本實用新型涉及生物技術(shù)診斷領(lǐng)域，具體涉及一種用于術(shù)后病人監(jiān)測的多指標(biāo)時間分辨熒光免疫層析試劑盒。

背景技術(shù)：

病人手術(shù)后并發(fā)癥較多，輕者有發(fā)熱、心率增快、氣短、食欲不振、惡心、白細胞增高，重者可出現(xiàn)血壓低、呼吸困難、少尿、昏迷甚至死亡。手術(shù)創(chuàng)傷、滲出增多、心臟內(nèi)異物的植入、抗菌素應(yīng)用不當(dāng)、手術(shù)后免疫力下降等因素，均易導(dǎo)致手術(shù)部位或其他部位的感染。急性腎功能衰竭是心臟術(shù)后的一個嚴(yán)重并發(fā)癥，可高達30%，一旦發(fā)生急性腎功能衰竭，患者術(shù)后死亡率即急劇升高,可達60%。尤其是術(shù)后低血壓，時間長了很容易發(fā)生急性腎衰，初期表現(xiàn)為少尿，無尿，隨之血肌酐，尿素氮逐漸上升，出現(xiàn)高鉀血癥、水負荷過重，如不及時處理，往往會使心功能進一步衰竭，出現(xiàn)肺水腫，病情十分兇險。

降鈣素原(Procalcitonin,PCT)為降鈣素CT的前體物質(zhì)，是一種無激素活性糖蛋白，由116個氨基酸組成，分子量13kD，由N末端-降鈣素-C末端三部分組成，其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定不受體內(nèi)激素水平的影響。PCT作為一種臨床感染標(biāo)志物，在全身性細菌感染患者和膿毒癥患者血清中含量迅速升高，與炎癥的嚴(yán)重程度成正比，在系統(tǒng)炎癥反應(yīng)綜合征、膿毒癥、嚴(yán)重膿毒癥及膿毒癥休克病人中PCT濃度有明顯差異。PCT可在感染2小時后檢測到，在感染后12-24小時達到高峰，不受臨床用藥影響，對于系統(tǒng)性細菌感染和膿毒癥等具有高度敏感性和特異性。臨床研究表明，PCT檢測在不同醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)Χ喾N疾病的診斷和治療有很高的價值，它是區(qū)別細菌和非細菌性感染的重要標(biāo)志物。研究指出，心臟術(shù)后早期發(fā)生并發(fā)癥患者術(shù)后24h、48h、72h的PCT濃度高于術(shù)后無并發(fā)癥患者。PCT是一種早期的、敏感性和特異性極佳的高危監(jiān)測指標(biāo)；測定PCT有助于臨床甄別心臟術(shù)后感染的高危患者。

中性粒細胞明膠酶相關(guān)性脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)是一種小分子量分泌型蛋白，由Kjeldsedn等人于1993年發(fā)現(xiàn)，是Lipocalin家族的新成員。生理條件下，NCAL少量合成于骨髓中性粒細胞和腎小管等多個系統(tǒng)的上皮細胞，炎癥反應(yīng)和惡性腫瘤可誘使其在多組織(如子宮、前列腺、唾液腺、肺、腎、氣道及消化道上皮等)中大量生成，幾個小時內(nèi)就可以達到峰值，產(chǎn)生速度明顯快于其它相關(guān)生物標(biāo)記物。NGAL在急性腎小管損傷早期就已經(jīng)表達，反映腎小管功能紊亂，它濃度的升高提示腎小管損傷發(fā)生，而傳統(tǒng)指標(biāo)血肌酐升高則需24小時以上。Mishra等對20例心臟分流術(shù)后發(fā)生急性腎損傷的兒童研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)以50ug/l作為診斷分界值時，尿NGAL檢出急性腎損傷的敏感性和特異性分別為100%和98%，受試者工作特征（ROC）曲線下面積為99.8%。Dent等在對120例行體外循環(huán)手術(shù)的兒童血漿NGAL監(jiān)測后發(fā)現(xiàn)，若發(fā)生急性腎損傷，血NGAL在術(shù)后2h即可升高3倍，而血清肌酐在術(shù)后2-3天升高。NGAL是目前早期AKI診斷的生物標(biāo)志物。

