本實(shí)用新型屬于體外診斷醫(yī)療器械技術(shù)領(lǐng)域，特別是免疫檢測(cè)的試劑盒，具體涉及為一種I型志賀毒素時(shí)間分辨熒光免疫檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)：

志賀毒素(shiga toxin，stx)是導(dǎo)致腸出血性大腸桿菌感染的主要致病因素之一，其可以透過破損的腸上皮細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)，與靶器官上皮細(xì)胞受體結(jié)合，造成腸道、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等器官的損傷，嚴(yán)重時(shí)可引起溶血性尿毒綜合征，危及患者生命。并且具有暴發(fā)流行性感染的特點(diǎn)，已成為全世界所關(guān)注的的公共衛(wèi)生問題。志賀毒素分為stxI和stxII兩個(gè)亞型，stxII擁有多個(gè)變種，如stxIIc、stxIId、stxIIe、stxIIf等，而stxI則相對(duì)簡(jiǎn)單，這也為通過免疫學(xué)手段檢測(cè)stxI提供了便利。目前雖然認(rèn)為stxII是引起溶血性尿毒癥的主要因素，但是由stxI引起的溶血性尿毒癥仍然被經(jīng)常報(bào)道。

對(duì)病人糞便樣品進(jìn)行病原菌分離培養(yǎng)仍然是目前診斷產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌感染的金標(biāo)準(zhǔn)，然而該種傳統(tǒng)方法具有操作步驟繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，結(jié)果評(píng)判主觀性較強(qiáng)等缺點(diǎn)，所以建立一種操作簡(jiǎn)便，同時(shí)高靈敏性、高特異性的體外診斷方法，對(duì)于診斷、治療、傳染源追蹤和疫情控制均具有重大意義。

時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)(Time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)，是一種非同位素免疫分析技術(shù)，該技術(shù)使用鑭系元素標(biāo)記抗原或者抗體，根據(jù)鑭系元素螯合物的發(fā)光特點(diǎn)，通過時(shí)間分辨熒光免疫分析儀器同時(shí)對(duì)波長(zhǎng)和時(shí)間兩個(gè)參數(shù)進(jìn)行信號(hào)的檢測(cè)與分辨，從而達(dá)到定量分析待測(cè)目標(biāo)物質(zhì)含量的目的，并且可以有效地排除非特異性熒光的干擾，極大地提高分析靈敏度。在鑭系元素中，使用較多的主要是Eu(銪)和Tb(鋱)，Eu熒光壽命為1ms，在水中不穩(wěn)定，但加入增強(qiáng)劑之后可以克服該缺點(diǎn)；Tb熒光壽命為1.6ms，水中穩(wěn)定，但具有熒光波長(zhǎng)短、散射嚴(yán)重、能量大易使組分分解等明顯劣勢(shì)，因此從測(cè)量方法學(xué)上看雖然Tb很好，但不適合用于生物分析，故Eu最為常用。

上述試劑需要低溫保存，現(xiàn)有的試劑盒使用時(shí)通常需要放入冰袋中或者取出后快速使用，因此導(dǎo)致試劑盒的使用不便。

本實(shí)用新型試劑盒針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)試劑盒無低溫保持結(jié)構(gòu)及設(shè)置后試劑如何更好擺放的問題，本實(shí)用新型提供了一種I型志賀毒素時(shí)間分辨熒光免疫檢測(cè)試劑盒。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了克服現(xiàn)有技術(shù)試劑盒無低溫保持結(jié)構(gòu)及設(shè)置后試劑如何更好擺放的問題，本實(shí)用新型提供一種I型志賀毒素時(shí)間分辨熒光免疫檢測(cè)試劑盒。

