的制備方法是：將樣品墊裁成20mm×300mm的大小，浸泡在樣品墊緩沖液中，1小時(shí)之后取出，于室溫干燥16-18小時(shí)。第一樣品墊1b的緩沖液配方如下：2％bsa、1％pvp、0.5％tween溶解于0.01的pbs(ph7.4)緩沖液中。所述的抗精子抗體檢測(cè)卡的紅色乳膠微球標(biāo)記墊2a的制備方法依次包括下述步驟：①微球預(yù)處理：取粒徑200nm的紅色乳膠微球10μl加入到0.1m的ph5.5的1ml的檸檬酸緩沖液中，混勻；②微球的活化：取濃度為20mg/ml的cmc50μl，加入上述溶液中，混勻；在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)10min；③微球淬滅：加入終濃度為0.02m的2-巰基乙醇淬滅多余的cmc；④偶聯(lián)抗體：加入羊抗人igg抗體30ug至上述溶液中，在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)1h；⑤微球封閉：加入封閉劑5％的ova200μl，在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)30min；⑥微球純化：用脫鹽柱將蛋白微球復(fù)合物從溶液中分離出來；⑦保存：向脫鹽柱中加入體積為200μl的保存液，移至ep管中，超聲打散2次；所述的保存液為0.1m的ph8.0的甘氨酸-naoh緩沖液含1wt％酪蛋白鈉，10％海藻糖，2％peg20000，0.5％edta和0.2mg/ml鼠igg。⑧將上述所得的溶液用噴金劃膜儀噴至聚酯纖維素膜上，噴量為1～5μl/cm，放入37℃烘箱，干燥2～5小時(shí)；3)精子抗原包被的第一包被膜4a制備方法是：①精子抗原包被檢測(cè)線(t1線)：在硝酸纖維膜上劃線，在膜的一端用記號(hào)筆做好c1線和t1線的標(biāo)記，c線和t線的距離為0.5cm，t線與硝酸纖維素膜下緣的距離為1cm，用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將精子抗原稀釋到1.0mg/ml進(jìn)行包被；所述的精子抗原來自于人精液，劃線濃度為1μl/cm，速度100mm/s。質(zhì)控線(c1線)：用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將人igg多克隆抗體稀釋到0.8mg/ml進(jìn)行包被，劃線濃度為1μl/cm，速度100mm/s。所述的粉色乳膠微球的卵巢抗體檢測(cè)卡b依次包括下述步驟：在第二底板1b上依次銜接第二樣品墊2b、羊抗人igg抗體標(biāo)記的粉色乳膠微球標(biāo)記墊3b、卵巢抗原包被的第二包被膜4b和第二吸水墊5b，其中：1)第二樣品墊2b的制備方法是：將樣品墊裁成20mm×300mm的大小，浸泡在樣品墊緩沖液中，1小時(shí)之后取出，于室溫干燥16-18小時(shí)。第二樣品墊1b的緩沖液配方如下：緩沖液配方如下：2％bsa、1％pvp、0.5％tween溶解于0.01的pbs(ph7.4)緩沖液中。所述的抗卵巢抗體檢測(cè)卡的粉色乳膠微球標(biāo)記墊2b的制備方法依次包括下述步驟：①微球預(yù)處理：取粒徑200nm的粉色乳膠微球10μl加入到0.1m的ph5.5的1ml的檸檬酸緩沖液中，混勻；②微球的活化：取濃度為20mg/ml的cmc50μl，加入上述溶液中，混勻；在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)10min；③微球淬滅：加入終濃度為0.02m的2-巰基乙醇淬滅多余的cmc；④偶聯(lián)抗體：加入羊抗人igg抗體30ug至上述溶液中，在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)1h；⑤微球封閉：加入封閉劑5％的ova200μl，在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)30min；⑥微球純化：用脫鹽柱將蛋白微球復(fù)合物從溶液中分離出來；⑦保存：向脫鹽柱中加入體積為200μl的保存液，移至ep管中，超聲打散2次；所述的保存液為0.1m的ph8.0的甘氨酸-naoh緩沖液含1wt％酪蛋白鈉，10％海藻糖，2％peg20000，0.5％edta和0.2mg/ml鼠igg。