NT-proBNP（N末端腦鈉肽），是BNP前體(proBNP) 被內(nèi)肽酶切割后的產(chǎn)物，含N端76個氨基酸。當(dāng)發(fā)生心力衰竭時，BNP釋放到血液中，隨后降解為NT-proBNP和BNP，檢測血液中NT-proBNP和BNP的含量，可監(jiān)測心力衰竭的程度。由于 NT-proBNP的半衰期較長(120min)，體外穩(wěn)定性強，在心力衰竭患者中的濃度較BNP高，更有利于心力衰竭的診斷，因此NT-proBNP作為心力衰竭診斷的敏感指標(biāo)，并評估心功能損害嚴(yán)重程度。2002年美國FDA批準(zhǔn)Roche公司的ElecsysproBNP上市，檢測血液中的NT-proBNP。美國心臟協(xié)會(AHA)、美國臨床生化學(xué)院(NACP)制定的“心衰診斷和治療指南”及“心臟標(biāo)志物的應(yīng)用指南”中，把NT-proBNP作為心力衰竭的診斷和預(yù)后指標(biāo)。

目前檢測PCT、NGAL或者NT-proBNP的診斷產(chǎn)品均以不同形式在臨床上應(yīng)用，制作原理及操作程序各不相同，兼容性比較差，很難在短時間內(nèi)同時、快速地檢測出三者的結(jié)果，極大地影響了對患者的心腎功能和感染的及時診斷，從而造成很多病人因延誤救治而病情惡化甚至導(dǎo)致死亡。本實用新型試劑盒可以實現(xiàn)炎癥、心衰、腎衰的同步、快速、準(zhǔn)確的檢測。

此外，現(xiàn)有技術(shù)中用于術(shù)后病人監(jiān)測的試劑盒的檢測卡通常由上樣墊、結(jié)合墊、具有檢測線和質(zhì)控線的檢測墊及吸樣墊組成，該種檢測卡只適于血清樣品，而血漿和全血樣品不能來檢測，必須經(jīng)離心處理后方能檢測，限制影響了即時檢測的方便性。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本實用新型所要解決的技術(shù)問題是提供一種用于術(shù)后病人監(jiān)測的多指標(biāo)時間分辨熒光免疫層析試劑盒，可同時快速定量檢測鈣素原、中性粒細胞明膠酶相關(guān)性脂質(zhì)運載蛋白和N末端腦鈉肽三個指標(biāo)。

為解決以上技術(shù)問題，本實用新型提供的一種用于術(shù)后病人監(jiān)測的多指標(biāo)時間分辨熒光免疫層析試劑盒方案如下：試劑盒包括檢測卡和可選擇的熒光免疫定量分析儀，檢測卡包括上樣墊、結(jié)合墊、具有檢測線和質(zhì)控線的檢測墊、吸樣墊及底板，檢測指標(biāo)包括降鈣素原（PCT）、中性粒細胞明膠酶相關(guān)性脂質(zhì)運載蛋白（NGAL）和N末端腦鈉肽（NT-proBNP），結(jié)合墊包括結(jié)合墊本體和涂覆于結(jié)合墊本體上的時間分辨熒光微球標(biāo)記抗體涂層，該時間分辨熒光微球標(biāo)記抗體涂層中的抗體為所述指標(biāo)的抗體；檢測線有三條，這三條檢測線相互分離且分別為能夠與時間分辨熒光微球標(biāo)記抗體特異性結(jié)合的配對抗體或抗原形成的涂層。

根據(jù)本實用新型的一個方面，檢測墊上包被有分別與PCT、NGAL、NT-proBNP相對應(yīng)的單克隆抗體、多克隆抗體，或相應(yīng)的抗原構(gòu)成的檢測線和羊抗鼠IgG、羊抗雞IgY或羊抗兔IgG等抗體構(gòu)成的質(zhì)控線。

本實用新型還提供一種用于術(shù)后病人監(jiān)測的多指標(biāo)時間分辨熒光免疫層析試劑盒的方案，該試劑盒包括檢測卡和可選擇的熒光免疫定量分析儀，檢測卡包括上樣墊、結(jié)合墊、具有檢測線和質(zhì)控線的檢測墊、吸樣墊及底板，指標(biāo)包括降鈣素原、中性粒細胞明膠酶相關(guān)性脂質(zhì)運載蛋白和N末端腦鈉肽，試劑盒還包括熒光標(biāo)記抗體溶液，其中時間分辨熒光微球標(biāo)記抗體涂層中的抗體為所述指標(biāo)的抗體；檢測線有三條，這三條檢測線相互分離且分別為能夠與時間分辨熒光微球標(biāo)記抗體特異性結(jié)合的配對抗體或抗原形成的涂層。

