本實用新型涉及生物技術診斷領域，具體涉及一種可用于術后炎癥、急性腎衰和心衰的早期預警、治療過程和預后監(jiān)控的膠體金試劑盒。

背景技術：

病人手術后并發(fā)癥較多，輕者有發(fā)熱、心率增快、氣短、食欲不振、惡心、白細胞增高，重者可出現(xiàn)血壓低、呼吸困難、少尿、昏迷甚至死亡。手術創(chuàng)傷、滲出增多、心臟內(nèi)異物的植入、抗菌素應用不當、手術后免疫力下降等因素，均易導致手術部位或其他部位的感染。急性腎功能衰竭是心臟術后的一個嚴重并發(fā)癥，可高達30%，一旦發(fā)生急性腎功能衰竭，患者術后死亡率即急劇升高,可達60%。尤其是術后低血壓，時間長了很容易發(fā)生急性腎衰，初期表現(xiàn)為少尿，無尿，隨之血肌酐，尿素氮逐漸上升，出現(xiàn)高鉀血癥、水負荷過重，如不及時處理，往往會使心功能進一步衰竭，出現(xiàn)肺水腫，病情十分兇險。

降鈣素原(Procalcitonin,PCT)為降鈣素CT的前體物質(zhì)，是一種無激素活性糖蛋白，由116個氨基酸組成，分子量13kD，由N末端-降鈣素-C末端三部分組成，其結(jié)構穩(wěn)定不受體內(nèi)激素水平的影響。PCT作為一種臨床感染標志物，在全身性細菌感染患者和膿毒癥患者血清中含量迅速升高，與炎癥的嚴重程度成正比，在系統(tǒng)炎癥反應綜合征、膿毒癥、嚴重膿毒癥及膿毒癥休克病人中PCT濃度有明顯差異。PCT可在感染2小時后檢測到，在感染后12-24小時達到高峰，不受臨床用藥影響，對于系統(tǒng)性細菌感染和膿毒癥等具有高度敏感性和特異性。臨床研究表明，PCT檢測在不同醫(yī)學領域?qū)Χ喾N疾病的診斷和治療有很高的價值，它是區(qū)別細菌和非細菌性感染的重要標志物。研究指出，心臟術后早期發(fā)生并發(fā)癥患者術后24h、48h、72h的PCT濃度高于術后無并發(fā)癥患者。PCT是一種早期的、敏感性和特異性極佳的高危監(jiān)測指標；測定PCT有助于臨床甄別心臟術后感染的高?；颊摺?/p>

中性粒細胞明膠酶相關性脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)是一種小分子量分泌型蛋白，由Kjeldsedn等人于1993年發(fā)現(xiàn)，是Lipocalin家族的新成員。生理條件下，NCAL少量合成于骨髓中性粒細胞和腎小管等多個系統(tǒng)的上皮細胞，炎癥反應和惡性腫瘤可誘使其在多組織(如子宮、前列腺、唾液腺、肺、腎、氣道及消化道上皮等)中大量生成，幾個小時內(nèi)就可以達到峰值，產(chǎn)生速度明顯快于其它相關生物標記物。NGAL在急性腎小管損傷早期就已經(jīng)表達，反映腎小管功能紊亂，它濃度的升高提示腎小管損傷發(fā)生，而傳統(tǒng)指標血肌酐升高則需24小時以上。Mishra等對20例心臟分流術后發(fā)生急性腎損傷的兒童研究發(fā)現(xiàn)，當以50ug/l作為診斷分界值時，尿NGAL檢出急性腎損傷的敏感性和特異性分別為100%和98%，受試者工作特征（ROC）曲線下面積為99.8%。Dent等在對120例行體外循環(huán)手術的兒童血漿NGAL監(jiān)測后發(fā)現(xiàn)，若發(fā)生急性腎損傷，血NGAL在術后2h即可升高3倍，而血清肌酐在術后2-3天升高。NGAL是目前早期AKI診斷的生物標志物。