一種I型志賀毒素時(shí)間分辨熒光免疫檢測(cè)試劑盒，包括盒體，盒蓋，其特征在于，所述盒體內(nèi)設(shè)置一帶孔硬質(zhì)海綿，硬質(zhì)海綿上部中央設(shè)置一個(gè)抗stxI單克隆抗體包被的96微孔板凹槽；硬質(zhì)海綿上下兩側(cè)邊緣設(shè)置兩個(gè)冰袋孔；凹槽上下兩側(cè)分別水平設(shè)置3個(gè)stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶圓孔；凹槽左右兩側(cè)，一側(cè)設(shè)置一個(gè)Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶圓孔；另一側(cè)設(shè)置三個(gè)較大的圓孔，分別為增強(qiáng)液試劑瓶圓孔，濃縮清洗液試劑瓶圓孔，緩沖液試劑瓶圓孔。凹槽內(nèi)設(shè)置包被有stxI單克隆抗體的微孔板；各試劑瓶圓孔內(nèi)對(duì)應(yīng)放置相應(yīng)試劑瓶，冰袋孔內(nèi)設(shè)置兩冰袋。通過設(shè)置冰袋可以讓每個(gè)試劑保持在較低溫度，有效防止因?yàn)闇囟冗^高導(dǎo)致的試劑變形，另外個(gè)試劑瓶的合理擺放也可以保證試劑盒使用時(shí)取放的方便性。

進(jìn)一步，所述試劑瓶圓孔的口徑略大于試劑瓶口徑，此種設(shè)置可以防止試劑瓶在圓孔內(nèi)晃動(dòng)。

進(jìn)一步，所述兩個(gè)冰袋孔為細(xì)長(zhǎng)方孔，冰袋形狀與細(xì)長(zhǎng)孔相同，此種設(shè)置可以保證整個(gè)試劑盒溫度的均一性。

進(jìn)一步，硬質(zhì)海綿上的三個(gè)較大的圓孔朝外傾斜設(shè)置。此種設(shè)置可以保證較大的試劑瓶不會(huì)過高，影響盒蓋的扣合。

進(jìn)一步，各試劑瓶伸出圓孔的高度相同。

進(jìn)一步，所述硬質(zhì)海綿通過膠粘或熱塑方式固定于盒體內(nèi)，硬質(zhì)海綿的大小及深度與盒體相同。

進(jìn)一步，所述微孔板凹槽兩側(cè)設(shè)置方便取拿的弧形口?；⌒慰诘脑O(shè)置方便對(duì)微孔板的取放。

進(jìn)一步，所述冰袋孔上還設(shè)置與孔大小相同的硬質(zhì)海綿覆蓋，海綿覆蓋的設(shè)置可以防止冰袋融化后脫出。

進(jìn)一步，所述硬質(zhì)海綿覆蓋上設(shè)置可收回的提鉤。提鉤的設(shè)置方便海綿覆蓋的取蓋。

進(jìn)一步，所述硬質(zhì)海綿的微孔板凹槽正下方設(shè)置一個(gè)空腔，空腔的設(shè)置可以進(jìn)一步保證所有試劑瓶所處溫度的均一性，防止硬質(zhì)海綿形成實(shí)體對(duì)溫度傳輸造成干擾。

進(jìn)一步，所述盒體與盒蓋通過摩擦力較大的轉(zhuǎn)軸連接，非轉(zhuǎn)軸一側(cè)設(shè)置卡扣。

進(jìn)一步，盒蓋扣合后，盒蓋頂貼近各試劑瓶，此種設(shè)置可以有效防止試劑瓶在試劑盒內(nèi)晃動(dòng)。

本實(shí)用新型的有益效果為：

試劑盒內(nèi)設(shè)計(jì)冰袋可以有效減少運(yùn)輸及使用過程中因溫度過高造成的試劑失效的發(fā)生，盒體內(nèi)各試劑瓶布局合理，有效節(jié)省所述盒體內(nèi)部空間，使得單個(gè)試劑盒的體積得到壓縮，降低了試劑盒的運(yùn)輸成本。

