本實(shí)用新型涉及精準(zhǔn)醫(yī)療設(shè)備技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種鼻咽癌精準(zhǔn)診斷全自動(dòng)檢測設(shè)備。
背景技術(shù)：
鼻咽癌是我國南方地區(qū)常見的惡性腫瘤，鼻咽癌的發(fā)生是個(gè)多因素、多階段的過程。EB病毒可導(dǎo)致鼻咽部上皮細(xì)胞永生化，從而進(jìn)一步使其惡化。
在針對(duì)鼻咽癌的篩查及臨床診斷研究中，較為確定的EB病毒抗原主要有衣殼抗原(VCA)和早期抗原(EA)。已有研究證實(shí)EBV VCA-IgA抗體可出現(xiàn)于鼻咽癌確診前10-61個(gè)月，通過持續(xù)檢測EBV VCA-IgA有助于發(fā)現(xiàn)早期鼻咽癌。EA-IgA的出現(xiàn)通常提示機(jī)體EB病毒復(fù)制開始，在鼻咽癌患者有較高的特異性，不足之處在于敏感性較低，臨床篩查及血清學(xué)診斷多與VCA-IgA配合使用，可提高篩查的準(zhǔn)確率。
VCA-IgA和EA-IgA的常見的檢測方法有：酶聯(lián)免疫吸附法、免疫酶法、間接免疫熒光法。
酶聯(lián)免疫吸附法：將VCA或EA重組抗原包被于微孔板中，血清中的抗體與微孔中的抗原反應(yīng)，形成抗原-抗體復(fù)合物；洗板后加入酶標(biāo)二抗進(jìn)行反應(yīng)，形成抗原-抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物；洗板后加入顯色底物進(jìn)行顯色反應(yīng)，然后加入酸性終止液終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀讀取反應(yīng)液的OD值。根據(jù)比較樣本的OD值與陽性質(zhì)控品的OD值來判讀陰陽性。酶聯(lián)免疫吸附法.敏感性高，但特異性低，容易產(chǎn)生假陽性和假陰性。另外該方法屬于半定量，無法實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)定量。
免疫酶法：特定的細(xì)胞固定于載玻片上，血清中的抗體與載玻片上的細(xì)胞孵育反應(yīng)，形成細(xì)胞-抗體復(fù)合物；洗片后加入酶標(biāo)二抗，形成細(xì)胞-抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物；洗片后加入顯色底物反應(yīng)；反應(yīng)結(jié)束后洗片，并封片，利用普通光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞著色情況。根據(jù)細(xì)胞著色深淺判斷血清樣本的陰陽性。免疫酶法存在干擾因子較多，容易誤判的缺陷，而人工判讀則又存在主觀性強(qiáng)，難以進(jìn)行質(zhì)量控制和統(tǒng)一比較。
間接免疫熒光法：特定的細(xì)胞固定于載玻片上，血清中的抗體與載玻片上的細(xì)胞孵育反應(yīng)，形成細(xì)胞-抗體復(fù)合物；洗片后加入熒光素標(biāo)記二抗，形成細(xì)胞-抗體-熒光素標(biāo)記二抗復(fù)合物；反應(yīng)結(jié)束后洗片，并封片，利用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞熒光情況。根據(jù)細(xì)胞熒光有無或深淺判斷血清樣本的陰陽性。間接免疫熒光法敏感性不高、自動(dòng)化程度低，主觀性強(qiáng)，無法實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化定量。
以上各種檢測方法結(jié)果的準(zhǔn)確性、自動(dòng)化操作程度的局限一方面是檢測試劑的敏感性、特異性不夠明顯，另一方面，也沒有簡單的自動(dòng)化設(shè)備進(jìn)行檢測操作，利用人工操作局限了結(jié)果的效率及準(zhǔn)確性，特別是人工進(jìn)行結(jié)果分析容易受到多種因素的影響。目前尚沒有完整的檢測體系對(duì)EB病毒VCA/EA-IgA細(xì)胞進(jìn)行自動(dòng)化診斷全自動(dòng)檢測。