NT-proBNP(N末端腦鈉肽)，是BNP前體(proBNP) 被內(nèi)肽酶切割后的產(chǎn)物，含N端76個氨基酸。當發(fā)生心力衰竭時，BNP釋放到血液中，隨后降解為NT-proBNP和BNP，檢測血液中NT-proBNP和BNP的含量，可監(jiān)測心力衰竭的程度。由于 NT-proBNP的半衰期較長(120min)，體外穩(wěn)定性強，在心力衰竭患者中的濃度較BNP高，更有利于心力衰竭的診斷，因此NT-proBNP作為心力衰竭診斷的敏感指標，并評估心功能損害嚴重程度。2002年美國FDA批準Roche公司的ElecsysproBNP上市，檢測血液中的NT-proBNP。美國心臟協(xié)會(AHA)、美國臨床生化學院(NACP)制定的“心衰診斷和治療指南”及“心臟標志物的應用指南”中，把NT-proBNP作為心力衰竭的診斷和預后指標。

目前檢測PCT、NGAL或者NT-proBNP的診斷產(chǎn)品均以不同形式在臨床上應用，制作原理及操作程序各不相同，兼容性比較差，很難在短時間內(nèi)同時、快速地檢測出三者的結(jié)果，極大地影響了對患者的心腎功能和感染的及時診斷，從而造成很多病人因延誤救治而病情惡化甚至導致死亡。本實用新型的試劑盒則可以實現(xiàn)炎癥、心衰、腎衰的同步、快速、準確的檢測。

此外，現(xiàn)有技術中用于術后病人監(jiān)測的試劑盒的檢測卡通常由上樣墊、結(jié)合墊、具有檢測線和質(zhì)控線的承載膜及吸樣墊組成，該種檢測卡只適于血清樣品，而血漿和全血樣品不能用來檢測，必須經(jīng)離心處理后方能檢測，影響了即時檢測的方便性。

技術實現(xiàn)要素：

本實用新型所要解決的技術問題是提供一種用于術后病人監(jiān)測的多指標快速檢測膠體金試劑盒，可同時快速定量檢測鈣素原、中性粒細胞明膠酶相關性脂質(zhì)運載蛋白和N末端腦鈉肽三個指標。

為解決以上技術問題，本實用新型采用如下技術方案：

一種用于術后病人監(jiān)測的多指標快速檢測膠體金試劑盒，其包括檢測卡、比色卡和/或膠體金定量讀數(shù)儀，檢測卡包括上樣墊、膠體金結(jié)合墊、具有檢測線和質(zhì)控線的承載膜、吸樣墊及底板，所述指標包括降鈣素原（PCT）、中性粒細胞明膠酶相關性脂質(zhì)運載蛋白（NGAL）和N末端腦鈉肽（NT-proBNP），所述膠體金結(jié)合墊包括結(jié)合墊本體和涂覆于結(jié)合墊本體上的膠體金標記抗體涂層，膠體金標記抗體涂層中的抗體為所述指標的抗體；承載膜上的檢測線有三條，這三條檢測線相互分離且分別為能夠與膠體金標記的抗體特異性結(jié)合的配對抗體或抗原形成的涂層。

根據(jù)本實用新型的一個具體方面，檢測卡由上樣墊、膠體金結(jié)合墊、承載膜及吸樣墊依次相互交錯粘貼在底板上構成。

根據(jù)本實用新型的一個優(yōu)選方面，檢測卡還包括濾血膜，濾血膜覆設在的上樣墊上，上樣墊、膠體金結(jié)合墊、承載膜及吸樣墊依次相互交錯粘貼在底板上構成。

根據(jù)本實用新型的又一優(yōu)選方面，檢測卡還包括助推墊，且檢測卡由上樣墊、膠體金結(jié)合墊、助推墊、承載膜及吸樣墊依次相互交錯粘貼在底板上構成。

