本發(fā)明涉及高效液相色譜，尤其是坦度螺酮緩釋制劑含量測(cè)定方法。

背景技術(shù)：

1、中國藥典2020年版中記載，枸櫞酸坦度螺酮原料藥的含量測(cè)定是采用高氯酸滴定法，枸櫞酸坦度螺酮膠囊的含量測(cè)定是采用液相外標(biāo)法。

2、枸櫞酸坦度螺酮膠囊的含量測(cè)定中，

3、色譜條件為：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.01mol/l磷酸二氫鉀溶液(用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值至7.5)-乙腈(60∶40)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為243nm；進(jìn)樣體積20μl；

4、供試品溶液制備方法：取本品10粒，分別將內(nèi)容物用流動(dòng)相適量轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，囊殼用流動(dòng)相分次洗滌，洗液并入同一量瓶中，加流動(dòng)相適量，振搖使溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液適量，用流動(dòng)相稀釋制成每1ml中約含40μg的溶液。

5、現(xiàn)有技術(shù)報(bào)道的枸櫞酸坦度螺酮緩釋制劑中，通常含有親水性的凝膠類材料，該材料的特點(diǎn)是遇水或胃液后膨脹，形成凝膠屏障，從而控制藥物的釋放速度。但是，在采用中國藥典記載的含量測(cè)定的方法對(duì)上述專利中的坦度螺酮緩釋制劑進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在含量測(cè)定或前處理的過程中，因使用含水溶劑(流動(dòng)相溶液)而導(dǎo)致含有親水凝膠的樣品變粘稠，難以將其離心或過濾，從而導(dǎo)致無法進(jìn)行后續(xù)提取操作和含量測(cè)定處理等。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了改善上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種坦度螺酮緩釋制劑的含量測(cè)定方法，所述含量測(cè)定方法包括以下步驟：

2、1)供試品溶液的制備：取坦度螺酮緩釋制劑，加入適量的溶劑崩散緩釋制劑，定容，離心得上清液；

3、2)含量測(cè)定：測(cè)定上清液中的坦度螺酮的含量。

4、在一些實(shí)施方案中，步驟1)中，供試品溶液的制備：取坦度螺酮緩釋制劑，不經(jīng)研磨，加入適量的溶劑崩散緩釋制劑，定容，離心得上清液。

5、在一些實(shí)施方案中，步驟1)中，取坦度螺酮緩釋制劑，不經(jīng)研磨，稱定后置于容器內(nèi)，加入適量的溶劑崩散緩釋制劑，繼續(xù)加入溶劑定容，搖勻，離心得上清液。

6、在一些實(shí)施方案中，步驟1)中所用的溶劑為甲醇。

7、在一些實(shí)施方案中，步驟1)中，容器內(nèi)預(yù)先加有研磨珠，例如玻璃珠、鋼珠、陶瓷珠、氧化鋯珠等。

8、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，所述坦度螺酮緩釋制劑包括坦度螺酮或其藥學(xué)上可接受的鹽。

9、在一些實(shí)施方案中，所述坦度螺酮緩釋制劑包括親水凝膠材料。

10、在一些實(shí)施方案中，所述親水凝膠材料是指遇水或消化液膨脹，形成凝膠屏障而控制藥物溶出的親水性聚合物。

11、在一些實(shí)施方案中，所述親水凝膠材料選自天然膠類(例如海藻酸鈉、瓊脂、西黃耆膠)、纖維素類衍生物、聚氧化乙烯。

12、在一些實(shí)施方案中，所述親水凝膠材料選自甲基纖維素(mc)、羥甲基纖維素、羥甲基纖維素鈉(cmc-na)、羥乙基纖維素(hec)、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素(hpmc)、羧甲基纖維素、羧乙基纖維素、微晶纖維素、聚維酮(pvp)、海藻酸鈉、卡波姆、kollidon?sr、聚氧化乙烯中的至少一種。

13、在一些實(shí)施方案中，hpmc選自hpmc?a4m、hpmc?e4m、hpmc?e10m、hpmc?k4m、hpmck15m、hpmc?k50m、hpmc?k100m中的至少一種。

14、在一些實(shí)施方案中，聚氧化乙烯選自聚氧化乙烯wsr、聚氧化乙烯n-80中的一種或幾種。

15、在一些實(shí)施方案中，聚氧化乙烯選自聚氧化乙烯wsr?303、聚氧化乙烯wsr?1105、聚氧化乙烯wsr301、聚氧化乙烯wsr?205、聚氧化乙烯n-80中的一種或幾種。

16、在一些實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的鹽為鹽酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、草酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、枸櫞酸鹽、甲磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、硝酸鹽；優(yōu)選為鹽酸鹽或枸櫞酸鹽；更優(yōu)選為枸櫞酸鹽。