因此，針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)不足，提供一種鼻咽癌精準(zhǔn)診斷全自動(dòng)檢測設(shè)備以克服現(xiàn)有技術(shù)不足甚為必要。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本實(shí)用新型的目的在于避免現(xiàn)有技術(shù)的不足之處而提供一種鼻咽癌精準(zhǔn)診斷全自動(dòng)檢測設(shè)備，該鼻咽癌精準(zhǔn)診斷全自動(dòng)檢測設(shè)備采用對(duì)EB病毒VCA/EA-IgA抗體具有良好的敏感性和特異性的檢測試劑、并結(jié)合HELIOS全自動(dòng)熒光免疫分析儀以及即時(shí)滴度定量判讀裝置，可實(shí)現(xiàn)熒光檢測的自動(dòng)化，并針對(duì)EBV VCA/EA IgA CIF檢測的熒光結(jié)果圖片進(jìn)行判斷，具有檢測結(jié)果精度高、檢測方便的特點(diǎn)。
本實(shí)用新型的上述目的通過如下技術(shù)手段實(shí)現(xiàn)。
提供一種鼻咽癌精準(zhǔn)診斷全自動(dòng)檢測設(shè)備，包括采用EB病毒VCA/EA-IgA細(xì)胞免疫熒光檢測試劑的HELIOS全自動(dòng)熒光免疫分析儀和即時(shí)滴度定量判讀裝置；
EB病毒VCA/EA-IgA細(xì)胞免疫熒光檢測試劑主要成分包括細(xì)胞片、熒光二抗FITC-IgA、陽性對(duì)照質(zhì)控品、陰性對(duì)照質(zhì)控品、封片劑、PBS粉劑和蓋玻片；
HELIOS全自動(dòng)熒光免疫分析儀設(shè)置有攝像系統(tǒng)，攝像系統(tǒng)與即時(shí)滴度定量判讀裝置連接；
HELIOS全自動(dòng)熒光免疫分析儀對(duì)樣品進(jìn)行自動(dòng)化檢測，并通過攝像系統(tǒng)對(duì)檢測的樣品成像，樣品成像的圖片結(jié)果輸入至即時(shí)滴度定量判讀裝置，通過即時(shí)滴度定量判讀裝置獲得滴度結(jié)果。
優(yōu)選的，上述的鼻咽癌精準(zhǔn)診斷全自動(dòng)檢測設(shè)備，HELIOS全自動(dòng)熒光免疫分析儀的攝像系統(tǒng)具體為顯微攝像裝置，顯微攝像裝置與所述即時(shí)滴度定量判讀裝置連接。
優(yōu)選的，上述的鼻咽癌精準(zhǔn)診斷全自動(dòng)檢測設(shè)備，即時(shí)定量判讀裝置包括將照片轉(zhuǎn)換成灰度圖片的灰度轉(zhuǎn)換器、將灰度圖片進(jìn)行黑白反轉(zhuǎn)的反轉(zhuǎn)器、進(jìn)行單位面積熒光強(qiáng)度計(jì)算的計(jì)算器以及根據(jù)單位面積熒光強(qiáng)度獲得滴度數(shù)值的分析器。
優(yōu)選的，上述的鼻咽癌精準(zhǔn)診斷全自動(dòng)檢測設(shè)備，灰度轉(zhuǎn)換器將照片轉(zhuǎn)換成8位的灰度圖片。
優(yōu)選的，上述的鼻咽癌精準(zhǔn)診斷全自動(dòng)檢測設(shè)備，分析器存儲(chǔ)有單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值與滴度匹配表，匹配表具體如下；
當(dāng)單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值小于0.05時(shí)，滴度值小于10；
當(dāng)單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值大于等于0.05而小于0.08時(shí)，滴度值判定為10；
當(dāng)單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值大于等于0.08而小于0.12時(shí)，滴度值判定為20；