⑧將上述所得的溶液用噴金劃膜儀噴至聚酯纖維素膜上，噴量為1～5μl/cm，放入37℃烘箱，干燥2～5小時(shí)；3)卵巢抗原包被的第二包被膜4b制備方法是：①卵巢抗原包被檢測(cè)線(t2線)：在硝酸纖維膜上劃線，在膜的一端用記號(hào)筆做好c線和t線的標(biāo)記，c2線和t2線的距離為0.5cm，t線與硝酸纖維素膜下緣的距離為1cm，用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將卵巢抗原稀釋到1.0mg/ml進(jìn)行包被；所述的卵巢抗原來自于猴卵巢，劃線濃度為1μl/cm，速度100mm/s。質(zhì)控線(c2線)：用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將人igg多克隆抗體稀釋到0.8mg/ml進(jìn)行包被，劃線濃度為1μl/cm，速度100mm/s。所述的橙色乳膠微球的子宮內(nèi)膜抗體檢測(cè)卡c依次包括下述步驟：在第三底板1c上依次銜接第三樣品墊2c、羊抗人igg抗體標(biāo)記的橙色乳膠微球標(biāo)記墊3c、子宮內(nèi)膜抗原包被的第三包被膜4c和第三吸水墊5c，其中：1)第三樣品墊2c的制備方法是：將樣品墊裁成20mm×300mm的大小，浸泡在樣品墊緩沖液中，1小時(shí)之后取出，于室溫干燥16-18小時(shí)。第三樣品墊1c的緩沖液配方如下：2％bsa、1％pvp、0.5％tween溶解于0.01的pbs(ph7.4)緩沖液中。所述的抗子宮內(nèi)膜抗體檢測(cè)卡的橙色乳膠微球標(biāo)記墊2c的制備方法依次包括下述步驟：①微球預(yù)處理：取粒徑200nm的橙色乳膠微球10μl加入到0.1m的ph5.5的1ml的檸檬酸緩沖液中，混勻；②微球的活化：取濃度為20mg/ml的cmc50μl，加入上述溶液中，混勻；在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)10min；③微球淬滅：加入終濃度為0.02m的2-巰基乙醇淬滅多余的cmc；④偶聯(lián)抗體：加入羊抗人igg抗體30ug至上述溶液中，在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)1h；⑤微球封閉：加入封閉劑5％的ova200μl，在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)30min；⑥微球純化：用脫鹽柱將蛋白微球復(fù)合物從溶液中分離出來；⑦保存：向脫鹽柱中加入體積為200μl的保存液，移至ep管中，超聲打散2次；所述的保存液為0.1m的ph8.0的甘氨酸-naoh緩沖液含1wt％酪蛋白鈉，10％海藻糖，2％peg20000，0.5％edta和0.2mg/ml鼠igg。⑧將上述所得的溶液用噴金劃膜儀噴至聚酯纖維素膜上，噴量為1～5μl/cm，放入37℃烘箱，干燥2～5小時(shí)；3)子宮內(nèi)膜抗原包被的第三包被膜4c制備方法是：①子宮內(nèi)膜抗原包被檢測(cè)線(t3線)：在硝酸纖維膜上劃線，在膜的一端用記號(hào)筆做好c3線和t3線的標(biāo)記，c3線和t3線的距離為0.5cm，t線與硝酸纖維素膜下緣的距離為1cm，用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將子宮內(nèi)膜抗原稀釋到1.0mg/ml進(jìn)行包被；所述的子宮內(nèi)膜抗原來自于牛子宮內(nèi)膜，劃線濃度為1μl/cm，速度100mm/s。質(zhì)控線(c3線)：用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將人igg多克隆抗體稀釋到0.8mg/ml進(jìn)行包被，劃線濃度為1μl/cm，速度100mm/s。所述的黃色乳膠微球的透明帶抗體檢測(cè)卡d、依次包括下述步驟：在第四底板1d上依次銜接第四樣品墊2d、羊抗人igg抗體標(biāo)記的黃色乳膠微球標(biāo)記墊3d、透明帶抗原包被的第四包被膜4d和第四吸水墊5d，其中：1)第四樣品墊2d的制備方法是：將樣品墊裁成20mm×300mm的大小，浸泡在樣品墊緩沖液中，1小時(shí)之后取出，于室溫干燥16-18小時(shí)。第四樣品墊1d的緩沖液配方如下：2％bsa、1％pvp、0.5％tween溶解于0.01的pbs(ph7.4)緩沖液中。