附圖說明

圖1為本實(shí)用新型整體結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為本實(shí)用新型不帶各試劑瓶、微孔板及冰袋整體結(jié)構(gòu)示意圖；

圖3為本實(shí)用新型硬質(zhì)海綿結(jié)構(gòu)示意圖；

圖4本實(shí)用新型不帶各試劑瓶、微孔板及冰袋的硬質(zhì)海綿結(jié)構(gòu)示意圖；

圖5為本實(shí)用新型硬質(zhì)海綿剖視結(jié)構(gòu)示意圖；

圖6為本實(shí)用新型各試劑瓶、微孔板及冰袋擺放結(jié)構(gòu)示意圖；

圖中，1、盒體；2、盒蓋；3、硬質(zhì)海綿；31、96微孔板；32、凹槽；33、弧形口；41、緩沖液試劑瓶圓孔；42、緩沖液試劑瓶；43、增強(qiáng)液試劑瓶圓孔；44、增強(qiáng)液試劑瓶；45、濃縮清洗液試劑瓶圓孔；46、濃縮清洗液試劑瓶；51、Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶圓孔；52、Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶；53、stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶圓孔；54、stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶；61、冰袋孔；62、冰袋；63、海綿覆蓋；64、提鉤；7、空腔；8、轉(zhuǎn)軸；9、突起結(jié)構(gòu)。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1一種I型志賀毒素時(shí)間分辨熒光免疫檢測(cè)試劑盒

一種I型志賀毒素時(shí)間分辨熒光免疫檢測(cè)試劑盒，包括盒體1，盒蓋2，其中盒體1內(nèi)設(shè)置一帶孔硬質(zhì)海綿3，硬質(zhì)海綿3上部中央設(shè)置一個(gè)抗stxI單克隆抗體包被的96微孔板31凹槽32；硬質(zhì)海綿3上下兩側(cè)邊緣設(shè)置兩個(gè)冰袋孔61；凹槽32上下兩側(cè)分別水平設(shè)置3個(gè)stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶圓孔53；凹槽32左右兩側(cè)，一側(cè)設(shè)置一個(gè)Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶圓孔51；另一側(cè)設(shè)置三個(gè)較大的圓孔，分別為增強(qiáng)液試劑瓶圓孔43，濃縮清洗液試劑瓶圓孔45，緩沖液試劑瓶圓孔41。凹槽32內(nèi)設(shè)置包被有stxI單克隆抗體的微孔板31；各孔內(nèi)對(duì)應(yīng)放置相應(yīng)物品，具體為：冰袋孔61內(nèi)設(shè)置冰袋62，凹槽32內(nèi)設(shè)置96微孔板31；stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶圓孔53內(nèi)設(shè)置stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶54；Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶圓孔51設(shè)置Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶52；增強(qiáng)液試劑瓶圓孔43內(nèi)設(shè)置增強(qiáng)液試劑瓶44；濃縮清洗液試劑瓶圓孔45內(nèi)設(shè)置濃縮清洗液試劑瓶46；緩沖液試劑瓶圓孔41設(shè)置緩沖液試劑瓶42。通過設(shè)置冰袋62可以讓每個(gè)試劑保持在較低溫度，有效防止因?yàn)闇囟冗^高導(dǎo)致的試劑變形，另外各試劑瓶的合理擺放也可以保證試劑盒使用時(shí)取放的方便性。

試劑瓶圓孔的口徑略大于試劑瓶口徑，此種設(shè)置可以防止試劑瓶在圓孔內(nèi)晃動(dòng)。兩個(gè)冰袋孔61為細(xì)長(zhǎng)方孔，冰袋62形狀與細(xì)長(zhǎng)孔相同，此種設(shè)置可以保證整個(gè)試劑盒溫度的均一性。硬質(zhì)海綿3上的三個(gè)較大的圓孔朝外傾斜設(shè)置。此種設(shè)置可以保證較大的試劑瓶不會(huì)過高，影響盒蓋2的扣合。各試劑瓶伸出圓孔的高度相同。