根據(jù)本實用新型的一個具體方面，檢測卡由上樣墊、結(jié)合墊、檢測墊及吸樣墊依次相互交錯粘貼在底板上構(gòu)成。

根據(jù)本實用新型的一個優(yōu)選方面，檢測卡還包括濾血膜，濾血膜覆設(shè)在上樣墊上，上樣墊、結(jié)合墊、檢測墊及吸樣墊依次相互交錯粘貼在底板上。

根據(jù)本實用新型的又一優(yōu)選方面，檢測卡還包括助推墊，且檢測卡由上樣墊、結(jié)合墊、助推墊、檢測墊及吸樣墊依次相互交錯粘貼在底板上構(gòu)成。

根據(jù)本實用新型的還一優(yōu)選方面，檢測卡還包括濾血膜和助推墊，濾血膜覆設(shè)在上樣墊上，上樣墊、結(jié)合墊、助推墊、檢測墊及吸樣墊依次相互交錯粘貼在底板上。

優(yōu)選地，助推墊的材質(zhì)為玻璃纖維素膜或無紡布。

根據(jù)本實用新型的一個優(yōu)選方面，所述檢測墊僅有一條，所述三條檢測線、質(zhì)控線相互平行且沿著所述檢測墊的長度方向依次設(shè)置在所述檢測墊上。

進一步地，三條檢測線中靠近結(jié)合墊的檢測線為降鈣素原的配對抗體或抗原涂層，靠近吸樣墊的檢測線為N末端腦鈉肽的配對抗體或抗原涂層，中間的檢測線為中性粒細胞明膠酶相關(guān)性脂質(zhì)運載蛋白的配對抗體或抗原涂層，質(zhì)控線位于檢測墊的靠近吸樣墊的端部。

根據(jù)本實用新型的又一優(yōu)選方面，所述檢測墊包括三條檢測分墊，所述三條檢測線分別分布在三條檢測分墊上。在各檢測分墊上分別設(shè)置有質(zhì)控線。PCT、NGAL、NT-proBNP相對應(yīng)的單克隆抗體、多克隆抗體，或相應(yīng)的抗原分別包被在三條檢測墊上，每條檢測墊上平行設(shè)置質(zhì)控線，包被包括但不限于羊抗鼠IgG、羊抗雞IgY或羊抗兔IgG抗體，或僅對結(jié)合墊經(jīng)過玻纖處理液處理，制備包含熒光微球標(biāo)記的PCT單克隆抗體、熒光微球標(biāo)記的NGAL單克隆抗體和熒光微球標(biāo)記的NT-proBNP單克隆抗體的熒光液。

根據(jù)本實用新型的又一優(yōu)選方面，檢測卡包括三個獨立的檢測分卡，上樣墊、結(jié)合墊、吸樣墊和底板分別有三條，每一條上樣墊、結(jié)合墊、檢測分墊、吸樣墊和底板組裝成一個檢測分卡。

優(yōu)選地，質(zhì)控線通過包被包括但不限于羊抗鼠IgG、羊抗雞IgY或羊抗兔IgG等形成。

優(yōu)選地，檢測墊為硝酸纖維素膜且為孔徑5～12um的多孔樣結(jié)構(gòu)膜；上樣墊、結(jié)合墊的材質(zhì)為玻璃纖維素膜或無紡布，吸樣墊的材質(zhì)為吸水濾紙。

熒光微球時間分辨技術(shù)和免疫層析檢測技術(shù)是已知的。本實用新型所述的時間分辨熒光微球標(biāo)記抗體可采用本領(lǐng)域熟知的方法制備。

由于以上技術(shù)方案的實施，本實用新型與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點：

本實用新型試劑盒包括快速檢測炎癥、腎衰和心衰的三聯(lián)檢測卡，其采用PCT、NGAL、NT-proBNP三種標(biāo)記物，可有效的同時監(jiān)測心臟手術(shù)后炎癥、腎衰和心衰的風(fēng)險。該試劑盒診斷靈敏度高、特異性強，臨床監(jiān)測的準(zhǔn)確率高達95％以上，使術(shù)后病人炎癥、腎衰和心衰的即時監(jiān)測成為可能，及時阻止病人的病情惡化。

