本技術(shù)涉及藥物分析，尤其涉及一種布立西坦有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

1、布立西坦(brivaracetam)是一種2-吡咯烷酮衍生物，化學(xué)名為(2s)-2-[(4r)-2-氧代-4-丙基-吡咯烷-1-基]丁酰胺，分子式為c11h20n2o2，cas登記號(hào)357336-20-0，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

2、

3、布立西坦是由比利時(shí)ucb公司開(kāi)發(fā)的第三代抗癲癇藥物，是第二代抗癲癇藥物左乙拉西坦的吡咯烷烴的4位碳原子連接正丙基類(lèi)似物。布立西坦是大腦突出囊泡蛋白2a(sv2a)選擇性和高親和力的配體，具有優(yōu)于左乙拉西坦的抑制突觸傳遞和囊泡釋放的親和能力。布立西坦親脂性高，腦部滲透速度快，具有較短的作用潛伏期，對(duì)于癲癇持續(xù)狀態(tài)或癲癇集群性發(fā)作的臨床緊急治療情況具有十分重要的意義。布立西坦分別于2016年1月14日和2016年2月18日被歐洲醫(yī)藥管理局(ema)和美國(guó)食品藥品管理局(fda)批準(zhǔn)上市，商品名為briviact，用于治療16歲及以上部分發(fā)作型的癲癇患者，輔助治療伴隨或不伴隨繼發(fā)全身性發(fā)作。

4、在合成該化合物的過(guò)程中，由于關(guān)鍵中間體和起始物料反應(yīng)不完全而帶入到后續(xù)反應(yīng)中所產(chǎn)生的副產(chǎn)物，由于起始原料純度不高而引起的反應(yīng)副產(chǎn)物，由于藥物自身降解而產(chǎn)生的降解副產(chǎn)物，合成過(guò)程當(dāng)中的工藝副產(chǎn)物等雜質(zhì)，都屬于該藥物的有關(guān)物質(zhì)，需要進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制。

5、發(fā)明專(zhuān)利202010632316.8提供了一種布立西坦水解雜質(zhì)(s)-2-((r)-2-氧代-4-丙基吡咯烷-1-基)丁酸(雜質(zhì)d)的檢測(cè)方法。該方法通過(guò)高效液相色譜儀，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，磷酸水溶液和乙腈作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為200～220nm。但是該專(zhuān)利所記載的測(cè)定方法不能將布立西坦與其另外2種有關(guān)物質(zhì)：(s)-2-((r)-2,5-二氧代-3-丙基吡咯烷-1-基)丁酰胺(雜質(zhì)e)、(s)-n-((s)-1-氨基-1-氧丁烷-2-基)-2-((r)-2-氧代-4-丙基吡咯烷-1-基)丁酰胺(雜質(zhì)f)進(jìn)行有效地分離和測(cè)定。

6、鑒于目前尚未記載同時(shí)將上述有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)分離的檢測(cè)方法，但是雜質(zhì)的控制在藥品的整個(gè)生命周期有舉足輕重的作用，因此，亟需建立一種易操作的關(guān)于布立西坦有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，以便更好地促進(jìn)該藥物的研發(fā)，確保產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本技術(shù)提供了一種布立西坦有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法采用高效液相色譜法，通過(guò)選擇特定的色譜條件，能夠簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確地分析、檢測(cè)出布立西坦及其有關(guān)物質(zhì)，從而保證了布立西坦及其制劑的質(zhì)量可控。

2、本技術(shù)第一個(gè)方面提供了一種布立西坦中有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，采用高相液相色譜法檢測(cè)布立西坦樣品中的一種或多種布立西坦有關(guān)物質(zhì)。

3、在一種示例性的實(shí)施例中，所述有關(guān)物質(zhì)為：

4、雜質(zhì)d:(s)-2-((r)-2-氧代-4-丙基吡咯烷-1-基)丁酸，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

5、

6、雜質(zhì)e:(s)-2-((r)-2,5-二氧代-3-丙基吡咯烷-1-基)丁酰胺，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

7、

8、雜質(zhì)f:(s)-n-((s)-1-氨基-1-氧丁烷-2-基)-2-((r)-2-氧代-4-丙基吡咯烷-1-基)丁酰胺，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

9、

10、在一種示例性的實(shí)施例中，高相液相色譜儀檢測(cè)時(shí)，色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充柱。

11、在一種示例性的實(shí)施例中，高相液相色譜儀檢測(cè)時(shí)，所述色譜柱的型號(hào)為welchlp-c18250mm×4.6mm，5μm。

12、在一種示例性的實(shí)施例中，高相液相色譜儀檢測(cè)時(shí)，流動(dòng)相由流動(dòng)相a和流動(dòng)相b組成；其中，所述流動(dòng)相a為磷酸水溶液，所述流動(dòng)相b為乙腈。

13、在一種示例性的實(shí)施例中，所述流動(dòng)相a為體積分?jǐn)?shù)為0.1％的磷酸水溶液。

14、在一種示例性的實(shí)施例中，高相液相色譜儀檢測(cè)時(shí)，所述流動(dòng)相洗脫程序?yàn)樘荻认疵?，梯度洗脫程序如下?/p>

15、 時(shí)間/min 流動(dòng)相a(％，體積百分比) 流動(dòng)相b(％，體積百分比) 0 90 10 60 75 25 65 75 25 70 90 10 75 90 10

