本發(fā)明屬于中藥鑒別領(lǐng)域，具體涉及一種區(qū)分片姜黃及其近似品的色譜鑒別方法。

背景技術(shù)：

1、片姜黃為姜科植物溫郁金curcuma?wenyujin?y.h.chen?et?c.ling的干燥根莖，為冷背藥，始載于《仁齋直指方論》。味辛、苦，性溫，歸脾、肝經(jīng)。具有破血行氣，通經(jīng)止痛的功效。

2、現(xiàn)代研究表明，片姜黃中主要有揮發(fā)油、生物堿類、多糖類和無(wú)機(jī)元素等，其中主要藥效成分為倍半萜類成分，是構(gòu)成揮發(fā)油的主要成分。片姜黃在抗腫瘤、抗炎鎮(zhèn)痛、抗血栓凝血、增強(qiáng)機(jī)體免疫等方面有顯著作用，在臨床上主要用于治療婦科疾病、風(fēng)濕痹癥、風(fēng)寒肩臂疼痛及腰部作痛等。

3、溫郁金同一植株地下部分可產(chǎn)3種藥材，且均被2020年《中國(guó)藥典》收載，其加工、用途都不盡相同。塊根煮熟曬干是著名藥材“溫郁金”，味微苦、辛，性微溫，能疏肝解郁，行氣祛瘀，利膽退黃；側(cè)根莖鮮切厚片曬干稱“片姜黃”，味辛、苦，性溫，能破血行氣，通經(jīng)止痛；主根莖煮熟曬干稱“溫莪術(shù)”，味苦、辛，性溫，能破血散氣，消癥積，止痛。

4、中國(guó)藥典2020年版中，片姜黃項(xiàng)下僅收載了溫郁金curcuma?wenyujin?y.h.chenet?c.ling的干燥根莖一種為片姜黃的法定基原，姜黃項(xiàng)下僅收載了姜科植物姜黃curcumalonga?l.的干燥根莖一種為姜黃的法定基原；莪術(shù)項(xiàng)下收載了蓬莪術(shù)curcumaphaeocaulis?val.廣西莪術(shù)curcuma?kwangsiensis?s.g.lee?et?c.f.liang或溫郁金curcuma?wenyujin?y.h.chen?et?c.ling的干燥根莖三種為莪術(shù)的法定基原；郁金項(xiàng)下收載了溫郁金curcuma?xvenyujin?y.h.chen?et?c.ling、姜黃curcuma?longa?l、廣西莪術(shù)curcuma?k-wangsiensis?s.g.lee?et?c.f.liang或蓬莪術(shù)curcuma?phaeocaulis?vai.的干燥塊根四種為郁金的法定基原。

5、中藥主要來(lái)源于自然界的動(dòng)植物，其中一些具有多種基原，這些中藥往往存在基原混亂、真?zhèn)坞y辨等現(xiàn)象，由此導(dǎo)致質(zhì)量很不穩(wěn)定，極大的限制了其臨床的應(yīng)用效果。目前對(duì)于片姜黃及其近似品對(duì)比研究的方法較多，針對(duì)混淆品的研究主要集中在性狀和色譜方面的研究。張新華等就姜黃與片姜黃的來(lái)源、性狀、顯微、理化等方面的鑒別、成分與功能主治等方面進(jìn)行了比較(張新華,韓立杰.姜黃與片姜黃臨床應(yīng)用的甄別[j].光明中醫(yī),2011,26(9).)。李德勛就姜黃與片姜黃的薄層色譜鑒別進(jìn)行了研究(李德勛,姜黃與片姜黃的薄層色譜鑒別[j].醫(yī)藥衛(wèi)生科技,2001(03).)。方洪壯等對(duì)姜黃與片姜黃揮發(fā)油色譜指紋圖譜進(jìn)行了比較，結(jié)果表明：至少有10種化學(xué)成分在姜黃揮發(fā)油的色譜指紋圖譜中存在而在片姜黃圖譜中未被檢出，至少有9種化學(xué)成分在片姜黃中存在而在姜黃中未見(jiàn)，姜黃與片姜黃揮發(fā)油指紋圖譜中共有的化學(xué)成分有9種(方洪壯,任淑清.姜黃與片姜黃揮發(fā)油色譜指紋圖譜的比較[j].中藥材,2006,(11).)。上述研究中從藥材的性狀比較不適用于藥材的標(biāo)準(zhǔn)湯劑和配方顆粒等，而采用氣相色譜法建立的特征圖譜主要分析的是揮發(fā)油中的倍半萜類成分，樣品制備繁瑣，且不適用于標(biāo)準(zhǔn)湯劑。

6、因此，有必要建立一種全面、準(zhǔn)確、快速的片姜黃及其近似品的色譜鑒別方法，該方法能夠區(qū)分鑒別片姜黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑或配方顆粒等與其近似品制劑，對(duì)片姜黃與包括姜黃、不同基原的莪術(shù)、不同基原的郁金等在內(nèi)的近似品的質(zhì)量檢測(cè)至關(guān)重要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、發(fā)明要解決的問(wèn)題