所述的抗透明帶抗體檢測(cè)卡的黃色乳膠微球標(biāo)記墊2d的制備方法依次包括下述步驟：①微球預(yù)處理：取粒徑200nm的黃色乳膠微球10μl加入到0.1m的ph5.5的1ml的檸檬酸緩沖液中，混勻；②微球的活化：取濃度為20mg/ml的cmc50μl，加入上述溶液中，混勻；在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)10min；③微球淬滅：加入終濃度為0.02m的2-巰基乙醇淬滅多余的cmc；④偶聯(lián)抗體：加入羊抗人igg抗體30ug至上述溶液中，在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)1h；⑤微球封閉：加入封閉劑5％的ova200μl，在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)30min；⑥微球純化：用脫鹽柱將蛋白微球復(fù)合物從溶液中分離出來；⑦保存：向脫鹽柱中加入體積為200μl的保存液，移至ep管中，超聲打散2次；所述的保存液為0.1m的ph8.0的甘氨酸-naoh緩沖液含1wt％酪蛋白鈉，10％海藻糖，2％peg20000，0.5％edta和0.2mg/ml鼠igg。⑧將上述所得的溶液用噴金劃膜儀噴至聚酯纖維素膜上，噴量為1～5μl/cm，放入37℃烘箱，干燥2～5小時(shí)；3)透明帶抗原包被的第四包被膜4d制備方法是：①透明帶抗原包被檢測(cè)線(t4線)：在硝酸纖維膜上劃線，在膜的一端用記號(hào)筆做好c4線和t4線的標(biāo)記，c4線和t4線的距離為0.5dm，t線與硝酸纖維素膜下緣的距離為1cm，用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將透明帶抗原稀釋到1.0mg/ml進(jìn)行包被；所述的透明帶抗原來自于透明帶抗原來自于牛卵泡，劃線濃度為1μl/cm，速度100mm/s。質(zhì)控線(d線)：用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將人igg多克隆抗體稀釋到0.8mg/ml進(jìn)行包被，劃線濃度為1μl/cm，速度100mm/s。所述的綠色乳膠微球的滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗體檢測(cè)卡e、依次包括下述步驟：在第五底板1e上依次銜接第五樣品墊2e、羊抗人igg抗體標(biāo)記的綠色乳膠微球標(biāo)記墊3e、滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗原包被的第五包被膜4e和第五吸水墊5e，其中：1)第五樣品墊2e的制備方法是：將樣品墊裁成20mm×300mm的大小，浸泡在樣品墊緩沖液中，1小時(shí)之后取出，于室溫干燥16-18小時(shí)。第五樣品墊1e的緩沖液配方如下：2％bsa、1％pvp、0.5％tween溶解于0.01的pbs(ph7.4)緩沖液中。所述的抗滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗體檢測(cè)卡的綠色乳膠微球標(biāo)記墊2e的制備方法依次包括下述步驟：①微球預(yù)處理：取粒徑200nm的綠色乳膠微球10μl加入到0.1m的ph5.5的1ml的檸檬酸緩沖液中，混勻；②微球的活化：取濃度為20mg/ml的cmc50μl，加入上述溶液中，混勻；在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)10min；③微球淬滅：加入終濃度為0.02m的2-巰基乙醇淬滅多余的cmc；④偶聯(lián)抗體：加入羊抗人igg抗體30ug至上述溶液中，在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)1h；⑤微球封閉：加入封閉劑5％的ova200μl，在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)30min；⑥微球純化：用脫鹽柱將蛋白微球復(fù)合物從溶液中分離出來；⑦保存：向脫鹽柱中加入體積為200μl的保存液，移至ep管中，超聲打散2次；所述的保存液為0.1m的ph8.0的甘氨酸-naoh緩沖液含1wt％酪蛋白鈉，10％海藻糖，2％peg20000，0.5％edta和0.2mg/ml鼠igg。