17、在一些實(shí)施方案中，坦度螺酮緩釋制劑包括坦度螺酮緩釋片劑、坦度螺酮緩釋丸劑、坦度螺酮緩釋膠囊劑。

18、在一些實(shí)施方案中，坦度螺酮緩釋膠囊劑需去除膠囊殼再進(jìn)行含量測(cè)定。

19、在一些實(shí)施方案中，步驟1)供試品溶液中，枸櫞酸坦度螺酮的濃度為0.05mg/ml-5.0mg/ml，優(yōu)選為0.1mg/ml-2.0mg/ml，更優(yōu)選為0.2mg/ml-1.0mg/ml，例如為0.6mg/ml。

20、在一些實(shí)施方案中，步驟1)供試品溶液中，親水凝膠材料的濃度為0.1mg/ml-10.0mg/ml，優(yōu)選為0.5mg/ml-5.0mg/ml，更優(yōu)選為1.0mg/ml-3.0mg/ml，例如為2.2mg/ml。

21、在一些實(shí)施方案中，步驟1)中，取5片坦度螺酮緩釋片劑，容器的容量為250ml。

22、在一些實(shí)施方案中，步驟1)中，研磨珠的用量與枸櫞酸坦度螺酮的質(zhì)量比為1-20粒：50-200mg，例如10粒：150mg。

23、在一些實(shí)施方案中，步驟1)中，研磨珠的用量與親水凝膠材料的質(zhì)量比1-20粒：200-1000mg，例如10粒：550mg。

24、在一些實(shí)施方案中，步驟1)中，可使用超聲、渦旋、振蕩等處理以促進(jìn)樣品的溶解與崩解。

25、在一些實(shí)施方案中，步驟1)中，研磨珠的直徑為3-8mm，優(yōu)選6-8mm。

26、在一些實(shí)施方案中，步驟1)具體包括以下步驟：取5片坦度螺酮緩釋片劑，精密稱定，置于預(yù)加有研磨珠的250ml量瓶?jī)?nèi)，加入適量的溶劑崩散緩釋制劑，繼續(xù)加入溶劑稀釋至量瓶刻度，搖勻，離心，得供試品溶液。

27、在一些實(shí)施方案中，步驟1)進(jìn)一步包括供試品溶液的稀釋步驟：

28、取一定量的步驟1)中的供試品溶液于量瓶中，加入適量溶劑進(jìn)一步溶解，再用流動(dòng)相稀釋至量瓶刻度，搖勻，過濾，得稀釋后的供試品溶液。

29、在一些實(shí)施方案中，溶解所用溶劑為甲醇。

30、在一些實(shí)施方案中，供試品溶液的體積與溶劑體積比例為1:1。

31、在一些實(shí)施方案中，稀釋后的供試品溶液中，枸櫞酸坦度螺酮的濃度為0.005mg/ml-1.0mg/ml，優(yōu)選為0.01mg/ml-0.10mg/ml，更優(yōu)選為0.03mg/ml。

32、在一些實(shí)施方案中，稀釋后的供試品溶液中，親水凝膠材料的濃度為0.01mg/ml-2.0mg/ml，優(yōu)選為0.05mg/ml-0.5mg/ml，更優(yōu)選為0.11mg/ml。

33、在一些實(shí)施方案中，供試品溶液的稀釋步驟中，稀釋所用的流動(dòng)相包括a相和b相；a相為0.005mol/l-0.2mol/l(例如0.025mol/l)磷酸二氫鉀水溶液，b相為乙腈。

34、在一些實(shí)施方案中，a相：b相＝60∶40。

35、在一些實(shí)施方案中，a相進(jìn)一步用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值至7.5。

36、在一些實(shí)施方案中，步驟1)進(jìn)一步包括供試品溶液的稀釋步驟：

37、取5ml的步驟1)中的供試品溶液于100ml量瓶中，加入5ml溶劑進(jìn)一步溶解，再用流動(dòng)相稀釋至量瓶刻度，搖勻，過濾，得稀釋后的供試品溶液。

38、在一些實(shí)施方案中，步驟2)中采用高效液相色譜法測(cè)定含量。

39、在一些實(shí)施方案中，步驟2)中按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。

40、在一些實(shí)施方案中，步驟2)中記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的約1.3倍。

41、在一些實(shí)施方案中，步驟2)中含量測(cè)定的色譜條件為：

42、色譜柱：選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，例如c18；優(yōu)選地，色譜柱尺寸為4.6mm×150mm，5μm；

43、流動(dòng)相條件為：a相為0.005mol/l-0.2mol/l(例如0.025mol/l)磷酸二氫鉀水溶液，b相為乙腈；等度洗脫；

44、檢測(cè)波長(zhǎng)為240nm-246nm，例如243nm；

45、柱溫為20℃-40℃，例如30℃；

46、進(jìn)樣體積5μl-50μl，例如20μl；

47、流速為0.8-1.2ml/min。

48、在一些實(shí)施方案中，a相：b相＝60∶40。

49、在一些實(shí)施方案中，a相進(jìn)一步用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值至7.5。