2、為了解決現(xiàn)有技術(shù)的上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種區(qū)分片姜黃樣品及其近似品的色譜鑒別方法，該方法適用于片姜黃及其近似品的標(biāo)準(zhǔn)湯劑或配方顆粒，可以鑒別片姜黃與包括姜黃、莪術(shù)、郁金等在內(nèi)的近似品，為片姜黃、姜黃、莪術(shù)和郁金等的標(biāo)準(zhǔn)湯劑等的內(nèi)在質(zhì)量控制提供了新的分析手段，以達(dá)到同時(shí)鑒別片姜黃及其近似品的基原、真?zhèn)蔚哪康摹?/p>

3、用于解決問(wèn)題的方案

4、[1].本發(fā)明提供一種區(qū)分片姜黃樣品及其近似品的色譜鑒別方法，其中，所述方法包括以下步驟：

5、(1)樣品溶液制備：用提取溶劑分別對(duì)片姜黃樣品、近似品樣品進(jìn)行提取，收集提取液，制備片姜黃樣品溶液和近似品樣品溶液；

6、所述片姜黃樣品選自片姜黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑或片姜黃配方顆粒；所述近似品樣品選自近似品標(biāo)準(zhǔn)湯劑或近似品配方顆粒；所述近似品為姜黃、莪術(shù)、郁金中的一種或多種；

7、(2)對(duì)照品溶液制備：包括分別取姜黃素、莪術(shù)二醇、莪術(shù)奧酮二醇、莪術(shù)雙環(huán)烯酮中的一種或多種對(duì)照品制備對(duì)照品溶液的步驟；

8、(3)特征圖譜的建立：采用超高效液相色譜法對(duì)步驟(1)中所述片姜黃樣品溶液、所述近似品樣品溶液和步驟(2)中所述對(duì)照品溶液進(jìn)行檢測(cè)，相應(yīng)獲得檢測(cè)圖譜和對(duì)照?qǐng)D譜，采用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行分析建立片姜黃樣品特征圖譜和近似品樣品特征圖譜；

9、(4)鑒別標(biāo)準(zhǔn)的制定：將步驟(3)中所述片姜黃樣品特征圖譜、所述近似品樣品特征圖譜和所述對(duì)照?qǐng)D譜進(jìn)行比對(duì)，制定鑒別標(biāo)準(zhǔn)；

10、(5)供試品的處理：取待測(cè)樣品，按照步驟(1)中的方法得到供試品溶液，再按照步驟(3)中的方法，生成供試品特征圖譜；

11、(6)供試品的鑒別：根據(jù)步驟(4)中制定的鑒別標(biāo)準(zhǔn)，將步驟(5)中生成的供試品特征圖譜進(jìn)行比對(duì)，確定供試品為片姜黃或所述近似品中的任意一種。

12、[2].根據(jù)[1]所述的色譜鑒別方法，其中，步驟(1)中，所述莪術(shù)的藥材基原包括溫郁金、廣西莪術(shù)、蓬莪術(shù)中的一種或多種；所述郁金的藥材基原包括溫郁金、廣西莪術(shù)中的一種或多種；

13、所述提取溶劑為甲醇、甲醇的水溶液，優(yōu)選體積濃度為30％～70％的甲醇水溶液；所述提取的方式為超聲處理、振搖提取或加熱回流提取中的任一種；優(yōu)選地，所述提取的方式為超聲提取，功率為200w～300w，頻率為35khz～45khz，提取的時(shí)間為5min～60min。

14、[3].根據(jù)[1]或[2]所述的色譜鑒別方法，其中，步驟(2)中所述制備對(duì)照品溶液包括用甲醇體積百分比不低于50％的甲醇水溶液或甲醇分別溶解對(duì)照品，制成濃度為10～40μg/ml的姜黃素對(duì)照品溶液、莪術(shù)二醇對(duì)照品溶液、莪術(shù)奧酮二醇對(duì)照品溶液、莪術(shù)雙環(huán)烯酮對(duì)照品溶液中的一種或多種。

15、[4].根據(jù)[1]～[3]任一技術(shù)方案所述的色譜鑒別方法，其中，步驟(3)中所述超高效液相色譜法的色譜條件包括：

16、固定相：以十八烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，

17、流動(dòng)相：以乙腈為流動(dòng)相a，以磷酸的水溶液為流動(dòng)相b；優(yōu)選地，以體積分?jǐn)?shù)為0.05％～0.20％的磷酸溶液為流動(dòng)相b；

18、還包括梯度洗脫程序，所述梯度洗脫程序?yàn)椋?/p>

19、 時(shí)間/分鐘) 流動(dòng)相a/％ 流動(dòng)相b/％ 0～4 20 80 4～8 20→30 80→70 8～12 30→32 70→68 12～20 32→43 68→57 20～25 43→75 57→25 25～30 75 25