進一步地，本實用新型試劑盒通過增加濾血膜，適用于全血檢測，便于病人出院后在社區(qū)衛(wèi)生機構(gòu)進行心腎功能和感染檢測，減輕去醫(yī)院掛號、排隊、化驗、取報告等繁瑣過程，減輕公共醫(yī)療機構(gòu)的壓力，更有益于患者的日常監(jiān)測。

進一步地，本實用新型在結(jié)構(gòu)上增加了助推墊，可以有效的去除背景干擾，從而進一步提高診斷靈敏度高和準(zhǔn)確度，此外助推墊還有助于加快檢測樣品流動，提高檢測效率，縮短檢測時間。

附圖說明

圖1為根據(jù)本實用新型的實施例1的檢測卡的主視結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為根據(jù)本實用新型的實施例2的檢測卡的主視結(jié)構(gòu)示意圖；

圖3為根據(jù)本實用新型的實施例3的檢測卡的立體結(jié)構(gòu)示意圖；

圖4為根據(jù)本實用新型的實施例4的檢測分卡的主視結(jié)構(gòu)示意圖（含T1檢測線）；

圖5為根據(jù)本實用新型的實施例4的檢測分卡的主視結(jié)構(gòu)示意圖（含T2檢測線）；

圖6為根據(jù)本實用新型的實施例4的檢測分卡的主視結(jié)構(gòu)示意圖（含T3檢測線）；

其中：1,1’,1”、上樣墊；2,2’,2”、膠體金結(jié)合墊；20,20’,20”、結(jié)合墊本體；21,21’,21”、膠體金標(biāo)記抗體涂層；3、檢測墊；30,30’,30”、檢測分墊；4,4’,4”、吸樣墊；5,5’,5”、底板；6,6’,6”、濾血膜；7,7’,7”、助推墊；T1,T2,T3、檢測線；C,C’,C”、質(zhì)控線。

具體實施方式

實施例1

如圖1所示，用于術(shù)后病人監(jiān)測的多指標(biāo)時間分辨熒光免疫層析試劑盒，其包括檢測卡、熒光免疫定量分析儀，檢測卡包括上樣墊1、結(jié)合墊2、具有檢測線和質(zhì)控線C的檢測墊3、吸樣墊4及底板5、濾血膜6和助推墊7，濾血膜6覆設(shè)在上樣墊1上，上樣墊1、結(jié)合墊2、檢測墊3及吸樣墊4依次相互交錯粘貼在底板5上。其中，助推墊7的材質(zhì)為玻璃纖維素膜或無紡布。檢測墊3為硝酸纖維素膜且為孔徑5～12um的多孔樣結(jié)構(gòu)膜；上樣墊1、結(jié)合墊2的材質(zhì)為玻璃纖維素膜或無紡布，吸樣墊4的材質(zhì)為吸水濾紙。

進一步地，檢測卡能夠同時檢測降鈣素原、中性粒細胞明膠酶相關(guān)性脂質(zhì)運載蛋白和N末端腦鈉肽三種指標(biāo)，結(jié)合墊2包括結(jié)合墊本體20和涂覆于結(jié)合墊本體20上的時間分辨熒光微球標(biāo)記抗體涂層21，該時間分辨熒光微球標(biāo)記抗體涂層21中的抗體為所述指標(biāo)的抗體。該檢測墊3為一個，其上有三條檢測線T1、T2、T3，這三條檢測線T1、T2、T3相互分離且分別為三種標(biāo)志物的配對抗體或抗原形成的涂層，三種標(biāo)志物的配對抗體或抗原分別能夠與時間分辨熒光微球標(biāo)記抗體涂層特異性結(jié)合。三條檢測線T1、T2、T3、質(zhì)控線C相互平行且沿著檢測墊3的長度方向依次設(shè)置。三條檢測線T1、T2、T3中靠近結(jié)合墊2的檢測線T1為降鈣素原的配對抗體或抗原涂層，靠近吸樣墊4的檢測線T3為N末端腦鈉肽的配對抗體或抗原涂層，中間的檢測線T2為中性粒細胞明膠酶相關(guān)性脂質(zhì)運載蛋白的配對抗體或抗原涂層，質(zhì)控線C位于檢測墊3的靠近吸樣墊4的端部。質(zhì)控線C通過包被包括但不限于羊抗鼠IgG、羊抗雞IgY或羊抗兔IgG等形成。