當(dāng)單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值大于等于0.12而小于0.16時(shí)，滴度值判定為40；
當(dāng)單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值大于等于0.16而小于0.19時(shí)，滴度值判定為80；
當(dāng)單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值大于等于0.19而小于0.22時(shí)，滴度值判定為160；
當(dāng)單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值大于等于0.22而小于0.24時(shí)，滴度值判定為320；
當(dāng)單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值大于等于0.24而小于0.3時(shí)，滴度值判定為640；
當(dāng)單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值大于0.3時(shí)，滴度值判定為大于640。
本實(shí)用新型的鼻咽癌精準(zhǔn)診斷全自動(dòng)檢測設(shè)備，包括采用EB病毒VCA/EA-IgA細(xì)胞免疫熒光檢測試劑的HELIOS全自動(dòng)熒光免疫分析儀和即時(shí)滴度定量判讀裝置；EB病毒VCA/EA-IgA細(xì)胞免疫熒光檢測試劑主要成分包括細(xì)胞片、熒光二抗FITC-IgA、陽性對(duì)照質(zhì)控品、陰性對(duì)照質(zhì)控品、封片劑、PBS粉劑和蓋玻片；HELIOS全自動(dòng)熒光免疫分析儀設(shè)置有攝像系統(tǒng)，攝像系統(tǒng)與即時(shí)滴度定量判讀裝置連接；HELIOS全自動(dòng)熒光免疫分析儀對(duì)樣品進(jìn)行自動(dòng)化檢測，并通過攝像系統(tǒng)對(duì)檢測的樣品成像，樣品成像的圖片結(jié)果輸入至即時(shí)滴度定量判讀裝置，通過即時(shí)滴度定量判讀裝置獲得滴度結(jié)果。該鼻咽癌精準(zhǔn)診斷全自動(dòng)檢測設(shè)備采用對(duì)EB病毒VCA/EA-IgA抗體具有良好的敏感性和特異性的檢測試劑、并結(jié)合HELIOS全自動(dòng)熒光免疫分析儀以及即時(shí)滴度定量判讀裝置，可實(shí)現(xiàn)熒光檢測的自動(dòng)化，并針對(duì)EBV VCA/EA IgA CIF檢測的熒光結(jié)果圖片進(jìn)行判斷，具有檢測結(jié)果精度高、檢測方便的特點(diǎn)。
附圖說明
結(jié)合附圖對(duì)本實(shí)用新型作詳細(xì)說明，但附圖中的內(nèi)容不構(gòu)成對(duì)本實(shí)用新型的限制。
圖1是本實(shí)用新型鼻咽癌精準(zhǔn)診斷全自動(dòng)檢測設(shè)備的示意圖。
在圖1中包括：
ELIOS全自動(dòng)熒光免疫分析儀100、
即時(shí)滴度定量判讀裝置200。
具體實(shí)施方式
結(jié)合以下實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步描述。
實(shí)施例1。
一種鼻咽癌精準(zhǔn)診斷全自動(dòng)檢測設(shè)備，如圖1所示，包括HELIOS全自動(dòng)熒光免疫分析儀100和即時(shí)滴度定量判讀裝置200。
HELIOS全自動(dòng)熒光免疫分析儀采用EB病毒VCA/EA-IgA細(xì)胞免疫熒光檢測試劑。EB病毒VCA/EA-IgA細(xì)胞免疫熒光檢測試劑主要成分包括細(xì)胞片、熒光二抗FITC-IgA、陽性對(duì)照質(zhì)控品、陰性對(duì)照質(zhì)控品、封片劑、PBS粉劑和蓋玻片。