根據(jù)本實用新型的還一優(yōu)選方面，檢測卡還包括濾血膜和助推墊，濾血膜覆設在的上樣墊上，上樣墊、膠體金結(jié)合墊、助推墊、承載膜及吸樣墊依次相互交錯粘貼在底板上。

優(yōu)選地，助推墊的材質(zhì)為玻璃纖維素膜或無紡布。

優(yōu)選地，三條檢測線質(zhì)控線相互平行且沿著承載膜的長度方向依次設置。

進一步地，三條檢測線中靠近膠體金結(jié)合墊的檢測線為降鈣素原的配對抗體或抗原涂層，靠近吸樣墊的檢測線為N末端腦鈉肽的配對抗體或抗原涂層，中間的檢測線為中性粒細胞明膠酶相關性脂質(zhì)運載蛋白的配對抗體或抗原涂層，質(zhì)控線位于承載膜的靠近吸樣墊的端部。

優(yōu)選地，質(zhì)控線通過包被包括但不限于羊抗鼠IgG、羊抗雞IgY或羊抗兔IgG等形成。

優(yōu)選地，承載膜為硝酸纖維素膜且為孔徑5～12um的多孔樣結(jié)構膜；上樣墊、結(jié)合墊本體的材質(zhì)為玻璃纖維素膜或無紡布，吸樣墊的材質(zhì)為吸水濾紙。

進一步地，所述底板的材質(zhì)為PVC。

由于以上技術方案的實施，本實用新型與現(xiàn)有技術相比具有如下優(yōu)點：

本實用新型試劑盒包括快速檢測炎癥、腎衰和心衰的三聯(lián)檢測卡，其采用PCT-NGAL-NT-proBNP三種標記物，可有效的同時監(jiān)測心臟手術后炎癥、腎衰和心衰的風險。該試劑盒診斷靈敏度高、特異性強，臨床監(jiān)測的準確率高達95％以上，使術后病人炎癥、腎衰和心衰的即時監(jiān)測成為可能，降低因檢測不及時造成的漏診、誤診，降低死亡率。

進一步地，本實用新型試劑盒通過增加濾血膜，適用于全血檢測，便于病人出院后在社區(qū)衛(wèi)生機構進行心腎功能和感染檢測，減輕去醫(yī)院掛號、排隊、化驗、取報告等繁瑣過程，減輕公共醫(yī)療機構的壓力，更有益于患者的日常監(jiān)測。

進一步地，本實用新型在結(jié)構上增加了助推墊，可以有效的去除背景干擾，從而進一步提高診斷靈敏度高和準確度，此外助推墊還有助于加快檢測樣品流動，提高檢測效率，縮短檢測時間，可以避免膠體金顆粒被底板截留，提高產(chǎn)品性能。

附圖說明

圖1為根據(jù)本實用新型的檢測卡的主視結(jié)構示意圖；

圖2為根據(jù)本實用新型實施例2的檢測卡的立體結(jié)構示意圖；

圖3為根據(jù)本實用新型實施例3的檢測分卡的主視結(jié)構示意圖（含T1檢測線）；

圖4為根據(jù)本實用新型實施例3的檢測分卡的主視結(jié)構示意圖（含T2檢測線）；

圖5為根據(jù)本實用新型實施例3的檢測分卡的主視結(jié)構示意圖（含T3檢測線）；

其中：1,1’,1”、上樣墊；2,2’,2”、膠體金結(jié)合墊；20,20’,20”、結(jié)合墊本體；21,21’,21”、膠體金標記抗體涂層；3、承載膜；30,30’,30”、承載分膜；4,4’,4”、吸樣墊；5,5’,5”、底板；6,6’,6”、濾血膜；7,7’,7”、助推墊；T1,T2,T3、檢測線；C,C’,C”、質(zhì)控線。