硬質(zhì)海綿3通過膠粘方式固定于盒體1內(nèi)，硬質(zhì)海綿3的大小及深度與盒體1相同。

微孔板31凹槽32兩側(cè)設(shè)置方便取拿的弧形口33?；⌒慰?3的設(shè)置方便對(duì)微孔板31的取放。

盒體1與盒蓋2通過摩擦力較大的轉(zhuǎn)軸8連接，非轉(zhuǎn)軸一側(cè)設(shè)置卡扣，卡扣結(jié)構(gòu)對(duì)應(yīng)設(shè)置在盒體1與盒蓋2上的突起結(jié)構(gòu)9。盒蓋2扣合后，盒蓋2頂貼近各試劑瓶，此種設(shè)置可以有效防止試劑瓶在試劑盒內(nèi)晃動(dòng)。

實(shí)施例2一種I型志賀毒素時(shí)間分辨熒光免疫檢測(cè)試劑盒

一種I型志賀毒素時(shí)間分辨熒光免疫檢測(cè)試劑盒，包括盒體1，盒蓋2，其中盒體1內(nèi)設(shè)置一帶孔硬質(zhì)海綿3，硬質(zhì)海綿3上部中央設(shè)置一個(gè)抗stxI單克隆抗體包被的96微孔板31凹槽32；硬質(zhì)海綿3上下兩側(cè)邊緣設(shè)置兩個(gè)冰袋孔61；凹槽32上下兩側(cè)分別水平設(shè)置3個(gè)stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶圓孔53；凹槽32左右兩側(cè)，一側(cè)設(shè)置一個(gè)Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶圓孔51；另一側(cè)設(shè)置三個(gè)較大的圓孔，分別為增強(qiáng)液試劑瓶圓孔43，濃縮清洗液試劑瓶圓孔45，緩沖液試劑瓶圓孔41。凹槽32內(nèi)設(shè)置包被有stxI單克隆抗體的微孔板31；各孔內(nèi)對(duì)應(yīng)放置相應(yīng)物品，具體為：冰袋孔61內(nèi)設(shè)置冰袋62，凹槽32內(nèi)設(shè)置96微孔板31；stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶圓孔53內(nèi)設(shè)置stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶54；Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶圓孔51設(shè)置Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶52；增強(qiáng)液試劑瓶圓孔43內(nèi)設(shè)置增強(qiáng)液試劑瓶44；濃縮清洗液試劑瓶圓孔45內(nèi)設(shè)置濃縮清洗液試劑瓶46；緩沖液試劑瓶圓孔41設(shè)置緩沖液試劑瓶42。通過設(shè)置冰袋62可以讓每個(gè)試劑保持在較低溫度，有效防止因?yàn)闇囟冗^高導(dǎo)致的試劑變形，另外各試劑瓶的合理擺放也可以保證試劑盒使用時(shí)取放的方便性。

試劑瓶圓孔的口徑略大于試劑瓶口徑，此種設(shè)置可以防止試劑瓶在圓孔內(nèi)晃動(dòng)。兩個(gè)冰袋孔61為細(xì)長(zhǎng)方孔，冰袋62形狀與細(xì)長(zhǎng)孔相同，此種設(shè)置可以保證整個(gè)試劑盒溫度的均一性。硬質(zhì)海綿3上的三個(gè)較大的圓孔朝外傾斜設(shè)置。此種設(shè)置可以保證較大的試劑瓶不會(huì)過高，影響盒蓋2的扣合。各試劑瓶伸出圓孔的高度相同。