本例中的各部件是這樣組裝到一起的，在干燥室內(nèi)，溫度20～25℃，濕度小于40％，取底板5，在底板5上順次粘結(jié)上樣墊1、結(jié)合墊2、助推墊7、檢測墊3和吸樣墊4，各部分依次與且僅與相鄰部位相接觸且部分重疊，將已包被的檢測墊3放置在底板5的中部粘貼，將結(jié)合墊裁切成合適的寬度，在檢測墊3靠近檢測線一側(cè)搭接助推墊7，將結(jié)合墊2裁切成合適的寬度，粘貼在助推墊7的1/4處，在結(jié)合墊2另一側(cè)搭接粘貼上樣墊1，搭結(jié)合墊2的1/3粘貼；濾血膜6覆蓋粘貼在上樣墊1上；在檢測墊3的靠近質(zhì)控線一側(cè)搭接吸樣墊4，搭吸樣墊4的1/10粘貼。最后用裁剪機將貼好的底板切成3～5mm寬的試紙條，裝入塑料卡內(nèi)即形成檢測卡。

本例試劑盒的檢測方法如下（干法上樣）：

(1)將檢測試劑及樣本平衡至室溫，取出檢測卡，平放；

(2)吸取待測樣本，加入潔凈的離心管中，用樣本稀釋液進行稀釋，充分混勻；

(3)用移液槍吸取稀釋后的樣本加入到上樣墊1的樣本孔中，15分鐘后，根據(jù)已預(yù)先設(shè)置在時間分辨熒光免疫定量讀數(shù)儀的標(biāo)準(zhǔn)曲線對PCT、NGAL和BNP的濃度進行計算并顯示結(jié)果。

本例檢測卡的檢測原理如下：

當(dāng)樣本加入到樣品孔后，樣本中含有的PCT、NGAL或NT-proBNP抗原與熒光微球標(biāo)記的PCT、NGAL或 NT-proBNP抗體結(jié)合，借助毛細管作用，所形成的抗體-抗原免疫復(fù)合物沿硝酸纖維素膜層析至檢測線，然后與固化在檢測線上的PCT、NGAL和NT-pro BNP抗體發(fā)生高特異性和高親和性的免疫反應(yīng) , 因而免疫復(fù)合物被富集或截留在層析材料的檢測帶上 , 未結(jié)合的免疫復(fù)合物則繼續(xù)層析至質(zhì)控線被羊抗鼠IgG、羊抗雞IgY或羊抗兔IgG抗體捕獲。反應(yīng)完成后 , 檢測帶上Eu ^{3 +}螯合物的含量與目標(biāo)被檢物的濃度有一定的對應(yīng)關(guān)系 。如果待測樣品溶液中不含被檢物 , 則檢測帶上就沒有Eu ^{3 +}螯合物 。由于鑭系離子螯合物的熒光衰變時間長，為傳統(tǒng)熒光的10³—10⁶倍。用時間分辨熒光儀測量其熒光時，在脈沖光源激發(fā)之后，可以延遲一段時間再進行測量，此時其他成分的短半衰期熒光已經(jīng)衰變，只存在Eu³⁺標(biāo)記物的特異性熒光，通過測量免疫反應(yīng)后試紙條檢測帶上 Eu ^{3 +}螯合物的含量 ,參照標(biāo)準(zhǔn)濃度曲線就可以定量得到待測樣品中對應(yīng)抗原的濃度。

當(dāng)反應(yīng)結(jié)束后，通過分析，根據(jù)已預(yù)先設(shè)置在時間分辨熒光免疫定量讀數(shù)儀內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)曲線對PCT、NGAL和NT-proBNP的濃度進行計算并顯示結(jié)果。