HELIOS全自動(dòng)熒光免疫分析儀設(shè)置有攝像系統(tǒng)，攝像系統(tǒng)與即時(shí)滴度定量判讀裝置連接。HELIOS全自動(dòng)熒光免疫分析儀對(duì)樣品進(jìn)行自動(dòng)化檢測，并通過攝像系統(tǒng)對(duì)檢測的樣品成像，樣品成像的圖片結(jié)果輸入至即時(shí)滴度定量判讀裝置，通過即時(shí)滴度定量判讀裝置獲得滴度結(jié)果。
具體的，該鼻咽癌精準(zhǔn)診斷全自動(dòng)檢測設(shè)備，HELIOS全自動(dòng)熒光免疫分析儀設(shè)置有顯微攝像裝置，顯微攝像裝置與所述即時(shí)滴度定量判讀裝置連接。
具體的，即時(shí)定量判讀裝置包括將照片轉(zhuǎn)換成灰度圖片的灰度轉(zhuǎn)換器、將灰度圖片進(jìn)行黑白反轉(zhuǎn)的反轉(zhuǎn)器、進(jìn)行單位面積熒光強(qiáng)度計(jì)算的計(jì)算器以及根據(jù)單位面積熒光強(qiáng)度獲得滴度數(shù)值的分析器。即時(shí)定量判讀裝置通過如下方法獲得圖片的滴度結(jié)果，
A，將照片轉(zhuǎn)換成灰度圖片，優(yōu)選將照片轉(zhuǎn)換成8位的灰度圖片；
B，將步驟A得到的灰度圖片進(jìn)行黑白反轉(zhuǎn)，得到反轉(zhuǎn)后的圖片，命名為反轉(zhuǎn)圖片；
C，對(duì)反轉(zhuǎn)圖片進(jìn)行光密度校正、排除非特異性顆粒熒光后，計(jì)算單位面積熒光強(qiáng)度；
D，根據(jù)單位面積熒光強(qiáng)度獲得滴度數(shù)值。
具體的，分析器存儲(chǔ)有單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值與滴度匹配表，匹配表具體如下；
當(dāng)單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值小于0.05時(shí)，滴度值小于10；
當(dāng)單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值大于等于0.05而小于0.08時(shí)，滴度值判定為10；
當(dāng)單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值大于等于0.08而小于0.12時(shí)，滴度值判定為20；
當(dāng)單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值大于等于0.12而小于0.16時(shí)，滴度值判定為40；
當(dāng)單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值大于等于0.16而小于0.19時(shí)，滴度值判定為80；
當(dāng)單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值大于等于0.19而小于0.22時(shí)，滴度值判定為160；
當(dāng)單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值大于等于0.22而小于0.24時(shí)，滴度值判定為320；
當(dāng)單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值大于等于0.24而小于0.3時(shí)，滴度值判定為640；
當(dāng)單位面積熒光強(qiáng)度的數(shù)值大于0.3時(shí)，滴度值判定為大于640。
該鼻咽癌精準(zhǔn)診斷全自動(dòng)檢測設(shè)備，EB病毒VCA/EA-IgA細(xì)胞免疫熒光檢測試劑具有敏感性高，特異性好的特點(diǎn)。其細(xì)胞片的制備過程如下,
(1)建立細(xì)胞系
(1.1)培養(yǎng)液的設(shè)置：以RPMI1640為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加10％～15％的胎牛血清，調(diào)整培養(yǎng)液PH初始值為7.2～7.4。
(1.2)建立B95-8細(xì)胞系和Raji細(xì)胞系