硬質(zhì)海綿3通過膠粘方式固定于盒體1內(nèi)，硬質(zhì)海綿3的大小及深度與盒體1相同。

微孔板31凹槽32兩側(cè)設(shè)置方便取拿的弧形口33?；⌒慰?3的設(shè)置方便對(duì)微孔板31的取放。冰袋孔61上還設(shè)置與孔大小相同的硬質(zhì)海綿3覆蓋，海綿覆蓋63的設(shè)置可以防止冰袋62融化后脫出。硬質(zhì)海綿3覆蓋上設(shè)置可收回的提鉤64。提鉤64的設(shè)置方便海綿覆蓋63的取蓋。盒體1與盒蓋2通過摩擦力較大的轉(zhuǎn)軸8連接，非轉(zhuǎn)軸一側(cè)設(shè)置卡扣，卡扣結(jié)構(gòu)對(duì)應(yīng)設(shè)置在盒體1與盒蓋2上的突起結(jié)構(gòu)9。盒蓋2扣合后，盒蓋2頂貼近各試劑瓶，此種設(shè)置可以有效防止試劑瓶在試劑盒內(nèi)晃動(dòng)。

實(shí)施例3一種I型志賀毒素時(shí)間分辨熒光免疫檢測(cè)試劑盒

一種I型志賀毒素時(shí)間分辨熒光免疫檢測(cè)試劑盒，包括盒體1，盒蓋2，其中盒體1內(nèi)設(shè)置一帶孔硬質(zhì)海綿3，硬質(zhì)海綿3上部中央設(shè)置一個(gè)抗stxI單克隆抗體包被的96微孔板31凹槽32；硬質(zhì)海綿3上下兩側(cè)邊緣設(shè)置兩個(gè)冰袋孔61；凹槽32上下兩側(cè)分別水平設(shè)置3個(gè)stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶圓孔53；凹槽32左右兩側(cè)，一側(cè)設(shè)置一個(gè)Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶圓孔51；另一側(cè)設(shè)置三個(gè)較大的圓孔，分別為增強(qiáng)液試劑瓶圓孔43，濃縮清洗液試劑瓶圓孔45，緩沖液試劑瓶圓孔41。凹槽32內(nèi)設(shè)置包被有stxI單克隆抗體的微孔板31；各孔內(nèi)對(duì)應(yīng)放置相應(yīng)物品，具體為：冰袋孔61內(nèi)設(shè)置冰袋62，凹槽32內(nèi)設(shè)置96微孔板31；stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶圓孔53內(nèi)設(shè)置stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶54；Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶圓孔51設(shè)置Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶52；增強(qiáng)液試劑瓶圓孔43內(nèi)設(shè)置增強(qiáng)液試劑瓶44；濃縮清洗液試劑瓶圓孔45內(nèi)設(shè)置濃縮清洗液試劑瓶46；緩沖液試劑瓶圓孔41設(shè)置緩沖液試劑瓶42。通過設(shè)置冰袋62可以讓每個(gè)試劑保持在較低溫度，有效防止因?yàn)闇囟冗^高導(dǎo)致的試劑變形，另外各試劑瓶的合理擺放也可以保證試劑盒使用時(shí)取放的方便性。

試劑瓶圓孔的口徑略大于試劑瓶口徑，此種設(shè)置可以防止試劑瓶在圓孔內(nèi)晃動(dòng)。兩個(gè)冰袋孔61為細(xì)長(zhǎng)方孔，冰袋62形狀與細(xì)長(zhǎng)孔相同，此種設(shè)置可以保證整個(gè)試劑盒溫度的均一性。硬質(zhì)海綿3上的三個(gè)較大的圓孔朝外傾斜設(shè)置。此種設(shè)置可以保證較大的試劑瓶不會(huì)過高，影響盒蓋2的扣合。各試劑瓶伸出圓孔的高度相同。