50、在一些實(shí)施方案中，所述含量測(cè)定方法還包括以下步驟：

51、3)對(duì)照品溶液的制備：精密稱取對(duì)照品，置于容器中，加溶劑溶解對(duì)照品，定容；所述對(duì)照品為坦度螺酮或其藥學(xué)上可接受的鹽。

52、在一些實(shí)施方案中，步驟3)中所用的溶劑為甲醇。

53、在一些實(shí)施方案中，步驟3)中，容器內(nèi)預(yù)先加有研磨珠，例如玻璃珠、鋼珠、陶瓷珠、氧化鋯珠等。

54、在一些實(shí)施方案中，步驟3)中，對(duì)照品溶液的濃度為0.2mg/ml-0.4mg/ml，例如0.3mg/ml。

55、在一些實(shí)施方案中，步驟3)中，研磨珠的用量與枸櫞酸坦度螺酮的質(zhì)量比為1-10粒：10-100mg，例如4粒：30mg。

56、在一些實(shí)施方案中，步驟3)中，研磨珠的直徑為3-8mm，優(yōu)選6-8mm。

57、在一些實(shí)施方案中，步驟3)具體包括以下步驟：精密稱取對(duì)照品30mg，置于預(yù)加有研磨珠的100ml量瓶中，加溶劑溶解對(duì)照品，然后用溶劑稀釋至量瓶刻度定容；所述對(duì)照品為坦度螺酮或其藥學(xué)上可接受的鹽。

58、在一些實(shí)施方案中，步驟3)進(jìn)一步包括對(duì)照品溶液的稀釋步驟：

59、取一定量的步驟3)中的對(duì)照品溶液于量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至量瓶刻度，搖勻，過濾，得稀釋后的對(duì)照品溶液。

60、在一些實(shí)施方案中，對(duì)照品溶液的稀釋步驟中，稀釋所用的流動(dòng)相包括a相和b相；a相為0.005mol/l-0.2mol/l(例如0.025mol/l)磷酸二氫鉀水溶液，b相為乙腈。

61、在一些實(shí)施方案中，a相：b相＝60∶40。

62、在一些實(shí)施方案中，a相進(jìn)一步用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值至7.5。

63、在一些實(shí)施方案中，稀釋后的對(duì)照品溶液的濃度為0.005mg/ml-1.0mg/ml，優(yōu)選為0.01mg/ml-0.10mg/ml，更優(yōu)選為0.02mg/ml-0.04mg/ml，例如0.03mg/ml。

64、在一些實(shí)施方案中，坦度螺酮緩釋制劑還任選的包含填充劑、助漂劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑。

65、在一些實(shí)施方案中，所述坦度螺酮緩釋制劑中，藥物活性成分的含量為1-15％(優(yōu)選2.5-10％)，親水凝膠材料的含量為5-75％(優(yōu)選15-65％，進(jìn)一步優(yōu)選為15-61.7％)。

66、在一些實(shí)施方案中，所述坦度螺酮緩釋制劑中包括以下重量百分比的組分：

67、

68、在一些實(shí)施方案中，所述填充劑選自乳糖、蔗糖、微晶纖維素、預(yù)膠化淀粉、甘露醇、山梨醇、木糖醇、葡萄糖、硫酸鈣、磷酸氫鈣、磷酸鈣、氯化鈣、氯化鋁、氯化鈉、氧化鈣、氧化鋅、氧化鎂中的一種或幾種的組合；優(yōu)選為微晶纖維素。

69、在一些實(shí)施方案中，所述助漂劑選自碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、碳酸鎂、碳酸鈣中的一種或幾種的組合；優(yōu)選地，所述助漂劑選自碳酸鈉和/或碳酸氫鈉。

70、在一些實(shí)施方案中，所述的潤(rùn)滑劑選自滑石粉、微粉硅膠、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅、硬脂酸富馬酸鈉、十二烷基硫酸鎂、十二烷基硫酸鈉、氫化植物油中的一種或幾種的組合；優(yōu)選為硬脂酸鎂。

71、在一些實(shí)施方案中，所述粘合劑選自聚乙烯吡咯烷酮、明膠、黃原膠、糊精、聚乙烯醇、羧甲基纖維素中的一種或幾種的組合；優(yōu)選地，所述粘合劑選自聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇。

72、有益效果

73、本發(fā)明提供的上述坦度螺酮緩釋制劑含量測(cè)定方法，具有以下優(yōu)勢(shì)：

74、1.選用甲醇作為提取溶劑，避免樣品粘稠，同時(shí)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)成分枸櫞酸坦度螺酮的有效提??；

75、2.采用投片法直接進(jìn)行提取，而不采用常規(guī)的研磨稱量法，避免了供試品研磨后嚴(yán)重吸附導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏低的問題；

76、3.在投片法進(jìn)行提取時(shí)，創(chuàng)造性的加入了研磨珠以輔助提取，使得緩釋片劑能夠?qū)崿F(xiàn)快速崩散。