B95-8可天然表達(dá)EBV VCA，B95-8細(xì)胞系的建立工藝是：將B95-8細(xì)胞放于上述培養(yǎng)液中，置于35～37℃含3～6％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，建立表達(dá)效率穩(wěn)定均一的B95-8細(xì)胞系。
Raji細(xì)胞培養(yǎng)條件與B95-8細(xì)胞一樣，但Raji細(xì)胞須經(jīng)激活劑激活方可表達(dá)EBV EA。Raji細(xì)胞系的激活工藝是：在500～1000rpm的條件下離心5～10分鐘收集Raji細(xì)胞，用新的培養(yǎng)液重懸Raji細(xì)胞，并調(diào)整Raji細(xì)胞深度為(1～3)×106個(gè)/ml，增加正丁酸鈉至終濃度為0.1～1mM，增加TPA至終濃度為10～100ng/ml，并置于35～37℃含3～6％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12～48h，即建立了表達(dá)效率穩(wěn)定均一的Raji細(xì)胞系。
(2)細(xì)胞片的均一性控制
涂片的細(xì)胞控制傳代在50代以內(nèi)，以細(xì)胞裂解個(gè)數(shù)少于5％為標(biāo)準(zhǔn)，以相同的涂片工藝進(jìn)行涂片。
本實(shí)用新型稀釋的熒光二抗FITC-IgA、陽性對(duì)照質(zhì)控品、陰性對(duì)照質(zhì)控品在2～8℃的條件下均可穩(wěn)定12個(gè)月。
穩(wěn)定性的效果通過穩(wěn)定劑作用達(dá)到。具體的，熒光二抗FITC-IgA、陽性對(duì)照質(zhì)控品或陰性對(duì)照質(zhì)控品的稀釋液含有穩(wěn)定劑，含有穩(wěn)定劑的稀釋液的PH值控制在7.2至7.3之間。
以稀釋液重量份為1，穩(wěn)定劑含有如下重量百分比的成分：
甘氨酸 1％～5％、
海澡糖 1％～5％、
BSA 1％～5％、
PBS 1％～3％。
具體的，以重量百分比計(jì)，封片劑含有：
甘油 10％～30％；
熒光保護(hù)劑 3～8％；
PBS 50％～90％。
該EB病毒VCA/EA-IgA細(xì)胞免疫熒光檢測試劑，成品結(jié)構(gòu)為在一載玻片上具有12孔疏水圓孔的結(jié)構(gòu)，12孔疏水圓孔呈兩列設(shè)置，每列均為6個(gè)。優(yōu)選，12孔疏水圓孔呈兩行六列矩陣排布。為了識(shí)別準(zhǔn)確及自動(dòng)化應(yīng)用，12孔疏水載玻片上具有項(xiàng)目專有的二維識(shí)別碼，適用于與HELIOS全自動(dòng)熒光免疫分析儀匹配，并可配套EBV VCA/EA-IgA CIF即時(shí)滴度定量判讀裝置進(jìn)行實(shí)時(shí)定量判讀，使得自動(dòng)化監(jiān)測成為可能。
本實(shí)用新型的EB病毒VCA/EA-IgA細(xì)胞免疫熒光檢測試劑，新改良了兩種經(jīng)激活可穩(wěn)定高效表達(dá)抗原的細(xì)胞系B95-8和Raji，同時(shí)對(duì)細(xì)胞片、熒光二抗和質(zhì)控品做了穩(wěn)定性處理和優(yōu)化，使試劑的敏感性和特異性均大大提高。
通過對(duì)細(xì)胞片、熒光二抗和EBV VCA/EA IgA質(zhì)控品添加穩(wěn)定劑，使試劑的效期大大增長。相比于目前市場上產(chǎn)品的有效期提高了至少一倍。
EBV VCA/EA IgA CIF檢測試劑的成品配套應(yīng)用于全自動(dòng)熒光免疫分析儀(HELIOS)，實(shí)現(xiàn)操作過程自動(dòng)化。且優(yōu)化的涂片工藝和均勻性控制，使得細(xì)胞片批間差減少，應(yīng)用在EBV VCA/EA IgA CIF即時(shí)滴度定量判讀裝置，可得出更準(zhǔn)確的定量結(jié)果，實(shí)現(xiàn)全國實(shí)驗(yàn)室間的可比性。
采用本實(shí)用新型的設(shè)備體系，進(jìn)行檢測，具體步驟如下：
1)洗液：將PBS粉劑用純化水稀釋至工作濃度。