實施例2

如圖2所示，本例提供一種用于術(shù)后病人監(jiān)測的多指標(biāo)時間分辨熒光免疫層析試劑盒，其基本同實施例1，不同的是，其結(jié)合墊不具有時間分辨熒光微球標(biāo)記抗體涂層，試劑盒還進一步包括時間分辨熒光微球標(biāo)記抗體溶液。

本例試劑盒的檢測方法如下（濕法上樣）：

(1)將檢測試劑及樣本平衡至室溫，取出檢測卡，平放；

(2)吸取待測樣本，與時間分辨熒光微球標(biāo)記抗體溶液充分混合；

(3)用移液槍吸取混合液加入到上樣墊1的樣本孔中，15分鐘后，根據(jù)已預(yù)先設(shè)置在時間分辨熒光免疫定量讀數(shù)儀的標(biāo)準(zhǔn)曲線對PCT、NGAL和NT-proBNP的濃度進行計算并顯示結(jié)果。

實施例3

如圖3所示，本例提供一種用于術(shù)后病人監(jiān)測的多指標(biāo)時間分辨熒光免疫層析試劑盒，其基本同實施例1，不同的是，其檢測墊包括三個并排設(shè)置的檢測分墊30,30’,30”，每個檢測分墊30,30’,30”上分別形成一條檢測線T1,T2,T3和質(zhì)控線C,C’,C”。

本例試劑盒的制備、檢測及檢測原理同實施例1。

實施例4

如圖4、圖5、圖6所示，本例提供一種用于術(shù)后病人監(jiān)測的多指標(biāo)時間分辨熒光免疫層析試劑盒，其基本同實施例1，不同的是，檢測卡包括三個獨立的檢測分卡，濾血膜6,6’,6”、上樣墊1,1’,1”、結(jié)合墊2,2’,2”、助推墊7,7’,7”、檢測分墊30,30’,30”、吸樣墊4,4’,4”和底板5,5’,5”分別有三條，每一條濾血膜6,6’,6”、上樣墊1,1’,1”、結(jié)合墊2,2’,2”、助推墊7,7’,7”、檢測分墊30,30’,30”、吸樣墊4,4’,4”和底板5,5’,5”組裝成一個檢測分卡，每個檢測分卡上的檢測分墊30,30’,30”上分別形成一條檢測線T1,T2,T3和質(zhì)控線C,C’,C”。

本例試劑盒的制備、檢測及檢測原理同實施例1。

綜上，本實用新型建立了以血清、血漿或全血中PCT、NGAL、NT-proBNP為目的物的熒光微球時間分辨免疫層析檢測方法，結(jié)合了時間分辨熒光微球高靈敏度、高特異性和免疫層析技術(shù)可進行單份標(biāo)本檢測、簡便快速的優(yōu)勢, 可有效的同時監(jiān)測心臟手術(shù)后炎癥、腎衰和心衰的風(fēng)險，操作簡單，15 min 即可得出實驗結(jié)果；配套熒光檢測儀經(jīng)濟、小型，更加適合基層單位；既利于大規(guī)模臨床樣本普查篩選和患者病情的監(jiān)測，又可單人份操作。熒光微球時間分辨免疫層析作為一種靈敏、快速、經(jīng)濟、簡便的PCT、NGAL、NT-proBNP的檢測方法，具有非常好的推廣應(yīng)用價值。

本實用新型試劑盒通過增加濾血膜，適用于全血檢測，便于病人出院后在社區(qū)衛(wèi)生機構(gòu)進行心腎功能和感染檢測，減輕去醫(yī)院掛號、排隊、化驗、取報告等繁瑣過程，減輕公共醫(yī)療機構(gòu)的壓力，更有益于患者的日常監(jiān)測。

進一步地，本實用新型在結(jié)構(gòu)上增加了助推墊，可以有效的去除背景干擾，從而進一步提高診斷靈敏度和準(zhǔn)確度，此外助推墊還有助于加快檢測樣品流動，提高檢測效率，縮短檢測時間。

以上對本實用新型做了詳盡的描述，其目的在于讓熟悉此領(lǐng)域技術(shù)的人士能夠了解本實用新型的內(nèi)容并加以實施，并不能以此限制本實用新型的保護范圍，凡根據(jù)本實用新型的精神實質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本實用新型的保護范圍內(nèi)。