⑧將上述所得的溶液用噴金劃膜儀噴至聚酯纖維素膜上，噴量為1～5μl/cm，放入37℃烘箱，干燥2～5小時(shí)；3)滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗原包被的第五包被膜4e制備方法是：①滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗原包被檢測(cè)線(t5線)：在硝酸纖維膜上劃線，在膜的一端用記號(hào)筆做好c5線和t5線的標(biāo)記，c5線和t5線的距離為0.5cm，t線與硝酸纖維素膜下緣的距離為1cm，用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗原稀釋到1.0mg/ml進(jìn)行包被；所述的滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗原來自于人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞，劃線濃度為1μl/cm，速度100mm/s。質(zhì)控線(c5線)：用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將人igg多克隆抗體稀釋到0.8mg/ml進(jìn)行包被，劃線濃度為1μl/cm，速度100mm/s。所述的藍(lán)色乳膠微球的人絨毛膜促性腺激素抗體檢測(cè)卡f、依次包括下述步驟：在第六底板1f上依次銜接第六樣品墊2f、羊抗人igg抗體標(biāo)記的藍(lán)色乳膠微球標(biāo)記墊3f、人絨毛膜促性腺激素抗原包被的第六包被膜4f和第六吸水墊5f，其中：1)第六樣品墊2f的制備方法是：將樣品墊裁成20mm×300mm的大小，浸泡在樣品墊緩沖液中，1小時(shí)之后取出，于室溫干燥16-18小時(shí)。第六樣品墊1f的緩沖液配方如下：2％bsa、1％pvp、0.5％tween溶解于0.01的pbs(ph7.4)緩沖液中。所述的抗人絨毛膜促性腺激素抗體檢測(cè)卡的藍(lán)色乳膠微球標(biāo)記墊2f的制備方法依次包括下述步驟：①微球預(yù)處理：取粒徑200nm的藍(lán)色乳膠微球10μl加入到0.1m的ph5.5的1ml的檸檬酸緩沖液中，混勻；②微球的活化：取濃度為20mg/ml的cmc50μl，加入上述溶液中，混勻；在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)10min；③微球淬滅：加入終濃度為0.02m的2-巰基乙醇淬滅多余的cmc；④偶聯(lián)抗體：加入羊抗人igg抗體30ug至上述溶液中，在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)1h；⑤微球封閉：加入封閉劑5％的ova200μl，在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上混勻反應(yīng)30min；⑥微球純化：用脫鹽柱將蛋白微球復(fù)合物從溶液中分離出來；⑦保存：向脫鹽柱中加入體積為200μl的保存液，移至ep管中，超聲打散2次；所述的保存液為0.1m的ph8.0的甘氨酸-naoh緩沖液含1wt％酪蛋白鈉，10％海藻糖，2％peg20000，0.5％edta和0.2mg/ml鼠igg。⑧將上述所得的溶液用噴金劃膜儀噴至聚酯纖維素膜上，噴量為1～5μl/cm，放入37℃烘箱，干燥2～5小時(shí)；3)人絨毛膜促性腺激素抗原包被的第六包被膜4f制備方法是：①人絨毛膜促性腺激素抗原包被檢測(cè)線(t6線)：在硝酸纖維膜上劃線，在膜的一端用記號(hào)筆做好c6線和t6線的標(biāo)記，c6線和t6線的距離為0.5cm，t線與硝酸纖維素膜下緣的距離為1cm，用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將人絨毛膜促性腺激素抗原稀釋到1.0mg/ml進(jìn)行包被；所述的人絨毛膜促性腺激素來自于人孕尿，劃線濃度為1μl/cm，速度100mm/s。質(zhì)控線(c6線)：用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01m的ph7.4的pbs將人igg多克隆抗體稀釋到0.8mg/ml進(jìn)行包被，劃線濃度為項(xiàng)目名稱檢測(cè)線陰性結(jié)果陽(yáng)性結(jié)果1μl/cm，速度100mm/s。為了更好的使用本發(fā)明提供的該不孕不育快速檢測(cè)試劑盒，下面給出本發(fā)明提供的樣本檢測(cè)方法：1.取100μl血漿/血清，加入到900μl的pbs稀釋液中；2.每個(gè)加樣孔各加入200μl上述溶液；3.10min時(shí)讀取結(jié)果即可，結(jié)果如下表。上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12