2)稀釋血清：待測血清用洗液作1：10稀釋待用。
3)加樣：在抗原片的反應(yīng)孔內(nèi)分別加入陰陽性對(duì)照和稀釋好的血清，35μL/孔。
4)孵育：將抗原片室溫(21～25℃)孵育30min。
5)洗滌：取出擴(kuò)原片，用洗液輕輕從一側(cè)沖洗反應(yīng)孔2遍，再將抗原片置于洗缸中浸泡5min。取出抗原片，用吸水紙將反應(yīng)孔周圍的殘液吸干。
6)加熒光二抗：在抗原片的反應(yīng)孔內(nèi)加入熒光二抗(FITC-IgA)，25μL/孔。
7)孵育：將抗原片室溫孵育30min。
8)洗滌：重復(fù)步驟5。
9)封片：每反應(yīng)孔滴加約10μL的封片劑。
10)觀察結(jié)果：HELIOS全自動(dòng)熒光免疫分析儀自帶的顯微成像裝置自動(dòng)拍照，即時(shí)滴度定量判讀裝置自動(dòng)對(duì)結(jié)果圖片進(jìn)行滴度定量判讀，得出滴度結(jié)果。
該鼻咽癌精準(zhǔn)診斷全自動(dòng)檢測設(shè)備采用對(duì)EB病毒VCA/EA-IgA抗體具有良好的敏感性和特異性的檢測試劑、并結(jié)合HELIOS全自動(dòng)熒光免疫分析儀以及即時(shí)滴度定量判讀裝置，可實(shí)現(xiàn)熒光檢測的自動(dòng)化，并針對(duì)EBV VCA/EA IgA CIF檢測的熒光結(jié)果圖片進(jìn)行判斷，具有檢測結(jié)果精度高、檢測方便的特點(diǎn)。
實(shí)施例2。
一種鼻咽癌精準(zhǔn)診斷全自動(dòng)檢測設(shè)備，其它特征與實(shí)施例1相同，不同之處在于：EB病毒VCA/EA-IgA細(xì)胞免疫熒光檢測試劑的穩(wěn)定劑含有如下重量百分比的成分：
甘氨酸 2％～3％、
海澡糖 1％～4％、
BSA 2％～3％、
PBS 2％～2.5％。
本實(shí)用新型中新改良了兩種經(jīng)激活可穩(wěn)定高效表達(dá)抗原的細(xì)胞系B95-8和Raji，同時(shí)對(duì)細(xì)胞片、熒光二抗和質(zhì)控品做了穩(wěn)定性處理和優(yōu)化，使試劑的敏感性和特異性均大大提高。
通過對(duì)細(xì)胞片、熒光二抗和EBV VCA/EA IgA質(zhì)控品添加穩(wěn)定劑，使試劑的效期大大增長。相比于目前市場上產(chǎn)品的有效期提高了至少一倍。
EBV VCA/EA IgA CIF檢測試劑的成品設(shè)計(jì)可配套應(yīng)用于全自動(dòng)熒光免疫分析儀(HELIOS)，實(shí)現(xiàn)操作過程自動(dòng)化。且優(yōu)化的涂片工藝和均勻性控制，使得細(xì)胞片批間差減少，應(yīng)用在EBV VCA/EA IgA CIF即時(shí)滴度定量判讀系統(tǒng)，可得出更準(zhǔn)確的定量結(jié)果，實(shí)現(xiàn)全國實(shí)驗(yàn)室間的可比性。
實(shí)施例3。
一種鼻咽癌精準(zhǔn)診斷全自動(dòng)檢測設(shè)備，其它特征與實(shí)施例1相同，不同之處在于：EB病毒VCA/EA-IgA細(xì)胞免疫熒光檢測試劑，以重量百分比計(jì)，封片劑含有：
甘油 15％～20％；
熒光保護(hù)劑 5～7％；
PBS 65％～80％。
本實(shí)用新型的試劑的敏感性和特異性性能均佳，穩(wěn)定性良好，適合與自動(dòng)化設(shè)備配套使用。
最后應(yīng)當(dāng)說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本實(shí)用新型的技術(shù)方案而非對(duì)本實(shí)用新型保護(hù)范圍的限制，盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本實(shí)用新型的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本實(shí)用新型技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。