具體實施方式

實施例1

如圖1所示，一種用于術后病人監(jiān)測的多指標快速檢測膠體金試劑盒，其包括檢測卡、比色卡和/或膠體金定量讀數(shù)儀，檢測卡包括上樣墊1、膠體金結(jié)合墊2、具有檢測線和質(zhì)控線C的承載膜3、吸樣墊4、底板5、濾血膜6和助推墊7，濾血膜覆設在的上樣墊1上，上樣墊1、膠體金結(jié)合墊2、助推墊7、承載膜3及吸樣墊4依次相互交錯粘貼在底板5上構成。其中，助推墊7的材質(zhì)為玻璃纖維素膜或無紡布。承載膜3為硝酸纖維素膜且為孔徑5～12um的多孔樣結(jié)構膜；上樣墊1的材質(zhì)為玻璃纖維素膜或無紡布，吸樣墊4的材質(zhì)為吸水濾紙。

進一步地，檢測卡能夠同時檢測降鈣素原、中性粒細胞明膠酶相關性脂質(zhì)運載蛋白和N末端腦鈉肽三種指標，膠體金結(jié)合墊2包括材質(zhì)為玻璃纖維素膜或無紡布的結(jié)合墊本體20以及噴涂在結(jié)合墊本體上的膠體金標記抗體涂層21，其中膠體金標記抗體涂層中的抗體為上述指標的抗體，承載膜3的檢測線有三條，這三條檢測線T1、T2、T3相互分離且分別為能夠與膠體金標記抗體特異性結(jié)合的配對抗體或抗原形成的涂層。三條檢測線T1、T2、T3、質(zhì)控線C相互平行且沿著承載膜3的長度方向依次設置。三條檢測線T1、T2、T3中靠近膠體金結(jié)合墊2的檢測線T1為降鈣素原的配對抗體或抗原涂層，靠近吸樣墊4的檢測線T3為N末端腦鈉肽的配對抗體或抗原涂層，中間的檢測線T2為中性粒細胞明膠酶相關性脂質(zhì)運載蛋白的配對抗體或抗原涂層，質(zhì)控線C位于承載膜3的靠近吸樣墊4的端部。質(zhì)控線C通過包被包括但不限于羊抗鼠IgG、羊抗雞IgY或羊抗兔IgG等形成。

本實用新型的各部件是這樣組裝到一起的，在干燥室內(nèi)，溫度20～25℃，濕度小于40％，取底板5，將已包被的承載膜3放置在底板5的中部粘貼，將助推墊7裁切成合適的寬度，在承載膜3的靠近檢測線一側(cè)搭接助推墊7；將膠體金墊裁切成合適的寬度，粘貼在助推墊7的1/4處；在膠體金結(jié)合墊2另一側(cè)搭接粘貼上樣墊1，搭膠體金結(jié)合墊2的1/3粘貼；上樣墊1上粘貼濾血膜6；在承載膜3的靠近質(zhì)控線一側(cè)搭接吸樣墊4，搭吸樣墊4的1/10粘貼；最后用裁剪機將貼好塑料板切成3～5mm寬的試紙條，裝入塑料卡內(nèi)即形成所述檢測卡。

本實用新型在使用時的檢測方法是這樣的：

（1）將檢測試劑及樣本平衡至室溫，取出檢測卡，平放；

（2）吸取血清、血漿或全血樣本，加入潔凈的離心管中，用樣本稀釋液進行稀釋，充分混勻；

（3）用移液槍吸取稀釋后的樣本加入到上樣墊1的樣本孔中，15～20分鐘內(nèi)進行定性分析或根據(jù)已預先設置在膠體金定量分析檢測儀內(nèi)的標準曲線對PCT、NGAL和NT-proBNP的濃度進行計算并顯示結(jié)果。