20、；優(yōu)選地還包括：柱溫為20～30℃，和/或，流速為0.28～0.32ml/min，和/或，檢測(cè)波長(zhǎng)為220～270nm。

21、[5].根據(jù)[1]～[4]任一技術(shù)方案所述的色譜鑒別方法，其中，步驟(3)中所述片姜黃樣品特征圖譜包括9個(gè)特征峰，其中，峰1為莪術(shù)奧酮二醇峰，峰3為莪術(shù)二醇峰，峰9為莪術(shù)雙環(huán)烯酮峰。

22、[6].根據(jù)[1]～[5]任一技術(shù)方案所述的色譜鑒別方法，其中，步驟(4)中所述鑒別標(biāo)準(zhǔn)的制定還包括：

23、分別從所述片姜黃樣品特征圖譜、所述近似品樣品特征圖譜中確定特征峰，采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)所述片姜黃樣品特征圖譜中的特征峰進(jìn)行歸屬，并對(duì)區(qū)別成分進(jìn)行指認(rèn)，比較各特征圖譜中所述特征峰的差異，將所述差異進(jìn)行記錄，得到鑒別標(biāo)準(zhǔn)。

24、[7].根據(jù)[6]所述的色譜鑒別方法，其中，所述差異包括：姜黃素峰可區(qū)分出姜黃，莪術(shù)奧酮二醇峰與莪術(shù)二醇峰的相對(duì)峰面積可區(qū)分莪術(shù)和片姜黃，莪術(shù)雙環(huán)烯酮峰與莪術(shù)二醇峰的相對(duì)峰面積可區(qū)分郁金和片姜黃。

25、[8].根據(jù)[1]～[7]任一技術(shù)方案所述的色譜鑒別方法，其中，步驟(6)中所述將步驟(5)中生成的供試品特征圖譜進(jìn)行比對(duì)包括：

26、若供試品特征圖譜在與姜黃素對(duì)照品相應(yīng)的保留時(shí)間存在色譜峰，則供試品為姜黃；

27、若供試品特征圖譜在與莪術(shù)奧酮二醇、莪術(shù)二醇、莪術(shù)雙環(huán)烯酮對(duì)照品相應(yīng)的保留時(shí)間存在色譜峰，且莪術(shù)奧酮二醇峰與莪術(shù)二醇峰的相對(duì)峰面積低于2.4，則供試品為莪術(shù)；

28、若供試品特征圖譜在與莪術(shù)奧酮二醇、莪術(shù)二醇、莪術(shù)雙環(huán)烯酮對(duì)照品相應(yīng)的保留時(shí)間存在色譜峰，且莪術(shù)雙環(huán)烯酮峰與莪術(shù)二醇峰相對(duì)峰面積高于6.2，則供試品為郁金；

29、若供試品特征圖譜在與莪術(shù)奧酮二醇、莪術(shù)二醇、莪術(shù)雙環(huán)烯酮對(duì)照品相應(yīng)的保留時(shí)間存在色譜峰，且莪術(shù)奧酮二醇峰與莪術(shù)二醇峰的相對(duì)峰面積高于2.4；莪術(shù)雙環(huán)烯酮峰與莪術(shù)二醇峰相對(duì)峰面積低于6.2，則供試品為片姜黃。

30、[9].根據(jù)[1]～[8]任一技術(shù)方案所述的方法在鑒別片姜黃、姜黃、莪術(shù)和/或郁金當(dāng)中的兩種或多種的應(yīng)用。

31、[10].根據(jù)[1]～[8]任一技術(shù)方案所述的方法在片姜黃及其近似品的質(zhì)量檢測(cè)中的應(yīng)用。

32、發(fā)明的效果

33、本發(fā)明通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，建立片姜黃及其不同基原近似品的特征圖譜，提供了一種區(qū)分片姜黃及其近似品的色譜鑒別方法。采用超高效液相色譜法對(duì)色譜條件進(jìn)行合理控制，確定了片姜黃樣品的9個(gè)特征峰，構(gòu)成了片姜黃藥材及其制劑的特征圖譜的全貌，同時(shí)也對(duì)片姜黃的近似品，姜黃、莪術(shù)和郁金等制劑進(jìn)行對(duì)比研究，能夠比較全面地反應(yīng)片姜黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑及其近似品(莪術(shù)、郁金、姜黃)的特征，并達(dá)到鑒別片姜黃與莪術(shù)、郁金、姜黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑或配方顆粒的目的。

34、本發(fā)明對(duì)整個(gè)片姜黃藥材的內(nèi)在品質(zhì)進(jìn)行把控，比較全面地反映了片姜黃藥材及其不同基原的近似品的特征，達(dá)到同時(shí)鑒別片姜黃及其近似品的目的，并且為片姜黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑或配方顆粒等制劑的內(nèi)在質(zhì)量控制提供了新的分析手段。

35、本發(fā)明方法簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確可靠，便于操作，時(shí)間較短，溶劑消耗量少，對(duì)環(huán)境污染小。同時(shí)具有專屬性強(qiáng)，穩(wěn)定性高，重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，尤其適合規(guī)?；a(chǎn)的檢測(cè)與監(jiān)控。

36、需要說(shuō)明的是，上述的記載并不是公開(kāi)了本發(fā)明的全部實(shí)施方式和本發(fā)明的全部?jī)?yōu)點(diǎn)。