16、在一種示例性的實(shí)施例中，高相液相色譜儀檢測(cè)時(shí)，色譜條件還包括：

17、檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；

18、流動(dòng)相流速為0.9～1.1ml/min，優(yōu)選地，為1.0ml/min；

19、柱溫為27～33℃，優(yōu)選地，為30℃；

20、進(jìn)樣量為10-30μl，優(yōu)選地，為10μl；

21、檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器。

22、在一種示例性的實(shí)施例中，所述檢測(cè)方法包括以下步驟：

23、1)配制溶液

24、a、分別配制雜質(zhì)d、e、f對(duì)照品的定位溶液；

25、b、配制布立西坦、雜質(zhì)d、e、f的對(duì)照品混合物溶液；

26、c、配制布立西坦樣品的供試品溶液；

27、d、配制布立西坦供試品溶液的對(duì)照溶液；

28、2)檢測(cè)

29、分別移取步驟a中的雜質(zhì)d、e、f的定位溶液、步驟b中的雜質(zhì)混合溶液、步驟c中的供試品溶液以及步驟d中的對(duì)照溶液注入高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，記錄色譜圖；

30、3)分析

31、根據(jù)各雜質(zhì)定位溶液的色譜圖分別確定雜質(zhì)d、e、f的保留時(shí)間；

32、根據(jù)供試品溶液和對(duì)照溶液色譜圖中的各雜質(zhì)的峰面積，計(jì)算供試品中雜質(zhì)d、e、f的含量。

33、在一種示例性的實(shí)施例中，步驟a中雜質(zhì)d、e、f的定位溶液的制備方法為：分別稱(chēng)取雜質(zhì)d、e、f對(duì)照品，分別用乙腈溶解，得到各雜質(zhì)的定位溶液；任選地，各雜質(zhì)的定位溶液的濃度可為0.01mg/ml。

34、在一種示例性的實(shí)施例中，步驟b中混合物溶液的制備方法為：稱(chēng)取布立西坦、雜質(zhì)d、e、f對(duì)照品，用乙腈溶解于同一容量瓶中定容，得到雜質(zhì)混合物溶液；任選地，混合物溶液中，布立西坦?jié)舛瓤蔀?mg/ml，各雜質(zhì)的濃度可為0.01mg/ml。

35、在一種示例性的實(shí)施例中，步驟c中布立西坦供試品溶液的制備方法為：稱(chēng)取布立西坦供試品，用乙腈溶解定容，過(guò)濾，取續(xù)濾液，得到供試品溶液；任選地，所述布立西坦供試品的濃度為5mg/ml。

36、在一種示例性的實(shí)施例中，所述布立西坦供試品為布立西坦原料藥或布立西坦制劑，所述布立西坦制劑包括但不限于布立西坦片(粉碎之后的粉末)、布立西坦注射液或布立西坦口服溶液。

37、在一種示例性的實(shí)施例中，步驟d中對(duì)照溶液的制備方法為：取步驟c中的所述供試品溶液100μl置于100ml容量瓶中，加入乙腈定容搖勻，得到對(duì)照溶液。

38、在一種示例性的實(shí)施例中，步驟3)中，對(duì)照品混合物溶液色譜圖中布立西坦及雜質(zhì)d、e、f色譜峰之間的分離度應(yīng)大于1.5。

39、在一種示例性的實(shí)施例中，步驟3)中，供試品中雜質(zhì)d、e、f的含量計(jì)算公式為：

40、

41、

42、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本技術(shù)所述的檢測(cè)方法具有如下優(yōu)點(diǎn)：

43、本技術(shù)所提供的檢測(cè)方法采用高效液相色譜法，能夠同時(shí)將布立西坦與其雜質(zhì)(雜質(zhì)d)(s)-2-((r)-2-氧代-4-丙基吡咯烷-1-基)丁酸、(雜質(zhì)e)(s)-2-((r)-2,5-二氧代-3-丙基吡咯烷-1-基)丁酰胺、(雜質(zhì)f)(s)-n-((s)-1-氨基-1-氧丁烷-2-((r)-2-氧代-4-丙基吡咯烷-1-基)丁酰胺進(jìn)行有效分離，可以用于檢測(cè)布立西坦中的雜質(zhì)d、e、f，準(zhǔn)確測(cè)定布立西坦中雜質(zhì)d、e、f的含量，操作簡(jiǎn)單，測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定可靠，專(zhuān)屬性強(qiáng)。本技術(shù)所提供的檢測(cè)方法可有效監(jiān)控布立西坦的合成過(guò)程，用于布立西坦的質(zhì)量檢測(cè)，保證其質(zhì)量，應(yīng)用前景廣闊。

44、本技術(shù)的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的說(shuō)明書(shū)中闡述，并且，部分地從說(shuō)明書(shū)中變得顯而易見(jiàn)，或者通過(guò)實(shí)施本技術(shù)而了解。本技術(shù)的其他優(yōu)點(diǎn)可通過(guò)在說(shuō)明書(shū)以及附圖中所描述的方案來(lái)實(shí)現(xiàn)和獲得。