試劑卡與膠體金定量讀數(shù)儀搭配，即可構成用于術后或日常炎癥、腎衰和心衰的早期預警、治療過程和愈后監(jiān)控的試劑盒。

本實用新型檢測原理如下：將樣本加入到樣品孔后，樣本中含有的PCT、NGAL或NT-proBNP抗原與膠體金標記的PCT、NGAL或NT-proBNP抗體結(jié)合，借助毛細管作用，所形成的抗體-抗原免疫復合物沿硝酸纖維素膜層析至檢測線，然后與固化在檢測線上的PCT、NGAL和NT-proBNP抗體或抗原結(jié)合。未結(jié)合的免疫復合物則繼續(xù)層析至質(zhì)控線被羊抗鼠IgG、羊抗雞IgY或羊抗兔IgG等抗體捕獲。

當反應結(jié)束后，根據(jù)色帶顏色的深淺與比色卡進行比對可進行定性判斷，可根據(jù)已預先設置在膠體金定量分析檢測儀內(nèi)的標準曲線對PCT、NGAL或NT-proBNP的濃度進行計算并顯示結(jié)果。

實施例2

如圖2所示，本例提供一種用于術后病人監(jiān)測的多指標快速檢測膠體金試劑盒，其基本同實施例1，不同的是，其承載膜3包括三個并排設置的承載分膜30，30’，30”，每個承載分膜30，30’，30”上分別形成一條檢測線和質(zhì)控線。

本例試劑盒的制備、檢測及檢測原理同實施例1。

實施例3

如圖3、圖4、圖5所示，本例提供一種用于術后病人監(jiān)測的多指標快速檢測膠體金試劑盒，其基本同實施例1，不同的是，檢測卡包括三個獨立的檢測分卡，濾血膜6，6’，6”、上樣墊1，1’，1”、結(jié)合墊2，2’，2”、助推墊7，7’，7”、承載分膜30，30’，30”、吸樣墊4，4’，4”和底板5，5’，5”分別有三條，每一條濾血膜6，6’，6”、上樣墊1，1’，1”、結(jié)合墊2，2’，2”、助推墊7，7’，7”、承載分膜30，30’，30”、吸樣墊4，4’，4”和底板5，5’，5”組裝成一個檢測分卡，每個檢測分卡上的承載分膜30，30’，30”上分別形成一條檢測線和質(zhì)控線。

本例試劑盒的制備、檢測及檢測原理同實施例1。

綜上，本實用新型試劑盒包括快速檢測炎癥、腎衰和心衰的三聯(lián)檢測卡，其采用PCT-NGAL-NT-proBNP三種標記物，可有效的同時監(jiān)測心臟手術后炎癥、腎衰和心衰的風險。該試劑盒診斷靈敏度高、特異性強，臨床監(jiān)測的準確率高達95％以上，使術后病人炎癥、腎衰和心衰的即時監(jiān)測成為可能，及時阻止病人的病情惡化。

進一步地，本實用新型試劑盒通過增加濾血膜，適用于全血檢測，便于病人出院后在社區(qū)衛(wèi)生機構進行心腎功能和感染檢測，減輕去醫(yī)院掛號、排隊、化驗、取報告等繁瑣過程，減輕公共醫(yī)療機構的壓力，更有益于患者的日常監(jiān)測。

進一步地，本實用新型在結(jié)構上增加了助推墊，可以有效的去除背景干擾，從而進一步提高診斷靈敏度高和準確度，此外助推墊還有助于加快檢測樣品流動，提高檢測效率，縮短檢測時間，可以避免膠體金顆粒被PVC底板截留，提高產(chǎn)品性能。

以上對本實用新型做了詳盡的描述，其目的在于讓熟悉此領域技術的人士能夠了解本實用新型的內(nèi)容并加以實施，并不能以此限制本實用新型的保護范圍，凡根據(jù)本實用新型的精神實質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應涵蓋在本實用新型的保護范圍內(nèi)。