硬質(zhì)海綿3通過熱塑方式固定于盒體1內(nèi)，硬質(zhì)海綿3的大小及深度與盒體1相同。微孔板31凹槽32兩側(cè)設(shè)置方便取拿的弧形口33?；⌒慰?3的設(shè)置方便對(duì)微孔板31的取放。冰袋孔61上還設(shè)置與孔大小相同的硬質(zhì)海綿3覆蓋，海綿覆蓋63的設(shè)置可以防止冰袋62融化后脫出。硬質(zhì)海綿3覆蓋上設(shè)置可收回的提鉤64。提鉤64的設(shè)置方便海綿覆蓋63的取蓋。硬質(zhì)海綿3的微孔板31凹槽32正下方設(shè)置一個(gè)空腔7，空腔7的設(shè)置可以進(jìn)一步保證所有試劑瓶所處溫度的均一性，防止硬質(zhì)海綿3形成實(shí)體對(duì)溫度傳輸造成的干擾。盒體1與盒蓋2通過摩擦力較大的轉(zhuǎn)軸8連接，非轉(zhuǎn)軸一側(cè)設(shè)置卡扣，卡扣結(jié)構(gòu)對(duì)應(yīng)設(shè)置在盒體1與盒蓋2上的突起結(jié)構(gòu)9。盒蓋2扣合后，盒蓋2頂貼近各試劑瓶，此種設(shè)置可以有效防止試劑瓶在試劑盒內(nèi)晃動(dòng)。

實(shí)施例4 stxI TRFIA樣品測(cè)定

(1)試劑的準(zhǔn)備

a、銪標(biāo)記stxI單克隆抗體凍干粉：使用前將凍干品置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)平衡至室溫，溶解于1ml蒸餾水中。

b、根據(jù)待測(cè)樣品的數(shù)量選擇相應(yīng)的抗體反應(yīng)板條，同樣在使用前平衡至室溫。

c、洗滌液：將濃縮洗板液用蒸餾水1：25倍稀釋，作為工作洗滌液。

d、銪標(biāo)記stxI單克隆抗體的稀釋：在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)內(nèi)根據(jù)樣品量以緩沖液按1：300的比例進(jìn)行稀釋。

(2)試驗(yàn)步驟

a、取反應(yīng)微孔板，靜置平衡至室溫，從第一孔，即A1孔開始，每孔依次加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品(共6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)，建議做復(fù)孔以保證標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性)。在標(biāo)準(zhǔn)品后依次加入50μl樣品(建議采用雙孔測(cè)量)。

b、加完標(biāo)準(zhǔn)品及樣本之后，每孔加入150μl緩沖液，25℃，300轉(zhuǎn)/分鐘振蕩孵育1小時(shí)，工作洗滌液沖洗5次。

c、每孔依次加入已經(jīng)用反應(yīng)緩沖液稀釋300倍的銪標(biāo)記單克隆抗體200μl，25℃，300轉(zhuǎn)/分鐘振蕩孵育1小時(shí)，工作洗滌液沖洗5次。

d、每孔加入增強(qiáng)液200μl，25℃靜置孵育5分鐘后測(cè)量。

e、待測(cè)試運(yùn)行結(jié)束后，退出樣本，收回所用試劑于2～8℃放置。所用抗體反應(yīng)板條取出后棄去，切勿重復(fù)使用。

結(jié)果處理：根據(jù)已知stxI濃度的系列參考標(biāo)準(zhǔn)品的相應(yīng)發(fā)光強(qiáng)度cps可得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過雙對(duì)數(shù)數(shù)學(xué)模型回歸處理得到回歸直線，待測(cè)樣品的stxI濃度可以通過其相應(yīng)發(fā)光強(qiáng)度cps從回歸直線上反算出來(表1)。

表1 stxI濃度的系列參考標(biāo)準(zhǔn)品的熒光值

本實(shí)用新型所述實(shí)施例是指導(dǎo)性的，而并非對(duì)實(shí)施方式的限定，只是幫助理解本實(shí)用新型，因此本實(shí)用新型并不限于具體實(shí)施方式中所述的實(shí)施例，凡是由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本實(shí)用新型的技術(shù)方案得出的其他具體實(shí)施方式，同樣屬于本實(shí)用新型保護(hù)的范圍。